LAPORAN PRAKTIKUM MIKROTEKNIK HEWAN MEMBUAT SEDIAAN SUPRAVITAL EPITELIUM MUKOSA MULUT
Disusun oleh :
Nama
: Yuni Kristina Serlyani Sihotang
NPM
: F1D016029
Hari/tanggal
: Senin, 19 Februari 2018
Dosen Pengampu
: 1. Dra.Novia Duya, M.Si
Asisten Praktikum
: 1. Ayu Wulandari 2. Uci Cahlia
F1D014017 F1D015030
3. M. M. Adi Rabbuka F1D015039
JURUSAN BIOLOGI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS BENGKULU 2018
BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar belakang
Praktikum kali ini merupakan praktikum dalam hal membuat sediaan kembali. Namun bedanya praktikum kali ini dilihat dari jenisnya. Dimana jenisnya ialah supravital dengan diikuti pengamatan pada epitelium mukosa mulut. Sebelumnya sedian supravital adalah metode yang digunakan mendapatkan sediaan dari sel atau jaringan yang hidup. Galeotti (1984) merupakan orang pertama yang mempelajari jaringan hidup dengan pewarnaan supravital yaitu neutral red (Subowo, 2010). Walaupun tubuh hewan dan manusia sudah dapat dikatakan kompleks namun hanya terdiri dari empat jaringan dasar jaringan yaitu jaringan epitel, jaringan otot, jaringan saraf, dan jaringan ikat. Jaringan epitel juga merupakan jaringan yang dapat dikatakan bahwa posisinya berada di permukaan luar dan permukaan dalam tubuh. Itu akibatnya segala sesuatu yang memasuki atau keluar dari tubuh harus menembus lembaran epitel. Dan fungsi lainnya juga ialah sebagai jaringan
yang dapat mengetahui atau menunjukkan kondisi
kesehatan ataupun penyakit pada suatu individu. Kemudian sel epitel mukosa pada mulut juga merupakan jaringan pertama yang terpapar agen genotoxic pada pencernaan dan pernafasan dibandingkan jaringan lainnya (Rutyatmi, 2013). Itu sebabnya pemilihan jaringan dan sel diambil pada bagian mukosa mulut. Sehingga mudah didapat dan mudah untuk melakukan beberapa kali pengulangan penelitian menggunaka media supravital ini (Subowo, 2010). 1.2 Tujuan
1. Mahasiswa memahami pembuatan sediaan supravital epitelium mukosa mulut. 2. Mahasiswa memahami kegunaan pembuatan sediaan supravital untuk keperluan diagnosis kesehatan.
BAB II PEMBAHASAN 2.1
Pengertian Jaringan Epitel
Kata epitelium berasal dari kata epi yang berarti upon atau di atas sedangkan kata thele dari epitel yang berarti nipple atau punting. Penggunaan kata epitel meluas untuk semua bentuk lapisan yang terdiri atas lembaran sel-sel (cellular membrane) baik yang bersifat tembus cahaya
ataupun
yang
tidak.
Dengan
berkembangnya
pemakaian
mikroskop, maka istilah epitel tidak terbatas pada kumpulan sel yang membentuk membran yang menutupi, tetapi juga digunakan untuk kelenjar. Hal tersebut didukung dengan hasil penelitian embriologis yang menyimpulkan bahwa sel-sel epitel pada permukaan tumbuh ke dalam jaringan pengikat di bawahnya dan berkembang menjadi kelenjar (Fawccet, 2002). Epitel merupakan jaringan yang terdiri atas sel-sel yang sangat rapat tanpa adanya zat antar sel. Epitel tidak mempunyai pembuluh darah, namun semua epitel tumbuh pada jaringan ikat yang mempunyai pembuluh darah. Epitel dipisahkan dengan jaringan ikat melalui membrana basalis (Fawccet, 2002). Untuk membuat preparat jaringan segar menggunakan metode supravital. Metode supravital merupakan suatu metode untuk mendapatkan sediaan dari sel atau jaringan yang hidup. Zat warna yang biasa dipakai untuk pewarnaan supravital adalah janus green, neutral red, methylene blue, dengan kosentrasi tertentu. Preparat supravital merupakan preparat yang bersifat sementara sehingga harus segera diamati dengan mikroskop setelah pembuatan preparat tersebut selesai (Subowo, 2010).
2.2
Sel Epitel
Sel-sel epitel mukosa mulut terdiri dari empat lapisan yaitu lapisan germinativum/basalis bagian dalam, lapisan spinosum, lapisan granulosum hingga lapisan corneum bagian luar. Stratum basalis terdiri dari selapis sel berbentuk kubus yang berbatasan dengan lamina propia dan mengandung
sel-sel induk yang secara kontinyu bermitosis dan anak selnya dikirimkan ke lapisan yang lebih superfisial. Stratum spinosum terdiri dari beberapa lapis sel berbentuk bulat atau oval dan mempunyai karakteristik sel yang mulai matang. Stratum granulosum terdiri dari beberapa lapis sel yang lebih gepeng dan lebih matang dari stratum spinosum dan mengandung banyak granula keratohyalin yang merupakan bakal sel keratin (Puspitawati, 2003). Stratum corneum terdiri dari selapis atau berlapis-lapis sel (tergantung regio) berbentuk pipih yang tidak berstruktur dan tidak mempunyai inti sel. Mukosa mulut dapat dikelompokkan menjadi tiga tipe yaitu mukosa pengunyahan, mukosa penutup dan mukosa khusus. Mukosa pengunyahan terdapat di regio rongga mulut yang menerima tekanan kunyah seperti gusi dan palatum durum. Jaringan epitelnya parakeratinised (mempunyai lapisan keratin tipis yang beberapa selnya ada yang masih memiliki inti sel yang tidak sempurna). Mukosa penutup terdapat pada dasar mulut, permukaan inferior lidah, permukaan dalam bibir dan pipi, palatum molle dan mukosa alveolaris kecuali gusi (Ningsih, 2015). Menurut Subowo (2006) jaringan epitel mempunyai ciri-ciri umum terdiri atas sel-sel yang saling berdekatan, yang berbentuk pipih. Hanya ada sedikit material antarsel. Jaringan bersifat avaskular atau tanpa pembuluh darah. Permukaan atas epithelium bebas, atau terbuka bagi bagian luar tubuh atau rongga tubuh bagian dalam. Permukaan basal berada pada jaringan ikat. Pembelahan sel pada epithelium terjadi secara terus menerus untuk menggantikan sel-sel yang rusak (Kusuma, 2009). Ada 2 macam jaringan epithelium, yaitu epithelium permukaan merupakan epitel pelapis berbaris yang menutupi permukaan tubuh dan organ tubuh bagian dalam, epitelium kelenjar menyekresi hormon atau produk lain. Tipe epitelnya nonkeratinised (tidak memiliki lapisan keratin). Mukosa khusus terdapat pada dorsum lidah, tipe epitelnya ortokeratinised (memiliki lapisan keratin yang tebal yang terdiri dari sel-sel yang sudah tidak berinti) .Perbandingan antara sel basal-parabasal, sel intermediet, dan sel superficial disebut indeks maturasi. Pada kondisi normal, jumlah sel pada
lapisan superfisial sesuai dengan jumlah sel pada lapisan sel basal. Rongga mulut dibatasi oleh membrane mukosa yang berhubungan dengan kulit. Rongga mulut terdiri dari bibir yang disekitarnya mulut yang terbuka, pipi berada disepanjang rongga, lidah dan ototnya, hard dan soft palate. Mukosa mulut normalnya berwarna merah jambu terang (light pink) dan lembab. Pada dasar mulut dan area bawah lidah kaya akan pembuluh darah.tipe dari ulcer atau trauma dapat mengakibatkan perdarahan. Ada 3 kelenjar saliva yang mensekresikan 1 liter saliva per hari. Kelenjar buccal ditemukan pada mukosa yang membatasi pipi dan mulut yang membuat kenyamanan pada jaringan oral (Campbell N, 2000). Epitel mempunyai fungsi bermacam-macam yaitu, pada permukaan luar tubuh, epitel memberi perlindungan terhadap kerusakan mekanis, perlindungan terhadap masuknya mikroorganisme dan men cegah penguapan air. Epitel penting sebagai reseptor sensoris, karena pada sel-sel epitel terdapat ujung-ujung saraf penghantar rasa sakit. Pada permukaan dalam, fungsi epitel yaitu sebagai absorpsi atau sekresi. Epitel mempunyai struktur yang berbeda-beda tergantung pada fungsinya. Untuk sebaran sel epitelium dalam tubuh manusia antara lain sel epitel di mulut (Puspitawati, 2003). Jaringan epithelium mempunyai ciri-ciri umum sebagai berikut : 1. Epitelium hanya terdiri atas sel -sel yang saling berdekatan, yang berbentuk pipih. Hanya ada sedikit material antarsel. 2. Jaringan bersifat avaskular atau tanpa pembuluh darah. 3. Permukaan atas epitelium bebas, atau terbuka bagi bagian luar tubuh atau rongga tubuh bagian dalam. Permukaan basal berada pada jaringan ikat. 4. Pembelahan sel pada epitelium terjadi secara terus menerus untuk menggantikan sel-sel yang rusak (Ningsih, 2015). Pengamatan kondisi histologis pada jaringan epitel ini dilakukan dengan cara mengambil sampel dari mukosa mulut yang terdapat di pinggir bagian pipi dalam. Yang kemudian langsung dibuat di kaca preparat, selanjutnya dilakukan pewarnaan agar dapat memperjelas dalam hal mengamati.
BAB III METODOLOGI PENELITIAN 3.1 Waktu dan Tempat
Pada praktikum membuat sediaan supravital epitelium mukosa mulut ini dilaksanakan pada hari Senin, 26 Februari 2018 pukul 13:00-16:00 WIB bertempat di Laboratorium Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu. 3.2 Alat dan Bahan Adapun alat yang digunakan pada praktikum ini diantaranya adalah tusuk gigi pipih steril dan bersih, pipet tetes, gelas benda, kaca penutup, dan mikroskop binokuler. Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah tisu, pewarna Metilen Blue (MB), garam fisiologis 0,9%, sel epitel mukosa mulut Homo sapiens. 3.3 Prosedur kerja Adapun prosedur kerja dari praktikum membuat sediaan supravital epithelium mukosa mulut adalah sebagai berikut satu tetes larutan garam fisiologi diteteskan ke bagian tengah gelas benda yang bersih dan bebas lemak. Dengan tusuk gigi pipih, sel epitel rongga mulut diambil dari bagian pipi dalam dengan cara digerakkan tusuk gigi ke atas ke bawah sebanyak 1015 kali. Tusuk gigi dioleskan ke larutan fisiologis di permukaan kaca benda, tusuk gigi dibolak balikkan dan dibuat gerakan memutas. Tusuk gigi dibuang ke dalam tempat sampah. Selanjutnya kaca benda ditutup dengan kaca penutup secara hati-hati agar tidak terbentuk gelembung udara. Satu tetes metilen blue, diteteskan di samping kaca penutup, pewarna dibiarkan masuk ke dalam. Tisu digunakan disisi sebelah kaca benda untuk menghisap larutan garam fisiologis. Pewarna dibiarkan selama 5 menit. Sediaan diamati dengan menggunakan mikroskop cahaya dari perbesaran 4x, 10x dan 100x. Difoto hasil pengamatan dari perbesaran lemah ke perbesaran kuat. Langkah kerja 19 diulang untuk setiap anggota praktikum. Hasil pengamatan dibandingan untuk setiap individu. Diperhatikan jika ditemukan abnormalitas pada nukleus seperti pronuclei, nukleus bertunas, binukleus, fragmen nukleus dan sel karyorrethic, serta sel karyolytic sel.
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN 4.1 Hasil
Pada praktikum mengenai pembuatan Sediaan Supravital Epitelium Mukosa Mulut didapat data pengamatan sel epitel rongga mulut berupa gambar seperti berikut : Tabel 1. Hasil pengamatan sediaan preparat supravital epitel rongga mulut pada praktikan : No
Gambar
Keterangan
1. 2
Sel epitel rongga mulut praktikan tidak perokok dengan perbesaran 40x.
1 3
2.
3 2
1
3.
1
Keterangan : 1. Membran sel 2. Nukleus (inti sel) 3. Sitoplasma Sel epitel rongga mulut praktikan perokok dengan perbesaran 400x. Keterangan : 1. Membran sel 2. Nukleus (inti sel) 3. Sitoplasma
Sel epitel rongga mulut praktikan tidak perokok dengan perbesaran 400x.
2 3
Keterangan : 1. Membran sel 2. Nukleus (inti sel) 3. Sitoplasma
4.2 Pembahasan
Pada praktikum berdasarkan hasil pengamatan gambar menggunakan mikroskop, epitelium mukosa mulut merupakan epitelium pipih dengan bentuk bulat agak bulat. Dalam pengamatan sediaan mukosa mulut dengan metode supravital dlakukan langsung mengambil sel epitel segar dari praktikan tidak perokok dan perokok. Dalam menggunakan pewarnaan methelyn blue 0,25% dalam larutan NaCl fisiologis dapat diketahui bahwa preparat epitel mukosa epitel dapat diamati dan melihah perbedaan sel epitel perokok dengan sel epitel tidak perokok. Pada perbesaran 400x, meskipun pada beberapa tempat ada penumpukan sel epitel (Pjeic, 2007) . Pengamatan dibawah mikroskop sel-sel epitel terwarna biru. Nukleus sel epitel terwarna lebih kuat menjadi lebih biru karena nukleus bersifat asam akan terwarna oleh pewarna basa yaitu methylene blue. Dimana dalam pewarnaan pada dasarnya jika objek yang diwarnai bersifat asam, maka pewarnaan yang digunakan bersifat basa. Begitu juga sebaliknya objek yang memiliki sifat basa maka pewarnaan yang digunakan mengandung sifat asam (Subowo, 2006). Saat pengamatan sel masih dalam bentuk asalnya, tidak terjadi plasmolisis atau krenasi karena menggunakan zat warna netral yaitu pada kosentrasi setara dengan kosentrasi cairan tubuh 0,9% larutan. Didalam preparat masih terdapat kotoran hal ini diduga berasal dari kotoran yang ada di dalam mulut yang ikut terambil saat pengambilan epitelium mukosa menggunakan tangkai skapel (Puspitawati, 2003) . Sel Epitel perokok
Sel Epitel tidak perokok
Dapat dilihat juga dalam gambar tidak memiliki perbedaan bahwa praktikan yang perokok memiliki sel epitel yang sama dengan yang normal. Diaman terlihat pada gambar bahwa ciri-ciri mikronuklei juga memilik 2 nukleus dalam 1 sel. Padahal pada gambar sel epitel yang diamati susah membedakan karena sel epitel saling bertumpukan satu sama lain dan pada sel tidak perokok juga memiliki titiktitik kecil yang tak jelas. Bisa jadi titik tersebut merupakan kotoran mulut yang terbawa. Namun
menurut Adiatama (1997) dalam jurnal Kusuma (2009)
sebenarnya pada perokok aktif memiliki mikronuklei. Maksudnya ialah dimana mikronuklei ini dapat ada karena sel abnormal yang megalami ketidak berhasilan dalam hal melakukan pembelahan sel yang sempurna. Dalam pengamatan sel epitel perokok juga kurang jelas dikarenakan mikroskop yang digunakan sudah dalam keadaan kurang baik lagi. Dimana pada tahap anafase, fragmen kromosom tidak dapat tertarik oleh benang spindel yang menyebabkan kromosom tetap mengalami pembelahan. Yang menyebabkan pada satu sel ada mikronuklei. Pada praktikan perokok ataupun tidak perokok sel abnormalitas pada nukleus sel epitel seperti misalnya binukleus, kondensasi kromatin, gigantik nukleus atau merupakan ciri-ciri diabetes tidak ditemukan baik pada kedua sediaan supravital epitel mukosa mulut. Ditandai ada atau tidaknya ialah dimana diameter nukleus tidak ada mengalami perbesaran atau dapat dikatakan bahwa diameter pada kedua sediaan tidak memiliki ciri-ciri tersebut dan juga tanda kedua ialah bahwa tidak adanya penurunan rasio nukleus-sitoplasma pada kedua sediaaan. Dapat dikatakan bahwa kedua sediaan tidak memiliki ciri-ciri adanya penyakit diabetes militus tipe II pada praktikan perokok ataupun tidak.
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan
1. Sediaan supravital digunakan untuk mendapatkan sediaan dari sel atau jaringan yang hidup seperti halnya diambil langsung dari epitel mukosa mulut Homo sapiens. 2. Sediaan supravital dapat digunakan sebagai diagnosis kesehatan, dimana pada keadaan yang memungkinkan sepertimelihat ciri-ciri sel epitel pada praktikan yang perokok walaupun masih belum terlihat jelas dikarenakan banyak sel epitel yang bertumpukan. 5.2 Saran
Sebaiknya mikroskop yang digunakan bisa lebih baik dan memiliki perbesaran yang lebih maksimal dalam hal melakukan pengamatan. Serta pewarnaan yang digunakan juga lebih beragam. Agar dapat terlihat lebih memiliki perbedaan pada kedua sel.
DAFTAR PUSTAKA Aditama TY. 1997. Rokok dan kesehatan. Jakarta: UI Press.Hal 17-25. Campbell, Nail A. 2000. Biologi.Erlangga. Jakarta. Fawcett, DW. 2002. Buku Ajar Histologi Ed. 12. EGC. Jakarta. Kusuma.2009. Pengaruh Merokok terhadap Kesehatan Rongga Mulut. Jurnal kedokteran. Vol 2 no. 3 Ningsih, diana. 2015. Hubungan Jenis Kelamin dengan Kesehatan Rongga mulut. Odonto dental jurnal . Vol.2 No.1 Puspitawati Ria. 2003. Struktur Makroskopik dan Mikroskopik Jaringan Lunak Mulut’.
Jurnal Kedokteran Gigi Universitas Indonesia. Vol.10 (Edisi
Khusus) : 462-467. Rutyatmi E. 2013. Bahan Ajar Mikroteknik . Semarang: Jurusan Biologi FMIPA UNNES. Subowo. 2006. Histologi Umum. Jakarta : PT Bumi Aksara. Subowo. 2010. Histologi sel . Jakarta : PT Bumi Aksara. Pejcic A., Obradovic R., Kesic L., and Kojovic D. 2007. Smoking and periodontal disease: A review. Medicine and Biology 2007. 14(2): 53 – 9
LAMPIRAN No 1.
Gambar
Keterangan Pemberian garam fisioligis ke atas kaca benda.
2.
Pengambilan sel epitel rongga mulut dengan tusuk gigi yang terlebih dahulu
disterilkan
dengan alkohol 70%.
3.
Sel
epitel
didapatkan
yang
kemudian
di letakkan di kaca benda
dengan
cara
membolak-balikkan tusuk
gigi
membuat
dan gerakan
memutar. 4.
Setelah didapatkan, kemudian kaca benda ditutup dengan kaca penutup, lalu diteteskan metilen blue disamping kaca penutup sambil dihisap garam fisiologis dari sisi lainnya dengan tissue.
5.
Penyerapan garam fisiologis agar pewarna metilen blue masuk dan mewarnai objek.
6.
Setelah merata pewarnaan, didiamkan selama 5 menit.
7.
Pengamatan sel epitel praktikan tidak perokok dengan perbesaran 40x
8.
Pengamatan sel epitel praktikan tidak perokok dengan perbesaran 100x.
9.
Pengamatan sel epitel praktikan tidak perokok dengan perbesaran 400x
10.
Pengamatan sel epitel praktikan perokok dengan perbesaran 400x
