MIKROTEKNIK
Pembuatan Preparat Daun Nangka ( Artocarpus heterophyllus) heterophyllus) Dan pengamatan stomata daun Karet (Ficus (Ficus sp.) sp.) dengan 3 metode (Imprint,pearnaan sa!ranin,dan pengamatan dengan "ir)
(Disusun untuk memenu#i tugas ak#ir semester mata ku$ia# Mikroteknik)
Disusun oleh:
Hera De Destika Ra Rahayu (3 (3425140767)
Program t tu!y:
"iologi#2014
Pem$im$ing:
Ratna De%i
%&R&'"N IOO*I +"K&T"' M"TEM"TIK" D"N IM& PEN*ET"&"N ""M
&NI-ER'IT"' NE*ERI %"K"RT"
/01
" 0 PEND"&&"N
1&1 'atar "elakang "elakang aringan !alam $ahasa Peranis a!alah *tissue* yang +ertama kali !igunakan oleh "ihat "ihat seoran seorang g ahli ahli anatom anatomii !an ,isiolo ,isiologi gi !ari !ari Perani Peraniss yang yang terkesan terkesan oleh oleh ragam ragam anyama anyaman n yang yang !i-um+ !i-um+ainy ainyaa se%akt se%aktu u men!ete men!eteksi ksi tu$uh& tu$uh& .$ser/ .$ser/asi asi mikros mikrosko+ ko+ +a!a +a!a -aringan yang $er$e!a memastikan $ah%a satuan terkeil !ari -aringan !i$entuk oleh sel sel inilah inilah meru+a meru+akan kan struktu strukturr terkei terkeill yang yang mem$en mem$entuk tuk tu$uh tu$uh manusi manusiah ahe%a e%an n !an tum$uhan ('ianury 2000)& u$uh tum$uhan seara mor,ologi ter!iri atas unit sel yang !ilin!ungi oleh !in!ing !an masingmasing sel !engan menga!akan kesatuan !engan a!anya su$stansi antar sel& Di !alam tu$uh tum$uhan selsel ini ter!a+at !alam kelom+ok yang seara struktural !an ,ungsional $er$e!a !engan kelom+ok sel yang lain& elom+okkelom+ok selsel terse$ut !ikenal !engan -aringan (man!a 2007)& el tum$uhan mem+unyai $entuk ukuran !an struktur yang $er/ariasi& truktur sel rumit namun !emikian semua sel mem+unyai +ersamaan !alam $e$era+a segi !asar& aring aringan an yang yang menyusu menyusun n tum$uh tum$uhtu tum$u m$uhan han ter!iri ter!iri !ari !ari -aringa -aringan n mu!a mu!a !an !e%asa& !e%asa& aringan-aringan ini !a+at !itemukan +a!a $agian akar $atang !an !aun tum$uhan& aringan ini !a+at !ilihat !engan mem$uat suatu +re+arat +enam+ang !ari $agian$agian tum$uhan (man!a 2007) Pre+arat a%etan -aringan tum$uhan a!alah salah satu me!ia +em$ela-aran "iologi yang sangat e,ekti,& Dengan latar $elakang se+erti !i atas maka !ihara+kan kita !a+at meng mengam amati ati !an !an meli melihat hat +re+ +re+ara aratt !eng !engan an meng menggu guna naka kan n meto meto!e !e +ara +ara,, ,,in in !eng !engan an +e%arnaan tunggal (man!a 2007)& eto!e +ara,in termasuk meto!e irisan yang meru+akan meto!e rutin atau stan!ar& eto!e ini sekarang $anyak !igunakan karena ham+ir semua maam -aringan !a+at !i+otong !engan $aik $ila menggunakan meto!e ini& Pre+arat a%etan -aringan tum$uhan a!alah salah satu me!ia +em$ela-aran $iologi yang sangat e,ekti,& .leh karena itu !engan latar $elakang se+erti !i atas maka !ilakukanlah +ero$aan ini !engan hara+an kita !a+at mengamati !an melihat +re+arat !engan menggunakan meto!e +ara,in&
1&2 Perumusan Perumusan masalah masalah
"agaimana ara mem$uat +re+arat !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) !engan
meto!e +ara,in +a +er$e!aan +engamatan stomata !aun karet ( Ficus s+&) !engan meto!e +e%arnaan sa,ranin im+rint !an meto!e +enam$ahan air
1&3 u-uan Penelitian u-uan +enelitian ini selain untuk memenuhi tugas akhir semester mata kuliah mikroteknik a!alah untuk menye!iakan !an menam$ah +re+arat a%etan -aringan tum$uhan khususnya !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) untuk mengetahui meto!e +engamatan stomata yang mana yang +aling e,ekti, !an tahan lama untuk ke+erluan +raktikum !i urusan "iologi&
1&4 an,aat Penelitian !a+un man,aat !ilakukannya +enelitian +em$uatan +re+arat -aringan tum$uhan ini a!alah: 1& enye!iakan +re+arat tum$uhan yang $elum a!a !i 'a$oratorium urusan "iologi ni/ersitas 8egeri akarta& 2& enam$ah +engetahuan tentang meto!e +engamatan stomata yang +aling e,ekti, untuk men!a+atkan stomata yang -elas !alam %aktu yang e+at !an tahan lama& 3& engetahui taha+taha+ +em$uatan +re+arat tum$uhan terutama !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) 4& enam$ahn +engetahuan tentang taha+tahan +em$uatan +re+arat yang $aik !an $enar&
" II TIN%"&"N P&'T"K"
99&1 ikroteknik ikroteknik atau teknik histologi ini akan !i+ela-ari ilmu atau seni untuk mem+ersia+kan organ -aringan atau $agian yang lainnya untuk !a+at !iamati !an !i+ela-ari !engan le$ih teliti& Pa!a umumnya untuk melihat -aringan atau organ ini !ilakukan !engan $antuan mikrosko+ karena struktur -aringan seara ter+erini +a!a !asarnya terlalu keil untuk !a+at !ilihat !engan mata telan-ang& uatu s+esimen mikroteknik !a+at meru+akan se$agian atau+un keseluruhan !ari struktur yang !iteta+kan& elain !iletakkan +a!a kaa +re+arat s+esimen ta!i umumnya !ilin!ungi !engan kaa +enutu+ yang !irekatkan !i atas s+esimen (lyas 2010)& "anyak ara !alam +em$uatan +re+arat -aringan tum$uhan !iantaranya a!alah !engan meto!e +ara,in& eto!a ini sekarang $anyak !igunakan karena ham+ir se mua maam -aringan !a+at !i+otong !engan $aik $ila menggunakan meto!a ini& e$aikanke$aikan meto!a ini a!alah irisan yang !ihasilkan -auh le$ih ti+is !ari +a!a menggunakan meto!a $eku atau meto!a seloi!in& Dengan meto!a $eku te$al irisan ratarata !iatas 10 mikron ta+i !engan meto!e +ara,in te$al irisan !a+at mena+ai ratarata 6 mikron& 9risanirisan yang $ersi,at seri !a+at !iker-akan !engan mu!ah $ila menggunakan meto!e ini& Prose!urnya -auh le$ih e+at !i$an!ingkan !engan meto!e seloi!in& 8amun meto!e +ara,in -uga memiliki kelemahan yaitu -aringan men-a!i keras mengerut !an mu!ah +atah& aringan-aringan yang $esar ti!ak !a+at !iker-akaan $ila menggunakan meto!e ini& e$agian $esar enimenim akan larut !engan meto!e ini (9mron 200;)& eto!e +ara,in termasuk meto!e sayatan yang $anyak !igunakan karena ham+ir semua -aringan !a+at !i+otong !engan meto!e ini& Pengamatan seara mikrosko+is !ari suatu -aringan !alam $er$agai kon!isi !an $er$agai elemen -aringan !a+at !iamati atau !iteliti melalui +re+arat +ermanen yang !i$uat !engan meto!e +ara,in& Pem$uatan +re+arat !engan meto!e +ara,in a!alah meto!e yang +aling umum !igunakan untuk +em$uatan +re+arat +ermanen $aik +a!a tum$uhan atau+un +a!a he%an (ugiharto 1<;<)& !+aun aha+an meto!e +ara,in Pem$uaatan +re+arat -aringan tum$uhan yang !ilakukan !engan meto!e +ara,in melalui $e$era+a taha+an yaitu: & Pengam$ilan -aringan (Diseksi#=olleting)
Diseksi meru+akan +roses +engam$ilan -aringan atau $agian -aringan !ari sum$er alami $aik $eru+a tum$uhan atau+un he%an yang akan !igunakan se$agai $ahan !asar !alam mikroteknik& Pa!a -aringan he%an setelah !ilakukan +engam$ilan !i+erlukan +roses +enuian (%ashing)& Penuian (%ashing) a!alah suatu taha+ yang mem$e!akan meto!e +ara,,in he%an !engan tum$uhan& Pero$aan ini +erlu !ilakukan karena -aringan yang !iam$il +a!a he%an !engan tum$uhan&+enuian ini +erlu !ilakukan karena -aringan yang !iam$il +a!a he%an sering kali !alam keaa!aan kotor oleh !arah atau kotoran se+erti +a!a organ +enernaan& elain itu -aringan he%an le$ih e+at mengalami !ehi!rasi yang merusak -aringan sehingga +erlu see+at mungkin !imasukan ke !alam larutan ,isiologis se$agai ,iksasi sementara& Penuian +a!a +em$uatan +re+arat he%an menggunakan larutan garam ,isiologis& "& >iksasi (>i?ation) >iksasi a!alah usaha yang !a+at mem+ertahankan elemenelemen sel atau -aringan agar teta+ $era!a +a!a tem+atnya !an ti!ak mengalami +eru$ahan $entuk mau+un ukuran&& me!ia yang !igunakan untuk ,iksasi !ise$ut !engan ,iksati,& >iksati, ter!iri !ari unsur unsur kimia yang !i$uat !alam $entuk larutan atau gas yang $er,ungsi agar aringan ti!ak mem$usuk !an !a+at mem+ertahankan struktur -aringan& u-uan !ilakukan ,iksasi !alam +em$uatan +re+arat !engan menggunakan meto!e +ara,,in a!alah: 1& mematikan (menghentikan +roses+roses meta$olisme)-aringan !engan e+at se!angkan kea!aan se!ikit $anyaknya men!ekati kea!aan semula& 2& menegah ter-a!inya kerusakan -aringan yang !ise$a$kan oleh mikroorganisme atau+un kerusakan oleh -enis enim yang terkan!ung oleh -aringan itu sen!iri yang !ikenal !engan autoloisis& 3& eningkatkan !aya +e%arnaan karena a!anya $ahan$ahan keras (mor!ant) yang meru+akan kom+onen -aringna ,iksati,&
=& Dehi!rasi (!ehy!ration)
Dehi!rasi a!alah +roses +enarikan air !ari !alam -aringan !engan menggunakan $ahan$ahan kimia tertentu& Dehi!rasi $ertu-uan untuk mengeluarkan air !ari !alam -aringan yang telah !i,iksasi& Proses !ehi!rasi meru+akan serangkaian +roses !engan ara memasukan sam+le ke !alam larutan !ehi!rasi seara $erseri !ari konsentrasi ren!ah sam+ai konsentrasi tinggi !engan mengurai konsentrasi air& Dehi!ran yang +aling umum !igunakan +a!a mikroteknik !engan meto!e +ara,,in a!alah alkohol& enis !ehi!ran lain a!alah !ioksan 8$utyl alohol aniline oil !an $ergamot oil& lohol meru+akan !ehi!ran yang umum !igunakan karena relati,e le$ih murah !an mu!ah !i+eroleh ta+i mam+u menghasilkan hasil yang $aik $ahkan untuk -enis-enis -aringan-aringan lunak se+erti otak sumsum tulang $elakang !an em$rio& Dalam +enggunaan alohol !i+akai serial !engan konsentrasi yang $er$e!a !imulai !ari konsentrasi ren!ah ke konsentrasi tinggi (35@50@70@;0@<5@100@)& 'ama +eren!aman tergantung untuk masingmasing konsetrasi $erkisar 16 -am& lohol 70@ se$agai sto+ing +oint -aringan !i malamkan& Proses !ehi!rasi !alam $er$agai konsentrasi alohol !ilakukan setingkat !emi setingkat& u-uannya a!alah untuk men-aga agar ti!ak ter-a!i +eru$ahan seara ti$ati$a !alam terha!a+ sel -aringan sehingga +eru$ahan struktur sel yang ter-a!i sekeil mungkin& +a$ila +roses !ehi!rasi ini ti!ak sem+urna $erarti masih a!a molekul air !ari !alam -aringan& eti!aksem+urnaan +roses !ehi!rasi ini !a+at !iketahui !engan -elas setelah -aringan !imasukan ke !alam at +en-ernih !imana -aringan ti!ak men-a!i trans+aran %alau+un -aringan telah lama !alam larutan +en-ernih& ika ter-a!i hal yang !emikian maka -aringan harus !ikem$alikan ke !ehi!ran& D& Pen-ernihan (=learing) =learing meru+akan +roses harus segera !ilakukan setelah !ehi!rasi& u-uan !ari +en-ernihan ini a!alah menggantikan tem+at alohol sementara !alam -aringan yang telah mengalami +roses !ehi!rasi !engan suatu sol/en atau me!ium +en-ernih se$elum +roses +enanaman
!alam
mentran+arankan
+ara,,in&
-aringan
e!ium
agar
+en-ernih
kemu!ian
ini
!a+at
mem+erlihatkan %arna sesuai !engan %arna +e%arnanya& A& 9n,iltrasi (9n,iltration)
akan
ter%arnai
men-ernihkan
atau
!engan
!an
$aik
9n,iltrasi a!alah suatu usaha menyusu+kan me!ia +enanaman (em$e!!ing me!ia) ke !alam -aringan !engan -alan menggantikan ke!u!ukan !ehi!ran !an $ahan +en-ernih (learing agents)& e!ia +enanaman yang !igunakan !alam in,iltrasi ini a!alah +ara,,in& Proses in,iltrasi ini umumnya !ilakukan !i !alam o/en yang suhunya !a+at !iatur sesuai titik leleh -enis +ara,,in yang !igunakan& Pa!a -aringan he%an $isa langsung !igunakan +ara,,in keras !engan titik leleh 565;=& Dalam +roses in,iltrasi se$aiknya -aringan -angsn langsung !imasukan ke !alam +ara,,in murni teta+i se$elum +ara,,in murni -aringan !imasukkan terle$ih !ahulu ke !alam am+uran $ahan +en-ernih !an +ara,,in murni !engan +er$an!ingkan yang sama& Baktu yang !i+erlukan -aringan am+uran ini terlalu lama uku+ $erkisar antara 1030 menit sa-a tergantung $esar keilnya -aringan& u-uan !ari semua ini a!alah untuk menghin!ari -aringan !sri +ru$shsn lingkungsn yang sangat men!a!ak& Peru$ahan +eru$ahan yang men!a!ak ini !a+at menim$ulkan kerusakan +a!a -aringan itu sen!iri se+erti -aringan men-a!i sangat mengkerut!ll& etelah !alam am+uran +ara,,in !an $ahan +en-ernih -aringan $aru !i+in!ahkan ke +ara,,in murni se$anyak tiga kali ganti yang masingmasingnya $erkisar antara 3060 menit& sahakan -aringan -angan terlalu lama !itinggalkan !alam o/en& u-uan !ari taha+ in,iltrasi ini a!alah untuk mengisi -aringan !engan +ara,,in se$agi +engikat -aringan agar teta+ memiliki $entuk !an struktur yang sama se+erti hi!u+& >& Penanaman (Am$e!!ing) Am$e!!ing atau +enanaman meru+akan +roses memasukan atau +enanaman -aringan ke !alam $alok$alik +ara,,in (etakan) sehingga memu!ahkan +roses +enyayatan !engan $antuan mikrotom& u-uan !ari taha+ ini a!alah untuk mem$uat $alok +ara,,in yang $erisi -aringan yang akan !i$uat +re+arat +ermanen& Para,,in yang !igunakan untuk menanam -aringan harus memiliki titik leleh yang sama !engan +ara,,in yang !igunakn %aktu in,iltrasi& Para,,in ketiga yang !i+akai +a!a in,iltrasi !a+at !igunakan langsung untuk +enanaman !engan syarat memang su!ah $ersih !ari $ahan +en-ernih& Halhal yang harus !i+erhatikan !alam +enanaman a!alah: Para,,in yang !igunakan $enar$enar $ersih !an murni
Peralatan yang !igunakan $enar$enar khusu untuk +rose situ sa-a Pem$uatan $alok se$aiknya !ilakukan !ekat o/en atau lam+u "unsen agar le$ih e+at susun-aringan sesuai !engan orientasi yang !irenanakan& aringan se$aiknya !i$eri la$el untuk menghin!ari kesalahan atau $ertukar& ntuk -enis-enis -aringan yang halus +erlu !iker-akan !i $a%ah lu+ angan sam+ai a!a gelem$ung u!ara +a!a $alok +ara,,in yang !i$uat terutama !ekat -aringan& C& Penyayatan (etioning) Proses +enyayatan a!alah +em$uatan sayatan atau +ita !ari $alok +ara,in yang telah ter$entuk !engan menggunakan mikrotom yang $ertu-uan untuk mem$uat sayatan -aringan !an !a+at !ilihat -elas !ari !alam mikrosko+& Pem$uatan irisan !engan meto!e +ara,in memiliki $e$era+a keuntungan !iantaranya a!alah yaitu +roses em$e!!ing le$ih e+at !an le$ih sim+el material em$e!!ing !a+at !isim+an !alam %aktu yang lama +a!a kon!isi kering serta !a+at mem$uat irisan yang ti+is& Am$e!!ing menggunakan +ara,,in sangat $aik !igunakan untuk stu!i em$riologi anatomi !an sitologi (hasim 2002)& H& Penem+elan !an ,iksasi (,i?ing) ,,i?ing a!alah +roses +elekatan atau +enem+atan sayatan -aringan +a!a kaa o$-ek !engan $antuan me!ia +elekat tertentu& u-uan +enem+elan ini a!alah untuk menem+elkan +ita +ara,,in yang su!ah $erisi sayatan -aringan +a!a kaa o$-ek& 9& De+ara,inasi !an Pe%arnaan (taining) De+ara,inasi a!alah suatu taha+ men-elang +roses +e%arnaan !engan menggunakan ?ilol untuk mem$ersihkan +ara,,in !ari -aringan !an kaa o$-ek& Penger-aan !e+ara,inasi aserial atau $erkelan-utan !engan +enger-aan +e%arnaan& u-uan !ari taha+ ini untuk mem$ersihkan -aringan !an kaa o$-ek !ari +ara,,in& Pe%arnaan meru+akan suatu taha+ !alam mikroteknik untuk mem+erta-am atau mem+er-elas $er$agai elemen -aringan terutama selseknya sehingga !a+at !i$e!akan !an !itelaah !engan mikrosko+&tan+a +e%arnaan -aringan akan trans+aran sehingga sulit untuk !iamati& Pe%arnaan akan mem+er-elas rini suatu -aringan sehinnga mu!ah untuk !i+ela-ari
99&P.H.8 88C ( Artocarpus heterophyllus) lasi,ikasi 8angka (rtoar+us hetero+hyllus) ing!om : Plantae (um$uhan) u$king!om : raheo$ionta (um$uhan $er+em$uluh) u+er Di/isi : +ermato+hyta (enghasilkan $i-i) Di/isi : agnolio+hyta (um$uhan $er$unga) elas : agnolio+si!a ($erke+ing !ua # !ikotil) u$ elas : Dillenii!ae .r!o : rtiales >amili : oraeae Cenus : Artocarpus +esies : Artocarpus heterophyllus
or,ologi anaman 8angka kar:
anaman nangka tum$uh kokoh karena !itun-ang oleh sistem +erakaran yang
kuat !ari -enis akar tunggang !engan sistem +era$angan akar yang uku+ $anyak& istem +erakaran yang kuat ini menye$a$kan tanaman nangka sering !itanam untuk ke+erluan konser/asi lahan miring !an !aerah aliran sungai& Daun:
Daun tanaman nangka tergolong !aun tunggal yang tum$uh $erselangseling
+a!a $agian ranting tanaman& Permukaan !aun nangka $agian atas !an $a%ah memiliki +enam+ilan yang $er$e!a& Permukaan !aun $agian atas memiliki %arna hi-au erah !engan tekstur yang liin se!angkan +ermukaan !aun $agian $a%ah $er%arna hi-au tua !engan tekstur yang kasar& Pangkal !aun memiliki +enum+u $er$entuk segitiga !engan %arna kuning keoklatan&
"unga:
anaman nangka a!alah tanaman $erumah satu artinya !alam satu tanaman
!a+at !i-um+ai $unga -antan !an $unga $etina& "unga -antan !iirikan !engan $entuknya yang menyeru+ai ga!a $engkok !an $er%arna hi-au tua se!angkan $unga $etina !iirikan !engan $entuknya yang menyeru+ai ga!a silin!ris yang +i+ih& "uah:
"uah nangka tergolong $uah ma-emuk semu artinya $uah terse$ut tersusun
oleh rangkaian $unga ma-emuk (nyam+lung) !an !ari luar terlihar se+erti hanya satu $uah&Di !alam $uah nangka (!iantara nyam+lung) ter!a+at !ami!ami yang se$etulnya meru+akan $unga nangka yang ti!ak terser$uki&
99&3 9m+rint teknik im+rint yaitu menetak stomata !aun menggunakan kuteks (at kuku)& 9m+rint !ilakukan !engan mengoleskan kuteks tras+aran !ari arah tulang !aun menu-u te+i !aun !engan le$ar sekitar 05 m& 'a+isan kuteks !i$iarkan selama 15 menit sam+ai kering !an !ikelu+as !engan menggunakan seloti+ trans+aran agar stomata !aun terikut& =etakan stomata (im+rint) yang !i!a+at !item+elkan +a!a gelas o$yek !an !iamati !i $a%ah mikrosko+ !engan +er$esaran 100 ?& ntuk mem+ermu!ah +engamatan stomata gam$ar stomata !i,oto !engan menggunakan kamera&
99& 4 eto!e %hole mount (+e%arnaan sa,ranin) eto!e Bhole ount meru+akan meto!e !imana o$-ek yang akan !i$uat se$agai +re+arat $era!a !alam kea!aan utuh yaitu tan+a setioning& ehingga !engan kon!isi terse$ut !a+at !iamati struktur utuh !ari suatu organisme !an tentu sa-a o$-ek akan terlihat !engan -elas ketika !iamati menggunakan mikrosko+& truktur yang !a+at !iamati menggunakan meto!e Bhole ount ini a!alah struktur re+ro!uksi mai+un struktur /egetati, +a!a suatu organisme ("iohem 200;)& eto!e +em$uatan +re+arat yang !igunakan untuk +engamatan seara menyeluruh artinya mem+ela-ari struktur /egetati, !an re+ro!ukti,nya tan+a melakukan +enyayatan terha!a+ tanaman terse$ut karena meto!e ini menggunakan semua $agian tanaman se$agai +re+aratnya& entu sa-a tanaman yang !iamati haruslah $erukuran keil sehingga !a+at termuat +a!a o$-ek glass& e!angkan +a!a tanaman yang agak $esar $isa !ilakukan
+emangkasan agar men-a!i le$ih ra+i !an keil& eto!e %hole mounth mem+unyai kele$ihan !an kelemahan masingmasing& ele$ihan meto!e ini a!alah !a+at mengamati seluruh $agian tanaman !engan -elas tia+ $agian$agiannya& e!angkan kelemahannya a!alah meto!e ini hanya $isa !ilakukan +a!a tanaman !engan ukuran yang keil sa-a ti!ak $isa tanaman yang $esar sehingga meto!e ini +erlu terus !ikem$angkan !engan melakukan $e$agai +ero$aan& ( Bahyuni 200;)&
99&5 eto!e +engamatan se!erhana Pa!a meto!e ini +engamatan stomata !engan ara se!erhana yaitu !engan menyayat ti+is $agian $a%ah !ari !aun lalu !iletkakkan !iatas kaa o$-ek !i$eri air agak sayatan ti!ak hilang lalu !itutu+ !engan o/er gelas kemu!ian !iamati !i$a%ah mirkosko+& Prosesnya mu!ah teta+i meto!e ini ka!ang susah untuk men!a+atkan stomata seara elas karena $iasanya saat menyayat terlalu te$al sehinggal stomatanya ti!ak terlihat&
99& 6 ( Ficus s+&) Daun meru+akan tem+at ,otosintesis& i!ak hanya se$agai tem+at ,otosintesis !aun -uga $er,ungsi untuk trans+irasi (+engua+an air) !an res+irasi (+erna+asan)& Pa!a gam$ar !aun >ius elastia terlihat selsel yang terse$ar& elsel terse$ut a!alah: A+i!ermis !engan kutikula yang $er,ungsi untuk mengurangi +engua+an& A+i!ermis termasuk !alam sistem -aringan !ermal ilem !an >loem& aringan +em$uluh !aun meru+akan lan-utan !ari -aringan $atang ter!a+at !i !alam tulang !aun !an uraturat !aun& Parenkim# tiang selselnya ra+at se!ang -aringan $unga karang selselnya agak renggang sehingga masih ter!a+at ruangruang antar sel& egiatan ,otosintesis le$ih akti, +a!a -aringan tiang karena kloro+lastnya le$ih $anyak !ari+a!a -aringan $unga karang& 8amun untuk kegiatan +ertukaran gas le$ih !ominan !i -aringan $unga karang tomata tersusun atas sel +enutu+ !an sel tetangga yang $anyak mengan!ung kloro+las& !anya stomata memungkinkan ter-a!inya +ertukaran gas antara sel E sel ,otosintetik
!i$agian !alam !aun !engan u!ara !isekitarnya& tomata -uga meru+akan -alan keluarnya ua+ air
" III METODOO*I
999&1 u-uan o+erasional +enelitian Penelitian ini $ertu-uan untuk men!a+atkan +re+arat a%etan -aringan tum$uhan !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) !an men!a+atakan stomata !engan 3 tehnik +engamatan a!a+un $e$era+a tu-uan +raktikum ini yaituF
1& en!a+atkan +otongan !aun Artocarpus heterophyllus "erukuran 05 m 2& enanam Artocarpus heterophyllus +a!a +ara,in 3& en!a+atkan +otongan +re+arat !aun Artocarpus heterophyllus !engan menggunakan 4& 5& 6& 7&
alat +emotong yaitu mikrotom& e%arnai +re+arat !aun Artocarpus heterophyllus !engan +e%arna sa,ranin en!a+atkan hasil +e%arnaan yang $aik engolesi +ermukaan !aun Ficus&s+ !engan kutek !an men!a+atkan etakan stomata elakukan +engamatan stomata !engan meto!e %hole mount !engan menggunakan
+e%arna sa,ranin ;& en!a+atkan stomata yang $agus
999&2 eto!e +enelitian eto!e +enelitian yang !igunakan a!alah meto!e !ekri+ti,
999&3 Baktu !an tem+at Penelitian ini !ilaksanakan +a!a $ulan ,e$ruari-uni 2016 !i 'a$ H -urusan $iologi ni/ersitas 8egeri akarta +a!a hari Ra$u +ukul 13&00 B9" hingga selesai&
999&4 lat !an "ahan lat:
ilet Penggaris o/en "eaker glass Celas ukur =orong Pi+et "otol /ilial Penangas aki tiga "unses aset $lok s+irator ikrotom .$-et gelas =o/er gelas issue
ertas la$el
"ahan:
Daun Artocarpus heterophyllus Daun Ficus s+& kua!es 'arutan > 'arutan Hemato?ylin 'arutan eosin +iritus ertas saring ertas kalen!er =ana!a $alsam lkohol $er$agai konsentrasi ilol a,ranin 'arutan !an larutan " Para,in air !an minyak +ara,in ertas la$el Putih telur uteks $ening Cliserin 30@ "aylin ilet goal
999&5 =ara ker-a =ara ker-a yang !ilakukan !alam +em$uatan +re+arat a%etan !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) a!alah se$agai $erikut: a& Proses +em$uatan alkohol $ertingkat $& Proses +em$uatan larutan > 'arutan ter!iri !ari 50 ethyl alkohol <6@ 5 asam asetat glaial 10
,ormal!ehi! (3740 @) 35 akua!es "ahan$ahan yang !i+erlukan !iam+urkan !an !imasukkan ke !alam $otol
kaa !an !isim+an selama satu minggu & Proses ,iksasi ia+kan alat !an $ahan yang !i+erlukan Potong !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) men-a!i +otongan+otongan keil (05 ? 05 m) se$anyak 35 +otongan&
emasukkan $ahan yang su!ah !i+otong ke!alam $otol /ilial kemu!ian
!i$eri larutan > hingga !aun teren!am !an !iamkan selasa satu minggu elakukan as+irasi menggunakan as+irator selama 5 menit atau hingga organ
tenggelam !& Proses +en-ernihan atau !ehi!rasi asukkan +otongan !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) ke !alam alkohol 70@ ;0@ <0@ !an 100@ seara $erturutturut selama G 2030 menitF lalu ke!alam minyak +ara,in e& Proses in,iltrasi asukkan +otongan !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) ke !alam +ara,in lunak !engan 2 hingga 3 kali +ergantian selama 1 -am ,& Proses +enanaman (em$e!!ing) "uat tem+at +enanaman !engan menggunakan kertas kalen!er yang $er$entuk +ersegi atau +ersegi +an-ang (sesuai ukuran organ tanamaman yang
!igunakan) asukkan +ara,in $lok yang su!ah !iairkan !iamkan sam+ai +ara,,in
terse$ut agak mem$eku asukkan $ahan ke !alam +ara,in yang su!ah agak mem$eku usahakan
$ahan !iletakkan !i tengahtengah $lok Diamkan sam+ai mem$eku g& Proses $loking Pin!ahkan $ahan yang su!ah !itanam !i $lok +a!a kaset !engan menem+elkan +a!a kaset !engan menggunakan +ara,in h& Proses +em$uatan larutan !an larutan " 'arutan ter!iri !ari gelatin 1 gram alium +ro+ionate 1 gr $enolkonium i&
-&
hlori!e 1 !an air 100 'arutan " ter!iri !ari hromealum 1 gr ,ormalin 40@ !an air <0 asukkan semua $ahan laurutan ke!alam $otol kaa am+ur men-a!i satu&
Demikian -uga !engan larutan " Proses +enyayatan ayat $ahan !engan menggunakan mikrotom 'etakkan sayatan !i o$-ek gelas yang su!ah !itetesi !engan larutan kemu!ian tetesi larutan " !iatas sayatan Proses +e%arnaan De+ara,inasi !engan ?ilol 1 !an 2 masingmasing selama 5 menit Dehi!rasi !engan alkohol 100@ <6@ ;0@ 70@ !an akua!es masingmasing
selama 5 menit asukkan ke !alam larutan haemato?ylin selama 2 menit =ui !engan air keran mengalir selama 5 menit emu!ian masukkan ke!alam larutan eosin selam 2 menit Dehi!rasi !engan alkohol 70@ ;0@ <6@ !an 100@ masingmasing selama 5 menit
asukkan ke !alam ?ylol 1 !an 2 masing masing selama 5 menit etelah itu $ahan !itutu+ !engan menetesi ana!a $alsam !i atas +re+arat
setelah itu !itutu+ !engan mengunakan o/er gelas emu!ian amati +re+arat !i $a%ah mikrosko+
=ar ker-a +engamatan stomata 1& eto!e im+rint oleskan kuteks tras+aran !ari arah tulang !aun menu-u te+i !aun !engan le$ar
sekitar 05 m& 'a+isan kuteks !i$iarkan selama 15 menit sam+ai kering !an !ikelu+as !engan
menggunakan seloti+ trans+aran agar stomata !aun terikut& =etakan stomata (im+rint) yang !i!a+at !item+elkan +a!a gelas o$yek !an
!iamati !i $a%ah mikrosko+ !engan +er$esaran 100 ?& gam$ar stomata !i,oto !engan menggunakan kamera& 2& eto!e %hole mount (+e%arnaan sa,ranin) >iksasi !aun karet ( Ficus s+&) !alam larutan ,iksati, !alam alohol 70 @
selama 1 -am& Diuiyaitu !engan mem$uang larutan ,iksati, lalu mengganti aua!es
$e$era+a kali& e$elum mem$uat sayatan +ara!ermal terle$ih !ahulu !aun !iui !engan
akua!es lihat sayatan !i $a%ah mikrosko+ su!ah ti+is atau $elum& am$il sayatan !engan kuas lalu $ilas !engan akua!es& ayatan !i ren!am !alam larutan $aylin selam 510 menit untuk melarutkan
kloro,il yang akan menghalangi stomata& sayatan selan-utnya !i$ilas !engan aua!es sam+ai larutan $aylin hilang& Pe%arnaan : %arnai sayatan e+i!ermis !aun !engan +e%arna tunggal yaitu
sa,ranin 1@ selama 35 menit& $ilas kem$ali sayatan yang telah !i%arnai !engan aua!es& am$il sayatan !engan kuas lalu letakkan !i atas kaa o$-ek lalu tetesi !engan
larutan glyserin 30@& tutu+ sayatan !engan kaa +enutu+lalu $ersihkan sisa larutan glyserin !engan
tissue& olesi +inggiran kaa +enutu+ !engan kutek $ening& $eri ta$le !i salah satu u-ung kaa o$-ek amati +re+arat yang su!ah -a!i !i $a%ah mikrosko+& 3& eto!e +engamatan se!erhana Daun karet ( Ficus s+&) !isayat melintang seti+is mungkin 'etakkan sayatan !iatas kaa o$-ek etesi !engan air utu+ !engan o/er gelas mati !i$a%ah mikrosko+
>oto hasil +engamatan
999&6 ehnik +engum+ulan !ata Data yang !iam$il $eru+a gam$ar mikrosko+is !ari +re+arat !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) !an stomata !ari !au karet ( Ficus s+&)
999&7 ehnik analisis !ata ehnik analisis !ata $er!asarkan anatomi +re+arat !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) !an +re+arat !aun karet ( Ficus s+&) yang tam+ak !i$a%ah mikrosko+&
" I"'I D"N PEM""'"N
9I&1 H9' 1& Cam$ar +re+arat meto!e im+rint
stomat
2. gam$ar +re+arat meto!e %hole mount (+e%arnaan sa,ranin +re+arat 5 menit
stomat
+re+arat setelah 1 minggu
stomat
3. gam$ar +re+arat meto!e se!erhana
stomat
4. gam$ar +re+arat -aringan +a!a !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus)
Jaringan
Jaringan
kutikula
Urat daun
Jaringan palisade Epidermis
9I&2 PA"H8 Praktikum ini $ertu-uan untuk mengetahui +em$uatan +re+arat -aringan !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) !an meto!e +engamatan stomata +a!a !aun Ficus s+& Dengan 3 meto!e& Pa!a +raktikum meto!e +ara,inlangkah +ertama yaitu !engan memotong !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) $erukuran 05 ? 05 m& emu!ian +otongan terse$ut !imasukkan ke!alam $otol /ilial !an !i$eri larutan > untuk +roses ,iksasi +roses ,iksasi ini !ilakukan selama 1 minggu& >iksasi $ertu-uan untuk menga%etkan semua struktur sel sehingga se!a+at mungkin $era!a !alam kea!aan sama atau ham+ir sama !engan +a!a %aktu masih hi!u+& etelah !ilakukan ,iksasi taha+ selan-utnya yaitu as+irasi !engan menggunakan as+irator selama 5 menit sam+ai organ yang ingin !iamati tenggelam tu-uan !ari taha+ ini yaitu untuk menghilangkan ka!ar oksigen yang a!a !alam -aringan& etelah taha+ as+irasi !ilan-utkan ke taha+ +enuian !an !ehi!rasi Pa!a taha+an !ehi!rasi ini !i$erikan alkohol $ertingkat !ari 70 @ ;0 @ <0 @ hingga <6 @ kami ti!ak menggunakan alkohol 100@ karena alkohol konsentasi terse$ut stoknya ha$is -a!i kami menggunakan alkohol <6@ se$agai konsentrasi tertinggi& tia+ tingkatan alkohol !ilakukan !ehi!rasi selama 10 menit& Pem$erian alkohol $ertingkat !ari konsentrasi ren!ah hingga konsentrasi tinggi $ertu-uan agar selnya ti!ak lisis atau rusak !an kan!ungan air +a!a
-aringan !a+at keluar se!ikit !emi se!ikit sesai !engan konsentrasi alkohol yang !igunakan& lkohol $ertingkat !i!a+atkan melalui +engeneran !engan rumus I1&1 J I2&2& e+erti halnya +a!a ,iksasi ta!i $er!asarkan literatur !ehi!rasi ini minimal !ilakukan 30 menit ti+a tingkatan alkohol& aha+an !ehi!rasi ini $ertu-uan untuk menarik air keluar yang $era!a !alam -aringan untuk !igantikan !engan alkohol& aha+ selan-utnya yaitu +en-ernihan !ilakukan !engan meren!am +re+arat !ilarutan ?ilolKalkohol (1:1) ?ilolK+ara,in (1:1) !an terakhir !iren!am minyak +ara,in& Pen-ernihan !ilakukan masingmasing satu -am&tu-uan !ari +roses ini a!alah untuk men-ernihkan +re+arat !ari alkohol& aha+ selan-utnya yaitu in,iltrasi menggunakan +ara,in air !i!alam o/en&+a!a +roses ini -aringan !imasukkan seara $ertaha+&lalu -aringan !iren!am !alam +ara,in murni !engan tu-uan menghilangkan kan!ungan ?ilolnya seara maksimum serta untuk menga%etkan -aringan& ahan selan-utnya em$e!!ing yaitu +roses memasukkan atau +enanaman -aringan ke!alam $lok$lok +ara,in sehingga memu!ahkan +roses +enyayatan !engan mikrotom& "lokny !i$uat !ari kertas kalen!er +ara,in yang telah !iairkan !imasukkan ke!alam $lok se$anyak setengah $agian lalu setelah setengah keras !itam$ah lagi +ara,in sam+ai memenuhi
/olume
$lokkemu!ian
!i!inginkan
+a!a
suhu
kamar
sam+ai
+ara,in
mem$eku&tu-uannya agar !a+at !engan mu!ah memotong !alam $entuk +erase gi +an-ang& aha+ selan-utnya yaitu +emotongan +re+arat !engan mikrotom karena mikrotom la$ H su!ah rusak -a!i melakukan +emotongan seara alami yaitu !engan menggunakan silet goal& 'alu hasil +otongan +re+arat !iletakkan !iatas kaa o$-ek lalu !i$eri larutan emu!ian !i$eri larutan " tu-uannya agar hasil +re+arat !a+at menem+el !engan erat +a!a kaa o$-ek& Proses selna-utnya a!alah +e%arnaan& Laitu !engsn meren!am +re+arat !ama ?ilol 1 !an ?ilol 2 masing selama 10 menit lalu !itete!i !engan alkohol <6@ selama 5 menit kemu!ian !i$eri sa,raninKalkohol 70@ selama 5 menit !iren!am !engan alkohol 70@ selama 5 menit lalu !iren!am alkohol a$solut selama 5 menit lalu !iren!am !alam ?ilolKalkohol <6@ selama 5 menit kemu!ian !iren!am lagi !engan ?ilol 1 !an ?ilol 2 masingmasing 5 menit !an !iamati !i$a%ah mikrosko+ lalu hasilnya !i,oto setelah itu
!itetesi !engan +utih telur yang $er,ungsi se$agai +erekat lalu n!itutu+ !engan o/er gelas !an !isim+an& >ungsi ?ilol !isini a!alah agar +ara,in yang menem+el +a!a kaa o$-ek !a+at terle+as sehingga yang tersisa hanya $ahan !aun +ere+arat sa-a& >ungsi alkohol untuk mem$ersihkan +re+arat !an ,ungsi sa,ranin untuk me%arnai -aringan&
A.DA PA8C8 . Pa!a meto!e im+rint yaitu meto!e !engan menggunakan kuteks memeliki kele$ihan yaitu !a+at melihat !engan -elas stomata yang teretak +a!a kuteks meto!e ini ti!ak mem$utuhkan alat yang $anyak !an +roses +enger-aannya e+at !an -uga hasil yang !i!a+atkan -elas&teta+i kekurangannya %arna !ari +re+arat +utih& ntuk meto!e +engamatan se!erhana memiliki $anyak kekurangan !iantaranya susah men!a+atkan sayatan yang sangat ti+is tan+a teram+ur !engan at hi-au !aun !an -uga r+oses ini -ika !i!iamkan terlalu lama !aun yang !isayat akan mengering kele$ihannya +enger-aanya relati, mu!ah ti!ak mem$utuhkan %aktu lama& ntuk meto!e %hole mount +e%arnaan sa,ranin %aktu yang !i$utuhkan %aktu yang lama !an +rosesnya agak se!ikit rumit ta+i meto!e ini $isa men!a+atkan stomata yang $agus !an $er%arna sehingga memu!ahkan kita untuk mengetahui -enis stomata a+a yang ter!a+at +a!a !au Ficus s+& Laitu ti+e stomata parasitik !an +a!a saat hari +ertama setelah +enger-aan !i!a+atkan stomata yang -elas !an $anyak teta+i masih ter!a+at -aringan-aringan yang lain se+erti !in!ing sel terlihat -elas teta+i setelah satu minggu stomata yang !i!a+atkan $e$ar $enar -elas !an agak renggang -aringan lain su!ah ti!ak terlihat& enurut saya meto!e yang +aling $agus yaitu meto!e +e%arnaan sa,ranin karena !i!a+tkan stomata yang sangan $agus teta+i kelemahananya %aktu yang !i$utuhan se!ikit le$ih lamase!angkan untuk men!a+atkan stomata yang e+at !engan ara mu!ah yaitu !engan meto!e im+rint&
" PEN&T&P
I&1 esim+ulan a&
Pem$uatan +re+arat a%etan !engan meto!e +ara,in ter!iri !ari taha+ ,iksasi
+en-ernihan in,iltrasi em$e!!ing +enyayatan !an +e%arnaan $& ti+e stomata !aun Ficus s+& Laitu ti+e +arasitik & +a!a +re+arat !aun nangka ( Artocarpus heterophyllus) terlihat -elas $agian$agian se+erti e+i!ermis $a%ah -aringan s+ons -aringan +alisa!e stomata -aringan +engangkut !an tulang !aun&
D"+T"R P&'T"K"
nonim 2004& Pem$uatan Pre+arat !engan eto!e Para,in&%%%&asosiasi+oliteknik&or&i!& Diakses +a!a tanggal 23 89 2016 nonim 200<& Pem$uatan Pre+arat !engan eto!e Para,in&%%%&-ust$iology&$logs+ot&om & Diakses +a!a tanggal 23 -uni 2016& Haruna >& !an sna!y & 2010& Penuntun Praktikum ikroteknik um$uhan&ni/ersitas Hasanu!!in akassar& 'ianury Ro$$y 8 2000 Histologi ni/ersitas Hasanu!!in Press akassar& et-o usetyoa!i& 2004& natomi um$uhan& alang: ni/ersitas 8egeri alang& ugiharto 1<;<& ikroteknik& De+artemen Pen!i!ikan !an e$u!ayaan Direktorat en!ral Pen!i!ikan inggi Pusat ntar ni/ersitas 9lmu Hayat 9nstitut Pertanian "ogor "ogor& umar!i 9& !an Pu!-oarinto & 2002& truktur Perkem$angan um$uhan& Hasanu!!in akassar&sssss
ni/ersitas
Bi!-a-anto 2001& ikroteknik um$uhan& ni/ersitas 8egeri alang alang&
