LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI PENENTUAN ANGKA KUMAN TANGGAL 9-10 MARET 2010
Disusun Oleh : Kelompok 2 pagi
1. Rani Wulandari
0906488533
2. Rosyida Amalia
0906488546
3. Shinta Ayu Nurfaradilla
0806488552
Departemen Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Indonesia 2010
I.
PENDAHULUAN
Percobaan penentuan angka kuman sangat penting dilakukan untuk mengetahui banyaknya jumlah bakteri atau kuman yang terdapat pada makanan, minuman, obat, obat tradisional, kosmetika, dan alat kesehatan. Jumlah kuman yang terdapat dalam produk-produk tersebut akan menentukan apakah produk tersebut layak dikonsumsi atau tidak. Percobaan kali ini mengambil sampel susu bayi. Percobaaan dilakukan dengan prinsip dan prosedur kerja yang sudah ditentukan untuk mendapatkan hasil yang memenuhi persyaratan hitung jumlah koloni sehingga mencapai tujuan yang diharapkan.
II.
TUJUAN
Praktikum kali ini bertujuan untuk menghitung jumlah kuman aerob yang terdapat dalam produk obat, obat tradisional, makanan, kosmetika dan alat kesehatan. Dalam hal ini kami melakukan penentuan angka kuman pada susu.
III. PRINSIP KERJA
Sediaan yang telah dihomogenkan dan diencerkan dengan pengenceran yang sesuai, ditanam pada media agar. Setelah diinkubasi pada suhu 37 oC selama 24-48 jam, dapat dihitung jumlah koloni yang tumbuh.
IV. TEORI DASAR
Uji Batas Miroba dilakukan untuk memperkirakan jumlah mikroba aerob di dalam semua jenis perbekalan farmasi, mulai dari bahan baku sampai sediaan jadi, dan untuk menyatakan perbekalan farmasi tersebut bebas dari spesies mikroba tertentu. Pengerjaan harus dilakukan secara aseptik (bebas kuman). Uji batas mikroba dilakukan dengan menumbuhkan kuman dengan cara menginkubasi sampel yang telah diencerkan dan diberi nutrisi. Yang disebut “inkubasi” adalah menempatkan wadah di dalam ruangan terkendali secara termostatik pada suhu 30 o-35o selama 18-24 jam. Jumlah kuman akan menentukan layak tidaknya sediaan tersebut dikonsumsi. Pengenceran yang dianggap
mewakili perhitungan jumlah kuman adalah pengenceran yang memberikan jumlah antara 30-300 koloni/ cawan petri.
V. ALAT DAN BAHAN
Alat : 1. Pembakar spiritus 2. Pipet tetes 10 mL, dan pipet tetes 1 mL 3. Tiga buah tabung reaksi 4. Satu buah rak tabung reaksi 5. Enam buah cawan petri 6. Homogenizer 7. Timbangan gram 8. Spatula 9. Spiritus 10. Label 11. Labu ukur 50 ml 12. Balon karet 13. Corong Bahan : 1. Buffer phosphate pH 7,2 2. Nutrient broth 3. Satu gram susu bubuk
VI. Prosedur Kerja
Teori 1. Alat dan bahan disiapkan 2. Tabung reaksi diberi label 10-1, 10-2, dan 10-3. 3. Cawan petri diberi label 10-1, 10-2, dan 10-3 masing-masing dua buah. 4. Seluruh tabung reaksi dimasukkan larutan buffer phosfate pH 7,2 sebanyak 9 ml. 5. Timbang 1 gram susu, larutkan dalam larutan buffer phospate pH 7,2 yang ada pada tabung 1. Kocok sampai homogen. 6. Tuang susu tersebut ke dalam tabung 1 dengan menggunakan corong. 7. Pipet 1 ml cairan dalam tabung 1 ke dalam tabung 2, kocok sampai homogen. 8. Pipet 1 ml cairan dalam tabung 2 ke dalam tabung 3, kocok sampai homogen. Dengan demikian pengenceran bahan yang diperoleh adalah 1:10. 1:100, dan 1:1000 9. Dari masing-masing pengenceran diambil 1 ml, masukkan ke dalam cawan petri. 10. Tuangkan Nutrien Agar Cair (suhu 45-55 o) sebanyak 15-20 ml. Goyangkan ke kanan dan ke kiri sampai merata dan biarkan beberapa saat sampai membeku. 11. Eramkan dalam inkubator pada temperatur 37o C selama 24-48 jam. 12. Hitung jumlah koloni kuman yang tumbuh.
Skema
4
2
1
Larutan buffer pH 7.2
3
Dengan menggunakan pipet, di isi 9 ml setiap tabungnya.
1mL
Susu 1 gram
1mL
3
10-1
10-2
10-3
1mL
1mL
1mL
10-1
10-2
-1
-2
10
10-1
10-2
10-3
10
10-1
10-2
10-3
Larutan NB 10-3
10-3
Diinkubasi selama 24-48 jam pada suhu 37 oC Dituang 15-20 mL.
VII. HASIL PENGAMATAN
Dari percobaan yang telah dilakukan dapat diamati bahwa banyak koloni yang tumbuh setelah dikultivasi pada media dan suhu lingkungan yang sesuai untuk bakteri tersebut. Ditemukan juga jamur pada pengenceran 10 -1dan 10-2.
10-1
10-2
10-3
10-1
10-2
10-3
VIII.PERHITUNGAN
Dari pengamatan yang telah dilakukan didapatkan hasil perhitungan seperti yang tercantum dalam tabel berikut ini.
Pengenceran 10-1 10-2 10-3
Jumlah Koloni Bakteri Petri 1 Petri 2 25 10 6 8 3 3
Rata-Rata 17, 5 7 3
Untuk menghitung jumlah bakteri digunakan rumus: Jumlah kuman total = jumlah koloni x kebalikan angka pengenceran
Maka kami mendapatkan hasil : •
Pada pengenceran 1:10
•
Pada pengenceran 1: 100
•
Pada pengenceran 1:1000
17, 5 x 10 = 175 kuman/gram 7 x 100 = 700 kuman/gram 3 x 1000 = 3000 kuman/gram
Namun, pengenceran yang mewakili perhitungan jumlah kuman adalah pengenceran yang memberikan jumlah antara 30-300 koloni/ cawan petri. Dengan demikian, tidak ada hasil perhitungan angka kuman yang dapat dijadikan acuan karena tidak ada pengenceran yang mewakili.
IX. PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil perhitungan koloni per cawan petri, pengenceran tidak ada yang mewakili jumlah perhitungan (30-300 koloni/ cawan petri). Dengan demikian, jumlah kuman yang terkandung dalam susu tidak dapat ditentukan dan dianggap tidak ada kuman per gram. Hal ini diakibatkan karena ketidaktepatan saat melakukan praktikum. Penyebab ketidaktepatan hasil praktikum, yaitu flambir terlalu lama dan tidak semua koloni bakteri dihitung. Namun, dari hasil pengamatan, tidak hanya bakteri yang tumbuh pada susu yang telah diinkubasi, tetapi juga ditemukan adanya pertumbuhan jamur. Hal ini terjadi susu yang digunakan bukanlah susu yang baru pertama kali digunakan sehingga peluang untuk kontaminasi spora jamur yang berterbangan di udara pada susu lebih besar.
X.
Kesimpulan
Dari data di atas, kami dapat menyimpulkan : 1.
Produk susu tersebut layak dikonsumsi.
2.
Jamur merupakan kontaminan udara.
Daftar Pustaka Departemen Kesehatan RI. 1995. Farmakope Indonesia . edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan. Staf Pengajar Departemen Farmasi FMIPA Universitas Indonesia. 2006.
Penuntun Praktikum Mikrobiologi Farmasi . Depok: Departemen Farmasi FMIPA UI. Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. 1994. Mikrobiologi
Kedokteran. Jakarta: Binarupa Aksara.
