LAPORAN DIALISIS

LAPORAN RESMI PRAKTIKUM BIOKIMIA I. II.

III. III.

JUDUL : “ DIALISIS” TUJUAN: 1. Memaham Memahamii prins prinsip ip kerj kerjaa dialy dialysis sis 2. Memisa Memisahkan hkan EtBr EtBr dari dari DNA dalam dalam agars agarsee gel !. Mengganti Mengganti "#$$er "#$$er lar#tan lar#tan prtein prtein melal#i melal#i dialisi dialisiss DAT DATA PENG PENGAM AMA ATAN DAN DAN PERH PERHIT ITUN UNGA GAN N PERLAKUAN A. PENYIAP PENYIAPAN AN KANTONG KANTONG DIALISIS DIALISIS Memtng mem"ran dialisis sepanjang %

HASIL PENGAMATAN / Mem"rane ane di dialysis

 "er"ent#k seperti

&m lal# mem"#ndel pada salah sat# #j#ngnya Mere"#s mem"rane dengan 1mM ED'A (p)*+, selama 1- menit Mem"ilas mem"rane dengan a#ades

 plasti& dan "er0arna  "ening (transparan, / Natr Natrii#m "ika "ikarr"na "natt  / /

 "ening ED'A  "ening A#ades  "ening

/

'er"en r"entt#k mem"r em"ran anee

Mere"#s kem"ali mem"rane dalam 1mM ED'A selama 1- menit Mem"iarkan mem"ran dingin dan menyimpannya dalam lemari es

dialysis siap pakai B. MEMB MEMBUA UAT T BUFF BUFFER  ER  a. BUFFER A 1. Mem"#at ) )!33) 1M dan

)!33Na 1M se"anyak masing/

B#$$er   p) A 1

!

masing %-- mL 2. Mem" Mem"#a #att 4 jen jenis is "#$$ "#$$er er A B#$$er

)!33)

)!33Na

1 2 ! 6

1M %(mL, 15% 1+% 146 1-2

1M (mL, % 1% !4 5+

7 etanl Ba# menyengat8

2

!

 "ening Ba# menyengat

!

!

 "ening Ba#

% 4

%5 15

161 1+1

menyengat8 6

b. BUFFER B 1. Mem"#at 9 2):36 1M dan 9)2:36

1M se"anyak masing/masing %--

% 4

%

 "ening Ba# asam8

4

 "ening Ba# 0angi8

4

 "ening Ba# 0angi8

mL 2. Mem"#at 4 jenis "#$$er B B#$$er

1 2 ! 6 % 4

92 ):36

9)2:36

1M (mL,

1M

!8% +8% 1582 !+81 418% +484

(mL, 548% 518% +-8+ 4185 !+8% 1!86

 "ening B#$$er   p) B 1 2 ! 6 %

7 etanl

4

'idak "er"a#8

4

ker#h 'idak "er"a#8

4

ker#h 'idak "er"a#8

4

ker#h 'idak "er"a#8

;

ker#h 2 lapisan8 ker#h dan

4

+

 "ening 'idak "er"a#8 ker#h

C. MENGGANTI BUFFER DENGAN DIALISIS Mengisi mem"ran dengan "#$$er B

B#$$er A  "ening B#$$er B  "ening

se"anyak % mL kem#dian mem"#ndel mem"ran Memas#kkan mem"rane ke dalam "#$$er A dan menyimpannya dalam $ree
/

= 1 menit sampai hmgen

?arna lar#tan8 mem"rane8 dan etanl   "ening

Mengam"il 2 tetes lar#tan dalam mem"ran dan menam"ahkan 2 tetes etanl Mem"#ndel mem"ran dan memas#kkan dalam "#$$er B serta menyimpannya dalam $reeeS36

I@.

/

?arna lar#tan8 mem"rane8 dan >eS36 ker#h dan tak "er"a#

:EMBA)ASAN

'#j#an dari per&"aan dialisis adalah memahami prinsip kerja dialisis8 memisahkan EtBr dari DNA dalam agarse gel dan mengganti "#$$er lar#tan prtein melal#i dialisis. Nam#n #nt#k  t#j#an yang ked#a tidak dilak#kan. Dialisis mer#pakan salah sat# teknik pemisahan tert#a #nt#k preparasi sampel8 pem#rnian dan karakterisasi "imlek#l. :rinsip kerjanya memisahkan mlek#l terlar#t "erdasarkan #k#ran

mlek#lnya melal#i s#at# mem"ran "erpri. Lar#tan dalam air yang mengand#ng &#ran makrmlek#l dan mlek#l ke&il ditempatkan dalam mem"ran "erpri yang ked#a #j#ngnya di"#ndel agar lar#tan tidak t#mpah kel#ar. Mem"ran terse"#t kem#dian direndam dalam 0adah  "esar "erisi "#$$er "erkek#atan inik rendah. m#mnya makrmlek#l "er#k#ran le"ih "esar  dari 1---- Da tidak "erdi$#si kel#ar mem"ran8 sedangkan mlek#l/mlek#l ke&il akan lel#asa  "erdi$#si melal#i pri/pri mem"ran.

Aki"atnya knsentrasi mlek#l ke&il di dalam mem"ran akan "erk#rang. 9esetim"angan  "ergant#ng pada l#me dan ter&apai setelah 6 sampai 4 jam. Setelah kesetim"angan ter&apai8  "#$$er dalam 0adah diganti yang "ar# dan jika dialisis dilanj#tkan knsentrasi mlek#l ke&il di dalam mem"ran akan menjadi semakin "erk#rang. Dialisis adalah metde yang sederhana8 m#rah dan e$ekti$8 paling sering dig#nakan #nt#k  menghilangkan garam dan mlek#l ke&il lainnya dari lar#tan makrmlek#l ata# #nt#k  mengganti "#$$er prtein. Selama pemisahan dan pem#rnian "imlek#l8 mlek#l ke&il ditam"ahkan #nt#k pengendapan selekti$ ata# melar#tkan mlek#l/mlek#l ke&il yang diinginkan. nthnya prtein sering diendapkan dengan penam"ahan pelar#t rganikCgaram seperti ammni#m ata# natri#m s#l$at. Akan tetapi kehadiran pelar#t rganik ata# garam terse"#t  "iasanya menggangg# pem#rnian le"ih lanj#t dan karakterisasi sehingga har#s dihilangkan. Dalam per&"aan ini8 "#$$er yang dig#nakan adalah "#$$er asetat dan "#$$er $s$at. B#$$er  ata# "iasa dise"#t lar#tan penyangga adalah s#at# lar#tan yang dapat mempertahankan p) pada kisarannya. ika pada s#at# lar#tan penyangga ditam"ah sedikit asama ata# sedikit "asa ata#

dien&erkan8 maka p) lar#tan relati$ tidak "er#"ah. Dalam kehid#pan sehari/hari "#$$er sangat  penting peranannya dalam reaksi/reaksi "ikimia dan dalam "idang "iteknlgi. B#$$er  memiliki "anyak ma&am dan jenis. Sehingga dalam memilih "#$$er8 yang har#s diperhatikan adalah p) ptim#m serta si$at/si$at "ilgisnya. Banyak jenis "#$$er yang memiliki pengar#h terhadap sistem "ilgis8 aktiitas en
 p) * p9 7 lg

:er&"aan dialisis ini dilak#kan melal#i ! tahap8 yait#  A. :ENIA:AN 9AN'3NF DIALISIS :rinsip kerja dari tahap ini adalah memtng mem"ran dialisis se"esar % &m8 kem#dian di"#ndel pada salah sat# #j#ngnya. Lal# mere"#s mem"ran dengan 2G ("C, natri#m  "ikar"nat dan 1 mM ED'A (p) * +, selama = 1- menit. Saat pere"#san mem"ran dalam ED'A ini dihar#skan mengg#nakan lateks dan penjepit kay# karena si$at lar#tan ED'A yang karsingenik. Selanj#tnya mem"ilas mem"ran dengan ak#ades dan mere"#s mem"ran kem"ali dalam 1 mM ED'A selama 1- menit. 'erakhir mem"iarkan mem"ran dingin dan menyimpannya dalam lemari es #nt#k per&"aan selanj#tnya. Dari tahap ini didapat mem"ran dialisis yang siap pakai. 9em#dian lar#tan ED'A dalam per&"aan memiliki $#ngsi #nt#k mem"#ka pri/pri mem"ran dan mempreparasi mem"ran.

B. :EMBA'AN B>>EH  Ada 2 jenis "#$$er yang dig#nakan dalam per&"aan ini8 yait# "#$$er A dan "#$$er B. B#$$er A mer#pakan "#$$er asetat yang di"#at dari lar#tan )!33) 1M di&#r dengan lar#tan )!33Na 1M dengan kmpsisi l#me yang "er"eda "eda. 9em#dian masing masing dari lar#tan "#$$er terse"#t di#k#r p)nya mengg#nakan indikatr #niersal. Setelah it# mengam"il 2 tetes dari lar#tan "#$$er A terse"#t dan ditam"ah dengan 2 tetesetanl

Buffer A

1

CH3COOH

CH3COONa

%H

Se&e#a' ()&a"ba'

M !"#$

M !"#$

Per,+baa- Te+r)

a#*+'+#

15%

%

!

Ba#

!8-

menyengat8

 "ening 2

1+%

1%

!

!84

Ba#

menyengat8

 "ening !

146

!4

!

68-

Ba#

menyengat8

 "ening 6

1-2

5+

%

684

Ba# asam8 "ening

%

%5

161

4

%8-

Ba# 0angi8 "ening

4

15

1+1

4

%84

Ba# 0angi8 "ening

Sedangkan "#$$er B mer#pakan "#$$er phsphat yang di"#at dari &#ran lar#tan 9 2):36 1M dengan lar#tan 9)2:36 1M dengan kmpsisi l#me "er"eda/"eda kem#dian masing/masing dari lar#tan "#$$er terse"#t di#k#r p)nya mengg#nakan indikatr #niersal. Setelah it#8 mengam"il 2 tetes dari lar#tan "#$$er B #nt#k di#ji dengan 2 tetes >eS36

Buffer

K HPO/

KHPO/

%H

B

M !"#$

M !"#$

Per,+baa-

1

!8%

548%

Se&e#a'

4

Te+r)

()&a"ba' FeSO/

%86 'idak

"er"a#8

ker#h 2

+8%

518%

4

%8+ 'idak

"er"a#8

ker#h !

1582

+-8+

4

482 'idak

"er"a#8

ker#h 6

!+81

4185

4

484 'idak

"er"a#8

ker#h %

418%

!+8%

;

;8- 2 lapisan8 ker#h dan "ening

4

+484

1!86

+

;84 'idak

"er"a#8

ker#h

)asil peng#k#ran p) per&"aan "aik pada "#$$er A ma#p#n "#$$er B men#nj#kkan adanya ketidakses#aian dengan teri. )al ini dim#ngkinkan pada per&"aan dig#nakan indikatr #niersal8 "#kan mengg#nakan p) meter sehingga p) yang di#k#r k#rang ak#rat.  Nam#n se&ara k#alitati$8 p) per&"aan meningkat seiring dengan penam"ahan garam ses#ai dengan teri yang ada. B#$$er A dan "#$$er B yang di"#at dig#nakan #nt#k per&"aan selanj#tnya. >#ngsi penam"aha alkhl adalah #nt#k #ji adanya "#$$er A sedangkan penam"ahan >eS36 adalah #nt#k #ji adanya "#$$er B

. :ENFFAN'IAN B>>EH DENFAN DIALISIS :ada tahap ini8 prinsip dasarnya adalah mengganti "#$$er dalam mem"ran melal#i dialisis dengan "#$$er lain. Langkah kerja yang dilak#kan yait# dengan mengisis mem"ran dialisis dengan "#$$er B se"anyak % ml kem#dian men#t#p dengan di"#ndel (jangan sampai  "&r,. Lal# memas#kkannya ke dalam gelas "eker "erisi "#$$er A8 men#t#pnya dan menyimpan dalam $ree
Selanj#tnya mem"ran di"#ndel lagi dan memas#kkannya ke dalam "#$$er B lal# menyimpannya lagi dalam $reeeS36 2 tetes. )asilnya8 lar#tan dalam mem"ran setelah ditetesi >eS36 adalah ker#h dan tidak "er"a#. )al ini men#nj#kkan "ah0a prses dialisis telah "erhasil8 dimana "#$$er A dalam mem"ran telah "erganti dengan "#$$er B di"#ktikan dengan #ji >eS36 psiti$.

@.

9ESIM:LAN 1. Dialisis adalah salah sat# teknik pemisahan tert#a #nt#k preparasi sampel8  pem#rnian8 dan karakterisasi "imlek#l 2. B#$$er adalah s#at# lar#tan yang dapat mempertahankan p) ketika ditam"ahkan asam ma#p#n "asa ata# dilak#kan pengen&eran !. :rinsip kerja dialisis adalah memisahkan mlek#l terlar#t "erdasarkan #k#ran mlek#l melal#i s#at# mem"rane "erpri 6. B#$$er yang dig#nakan dalam per&"aan adalah "#$$er asetat dan $s$at %. )asil peng#k#ran p)

4. Semakin "anyak l#me garam maka semakin tinggi nilai p) ;. :enam"ahan etanl "er$#ngsi  "#$$er A dengan ditandai adanya  penam"ahan >eS36 "er$#ngsi

B#$$er B 1 2 ! 6 % 4

 "#$$er yang ditandai adanya keker#han

p) 4 4 4 4 ; +

yang ditam"ahkan8 #nt#k #ji adanya "a# sedangkan #nt#k #ji adanya