“KONTROL DAN VALIDASI KULTUR SEL HEWAN”
-Control and Validation Animal Cell Culture-
Disusun Oleh: NAFA NAFA ULFA ULFATYA TYA 013115000005!
DEPARTEMEN BIOLOGI FAKULTAS AKULTAS ILMU ALAM INSTITUT TEKNOLOGI SEPULUH NOPEMBER SURABAYA 2017 1
A. Kulu! S"l
"ultur sel meru#a$an suatu metode %an& men&a'u #ada #en&an&$atan sel dari he(an atau tum)uhan %an& $emudian di$ultur dalam suatu lin&$un&an )uatan %an& sesuai* +el terse)ut da#at dian&$at dari ,arin&an se'ara lan&sun& dan di#ilih se'ara enimati$. melalui suatu te$ni$ %an& )erarti se)elum di)udida%a$an. atau mun&$in ,u&a diam)il dari 'ell line atau 'ell stain %an& sudah disedia$an* "ultur sel sudah dila$u$an se,a$ a(al tahun /0-an dan di&una$an se)a&ai sarana )ela,ar men&enai sel he(an se'ara in itro 2ahma(ati. /014* "ultur sel )er$aitan den&an #roses %an& $om#le$s men&enai isolasi sel dari lin&$un&an aslin%a in io4 mau#un dalam $ondisi lin&$un&an %an& di$ontrol in itro4* +el dari ,arin&an atau or&an tertentu da#at di&una$an se'ara luas #ada #enelitian mau#un dia&nosis. terutama #ada ine$si irus* "ultur sel meru#a$an alat %an& san&at di#erlu$an #ada #en&o)atan modern dan dia&nosis ine$si #ada manusia* +el da#at ,u&a di#eroleh dari ,arin&an %an& sa$it 'ontohn%a. sel tumor hati4 %an& diam)il selama o#erasi se)a&ai )a&ian dari tera#i untu$ #asien* "ultur sel )iasan%a dila$u$an dalam )entu$ sus#ensi sel %an& diam)il dari ,arin&an asli )ai$ se'ara enimati$. me$ani$. atau disosiasi $imia4. $ultur #rimer. atau 'ell line dan dila$u$an di )a(ah $ondisi la)oratorium %an& steril dan lin&$un&an %an& ter$endali meli)at$an suhu. &as. dan te$anan* 6al ini harus men%esuai$an lin&$un&an in io dari sel terse)ut sehin&&a sel mam#u )ertahan hidu# dan ter,adi #rolierasi se'ara ter$endali "humairoh. /014* B. P"#$u%%& '%& K(&!(l S"l H")%&
Ada#aun hal hal %an& #erlu di#erhati$an dalam mela$u$an $ultur sel atau $ultur ,arin&an he(an menurut Nema. /01/. diantaran%a :
7eralatan %an& Di)utuh$an dalam "ultir +el
Laminar Air Flo( Ter)a&i atas dua. %a$ni : Verti$al dan 6oriontal* "a# Verti$al 8iolo&i'al +aet% Ca)inet4 da#at di&una$an unru$ or&anism )er)aha%a* "a# 6oriontal untu$ or&anism %an& tida$ )er)aha%a* "edua "a# dilen&$a#i sarin&an 697A. dilen&$a#i den&an sinar UV untu$ sterilisasi*
n$u)ator CO/ +el tum)uh dalam atmosir 5; - 10; CO/ $arena media %an& di&una$an didu$un& den&an asam natrium )i'ar- )onate < 'ar)oni' dan #6 %an& ter#elihara den&an $uat
2
=i$ros$o# Ter)ali$ =i$ros$o# $ontras ase ter)ali$ di&una$an untu$ memisualisasi$an sel* Dalam #en&&unaan%a #ada 'aha%a %an& minim a&ar da#at terlihat sel-sel %an& ada didasar #re#arat*
Vessels +el-sel %an& )er&antun& #ada An'hora&e memili$i #ermu$aan %an& tida$ )era'un. )iolo&is. inert. dan o#ti$ %an& memun&$in$an sel untu$ )er$em)an&
selama
#ertum)uhan* ni terdiri dari #irin& #etri. #irin& multi-sumur. #irin& mi$rotiter. )otol rol. dan la)u sa#uan-T-/5. T-5. T-150 'm/ luas #ermu$aan4
+entriu&e Ada )er)a&ai ,enis sentriu&al )erdasar$an $e'e#atan* +entriu&e $e'e#atan rendah di)utuh$an untu$ se)a&ian )esar $ultur sel* +entriu&asi suhu rendah le)ih sesuai untu$ sel $arena $ondisi lin&$un&an sel %an& rata-rata /0 0C*
"ul$as Freeer atau $ul$as se)a&ai medium #ertum)uhan #em)e$uan4 %an& sesuai untu$ ,enis sel %an& harus tersim#an dalam $ondisi din&in )e$u4*
+u)strat dalam 7er$em)an&an "ultur +el Ada )an%a$ ,enis sel erte)rata %an& mem)utuh$an du$un&an untu$ #er$em)an&ann%a se'ara in itro* >i$a tida$. sel tida$ a$an tum)uh den&an te#at* +el terse)ut dise)ut sel %an& )er&antun& #ada #en%im#anan* Untu$ itu di#erlu$an se,umlah )esar su)strat %an& mun&$in untu$ #ertum)uhann%a misaln%a $a'a. #aladium. #ermu$aan lo&am4. non #ere$at misaln%a a&ar a&rose. dll*4*
"e)utuhan =edia untu$ "ultur +el 7ada umumn%a suatu $ultur sel mem)utuh$an medium %an& sesuai untu$ menun,an& #ertum)uhan dan #er$em)an&an sel %an& di$ultur* +e)uah media terdiri dari sum)er ener&i nutrisi4 %an& sesuai untu$ sel %an& mudah mere$a &una$an dan sen%a(a %an& men&atur si$lus sel* =edium ini harus mem)eri )an%a$ nutrisi. $a#asitas #en%an&&a. isotoni$. dan harus steril* "ara$teristi$ dan $om#osisi media $ultur sel )erariasi )er&antun& #ada #ers%aratan seluler tertentu* 7arameter #entin& meli#uti osmolaritas. #6. dan ormula nutrisi*
3
1* 8asi' =edia Com#onent =edium4
- =edium Alami - =edium Artiisial /* 8er)a&ai medium )uatan %an& di$em)an&$an untu$ $ultur sel a#at di$elom#o$$an $e dalam em#at $elas*
Lin&$un&an "ultur
1* #6 +e)a&ian )esar mamalia se'ara normal tum)uh den&an )ai$ #ada #6 .. dan ada sedi$it aria)ilitas di antara strain sel %an& )er)eda* /* CO/ +e)a&ian )esar #eneliti )iasan%a men&&una$an CO/ 5; - ; di udara. atau se'ara umum dalam rentan& ; - 10; CO/ untu$ $ultur sel* 3* +uhu +e)a&ian )esar sel manusia dan mamalia di#elihara #ada suhu 3! ? C sam#ai 3 ? C untu$ #ertum)uhan o#timal sementara sel-sel Aian mem)utuh$an
[email protected] ? C untu$ #ertum)uhan ma$simum*
>enis +el terdiri atas sel e#itel. sel limo)las dan sel i)ro)last*
Cell Line terdiri atas Finite Cell Line4 dan Continuous Cell Line4
7rosedur dalam "ultur +el 1* "ultur +el 7rimer /* +u)$ultur 3* "ultur =onola%er * +us#ension Culture 5* Ti#e +el "ultur
- +el "ultur de#endent4 - +el "ultur nde#endent4
7reserasi dan 7en%im#anan "rio#reserasi4
4
N/ nitro&en 'air4 di&una$an untu$ melestari$an sel $ultur ,arin&an. )ai$ dalam ase 'air -1! ? C4 atau dalam ase ua# -15! ? C4
*. K(&!(l Kulu! S"l "!+%'%, K(&%#-&%-
"ontrol terhada# $ultur sel %an& sedan& dila$u$an meru#a$an suatu hal %an& #entin&* 6al ini )er$aitan den&an #en'e&ahan terhada# adan%a $ontaminasi #ada sel %an& ten&ah di$ultur* "ontaminasi adalah adan%a $onstituen $e'il dan tida$ diin&in$an $ontaminan4 dalam materi. isi$ tu)uh. lin&$un&an alam. di tem#at $er,a. dll* "ontaminan #ada umumn%a adalah mi$roor&anisme hidu#. serin&$ali )isa )er$em)an& )ia$ dan men&am)il alih men&inasi4 #er'o)aan. terutama $ultur. dan mem)uat $ultur tida$ la&i da#at di&una$an* =em#ertahan$an $ondisi ase#sis adalah salah satu tantan&an %an& #alin& sulit* Ada )e)era#a ,alur #otensial untu$ men'emari termasu$ didalamn%a $e&a&alan dalam #rosedur sterilisasi #ada )aran& < alat &elas dan #i#et. tur)ulensi dan #arti$ulat de)u dan s#ora4 di udara di dalam ruan&an. in$u)ator %an& tida$ di,a&a den&an )ai$ dan lemari es. tudun& laminar air lo( %an& salah. saluran #en&am)ilan sel %an& ter$ontaminasi atau )io#si. dan #en%im#an&an dalam te$ni$ steril * 7otensi sum)er $ontaminasi di)a&i
)eserta tinda$an #en'e&ahan %an& harus
diam)il untu$ men&hindarin%a* 14 "ontaminasi oleh mata dan den&an mi$ros$o# #ada masin&-masin& #enan&anan suatu $ultur harus di#eri$sa den&an )enar /4 >i$a didu&a )ah(a suatu $ultur ter$ontaminasi. #i#et harus di)uan&. tudun& atau )an&$u harus di)ersih$an den&an al$ohol 0; %an& men&andun& desine$tan enoli$* "a# mesin atau )an&$u tida$ )oleh di&una$an sam#ai hari )eri$utn%a* "arena memili$i #otensi )erisi$o terhada# $ultur lain* +am#el harus di$eluar$an dari $ultur dan ditem#at$an #ada slide mi$ros$o#* 34 +iat $ontaminasi harus di'atat* 4
>i$a $ontaminasi masih )aru dan tida$ meluas. #eralatan %an& sedan& di&una$an )ersamaan den&an $ultur harus di)uan& atau di)eri desine$tan*
54 >i$a $ontaminasi itu )aru dan meluas $e semua media. larutan sto$. tri#sin. dan se)a&ain%a. semua alat %an& di&una$an harus se&era di)uan&* !4 >i$a ,enis #en'emaran %an& sama telah ter,adi se)elum solusi sto'$ 'he'$ $ontaminasi. a4 den&an in$u)asi sendiri atau dalam $aldu nutrisi )4 den&an men&eluar$an #latin& larutan #ada a&ar nutrien* >i$a a4 dan )4 ter)u$ti ne&ati. namun $ontaminasi masih ada. 5
100 mL larutan harus diin$u)asi. disarin& melalui ilter 0./ Bm. dan dila#isi sarin& #ada a&ar nutrien den&an $ontrol %an& tida$ diino$ulasi* 4 >i$a $ontaminasi meluas. multis#e'ii'. dan diulan& ma$a harus di#eri$sa. a4 #rosedur sterilisasi la)oratorium den&an suhu oen dan oto$la4. )4 #ra$ti$ #en&emasan dan #en%im#anan. misaln%a. alat &elas %an& tida$ dise&el harus di#ulih$an $em)ali setia# / ,am4. dan '4 inte&ritas ruan& ase#ti$ dan ilter laminar air lo(* @4 +eseoran& seharusn%a tida$ men'o)a untu$ mende$ontaminasi $ultur $e'uali ,i$a tida$ da#at di&anti$an*
Cara 7em)uan&an "ultur Ter$ontaminasi: 7rosedur )eri$ut umumn%a di&una$an untu$ #em)uan&an $ultur %an& ter$ontaminasi: 7entin& untu$ memasti$an )ah(a semua )ahan %an& ter$ontaminasi di)uan& den&an )enar* 8e,ana $ultur harus di$eluar$an dari area $ultur. )elum di)u$a ,i$a memun&$in$an. dan diauto$la* 8u$a )aran&. se#erti 'a(an 7etri den&an tutu# di tem#at. dan #i#et atau )aran& lainn%a itu %an& men&alami $onta$ lan&sun& den&an $ultur %an& ter$ontaminasi. harus direndam dalam hi#o$lorit desine$tan 'a(an #etri )isa di)u$a sam)il terendam4* >i$a han%a satu dari seran&$aian $ultur seru#a %an& ter$ontaminasi. #erlu untu$ mem)uan& se)otol medium %an& di&una$an den&an itu. ta#i $alau $ontaminasi itu meluas. ma$a semuan%a media serta semua solusi sto$ dan rea&en lainn%a. %an& di&una$an den&an sel-sel ini. seharusn%a di)uan& $e hi#o$lorit*
=enurut 2o'he. /013 7roto$ol untu$ de$ontaminasi mi$ro)a: 1* "um#ul$an media %an& ter$ontaminasi den&an hati-hati* >i$a memun&$in$an. or&anisme harus diu,i untu$ res#on terhada# )er)a&ai anti)ioti'* >i$a tida$. oto$la media atau tam)ah$an hi#o$lorit /* Cu'i sel di D8++ 6an$s 8++ tan#a )i$ar)onat. den&an 7enisilin. +tre#tomisin. Amoterisin 8 dan "anamisin atau entam%- 'in4* Untu$ monola%er. )ilas $ultur 3 $ali den&an D8++. tr%#sinie. lalu 'u'i sel dua $ali la&i di D8++ den&an sentriu&asi dan resus#ensi sus#ensi $ultur. 'u'i $ultur lima $ali di D8++4 oleh sentriu&asi dan resus#ensi* 3* 2eseed termos #ada tin&$at terendah ter&antun& ,enis sel* * Tam)ah$an media den&an anti)ioti$ tin&&i dan &anti $ultur setia# / hari 5* +u)$ultur dalam medium anti)ioti$ tin&&i* 6
!* Ulan&i Lan&$ah 1 sam#ai untu$ ti&a su)$ultur* * "eluar$an anti)ioti$. dan $ultur sel-seln%a untu$ ti&a su)$ultur le)ih lan,ut* @* 7eri$sa $em)ali $ultur ase-$ontras mi$ros$o#. den&an #e(arnaan 6oe'hst4* * "ultur sel untu$ dua )ulan le)ih lan,ut tan#a anti)ioti$. dan #eri$sa untu$ memasti$ann%a )ah(a semua $ontaminasi telah dieliminasi< dihilan&$an*
DAFTA2 7U+TA"A
Dais. >*=* /0114* A&-#%l *"ll *ulu!" / E"&-%l M"+(' * Ne( Yor$ : Eile%8la'$Eell Freshne%. * 2* /0054* *ulu!" ( A&-#%l *"ll/ A M%&u%l ( B%- T"+&-u" . 5th 9dition* Ne( Yor$ : Eile%-8la'$Eell "humairoh. *. 7us#itasari. =* /014* "ultur +el* 3u!&%l F%!#%4%. 4 : 1-1! Nema. 2*. "hare. +* /01/4* An Animal Cell Culture : Adan'e Te'hnolo&% or =odern 2esear'h* 3(u!&%l ( A'5%&" -& B-(-"&" %&' B-("+&(l(6. 3 : /1-//! N7T9L*
B-("+&(l(6
8
B-(l(6*
*"ll
=odule
!
Le'ture
1*
htt#:<
3u!&%l F%!#%4%. 4 : //3-/3!
2o'he* /0134* *ulu!" %&' M(&-(!-&6 ( A&-#%l *"ll B%- T"+&-u" * 6an&hou : AC9A 8los'len'es. n'*
7
