Isnainy Dinul A352150021 - Laporan Bakteri Patogen Tumbuhan

LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERI PATOGEN TUMBUHAN (PTN621) Teknik Isolasi, Deeksi !an I!eni"ikasi Bake#i Pao$en Tana%an

Isnainy Dinul Mursyalati Yus A352150021

Dosen: Dr. Ir. Ir. Kikin Hamzah Mutaqin M.!i Dr. Ir. "iyanto M.!i

Asisten #raktikum: $atit !astrini !.#

PROGRAM &TUDI 'ITOPATOLOGI 'ITOPATOLOGI 'AKULTA& PERTANIAN &EKOLAH PA&A&ARANA IN&TITUT PERTANIAN BOGOR  2*1+

PENDAHULUAN Laa# Belakan$ %akteri &a'at &itemukan &imana sa(a &en)an *era)amnya +isiolo)is yan) &imiliki masin), masin) *akteri. %akteri yan) &itemukan *erasosiasi &en)an tanaman a&a yan) se*a)ai e'i+it en&o+it &an 'ato)en. %akteri %akteri 'ato)en atau +ito'ato)en +ito'ato)en meru'akan meru'akan an))ota kelom'ok kelom'ok yan) terakhir terakhir yan)  (umlahnya relati+ se&ikit -Ka&o 12/ !i)ee 13 dalam !a&&ler 2002. Dalam (urnal !a&&ler -2002 menyat menyatakan akan *aha *aha semua semua *akteri *akteri 'ato)en 'ato)en sam'ai sam'ai saat saat ini masuk masuk &alam &alam %akteri %akteri Domain Domain -yan) -yan) se*elumnya &ikenal se*a)ai u*ateria. Ke*anyakan *akteri memiliki karakteristik mor+olo)i seara umum yakni *er*entuk lurus atau  *atan) yan) se&ikit melen)kun) &en)an &in&in) sel yan) kaku &an meta*olismenya aero*ik atau +akultati+ anaero*. #en)eualian terha&a' an))ota &ari kelas Molliutes. An))ota &ari kelas Molliutes meski' meski'un un masih masih *erhu* *erhu*un)a un)an n &en)an &en)an *akteri *akteri "ram,' "ram,'osi ositi+ ti+ se'ert se'ertii lost lostri& ri&ia ia &an *asil *asil &imana &imana kelom'ok ini ti&ak memiliki &in&in) sel yan) kaku. k aku. !alah satu +aktor yan) menentukan &alam ter(a&inya 'enyakit tum*uhan ialah a&anya interaksi  'ato)en &en)an tanaman inan) yan) &itun(ukkan &en)an ter(a&inya 'ertum*uhan &an 'erkem*an)an  'ato)en &i &alam (arin)an inan). 4ntuk ter(a&inya in+eksi 'ato)en harus terle*ih &ahulu men)enal inan)nya -masa 'ra'enetrasi untuk selan(utnya melakukan in+eksi &an masuk ke &alam (arin)an inan) -masa -masa 'asa 'asa 'enetr 'enetrasi asi. . !e*a)ai !e*a)ai aki*at aki*at &ari &ari a&anya a&anya in+eks in+eksii akan ter(a& ter(a&ii 'enyakit 'enyakit tum*uh tum*uhan an &an tum*uhan (u)a akan menun(ukkan res'on se*a)ai salah *entuk 'ertahanannya. #enyakit se*enarnya a&alah suatu 'roses &imana *a)ian,*a)ian tertentu &ari or)anisme ti&ak  &a'at men(alankan +un)sinya seara normal &en)an se*aik,*aiknya karena a&anya suatu )an))uan. $anam $anaman an &a'at &a'at &iliha &ilihatt &ari &ari &ua su&ut su&ut 'an&an) 'an&an) yaitu yaitu seara seara *iolo) *iolo)ii &an ekonomi ekonomi maka maka 'enyakit 'enyakit tanaman'un men)an&un) unsur &ua su&ut 'an&an) ini. Dari se)i *iolo)i tanaman a&alah or)anisme yan) melakukan ke)iatan +isiolo)is sehin))a &ari se)i ini 'enyakit tanaman a&alah 'enyim'an)an &ari si+at normal sehin))a tanaman ti&ak &a'at melakukan ke)iatan +isiolo)is se'erti *iasanya. %akteri %akteri ti&ak ti&ak &a'at melakukan in+eksi &en)an menem*us menem*us 'ermukaan 'ermukaan (arin)an (arin)an tum*uhan yan) utuh. %akteri &a'at masuk ke &alam (arin)an (arin)an tanaman tanaman melalui melalui luka mekanis. A&anya A&anya tekanan tekanan ne)ati+  ne)ati+  &i&alam 'em*uluh aki*at luka akan men)aki*atkan *akteri masuk ke&alam 'em*uluh sehin))a *akteri terse*ut terlin&un) &ari +aktor lin)kun)an yan) kuran) *aik. uka yan) &itim*ulkan oleh seran))a (u)a &a'at men(a&i (alan masuk *a)i *akteri. %akteri +ito'ato)en memiliki &in&in) sel sehin))a &a'at &i*a)i la)i men(a&i *akteri "ram,  'ositi+ &an *akteri "ram,ne)ati+. #en)elom'okan ini *er&asarkan 'a&a kema'anan 'earnaan 'a&a mikrosko' mikrosko' yan) sama &en)an 'en&ekatan 'en&ekatan +ilo)eneti +ilo)enetik. k. Dalam hal ini semua *akteri *akteri "ram ne)ati+  tanaman tanaman teraku' teraku' ke&alam Kelas #roteo*ate #roteo*ateria ria -!take*ran&t -!take*ran&t et al . 166 dalam  dalam  !a&&ler 2002 se&an)kan se&an)kan "ram,'osit "ram,'ositi+ i+ yan) &itemukan &i Kelas Atino*a Atino*ateria teria -!take*ran&t -!take*ran&t et al . .  17 17 dalam !a&&ler 2002. Ke*anyakan *akteri +ito'atolo)i meru'akan *akteri "ram,ne)ati+ yan) mana *akteri yan) yan) term termas asuk uk &ala &alam m ke&al ke&alam am kelom kelom'o 'ok k ini ini antar antaraa lain lain )enu )enuss Ai&o i&o8o 8ora ra9 9 A)ro* )ro*a ate teri rium um %urkhol&eria ntero*ater rinia #antoea #seu&omonas alstonia &an ;anthomonas se&an)kan  *e*era'a *akteri "ram,'ositi+ yan) termasuk antara lain )enus
BAHAN DAN METODE .ak !an Te%/a #raktikum %akteri #ato)en $anaman &ilaksanakan &i a*oratorium %akteriolo)i De'artemen #roteksi $anaman =akultas #ertanian Institut #ertanian %o)or 'a&a *ulan >kto*er hin))a Desem*er  2015. Ba0an !an Ala 1 Me!ia Pe#%0an Bake#i Alat &an *ahan yan) &i)unakan &alam 'raktikum ini a&alah me&ia *iakan *akteri yan) ter&iri &ari Kin)?s % Agar  Triphenyl Tetrazolium Chloride -$@< Yeast Dextrosa CaCO3 Agar  ( YDC 1.5 )ram M)!>.7H2> 1.5 )ram "liserol 15 ml A)ar 15 ml Aqua&es 1 liter  $@<  alstonia solanacearum #e'ton 10 )ram -Triphenyl Casamino acid  1 )ram Tetrazolium "lukase 5 )ram Chloride A)ar 17 )ram $@< 0.1 )ram -ti&ak &isterilisasi YD3 0.5 )ram  a2H#>C.2H20 0.5 )ram A)ar 17 )ram Aqua&es 1 liter  Y -ater  Aktinomiset Yeast !xtract  0.25 )ram Yeast !xtract  K2H#>C 0.5 )ram A)ar 16 )ram  Agar  Aqua&es 1 liter  $!A 10B %akteri en&o+it $!% 3 )ram A)ar 20 )ram Aqua&es 1 liter 

2 Isolasi Bake#i Pao$en !an Bake#i Ana$onis !a#i a#in$an Tana%an !an Tana0 Alat yan) &i)unakan *eru'a aan 'etri ta*un) reaksi erlenmeyer  )elas ukur )elas  *aker glass %ead, mikro 'i'et 1 ml &an 200 E ti's mikro'i'et steril )untin) 'isau atau silet ska'el (arum ose *ortex kertas tissu lam'u *unsen alat tulis &an la*el. !e&an)kan *ahan,  *ahan yan) &i)unakan &alam 'raktikum isolasi ini yaitu *akteri 'ato)en yan) &iisolasi &ari  *er*a)ai tanaman antara lain $a*el 2. Isolasi *akteri yan) &iam*il &ari *e*era'a sam'el tanaman %a)ian tanaman $anaman %akteri sasaran Daun $imun  'seudomonas syringae '8. glycinea Ku*is  anthomonas campestris '8. campestris #a&i  anthomonas oryzae '8. oryzae %atan) ortel  !r#inia caroto*ora euna  alstonia solanacearum #ele'ah #isan) %akteri en&o+it $anah &isekitar , Aktinomiset  'ertanaman  *am*u Me&ium yan) &i)unakan &alam isolasi yaitu Kin)?s % YDH 3B alkohol 70B akua&es steril air *ersih minyak immersi at Crystal *iolet (Crystal  *iolet  g- ethyl alcohol 5B 20 ml/ amonium oxalate 06 ) &an akua&es steril 60 ml lugol.s iodine (iodine 1 )/ potassium iodide 2 )/ &an akua&es steril 300 ml decolorizes (  5B ethyl  alcohol 100 ml/ acetone 100 ml  sa"ranin - sa"ranin 25 ) &an ethyl alcohol   5B 100 ml &i am'urkan kemu&ian &iam*il 10 ml &an &iam'ur &en)an 0 ml akua&es steril. 5 U-i 'isiolo$i Bake#i Alat yan) &i)unakan yaitu aan 'etri ta*un) reaksi erlenmeyer  )elas ukur %ea+er   glass o%/ect glass kaa 're'arat mikro'i'et (arum ose *ortex kertas tissu *unsen (arum suntik 'isau stainless &an kamera &i)ital. %ahan yan) &i)unakan &alam 'en)u(ian ini a&alah isolat *akteri murni *e*era'a me&ia yaitu -'e'ton 03 )/ a2 K>H 3B malachite green 50B -F8 &alam H2> sa+ranin 05 B-F8 &alam H 2> crystal *iolet , lugol.s iodine (iodone 0 g- potasium iodine (12) 4 g &alam aqua&es 100 ml alkohol 70B aku&es steril &an air *ersih. + Deeksi !an I!eni"ikasi Bake#i !en$an Teknik Molekla# Be#asis Asa% Nklea %ahan &an alat yan) &i'erlukan untuk ektraksi DA kromosom *akteri a&alah isolat  *akteri ta*un) eppendor"   15 ml %u""er   $ 'H 6.0 -10 mM $ris 1 mM D$A lysozim !D! 10B a
6 U-i Poensi Bake#i Ana$onis Alat yan) &i)unakan yaitu aan 'etri laminar air "lo#, kertas sarin) steril ta*un) reaksi mikro'i'et ti's mikro'i'et glass %ead,  (arum ose lam'u *unsen kertas tissu mistar &an kamera &i)ital. %ahan yan) &i)unakan yaitu isolat *akteri 'ato)en -Isolat 1 , alstonia solanacearum,  !r#inia, anthomonas campestris '8. ampestris &an anthomonas oryzae '8. oryzae) *akteri a)ens hayati -Aktinomiset *akteri en&o+it me&ia A serta alkohol 70B.  K#7a Pe#%0an !an Pe#0in$an Po/lasi Bake#i Alat yan) &i)unakan yaitu ta*un) erlenmeyer  ta*un) reaksi  sha+er  #ater%ath s'ekto+otometer alat tulis &an kamera &i)ital. !e&an)kan untuk *ahan,*ahan yan) &i)unakan yaitu isolat *akteri !scherichia coli me&ium % &an aku&es steril. 8 Teknik Penla#an 'io/las%a Alat yan) &i)unakan yaitu silet kertas +ilm &an kamera &i)ital. %ahan yan) &i)unakan yaitu tanaman kaan) tanah sehat &an tanaman kaan) tanah *er)e(ala sa'u setan.

Meo!e Teknik Ase/ik  #eker(aan &en)an mikroor)anisme mem*utuhkan keermatan &an kera'ian yan) tin))i karena mikroor)anisme san)at terse*ar &i ruan)an &an 'eralatan. 4ntuk mene)ah kontaminasi mikro* non sasaran &i'erlukan teknik ase'tik a)ar 'eker(aan &en)an mikro* sasaran men(a&i e+ekti+. $eknik  ase'tik &ilakukan terha&a' ruan)an &an 'eralatan ker(a tan)an &an *ahan 'erlakuan. #elaksanaan teknik ase'tik yan) *aik akan mem'ermu&ah &i'erolehnya mikro* non sasaran &alam *entuk *iakan murni. Ke)iatan 'raktikum umumnya *ersi+at ase'sik sehin))a &ilakukan &i &alam laminar air "lo# ca%inet . !e*elum melakukan 'eker(aan tan)an laminar air "lo# &isterilisasi men))unakan lam'u 4G selama 15 menit setelah itu me(a ker(a &isem'rot &en)an alkohol 70B atau airan antise'tik lain. Ki'as  'a&a laminar &ihi&u'kan &an setia' kali men))unakan alat %ahan &an 'eralatan yan) akan &i)unakan &isterilisasi terle*ih &ahulu !elama *eker(a se'erti aan 'etri &an (arum ose harus &i'anaskan terle*ih &ahulu &en)an a'i *unsen. !terilisasi &a'at &ilakukan &en)an ara sterilisasi *asah sterilisasi kerin) &an sterilisasi mekanik. !terilisasi yan) 'alin) umum &ilakukan a&alah sterilisasi *asah &en)an meman+aatkan ua' air (enuh 'a&a suhu 121 o< selama 15 menit. !terilisasi untuk me&ia &an alat &a'at &ilakukan &en)an teknik sterilisasi *asah &an sterilisasi kerin). !terilisasi *asah &ilakukan &en)an men))unakan autokla+ &an sterilisasi kerin) &en)an men))unakan o8en. !terilisasi men))unakan autokla+ &ilakukan 'a&a suhu 1210< &an tekanan 15 atm selama 2 (am. Me&ia yan) su&ah steril &isim'an &i &alam re"rigerator   &an anti*iotik 'a&a *e*era'a me&ia &itam*ahkan 'a&a saat me&ia akan &i)unakan. !e&an)kan alat,alat yan) su&ah steril akan &ilakukan sterilisasi kerin) &en)an &isim'an &i &alam o8en 'a&a suhu ruan) se*elum &i)unakan. 1 Teknik Isolasi Bake#i Pao$en !an Bake#i Non9Pao$en Isolasi *akteri 'enye*a* 'enyakit &imulai &en)an memanaskan me&ia *akteri steril yan) telah &i*uat men))unakan o8en selama 2 menit. Me&ia yan) telah air &ituan)kan ke &alam  'etri&is  20 ml lalu &i&iamkan hin))a mem*eku &i &alam laminar air "lo#. a) Isolasi !a#i Dan %akteri yan) &iisolasi &ari &aun yaitu !'esies 1 'enye*a* *erak *erse)i 'a&a &aun ke&elai  anthomonas campestris  '8. campestris 'enye*a* 'enyakit *usuk hitam 'a&a ku*is &an anthomonas oryzae '8& oryzae 'enye*a* 'enyakit haar &aun *akteri -kresek   'a&a 'a&i. %a)ian &iantara &aun sakit &an sehat &i'oton) keil &en)an ukuran 15 9 15 m2 kemu&ian &imasukkan ke &alam larutan kloroks 3B selama 1 menit. #oton)an &aun terse*ut kemu&ian &iam*il men))unakan 'inset steril &an &i*ilas selama 3 kali men))unakan akua&es steril selama 20 &etik. Daun &ikerin)an)inkan 'a&a tisu steril. !elan(utnya &aun &i'oton),'oton) le*ih keil men))unakan )untin) steril. #oton)an terse*ut &imasukkan ke &alam ta*un) reaksi yan) *erisi  ml %u""er   a
:) Isolasi Bake#i Ana$onis Akino%ise !a#i Tana0 $anah se*anyak 1 ) &imasukkan ke &alam larutan %u""er   a
ulasan *akteri &i*uat 'a&a )elas o*(ek &an &itam*ahkan &&H2o &ia&uk &an &ilakukan +iksasi 159 *olak *alik. !e*anyak

1 tetes at A -kristal 8iolet &iteteskan 'a&a koloni *akteri

&iamkan selama 1 menit. Kemu&ian 're'arat &i*ilas &en)an men))unakan air men)alir lalu

&ikerin)an)inkan. !e*anyak

tetes at % -larutan Io&in &iteteskan &i atas 're'arat &an

&i*iarkan selama 1 menit. #re'arat &i*ilas &en)an air men)alir lalu &ikerin)an)inkan. #re'arat kemu&ian &itetesi

tetes larutan at < -ethyl alkohol &an &i*iarkan selama 30 &etik lalu

&iui kem*ali &an &ikerin)an)inkan. !elan(utnya 're'arat &itetesi &en)an larutan at D -sa+ranin se*anyak

tetes &an &i&iamkan selama 10 &etik lalu &iui &an &ikerin)an)inkan.

!etelah itu &iamati &i *aah mikrosko'. ) U-i G#a% !en$an U-i KOH 3; O%/ect glass &isia'kan &an &itetesi &en)an K>H 3B. Koloni isolat hasil isolasi yan)  *erumur 2C (am &iam*il se*anyak satu lu' kemu&ian &isus'ensikan 'a&a larutan K>H 3B yan) telah &iteteskan 'a&a o%/ect glass. H 3B. An)kat lu' &an amati reaksi yan) ter(a&i. ika am'uran men(a&i len)ket menun(ukkan *aha *akteri yan) &iu(i meru'akan )ram ne)ati+. !e&an)kan a'a*ila ti&ak  len)ket *erarti *akteri yan) &iu(i meru'akan )ram 'ositi+. :) Pen$e:aan En!os/o#a #earnaan s'ora &ilakukan 'a&a *akteri *asil yan) *ersi+at )ram 'ositi+. 4(i ini &i)unakan untuk men)etahui s'ora 'a&a *akteri halo+ilik. Meto&e yan) &i)unakan a&alah meto&e !hae++er,=ulton yaitu olesan *akteri &ari *iakan murni &i+iksasi 'a&a kaa o*yekti+  steril &i)enan)i &en)an 5alachite green 5B -F8 &alam H2> &an &iletakkan 'a&a hot plate yan) su&ah &i'anaskan hin))a 200J< selama 10 menit. !etelah 10 menit kaa o*yek  &i&in)inkan kemu&ian &i*ersihkan &en)an air men)alir. >lesan *akteri &i)enan)i &en)an sa+ranin 05 B-F8 &alam H2> selama 1 menit &an &iui &en)an air men)alir. Kaa o*yek  &itiriskan &an sisa air &isera' &en)an kertas sera' kemu&ian &iamati &i *aah mikrosko'. arna s'ora a&alah hi(au atau tam'ak re+raktil -Ha&ioetomo 13. 3 U-i 'isiolo$i Bake#i a) U-i Anae#o Me&ia 'en)u(ian Anaero* &i'ersia'kan &alam ta*un) reaksi. Isolat *akteri yan) &iu(i &iinokulasikan &en)an ara men)am*il koloni *akteri &ari me&ia 'a&at men))unakan (arum

 're'arat &an menusukkan seara te)ak lurus 'a&a me&ia sekitar

5 mm .#roses inokulasi

&ilakukan 'a&a &ua ta*un). $a*un) 'ertama &itam*ahkan 05 ml )lukosa &an minyak 'ara+in 1 m kemu&ian &itutu' &en)an alumunium "oil  kem*ali. $a*un) yan) ke&ua tan'a minyak   'ara+in kemu&ian masin) masin) &iinku*asikan 'a&a suhu ruan) selama 2C (am. Hasil 'ositi+  &itan&ai &en)an 'eru*ahan arna me&ium &ari hi(au men(a&i kunin). ) U-i Reaksi Hi/e#sensii"  !emua isolat *akteri yan) &i'eroleh &iu(i hi'ersensiti+ untuk men)etahui a'akah isolat terse*ut 'ato)en tum*uhan ato *ukan. !e*anyak satu ose isolat *akteri yan) &iu(i &iinokulasikan 'a&a 5 ml me&ia % air &i &alam ta*un) reaksi. Kemu&ian sha+er   &en)an kee'atan 60 r'm selama 2C (am. 1 ml sus'ensi *akteri &iam*il men))unakan (arum suntik  steril yan) telah &ile'as *a)ian (arumnya. !us'ensi *akteri &iin(eksikan &ari *a)ian *aah &aun tem*akau se&an)kan sus'ensi *akteri alstonia solanacearum &iin(eksikan 'a&a *a)ian *atan) tanaman tomat. %a)ian yan) &iin(eksi sus'ensi *akteri &i*eri la*el ko&e isolat *akteri yan) &iu(i. Hasil in(eksi &iamati setelah 1,3 hari. eaksi 'ositi+ yan) *erarti *akteri terse*ut *ersi+at  'ato)enik &itun(ukkan &en)an a&anya *erak nekrosis 'a&a *a)ian yan) &iinokulasikan &en)an sus'ensi *akteri se*aliknya reaksi ne)ati+ ter(a&i *ila arna &aun teta' hi(au.

Pen 5El#= 12 El $ 12 El &an &&H2> 11C El &iam'urkan &alam 1 ta*un). $em'late DA sam'el &imasukan ke&alam ta*un) eppendor"   se*anyak 1 El lalu &itam*ahkan larutan 'a&a 'rose&ur nomor se*anyak 2C El. !am'el &imasukan ke&alam mesin #< selama 35 (am &en)an men)ulan) 35 siklus. Kom'onen yan) &i'erlukan &alam 'roses #< &imasukkan ke &alam ta*un) e''en&ro+  15 ml 'a&a kon&isi &in)in. !elan(utnya DA template se*anyak 1 El &i masukkan ke &alam ta*un) #<. #< mixture  &itam*ahkan ke &alam ta*un) #< masin),masin) se*anyak 2C ElFta*un). $a*un) &imasukkan ke &alam mesin #<. #roses am'li+ikasi #< &en)an 'rimer  uni8ersal ter&iri &ari ti)a taha'an reaksi yan) *erulan) &alam *e*era'a siklus yaitu &enaturasi

 'a&a suhu 5 o< selama 2 menit &an &ilakukan &en)an 35 siklus annealing  'a&a suhu sekitar  3 o< selama 30 &etik kstensi 'a&a suhu 72 o< selama 1 menit &an ekstensi akhir 'a&a suhu yan) sama selama 7 menit. !e&an)kan 'roses am'li+ikasi #< men))unakan 'rimer s'esi+ik  &ilakukan &en)an &enaturasi 'a&a suhu 5 o< selama 2 menit &an &ilakukan &en)an 2 siklus  'a&a 'a&a suhu 5 o< selama 30 &etik annealin) 'a&a suhu sekitar 3 o< selama 30 &etik ekstensi 'a&a suhu 72 o< selama 1 menit &an ekstensi akhir 'a&a suhu yan) sama selama 7 menit. =isalisasi DNA Hasil PR %ahan -a)arose 1B &isia'kan yan) ter&iri &ari 2 )r a)arose &an 20ml %u""er $A 29 &imasukkan ke &alam )elas *eker &an &i'anaskan selama  3 menit atau sam'ai larutan terse*ut men(a&i *enin) &an &i&iamkan selama 3 menit. #a&a )el a)arose &i*uat sumuran &en)an sisir  sesuai (umlah DA yan) in)in &i8isualisasi &an &itam*ahkan 5 El DA kemu&ian &iren&am &en)an larutan t%r selama 10 menit. Gisualisasi &ilakukan &en)an men))unakan mesin elektro+oresis selama 30 menit 'a&a te)an)an 70 8olt &an hasilnya &ilihat &en)an men))unakan transluminator 4G. + U-i Ana$onis%e Bake#i A$ens Ha
Daya ham*at -B L 6 K#7a Pe#%0an Bake#i Isolat  !&coli &irema(akan 'a&a me&ia % &an &iinku*asi selama C6 (am. !etelah &iinku*asi se*anyak 1 lu' isolat &iinokulasikan ke me&ia %. Isolat *akteri 'a&a % &iinku*asi  'a&a shaker selama 2C (am. Kemu&ian 'en)amatan >D &ilakukan setia' 1 (am sam'ai 7 (am.  ilai >D yan) terukur kemu&ian &iatat &an &i*uat kur8a 'ertum*uhan. #a&a 'en)amatan ke 1

&an 7 (am *iakan  !&coli &ilakukan 'latin) se*nyak 2 kali ulan)ansetia' +ase 'ertum*uhan yan) &iinokulasikan 'a&a me&ia A untuk melihat 'erkem*an)an (umlah koloni.  Teknik Penla#an 'io/las%a Disia'kan tanaman kaan) tanah sehat tanaman kaan) yan) *er)e(ala sa'u setan &iam*il &ari la'an)an. #a&a tanaman kaan) tanah yan) sehat &i*uat sayatan 'a&a a*an) tanaman. $anaman kaan) tanah yan) *er)e(ala &i 'oton) ti'is 'a&a *a)ian yan) *er)e(ala +ito'lasma. !ayatan yan) telah &i*uat &item'elkan &en)an 'oton)an ti'is &ari tanaman yan) terseran) +ito'lasma. %a)ian yan) telah &item'el &i*un)kus &en)an seal .

HA&IL DAN PEMBAHA&AN 1 Pen$a%aan $e-ala /a!a ana%an inan$ !an 0asil -i 0i/e#sensii"  $a*el 3. "e(ala 'enyakit aki*at in+eksi *akteri serta hasil u(i hi'ersensiti+ 'a&a tanaman tem*akau

$anaman $imun -Daun

%akteri yan) &iisolasi  'seudomonas  syringae '8.  glycinea

=oto &an &eskri'si )e(ala

%erak nekrotik *ersu&ut 'a&a 'ermukaan atas &aun &isertai &en)an halo *erarna kunin) teran)

Ku*is -Daun

#a&i -Daun

=oto koloni

arna: #utih kekunin)an $e'ian: %er)elom*an) le8asi:
 anthomonas campestris '8. campestris

%erak nekrotik oklat teran) &imulai &ari te'i &aun &an mem*entuk huru+ G

arna: Kunin) teran) $e'ian: iin le8asi:
%erak *erarna kunin) teran) &imulai &ari te'i &aun &an meman(an) &i se'an(an) tulan) &aun mulai &ari te'i

arna: kunin) 'uat $e'ian: iin le8asi:
 anthomonas oryzae '8& oryzae

ortel -%uah

 !r#inia caroto*ora

$er&a'at len&ir keoklatan &i 'an)kal ro' ku*is mem*entuk *usuh ke*asahan. %usuk *asah terse*ut &a'at meluas ke *a)ian ten)ah ro'. euna -%atan)

 alstonia  solanacearum

$anaman layu ti&ak &iaali &en)an 'en)unin)an. ayu &imulai &ari *a)ian u(un) &aun &an &aun rontok. #ele'ah  'isan) -#ele'ah

arna: Krem kekunin)an $e'ian: 4n&ulate le8asi:
arna: Merah tua $e'ian: iin le8asi:
%akteri en&o+it

arna: #utih kekunin)an $e'ian: %e)elom*an) le8asi: ata 'a&a te'i& an menon(ol &i ten)ah

$anah

Aktinomiset

arna: #utih $e'ian: %ersetae &i seluruh sisinya le8asi: Datar  %akteri yan) &iisolasi &iam*il &ari tanaman yan) menun(ukkan )e(ala khas yan) &iaki*atkan *akteri 'ato)en tertentu. !astrahi&ayat -2011 menyatakan *aha haar &aun *akteri - %acterial lea" %light  &ise*a*kan oleh  anthomonas oryzae  '8. oryzae memiliki iri koloni *erarna kunin) (erami sam'ai kunin) &en)an 'ertum*uhan koloni yan) lam*at. "e(ala aal &itan&ai &en)an a&anya tetesan,tetesan air kental &i'ermukaan u(un) &an te'i &aun yan) meru'akan masa *akteri 'a&a tanaman mu&a setelah tanam. %ila kon&isi men&ukun) maka akan ter*entuk *erak,*erak *esar meman(an) &ari u(un) &aun ke 'an)kal &aun yan) *erarna kunin). uka akan *erkem*an) -mem*esar menyeru'ai te'un) ke'utihan. #ato)en akan masuk &aun melalui lu*an) alami se'erti hi&ato&a atau luka &an akan e'at meluas khususnya 'a&a musim 'en)hu(an karena masa *akteri yan) (atuh akan mu&ah &ise*arkan melalui  'en)airan. In+eksi sistemik yan) &ikenal se*a)ai kresek ter(a&i karena (arin)an &aun men)erin) &an mati khususnya 'a&a tanaman mu&a. !ementara 'a&a tanaman yan) tua &aun akan men)unin) &an mati. #a&a +ase selan(utnya 'enyakit akan sulit &i*e&akan &en)an )e(ala %acterial lea" strea+ . 4ntuk men)u(inya &a'at &ilakukan &en)an ara memoton) *a)ian *aah &aun terin+eksi &an meren&amnya &alam larutan *asi +uhsin selama 1,2 hari. Hasil 'raktikum menun(ukkan *aha arna koloni  !r#inia caroto*ora  *erarna 'utih susu yan) semakin lama &isim'an men(a&i arna krem. Hasil 'raktikum memiliki kesamaan &en)an 'en)amatan yan) &ilakukan !allytha et al&, -201C yan) menyatakan &alam (urnalnya yakni koloni  !r#inia caroto*ora *erarna 'utih susu *erlen&ir men)kilat te'i rata &an tam'ak em*un) setelah &iinku*asi selama 2C (am. Holt et al . -1C dalam !allytha et al&, -201C menyatakan *aha kelom'ok Atinomyetes mem*entuk  miselium *era*an) setelah 2C (am 'a&a me&ia a)ar &an koloni mulai tam'ak setelah 3,C hari se&an)kan s'ora 'a&a aerial miselium &a'at ter*entuk setelah 7,1C hari.
Hasil U-i 'isiolo$i $a*el C. Hasil u(i 'earnaan )ram &an K>H 3B

%akteri

Hasil Dokumentasi

4(i 'earnaan )ram

4(i K>H

 'seudomonas syringae '8. glycinea

"ram ne)ati+ - , 

%erlen&ir

 anthomonas campestris '8. campestris

"ram ne)ati+ - , 

%erlen&ir  

 anthomonas oryzae '8& oryzae

"ram ne)ati+ - , 

%erlen&ir  

 !r#inia caroto*ora

"ram ne)ati+ - , 

%erlen&ir  

 alstonia solanacearum

"ram ne)ati+ - , 

%erlen&ir  

%akteri en&o+it

"ram 'ositi+ -  

$i&ak %erlen&ir  

Aktinomiset

"ram 'ositi+ -  

$i&ak %erlen&ir  

%ila &alam 'en)u(ian K>H 3B ti&ak a&a 'em*entukan len&ir len)ket yan) &a'at teran)kat le*ih &ari satu m oleh (arum ose kon&isi ini &ikenal &en)an reaksi ne)ati+ &an mikro*a yan) &iu(i ter)olon) "ram #ositi+ -elliot an& !tea& 167 dalam Masnilah et al& 2013. Dari ketu(uh sam'el *akteri yan) meru'akan )ram 'ositi+ yakni isolat *akteri en&o+it &an isolat aktinomiset. Hal terse*ut (u)a &a'at &ilihat &ari  *entuk *akteri yan) mana 'a&a kelima sam'el yakni  'seudomonas syringae  '8.  glyciniea  anthomonas campestris  '8. campestris  anthomonas oryzae  '8& oryzae  !r#inia caroto*ora &an alstonia solanacearum memiliki *entuk *atan). #a&a umumnya *akteri yan)  *ersi+at 'ato)en 'a&a tanaman meru'akan *akteri yan) *er*entuk *atan).

#earnaan "ram &i)unakan untuk men)etahui mor+olo)i *akteri &an mem*e&akan antara  *akteri "ram 'ositi+ &en)an *akteri "ram ne)ati+. ika &ilihat &i *aah mikrosko' *akteri "ram  'ositi+ akan *erarna un)u karena &a'at menahan kom'leks 'earna 'rimer kar*ol )entian 8ioletio&ium sam'ai akhir 'rose&ur 'earnaan. %akteri "ram ne)ati+ akan *erarna merah karena kehilan)an kom'leks arna kar*ol )entian 8ioletio&ium &en)an 'em*ilasan alkohol lalu terarnai oleh 'earna tan&in)an air +uksin -
A

B



D

E

'

G

"am*ar 1. Hasil u(i oksi&ati+ +ermentati+ ->=. -A n&o+it -% Aktinomiset -< rinia -D #seu&omonas. - ;oo/ -= alstonia -" ;anthomonas.

%akteri yan) &iisolasi  'seudomonas syringae '8. glycinea  anthomonas campestris '8. campestris  anthomonas oryzae '8& oryzae  !r#inia caroto*ora  alstonia solanacearum %akteri en&o+it Aktinomiset

Hasil u(i H       , ,

Hasil u(i >= Anaero* Aero* -=ermentati+ ->ksi&ati+              

#a&a 'en)u(ian hi'ersensiti+ 'a&a &aun tem*akau yan) &iin+iltrasikan &en)an sus'ensi isolat aktinomiset &an *e*era'a isolat *akteri en&o+it ti&ak menun(ukkan ter(a&inya nekrosis 'a&a (arin)an &aun hin))a C6 (am setelah inku*asi. Hal ini mem*uktikan *aha isolat yan) &iu(i *ukan *akteri  'ato)en tanaman. Hal ini sesuai &en)an 'en&a'at Kerr an& "i** -17 a'a*ila *akteri yan) &iu(i  *eru'a *akteri 'ato)en maka akan ter(a&i nekrosis 'a&a &aun tem*akau &imana ter(a&i hu*un)an yan) kom'ati*le antara 'ato)en &an tem*akau. A'a*ila sus'ensi *akteri yan) &iin+iltrasikan 'a&a &aun tem*akau ti&ak meran)san) res'on hi'ersensiti+ maka &a'at &i)unakan se*a)ai inokulan untuk 'emau  'ertum*uhan tanaman -elliot an& !tea& 167.

eaksi hi'ersensiti+ menye*a*kan hanurnya seluruh mem*rane seluler &ari sel,sel yan)  *erkontak &en)an *akteri &an kemu&ian &iikuti &en)an 'en)erin)an &an nekrosis (arin)an &aun yan) terseran) *akteri terse*ut -A)rios 200C. A&anya reaksi 'ositi+ ini mem*uktikan *aha *akteri yan) &iu(i meru'akan 'atho)en tanaman. Isolat alstonia solanacearum ti&ak &ilakukan u(i hi'ersensiti+ 'a&a tanaman tem*akau. Akan teta'i &iu(i 'a&a tanaman tomat yan) meru'akan tanaman se+amili &en)an tanaman leuna. Di&u)a karena a&anya 'er*e&aan strain *akteri yan) menyeran) leuna &an tomat &an (u)a &aya in+eksi  *akteri menurun 'a&a saat &ireisolasi. !elain itu isolat & solanacearum  terse*ut meru'akan *akteri yan) menyeran) *a)ian 'em*uluh tanaman sehin))a &am'ak yan) akan &itim*ulkan ke&uanya *ukan ter(a&inya nekrosis teta'i layu 'a&a tanaman. %er&asarkan i(iono -200 menyatakan *akteri  &  solanacearum teran)kut &alam 'em*uluh kayu &an 'a&a *atan) yan) lunak masuk &alam ruan) antar  sel &alam kulit &an em'ulur yan) kemu&ian men)uraikan sel,sel sehin))a ter(a&i ron))a,ron))a. %er&asarkan hasil u(i semua isolat *akteri yan) &iu(i mem*erikan reaksi 'ositi+ 'a&a 'en)u(ian oksi&ati+,+ermentati+ ->= -"am*ar 1.. Dari hasil u(i terse*ut *erarti semua isolat mam'u memeta*olisme kar*ohi&rat seara +ermentati+. Ini &itan&ai &en)an 'eru*ahan 'a&a me&ium >= yan) &itutu' 'ara++in atau'un ti&ak &itutu' 'ara++in me&ium yan) aalnya hi(au *eru*ah men(a&i kunin) -#riharta 2006. eaksi 'ositi+ &itan&ai &en)an 'eru*ahan arna hi(au men(a&i kunin) yan) &imulai &ari  'ermukaan me&ia yan) ti&ak tertutu' minyak 'ara++in atau'un yan) tertutu'i 'ara+in setelah masa inku*asi 7,1C hari. %er*e&a &en)an &eskri'si elliot &an !tea& -167 &an Asrul -2007 dalam Masnilah -2013 *aha  'seudomonas syringae  '8.  glycinea  *ereaksi 'ositi+ 'a&a u(i oksi&ati+ &an  *ereaksi ne)ati+ 'a&a u(i +ermentati+. eaksi 'ositi+ 'a&a u(i oksi&ati+ mem*uktikan %ah#a '& syringae  '8.  glycinea mem*utuhkan oksi)en untuk tum*uh &an mem'ro&uksi asam &alam kon&isi aero* sehin))a *akteri termasuk &alam )olon)an *akteri aero* -=ahy &an Hayar 163 dalam  Masnilah 2013. !e&an)kan reaksi 'ositi+ 'a&a u(i +ermentati+ kemun)kinan *isa &iaki*atkan a&anya kontaminasi atau'un *ahan,*ahan &alam 'em*uatan me&ia u(i su&ah ti&ak &alam kon&isi yan) o'timum atau  *ahkan *isa sa(a aki*at kesalahan 'en)er(aan aktu 'en)u(ian. %er&asarkan literatur &ari !astrahi&ayat -2011 *erikut si+at,si+at 'entin) &ari *e*era'a )enus  *akteri 'enye*a* 'enyakit tum*uhan. $a*el 5. !i+at 'entin) &ari *e*era'a )enus *akteri 'enye*a* 'enyakit tum*uhan

In&ikator  eaksi )ram >ksi&asiF+ermentati+

rinia , =ermentati+

"enus *akteri #seu&omonas , >ksi&asi

;anthomonas , >ksi&asi

ika 'a&a me&ium yan) &itutu' yan) &itutu' 'ara++in teta' *erarna hi(au se&an)kan yan) ti&ak &itutu' 'ara++in arna me&iumnya *eru*ah men(a&i kunin) *erarti *akteri u(i mam'u memeta*olisme kar*ohi&rat seara oksi&asi -#riharta 2006. %er*e&a 'a&a *e*era'a isolat *akteri se'erti 'a&a kelom'ok #seu&omonas &an ;anthomonas yan) &ise*utkan &i*e*era'a literatur  menyatakan *aha meru'akan oksi&asi akan teta'i 'a&a hasil 'raktikum men)hasilkan +ermentati+. A&a *e*era'a +aktor 'enye*a* hasil 'raktikum *er*e&a &en)an yan) a&a &i literatur antara lain &iaki*atkan a&anya kontaminasi atau'un *ahan,*ahan &alam 'em*uatan me&ia u(i su&ah ti&ak &alam kon&isi yan) o'timum atau *ahkan *isa sa(a aki*at kesalahan 'en)er(aan aktu 'en)u(ian. #earnaan s'ora &i)unakan untuk men)amati en&os'ora *akteri. n&os'ora hanya ter*entuk  &alam lin)kun)an yan) ti&ak men)untun)kan se'erti kekuran)an nutrisi. %entuk ini tahan terha&a'  'emanasan &an unsur,unsur +isik lain se'erti 'em*ekuan kekerin)an ra&iasi ultra8iolet serta *ahan,  *ahan kimia yan) &a'at men)hanurkan sel *akteri. %ila kea&aan lin)kun)an kem*ali men(a&i *aik

maka &in&in) en&os'ora akan 'eah &an *akteri mem*entuk sel 8e)etati+ kem*ali -
 anthomonas oryzae '8& oryzae

 alstonia solanacearum

 anthomonas campestris '8. campestris

 !r#inia caroto*ora

 'seudomonas syringae '8. glyciniea

%er&asarkan hasil 'raktikum terlihat *aha mekanisme anta)onis 'en)u(ian aktinomiset terha&a' kelima 'ato)en yan) &iu(ikan ialah mekanisme 'arasitisme. Aktinomiset yan) su&ah mem'arasit 'ato)en u(i menye*a*kan 'ato)en u(i ti&ak mam'u untuk tum*uh &i me&ia *uatan. Menurut D(atmiko -17 kemam'uan anta)onis &alam menekan 'ato)en in *itro karena 'a&a kon&isi la*oratorium anta)onis hanya *erha&a'an &en)an 'ato)en &an a&a 'a&a lin)kun)an yan) kaya nutrisi sehin))a mam'u memunulkan kemam'uannya &alam men)ham*at 'ato)en. Isolat aktinomiset ini *er'otensi untuk &i)unakan se*a)ai a)en 'en)en&ali 'ato)en tum*uhan. Hal ini &ikarenakan &ari hasil u(i anta)onis su&ah &i*uktikan mam'u menekan 'ertum*uhan 'ato)en &alam me&ia *uatan. Menurut Anu)rahati -2011 aktinomiset men)eluarkan anti*iotik yan) 'eka terha&a' *akteri )ram ne)ati+.

$a*el 7. Hasil u(i anta)onis *akteri 'ato)en &en)an *akteri en&o+it men))unakan meto&e  paper dis+ di""usion

%akteri

Hasil &okumentasi

 anthomonas oryzae '8& oryzae

 alstonia solanacearum

 anthomonas campestris '8. campestris

 !r#inia caroto*ora

Menurut $ortora &kk   , -2001 dalam 4tami -2005 'en)u(ian akti8itas *ahan antimikro*a seara in *itro &a'at &ilakukan melalui meto&e &i+usi akram. #rinsi' &ari meto&e &i+usi akram a&alah menem'atkan kertas akram yan) su&ah men)an&un) *ahan antimiko*a tertentu 'a&a me&ium lem'en) 'a&at yan) telah &iam'ur &en)an isolat yan) akan &iu(i. Me&ium ini kemu&ian &iinku*asi  'a&a suhu 37J< selama 16,2C (am. !elan(utnya &iamati a&anya area -zona (ernih &isekitar kertas akram. Daerah (ernih yan) tam'ak &i sekelilin) kertas akram menun(ukkan ti&ak a&anya  'ertum*uhan mikro*a. Isolat yan) sensiti+ terha&a' *ahan antimikro*a akan &itan&ai &en)an a&anya

&aerah ham*atan &isekitar akram se&an)kan isolat yan) resisten terlihat teta' tum*uh 'a&a te'i kertas akram. Anti*iotik yan) &ihasilkan mikror)anisme termasuk &alam hal ini *akteri en&o+it &alam melakukan ker(anya men)ham*at mikroor)anisme lain menurut !uan&i -12 dalam Diniyah -2010 ter&a'at C (alur yaitu: men)ham*at sintesis &in&in) sel men)ham*at +un)si sela'ut sel men)ham*at sintesa 'rotein &an men)ham*at sintesis asam nukleat. %er*e&a 'a&a hasil u(i anta)onis men))unakan paper dis+   isolat *akteri en&o+it ti&ak mam'u men)hasilkan zona ham*atF*enin) 'a&a me&ia yan) su&ah &i*eri masin),masin) isolat 'ato)en. Hal ini &i&u)a karena si+at anta)onis &ari masin),masin) isolat *akteri en&o+it su&ah menurun aki*at serin) &ilakukan 'emurnianF'uri+ikasi. $i&ak menutu' kemun)kinan 'emurnian yan) &ilakukan terlalu serin) &alam me&ia *iakan menye*a*kan *akteri su&ah menurun tin)kat anta)onisnya. !elain itu +aktor lain yan) menye*a*kan lemahnya si+at anta)onis *akteri en&o+it karena meman) *akteri en&o+it terse*ut memiliki si+at anta)onis yan) lemah -si+at )ennya. Menurut !to*el -2002 dalam Diniyah -2010 ter*entuknya zona ham*at (u)a &a'at &i'en)aruhi oleh +aktor lin)kun)an &an *akteri u(i yan)  *erle*ihan sehin))a 'en)aruh meta*olit yan) &ihasilkan oleh *akteri en&o+it ti&ak si)ni+ikan terha&a'  'ertum*uahan *akteri & Solanacearum. Deeksi Be#asis Asa% Nklea !en$an PR 

1

2

3

5

+

6



8

>

1*

"am*ar 2. Hasil #< &ari ekstraksi DA *akteri u(i &en)an 'rimer )eneral *akteri. -1 anthomonas oryzae  '8.  oryzae -2 alstonia solanacearum -3 "a)al -C n&o+it -5 "a)al - "a)al -7 Aktinomiset -6  !r#inia caroto*ora - & campestris  '8. campestris -10  'seudomonas syringae '8. glycinae. Dari hasil 8isualisasi terlihat *aha hasil elektro+oresis menun(ukkan sam'el 'ositi+ yaitu &en)an ter*entuknya 'ita DA *erukuran C7 *' yan) &i8isualisasi &en)an elektro+oresis )el a)arose. #a&a "am*ar 2. $erlihat *aha marker yan) &i)unakan meru'akan marker 100 *' &en)an 'ita am'li+ikon yan) &ihasilkan sekitar 500 *'. Kontrol 'ositi+ yan) &i)unakan meru'akan isolat murni ;oo koleksi la*oratorium &en)an ukuran C7 *' &an kontrol ne)ati+ men))unakan air. Am'li+ikasi )en 1! rA men)hasilkan 'ita DA *erukuran 1500 *'. Analisis sequens )en 1! rA isolat u(i menun(ukkan a&anya kemiri'an &en)an *akeri  & oryzae  '8. oryzae. #ita yan) te*al terse*ut menun(ukkan *aha )en 1!rA isolat teram'li+ikasi &en)an *aik. Hal ini &a'at &ise*a*kan oleh  *e*era'a +aktor yan) mem'en)aruhi #< o'timasi am'li+ikasi #< &ari DA tia' isolat &an kesesuaian 'rimer yan) &i)unakan. %er&asarkan hasil 8isualisasi ti&ak semua sam'el teram'li+ikasi &en)an *aik. Hal ini &i&u)a karena konsentrasi &ari ekstraksi DA yan) terlalu tin))i atau terlalu ren&ah. %ahkan ti&ak a&anya 'ita

yan) ter8isualisasi &ise*a*kan DA total yan) ti&ak a&a atau DA total yan) ter&e)ra&asi 'a&a saat &ilakukannya 'roses ekstraksi DA. Hasil 8isualisasi &ari elektro+oresis men(a&i 'an&uan untuk  &ilakukannya meto&e #< - 'lymerase chain reaction. A'a*ila DA *akteri &iam'li+ikasi &en)an teknik #< men))unakan 'asan)an 'rimer )eneral 27= &an 1C2 maka akan menun(ukkan hasil yan) 'ositi+. Hasil 'ositi+ &itun(ukkan &en)an ter*entuknya 'ita DA *erukuran 1500. %er&asarkan hasil 8isualisasi terlihat *aha 'a&a semua sam'el DA yan) &ianalisis ter&a'at 'ita DA *erukuran 1500 *' -!urya&i 201C. Dari hasil 8isualisasi men))unakan 'rimer s'esi+ik untuk ;oo. #ita 'a&a urutan no 1 meru'akan ekstraksi DA &ari sam'el tanaman yan) *er)e(ala ;oo. $erlihat arna teran) 'a&a sam'el ;oo yan) mana menan&akan *aha kromosom &ari ;oo ter&eteksi men))unakan 'rimer s'esi+ik. #en))unaan 'rimer s'esi+ik ;oo san)at mem*antu untuk i&enti+ikasi HD% &alam (umlah san)at  *anyak -$asliah 2013. Penla#an "io/las%a $a*el 6. $aha'an 'enularan +ito'lasma melalui  gra"ting 

#emoton)an *a)ian tanaman kaan) tanah yan) terin+eksi +ito'lasma

%atan) tanaman sehat &i'oton) mirin) kemu&ian &i*elah 2

"e(ala umum seran)an +ito'lasma  *elum terlalu nam'ak &en)an (elas ta'i &a'at &ilihat &aun kaan)  'ertum*uhannya san)at lama setelah &ilakukan 'enyam*un)an &en)an tanaman yan) terseran) +ito'lasma.

%a)ian tanaman yan) sakit &isisi'kan 'a&a 'oton)an *atan) tanaman yan) sehat &an &irekatkan &en)an seal 

%er&asarkan hasil 'raktikum &i'eroleh hasil *aha 'enularan tanaman kaan) yan) terin+eksi +ito'lasma ke tanaman kaan) yan) sehat ti&ak *erhasil. #enye*aran melalui teknik  gra"ting  meru'akan 'enye*aran yan) sulit &ilakukan men)in)at &alam teknik gra"ting   hanya se&ikit tin)kat ke*erhasilannya. $eknik gra"ting   yakni teknik yan) &i)unakan untuk menem'elkan antar mata tunas tanaman. %ila ke&ua mata tunas &a'at menem'el &en)an sem'urna maka +ito'lasma yan) a&a &i(arin)an tanaman (u)a akan ikut ter*aa ke tanaman yan) &i(a&ikan gra"ting . #enye*aran melalui teknik )ra+tin) ti&ak *e)itu 'entin) -iolaisen 2001. #enye*aran +ito'lasma &ari tanaman ke tanaman lainnya *iasanya ter)antun) 8ektor seran))a. #enye*aran melalui 8ektor seran))a se'erti eren) &an kutu meru'akan 'enye*aran yan) e+ekti+ &an ti&ak mem*utuhkan aktu yan) lama. K#7a Pe#%0an Bake#i

   D    >    i   a    l    i    

aktu Inku*asi -(am $erlihat &ari hasil kur8a 'ertum*uhan *akeri &ari (am 'ertama hin))a (am kesem*ilan kur8a terus men)alami kenaikan *aik 'a&a >D 1 mau'un >D 2. Kenaikan tertin))i 'a&a  (am setelah inku*asi 'a&a >D 2 se&an)kan 'a&a >D 1 hanya men)alami se&ikit kenaikan. #a&a (am 'ertama meru'akan +ase la) yakni +ase &imana a&a'tasi *akteri terha&a' me&ia 'erkem*an)*iakannya untuk  menyesuaikan &en)an kon&isi lin)kun)an &isekitarnya. ama +ase a&a'tasi ini &i'en)aruhi *e*era'a +aktor se'erti me&ium -lin)kun)an 'ertum*uhannya &an (umlah inokulum. ika me&ium &an lin)kun)an 'ertum*uhan sama se'erti me&ium &an lin)kun)an se*elumnya mun)kin ti&ak &i'erlukan aktu a&a'tasi. $eta'i (ika nutrient yan) terse&ia &an kon&isi lin)kun)an yan) *aru *er*e&a &en)an se*elumnya &i'erlukan aktu 'enyesuaian untuk mensintesa enzim,enzim. $ak hanya itu umlah aal sel yan) semakin tin))i akan mem'ere'at +ase a&a'tasi. =ase selan(utnya yakni +ase lo) atau 'ertum*uhan eks'onensial. $i&ak *utuh aktu yan) lama  *akteri untuk melakukan 'em*elahan &iriFmem'er*anyak &irinya sehin))a kemun)kinan setelah 1 (am aktu inku*asi su&ah ter(a&i 'em*elahan sel &an +ase lo) ini su&ah ter(a&i. #a&a +ase ini kee'atan  'ertum*uhan san)at &i'en)aruhi oleh me&ium tem'at tum*uhnya se'erti 'H &an kan&un)an nutrient  (u)a kon&isi lin)kun)an termasuk suhu &an kelem*a*an u&ara. #a&a +ase ini mikro*a mem*utuhkan ener)i le*ih *anyak &ari 'a&a +ase lainnya.

Dilihat &ari )ra+ik yan) terus naik *aha sam'ai  (am setelah inku*asi *elum menun(ukkan a&anya *entuk kur8a yan) sta*il atau *elum ter(a&i +ase stationer. Hal ini menye*a*kan 'o'ulasi  *akteri &alam me&ia terus menerus men)alami 'em*elahan &an ke'a&atan 'o'olasinya terus menin)kat. #a&a >D 1 terlihat antara 6, (am setelah inku*asi )ra+ik su&ah en&erun) ti&ak men)alami  'enin)katan yan) si)ni+ikan teta'i *elum *isa &ikatakan *aha 'ertum*uhannya sta*il. KE&IMPULAN

Kesim'ulan &ari hasil ke)iatan 'raktikum 'a&a 'en)amatan )e(ala 'enyakit a&alah &i'eroleh  *e*era'a *akteri 'ato)en tanaman se'erti 'seudomonas syringae '8. glycinea yan) &iisolasi &ari &aun timun anthomonas campestris '8. campestris &iisolasi &ari ku*is & oryzae  '8& oryzae &iisolasi &ari &aun 'a&i !r#inia caroto*ora &iisolasi &ari um*i ortel &an alstonia solanacearum  &iisolasi &ari tanaman leuna se&an)kan untuk *akteri non 'ato)en &iisolasi &ari 'ele'ah 'isan) &an tanah &isekitar   'erakaran tum*uhan *am*u. Dari ketu(uh isolat terse*ut kemu&ian &iu(i untuk men)etahui kemam'uan +isiolo)is &an anta)onisnya.  'seudomonas syringae  '8.  glycinea  & campestris  '8. campestris  & oryzae  '8& oryzae  !r#inia caroto*ora  &an  alstonia solanacearum meru'akan )ram ne)ati+ se&an)kan  isolat *akteri en&o+it &an 1 isolat aktinomiset meru'akan )ram 'ositi+. #a&a aktinomiset ti&ak &itemukan sel en&os'ora. Dari u(i +isiolo)is *akteri semua isolat *akteri u(i &a'at tum*uh seara aero* &an anaero* sehin))a seara 'ositi+ menun(ukkan reaksi oksi&ati+,+ermentati+. !elain itu 'a&a u(i anta)onis aktinomiset mam'u menekan 'erkem*an)an 'ato)en sehin))a *er'otensi se*a)ai a)ens hayati. %er*e&a 'a&a semua isolat *akteri en&o+it yan) mana ti&ak a&a satu'un yan) mam'u men)hasilkan zona ham*atF*enin). #enularan +ito'lasma &en)an teknik gra"ting   ti&ak *erhasil. Dari kur8a 'ertum*uhan *akteri terlihat *aha sam'ai  (am setelah inku*asi sam'el *akteri 1 &an 2 masih terus men)alami kenaikan 'ertum*uhan *akteri.

DA'TAR PU&TAKA

A)rios ". 200C. 'lant 'athology. =i+th &ition. !an Die)o I: 10.1C2F(+i.10.2.53 $asliahO Mahru' #rasetiyono . 2013. I&enti+ikasi Molekuler Haar Daun %akteri -;anthomonas oryzae '8. oryzae &an 4(i #ato)enisitasnya 'a&a "alur,)alur #a&i Iso)enik. urnal A)ro%io)en -2:C,57. 4tami 4. 2005. 2solasi :a+teri !ndo"it 'enghasil Antimi+ro%a Dari Tanaman hizopora musronata& Malan): 4I Malan) #riharta D Y A A. 2006. Isolasi &an I&enti+ikasi %akteri n&o+it &alam %atan) $anaman Artemisia  Annua . yan) Diu(i #otensi anti*akterianya $erha&a'  !schericia coli &an Staphylococcus aureus. 4ni8ersitas !anata Dharma -!kri'si. Yo)yakarta. i(iono. 200. alstonia solanacearum& http;<<#i/iyo*an&#ordpress.com. Akses 3 anuari 201.