USO DEL MICROSCOPIO El estudio práctico de la Histología y la Embriología basa su ejercicio principalmente en la observación al microscopio de las estructuras citohistológicas componentes de los organismos vivientes. Para ello, durante el desarrollo de las sesiones prácticas contará con un microscopio óptico que será su instrumento de estudio y le serán proporcionadas láminas de preparaciones histológicas que deberá visualizar con el microscopio. Antes de proporcionar las instrucciones de uso, se hace necesario recordar los componentes del microscopio óptico. Todo microscopio óptico se compone de dos sistemas: Sistema Óptico Es el eje de observación de objetos, y consta de los siguientes elementos: 1) Ocular: Lentes situadas cerca el ojo del observador, que amplifican la imagen del objetivo. 2) Objetivo: Lente más cercana a la preparación; amplifica la imagen del preparado histológico. Puede ser una lente única o un conjunto de ellas, de diferentes aumentos, montados en un Revólver. Habitualmente en el caso de un sistema de revólver, tiene los siguientes aumentos: 4x, 10x, 20x y 100x, este último objetivo es también conocido como lente de inmersión por requerir el uso de aceite de inmersión para poder hacer la observación de los preparados. 3) Condensador: Lente concentradora de rayos luminosos sobre la preparación. 4) Diafragma: Estructura anular que regula la cantidad de luz que ingresa al condensador. Se comporta como el iris del ojo. 5) Foco: Sistema de iluminación (sea una ampolleta o espejos) que dirigen el haz de luz hacia el condensador. En caso de ser una ampolleta, el microscopio tendrá una fuente de poder controlada con un interruptor de encendido, un reostato de regulación de intensidad de la luz y un enchufe que debe conectarse al sistema eléctrico para que pueda encenderse. Sistema Mecánico 1) Columna o Soporte: También denominado Estativo, es la parte sobre la que se monta el sistema óptico. Generalmente se compone de un Pie o base que sustenta todo el peso del microscopio dándole estabilidad, y un brazo en que se montan el condensador, el sistema de objetivos y oculares, y la platina de observación. o bservación. 2) Platina: Superficie plana, paralela al pie de la columna, donde se pone la preparación histológica. La platina puede tener una pinza de sujeción para el preparado histológico, unas regletas o vernier, que permiten realizar mediciones de las estructuras observadas, y Tornillos de desplazamiento en los ejes frontal y lateral (x e y), tornillos que permiten localizar un segmento del preparado en el eje de visualización. 3) Cabezal: Componente del sistema mecánico en que se sitúan los lentes oculares. Este cabezal puede ser monocular (1 único lente), binocular (2 lentes), trinocular (habitualmente combinando un sistema binocular con una salida para conexión de cámaras fotográficas o de video, o de una pantalla de
proyección). Puede ser un único cabezal o múltiples cabezales, estos últimos usados preferentemente en aplicaciones docentes guiadas. 4) Revólver: Pieza rotatoria donde se localizan los lentes objetivos. Esta pieza gira sobre el eje al que está anclado y, mediante un sistema de encaje, permite el posicionamiento de lentes objetivos de diferentes aumentos, en el eje de observación. 5) Tornillos de enfoque: Situados a los costados del brazo del estativo, permiten ajuste fino (micrométrico) y más tosco (macrométrico) de la preparación. Ajustando ambos se logra el enfoque correcto. Estos tornillos pueden estar separados, o bien integrados, siendo el tornillo macrométrico controlado por una perilla grande y el micrométrico con una perilla más pequeña habitualmente central respecto del eje de ambas perillas. Teniendo clara la composición de todo microscopio óptico antes descrita, revisaremos a continuación las instrucciones de uso. INSTRUCCIONES
Retire la funda del microscopio
Verifique que el microscopio está enchufado y encienda el microscopio.
Ponga el objetivo de menor aumento en posición de empleo y descienda totalmente la platina. Si en el último uso que tuvo el microscopio fue dejado correctamente, se encontrará en esta posición.
Ponga la preparación sobre la platina, sujetándola con las pinzas de sujeción.
Cerciórese que el objetivo 4x está bien encajado en su posición.
Proceda a enfocar de la siguiente manera: 1. Acerque cuidadosamente al máximo la lente objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Durante este procedimiento mire directamente, no por el ocular, para evitar la posible ruptura del preparado y posibles daños al objetivo. 2. Mire a través de los oculares y separe lentamente el objetivo de la preparación, usando el tornillo macromérico hasta que se vea relativamente nítida la muestra. 3. Gire el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
Cambie al objetivo 10x. Tendrá una imagen casi enfocada, por lo que deberá mover muy poco el tornillo micrométrico para conseguir el enfoque fino. Si al realizar el cambio de objetivo pierde totalmente la imagen, vuelva a enfocar con el lente objetivo anterior y repita los pasos 1 a 3 antes descritos.
Con el objetivo 40x debe tener precaución por cuanto su enfoque es a muy poca distancia del preparado, pudiendo suceder que preparación y objetivo choquen y se incrusten, o bien, que de haber observado previamente un preparado con el lente de inmersión, hayan quedado restos de aceite de inmersión y se manche el objetivo.
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Respecto del lente de inmersión, siga estos pasos: 1. Baje totalmente la platina. 2. Mirando directamente, Suba totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que indica la zona a visualizar y donde se habrá de echar el aceite. 3. Gire el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo en un punto intermedio entre éste y el objetivo 40x. 4. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. 5. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. 6. Mirando directamente el objetivo, suba lentamente la platina hasta que toque la gota de aceite. Notará que la gota parece ascender y adosarse al lente. 7. Enfoque con precaución el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y el preparado es mínimo, por lo que hay grandes riesgos de romper el preparado. 8. Una vez puesto el aceite de inmersión en el preparado, recuerde que no puede volver a enfocar con el objetivo 40x pues existe riesgo de manchar el lente con aceite. Si desea enfocar otro campo baje la platina y repita la operación desde el paso 3 de esta secuencia. 9. Finalice la observación bajando la platina y colocando el objetivo de menor aumento girando el revólver. Proceda al retiro de la preparación desde la platina. 10. Recuerde que nunca debe retirar el preparado con el objetivo de inmersión puesto en posición de observación. 11. Limpie el objetivo de inmersión con cuidado usando paño de batista o papel especial para óptica. Compruebe también que el objetivo de 40x esté limpio.
Al terminar la sesión siga los siguientes pasos: ◦
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Retire el último preparado que está observando Baje la platina Ponga el revólver del microscopio en el lente de 4x Baje la perilla reguladora de la intensidad lumínica hasta el mínimo Apague el microscopio y desenchúfelo Cúbralo con la funda protectora
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Mantenimiento y precauciones:
Cuando finalice el trabajo, deje puesto el objetivo menor en posición de observación. Asegúrese que la parte mecánica de la platina n sobresale del borde de la misma y cúbralo con su funda.
Cuando el microscopio no esté en uso tápelo con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no usará el microscopio por largos períodos, guárdelo en la caja del mismo, dentro de un armario para protegerlo del polvo.
No tome jamás las lentes con las manos. Si se ensucian, límpielas muy suavemente con papel filtro, paño suave sin pelusas o paño de óptica.
Si no está usando el microscopio, no deje puesta ninguna preparación sobre la platina.
Si ha usado el lente de inmersión, después de su uso limpie el aceite remanente del objetivo con paños especiales de óptica o papel filtro. Cuando pase el paño o papel, debe hacerlo SIEMPRE en un mismo sentido y con suavidad. Si el aceite se ha secado y se ha adherido al objetivo, se limpia con una mezcla de alcohol-acetona (70%:30%) o con xilol. El uso de estos solventes orgánicos se hace ocasionalmente, y teniendo en claro que puede dañar las lentes y su sujeción por disolver la grasa mineral que se emplea en la lubricación del mecanismo de sujeción y desplazamiento.
Recuerde no forzar los tornillos giratorios del microscopio (macro y micrométrico, platina, revólver, condensador).
Tenga presente que el cambio de objetivos se realiza girando el revólver y mirando siempre en forma directa (ojo desnudo) la preparación, para prevenir el roce entre el lente y la muestra. Jamás cambie el objetivo agarrándolo por el tubo ni mientras se observa a través del ocular.
Debe mantener siempre seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama algún líquido sobre ella, séquelo con un paño. Si se mancha con aceite, límpiela con un paño humedecido con xilol, o con isopropanol si dispone de él.
Recuerde revisar y limpiar siempre el microscopio al final de cada sesión práctica. T.M. Adolfo Antonio Ríos Alcorta Coordinador Nacional de Histotecas Universidad Pedro de Valdivia
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LABORATORIO N° 1 : “ MICROSCOPIA” Microscopio óptico (M.O), de Campo Claro o Fotónico: La luz, al atravesar el preparado cito-histológico, es modificada en algunas de sus características, las que pueden ser captadas por el ojo: -Variaciones de luz (contraste de luz y sombras). - Variaciones de color (diferentes longitudes de onda). Dado que la mayor parte de las células, tejidos y órganos carecen de color, el paso de la luz a través de ellos no nos permite observer todas sus características, por este motive, debe modificarse la preparación cito-histológica mediante la aplicación de tinciones histológicas, obteniendo una absorción diferencial de luz permitiendo la visualización de diferentes estructuras. El M.O, presenta dos características importantes: 1. Poder de resolución: Distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se visualicen separadas 2. Aumento: que es la relación entre el tamaño de la imagen y del objeto,en valores lineales. La calidad de una imagen, su claridad y riqueza de detalles, depende del poder de resolución. El M.O, tiene un máximo poder de resolución de 0,2 micrometros, aunque en forma rutinaria es de 0,5 micrometros; este tipo de microscopio está formado por partes mecánicas (tornillos macro y micrométrico, platina, verniers, columna, base o estativo) y ópticas (condensador y diafragma , lente objetivo y lente ocular). Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de pequeño tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualización. Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 µm), o sea la menor distancia vista o resuelta por el ojo humano es de dos líneas separadas a algo menos de 1mm de distancia; si hay dos líneas a 200 µm de distancia, veremos una sola línea. Los microscopios se utilizan para mejorar la resolución. La invención del microscopio en el siglo XVII posibilitó la serie de descubrimientos posteriores de las mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio óptico simple, examinó un corte de corteza, encontró que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cámaras, que llamó “células”, en realidad sólo vió las paredes celulares, ya que este tejido está muerto a la madurez y las células ya no tienen contenido. Más tarde, Hoock y algunos de sus contemporáneos observaron células vivas.
Microscopio óptico (MO) El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan
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microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes. El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especimenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectángulo fino de vidrio. El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz eléctrica que dirige la luz a través de la muestra. Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 µm, unas mil veces la del ojo humano. El tipo de microscopio más utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces. El microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de forma que el objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de lentes. El equipamiento adicional de un microscopio consta de un armazón con un soporte que sostiene el material examinado y de un mecanismo que permite acercar y alejar el tubo para enfocar la muestra. Los especímenes o muestras que se examinan con un microscopio son transparentes y se observan con una luz que los atraviesa, y se suelen colocar sobre un rectángulo fino de vidrio(portaobjeto). El soporte tiene un orificio por el que pasa la luz. Bajo el soporte se encuentra un espejo que refleja la luz para que atraviese el espécimen. El microscopio puede contar con una fuente de luz eléctrica que dirige la luz a través de la muestra.
Los MO actuales tiene un poder resolutivo de 0,2 µm, unas mil veces la del ojo humano
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Todo microscopio óptico se compone de dos sistemas: Sistema Óptico Es el eje de observación de objetos, y consta de los siguientes elementos: 1) Ocular: Lentes situadas cerca el ojo del observador, que amplifican la imagen del objetivo. 2) Objetivo: Lente más cercana a la preparación; amplifica la imagen del preparado histológico. Puede ser una lente única o un conjunto de ellas, de diferentes aumentos, montados en un Revólver. Habitualmente en el caso de un sistema de revólver, tiene los siguientes aumentos: 4x, 10x, 20x y 100x, este último objetivo es también conocido como lente de inmersión por requerir el uso de aceite de inmersión para poder hacer la observación de los preparados. 3) Condensador: Lente concentradora de rayos luminosos sobre la preparación. 4) Diafragma: Estructura anular que regula la cantidad de luz que ingresa al condensador. Se comporta como el iris del ojo. 5) Foco: Sistema de iluminación (sea una ampolleta o espejos) que dirigen el haz de luz hacia el condensador. En caso de ser una ampolleta, el microscopio tendrá una fuente de poder controlada con un interruptor de encendido, un reostato de regulación de intensidad de la luz y un enchufe que debe conectarse al sistema eléctrico para que pueda encenderse. Sistema Mecánico 1) Columna o Soporte: También denominado Estativo, es la parte sobre la que se monta el sistema óptico. Generalmente se compone de un Pie o base que sustenta todo el peso del microscopio dándole estabilidad, y un brazo en que se montan el condensador, el sistema de objetivos y oculares, y la platina de observación.
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2) Platina: Superficie plana, paralela al pie de la columna, donde se pone la preparación histológica. La platina puede tener una pinza de sujeción para el preparado histológico, unas regletas o vernier, que permiten realizar mediciones de las estructuras observadas, y Tornillos de desplazamiento en los ejes frontal y lateral (x e y), tornillos que permiten localizar un segmento del preparado en el eje de visualización. 3) Cabezal: Componente del sistema mecánico en que se sitúan los lentes oculares. Este cabezal puede ser monocular (1 único lente), binocular (2 lentes), trinocular (habitualmente combinando un sistema binocular con una salida para conexión de cámaras fotográficas o de video, o de una pantalla de proyección). Puede ser un único cabezal o múltiples cabezales, estos últimos usados preferentemente en aplicaciones docentes guiadas. 4) Revólver: Pieza rotatoria donde se localizan los lentes objetivos. Esta pieza gira sobre el eje al que está anclado y mediante un sistema de encaje, permite el posicionamiento de lentes objetivos de diferentes aumentos, en el eje de observación. 5) Tornillos de enfoque: Situados a los costados del brazo del estativo, permiten ajuste fino (micrométrico) y más tosco (macrométrico) de la preparación. Ajustando ambos se logra el enfoque correcto. Estos tornillos pueden estar separados, o bien integrados, siendo el tornillo macrométrico controlado por una perilla grande y el micrométrico con una perilla más pequeña habitualmente central respecto del eje de ambas perillas.
Existen distintas variantes de observación en MO: Microscopía óptica normal (de campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con colorantes específicos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de otra manera
Célula de Arveja (Pisum sp.) Traqueidas del leño de Pino (Pinus sp.) coloración: safranina-fast-green Coloración: safranina
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LUPA STEREOSCÓPICA Es una variación de los microscopios ópticos de campo claro. Su utilidad es la observación y manipulación d de muestras pequeñas, como la observación grosso modo de piezas completas. Brinda utilidad en Embriología, Biología, Histología, Patología, Infectología, y Geología. La lupa stereoscópica consta de las siguientes componente: Interruptor de encendido Fuente de iluminación incidente y transmitida Comando de enfoque Tornillo de la abrazadera Soporte de deslizamiento Ocular Anillo de ajuste de dioptrías Prisma cubierto Objetivo Interruptor de encendido Sujetador de muestra Platina de vidrio en blanco y negro.
Cabezal La cabeza es binocular y vertical con una inclinación de 45º. Ajuste de dioptrías +/- 5º. Distancia interpupilar ajustable de 54-76mm. Selección de tapas: a) La platina de vidrio esmerilado se coloca en la base y se fija con un tronillo. Se utiliza cuando se intenta visualizar una muestra por transparencia. En este caso por favor utilice el iluminador de transmisión. b) La tapa negra y blanca se mantiene en el embalaje como accesorio. Cuando se utiliza por favor saque la tapa de vidrio y el lugar ponga la etapa en blanco y negro en la base. Normalmente, el lado blanco esta hacia arriba. Si la muestra es de color blanco o colores claros, utilice el lado negro para mejorar el contraste con el iluminador incidente.
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INSTRUCCIONES DE USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO Teniendo clara la composición de todo microscopio óptico antes descrita, revisaremos a continuación las instrucciones de uso.
1. Retire la funda del microscopio 2. Verifique que el microscopio está enchufado y encienda el microscopio. 3. Ponga el objetivo de menor aumento en posición de empleo y descienda totalmente la platina. Si en el último uso que tuvo el microscopio fue dejado correctamente, se encontrará en esta posición. 4. Ponga la preparación sobre la platina, sujetándola con las pinzas de sujeción. 5. Cersiórese que el objetivo 4x está bien encajado en su posición. 6. Proceda a enfocar de la siguiente manera: 7. Acerque cuidadosamente al máximo la lente objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Durante este procedimiento mire directamente, no por el ocular, para evitar la posible ruptura del preparado y posibles daños al objetivo. 8. Mire a través de los oculares y separe lentamente el objetivo de la preparación, usando el tornillo macromérico hasta que se vea relativamente nítida la muestra. 9. Gire el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino. 10. Cambie al objetivo 10x. Tendrá una imagen casi enfocada, por lo que deberá mover muy poco el tornillo micrométrico para conseguir el enfoque fino. Si al realizar el cambio de objetivo pierde totalmente la imagen, vuelva a enfocar con el lente objetivo anterior y repita los pasos 1 a 3 antes descritos. 11. Con el objetivo 40x debe tener precaución por cuanto su enfoque es a muy poca distancia del preparado, pudiendo suceder que preparación y objetivo choquen y se incrusten, o bien, que de haber observado previamente un preparado con el lente de inmersión, hayan quedado restos de aceite de inmersión y se manche el objetivo. 12. Respecto del lente de inmersión, siga estos pasos: 13. Baje totalmente la platina. 14. Mirando directamente, Suba totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que indica la zona a visualizar y donde se habrá de echar el aceite. 15. Gire el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo en un punto intermedio entre éste y el objetivo 40x. 16. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. 17. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
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18. Mirando directamente el objetivo, suba lentamente la platina hasta que toque la gota de aceite. Notará que la gota parece ascender y adosarse al lente. 19. Enfoque con precaución el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y el preparado es mínimo, por lo que hay grandes riesgos de romper el preparado. 20. Una vez puesto el aceite de inmersión en el preparado, recuerde que no puede volver a enfocar con el objetivo 40x pues existe riesgo de manchar el lente con aceite. Si desea enfocar otro campo baje la platina y repita la operación desde el paso 3 de esta secuencia. 21. Finalice la observación bajando la platina y colocando el objetivo de menor aumento girando el revólver. Proceda al retiro de la preparación desde la platina. 22. Recuerde que nunca debe retirar el preparado con el objetivo de inmersión puesto en posición de observación. 23. Limpie el objetivo de inmersión con cuidado usando paño de batista o papel especial para óptica. Compruebe también que el objetivo de 40x esté limpio. Mantenimiento y precauciones:
Cuando finalice el trabajo, deje puesto el objetivo menor en posición de observación. Asegúrese que la parte mecánica de la platina n sobresale del borde de la misma y cúbralo con su funda.
Cuando el microscopio no esté en uso tápelo con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no usará el microscopio por largos períodos, guárdelo en la caja del mismo, dentro de un armario para protegerlo del polvo.
No tome jamás las lentes con las manos. Si se ensucian, límpielas muy suavemente con papel filtro, paño suave sin pelusas o paño de óptica.
Si no está usando el microscopio, no deje puesta ninguna preparación sobre la platina.
Si ha usado el lente de inmersión, después de su uso limpie el aceite remanente del objetivo con paños especiales de óptica o papel filtro. Cuando pase el paño o papel, debe hacerlo SIEMPRE en un mismo sentido y con suavidad. Si el aceite se ha secado y se ha adherido al objetivo, se limpia con una mezcla de alcohol-acetona (70%:30%) o con xilol. El uso de estos solventes orgánicos se hace ocasionalmente, y teniendo en claro que puede dañar las lentes y su sujeción por disolver la grasa mineral que se emplea en la lubricación del mecanismo de sujeción y desplazamiento.
Recuerde no forzar los tornillos giratorios del microscopio (macro y micrométrico, platina, revólver, condensador).
Tenga presente que el cambio de objetivos se realiza girando el revólver y mirando siempre en forma directa (ojo desnudo) la preparación, para prevenir el roce entre el lente y la muestra. Jamás cambie el objetivo agarrándolo por el tubo ni mientras se observa a través del ocular.
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Debe mantener siempre seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama algún líquido sobre ella, séquelo con un paño. Si se mancha con aceite, límpiela con un paño humedecido con xilol.
Recuerde revisar y limpiar siempre el microscopio al final de cada sesión práctica.
INSTRUCCIONES DE USO DE LA LUPA STEREOSCÓPICA A diferencia del Microscopio óptico, el uso y mantenimiento se simplifica dado que solamente consta de un aumento menor 1. Retire la funda de la lupa 2. Verifique que la lupa está enchufada y encienda el microscopio. 3. Verifique que las protecciones de goma estén puestas en ambos oculares. Éstas se utilizan para proteger de la luz incidente el torno a los oculares y así mejorar la visibilidad. 3. Ponga la preparación sobre el centro la platina, sujetándola con las pinzas de sujeción. 4. Ponga el objetivo de menor aumento en posición de empleo y descienda totalmente la platina. Si en el último uso que tuvo la lupa fue dejada correctamente, se encontrará en esta posición. 3. Ponga el objetivo de menor aumento en posición de empleo y descienda totalmente la platina. Si en el último uso que tuvo la lupa fue dejada correctamente, se encontrará en esta posición. 4. Ponga la preparación (muestra) sobre la platina, sujetándola con las pinzas de sujeción. 5. Afloje el tornillo de fijación del cuerpo de la lupa y mueva éste hacia arriba y hacia abajo. Fíjelo a la distancia deseada. 6. Gire el mando de zoom mientras mira por el ocular derecho hasta que aparezca la imagen. Utilizando el mando de enfoque conseguirá una imagen más nítida de la muestra. 7. A continuación, mire a través del ocular izquierdo con el ojo izquierdo y gire el anillo de ajuste de dioptrías hasta obtener una imagen tan nítida como el dado derecho. Hacer este ajuste sin mover el enfoque. 8. A continuación, sujete la cubierta del prisma derecha e izquierda y mueva más cerca con el fin de coincidir con la distancia de pupila. 9. El ajuste es correcto cuando el campo de visión se visualice cómodamente y presente un solo campo completo. 10. En algunos modelos de lupas stereoscópicas, existe la posibilidad de cambiar de aumento de 2x a 4x. Si se trata de uno de estos modelos, el procedimiento a realizar implica desenroscar el anillo de los objetivos. Poner el nuevo objetivo (opcional) y enrósquelo hasta fijar correctamente. 11. Finalice la observación subiendo el cuerpo de la lupa y colocando el objetivo de menor aumento. Proceda al retiro de la preparación desde la platina.
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12. Limpie el objetivo con cuidado usando paño de batista o papel especial para óptica. TÉCNICAS DE IDENTIFICACIÓN EN HISTOLOGÍA Introducción Las células en su mayoría son incoloras, aquellas que en su citoplasma poseen Inclusiones que son sustancias o partículas coloreadas de origen endógeno como caroteno, melanina, licopenos o exógenos como carbón. Cuando se trata de estudiar células aisladas o disociadas, tejidos delgados el proceso de coloración no tiene problemas. El problema se produce cuando se tiene que analizar órganos o tejidos más voluminosos, en donde por la densidad celular se dificulta la coloración y la observación de ellos; sobre todo en la observación al microscopio óptico, que se basa en lo delgado de la muestra que debe ser lo más trasparente para que el haz de luz la atraviese. Es recomendable que su grosor esté entre 7 a 10 micrometros o micras ( m), para una clara observación, además deberán ser teñidos los tejidos. Al realizer el corte, dependerá de la orientación especial el cómo se observe el preparado, como observaremos en el esquema:
Para lograr la adecuada preparación y observación de los preparados, se debe realizar el siguiente procedimiento con los siguientes pasos:
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ACTIVIDADES PRÁCTICAS DE ENTRENAMIENTO EN EL USO DE LUPA Y MICROSCOPIOS
Objetivos 1.- Comprender los principales tipos de microscopio usados en los estudios 2.- Enfocar con los diferentes presentadas.
citohistológicos.
aumentos de manera progresiva las preparaciones histológicas,
3.-Comparar el poder de resolución de los diferentes lentes objetivos, ante la aparición detalles en la muestra, imperceptibles a la visión humana, mediante el uso pr ogresivo de los diversos aumentos. Actividades 1.- Se le entregarán 3 preparaciones de aprendizaje: a) Hilos. b) Letras y números c) Cuadrícula de papel milimetrado 2.- Observe en los aumentos de 4x, 10x y 40x, las muestras preparadas entregadas. 3.- a) Identifique y rotule cada una de las partes del esquema de microscopio b) Anote qué observa con la nitidez de la imagen cuando mueve el tornillo micrométrico c) Anote qué observa con la nitidez de los planos más superficial y profundo cuando mueve el tornillo micrométrico d) Anote qué observa con la orientación de la imagen a cada aumento e) Anote qué observa con la resolución de la imagen a diferentes aumentos
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2a.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersión. (Hilo de colores). Reconozca las formas a cada aumento y describa lo observado.
MUESTRA
TINCIÓN
ELEMENTOS QUE RECONOCE
FUNCIÓN
DESCRIPCIÓN 4X
DESCRIPCIÓN 10X
DESCRIPCIÓN 40X
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2b.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersión. (Letras y números). Reconozca las formas y posición a cada aumento y describa lo observado.
MUESTRA
TINCIÓN
ELEMENTOS QUE RECONOCE
FUNCIÓN
DESCRIPCIÓN 4X
DESCRIPCIÓN 10X
DESCRIPCIÓN 40X
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2c.- Observe la muestra entregada con los aumentos del microscopio incluyendo inmersión. (Cuadrícula de papel milimetrado). Anote las mediciones realizadas a cada aumento. Cada cuadrícula mide 20 mm x 20 mm. Ubique la preparación de manera que la cruz de líneas más gruesas quede en el centro preciso del campo. Cada división de la cuadrícula representa 1 mm En cada aumento, cuente la cantidad de líneas que dividen a la línea central. Anote este valor frente a cada aumento en la tabla que sigue bajo el encabezado “N° DE DIVISIONES CONTADAS”:
AUMENTO SEGÚN LENTE OBJETIVO
N° DE DIVISIONES CONTADAS
AUMENTO REAL
4x 10x 40x En cada aumento, cuente la cantidad de líneas que dividen a la línea central. Anote este valor frente a cada aumento en la tabla que sigue bajo el encabezado “N° DE DIVISIONES CONTADAS”: Calcule el aumento real de cada campo según la siguiente fórmula:
Donde 20 corresponde al total de divisiones (mm) de la cuadrícula.
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3.- Identifique las partes del Microscopio y señale sus funciones:
LETRA
NOMBRE
FUNCIÓN
A B C D E F G H I J K L M
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INSTRUCCIONES PARA TODAS LAS PREPARACIONES QUE OBSERVARÁ DURANTE LAS SESIONES PRÁCTICAS DE HISTOLOGÍA
a) Verifique que el microscopio tenga adecuadamente conectado el enchufe en su puerto de conexión y en el enchufe bajo su estación de trabajo. Encienda su microscopio con el botón de encendido (0 I) y luego con el reóstato (perilla <<<) aumente gradualmente la intensidad. b) Una vez encendido su microscopio, asegúrese que la lámpara esté encendida c) Enfoque en aumento 4x (lupa o aumento menor) la muestra, utilizando para ello el micro y macrométrico cuidando de no romper la preparación d) Identifique los componentes, estructuras, células y matriz extracelular de los preparados. e) Dibuje y rotule cada capa identificada f) A aumento mayor (10x), identifique las células que componen a cada capa g) Dibuje y rotule lo observado h) Repita estos últimos 2 pasos a aumento 40x i) Baje la intensidad de la iluminación. Si es su último preparado a observar, apague el microscopio, ponga el objetivo 4x volviendo de mayor a menor aumento, baje la platina, retire el preparado y vuelva a dejarlo en la bandeja que está al comienzo del mesón
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Genesser, F (2000). Histología. 3a Edición. Editorial Médica Panamericana. Genesser, F (2015). Histología. 4a Edición. Editorial Médica Panamericana.
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