OBJETIVOS
Objetivos General
Estudiar la importancia que tienen los cultivos puros para el análisis de las características bioquímicas, bioquímicas, reacción reacción a la coloración coloración y morfología morfología que presentan presentan las colonias;
Objetivos específicos
Obtener colonias de bacterias en cultivo puro mediante la siembra en medios líquidos, fondo en tubo y método de estrías por agotamiento Aprender a cultivar en medio liquido( caldo nutritivo) Adquirir las habilidades necesarias para realizar las principales principale s técnicas de inoculación (siembra) e identificación de las principales formas bacterianas
METODOLOGÌA
Método de estrías por agotamiento Con el asa ya esterilizada se tomó una porción de una de las colonias presentes en el cultivo, y se depositó en un costado de la caja de petri (contenía agar nutritivo), a partir de ese punto se hicieron estrías pasando el asa suevamente en forme de zig-zag por la superficie del agar sin rasparlo. Luego O se tapo la caja de petri, se quemo el asa y se incubo a 37 c/ 24 horas. Este procedimiento se realizó al pie del mechero.
Figura 1: Modelo de estriado
Siembra en fondo en tubo, por picadura Con un asa previamente esterilizado se tomò una pequeña cantidad de la muestra a examinar, se inclinò el tubo de ensayo( contenia agar) y se introdujo la punta del asa en este; llegando al fondo pero sin tocar el tubo. Se sacó el asa por el mismo canal y al llegar a la superficie inclinada, se practicaron estría
Siembra en caldos Al pie del mechero y con una asa esterilizada se tomo la muestra a examinar, se inclino el tubo con el caldo y en el espcio desocupado por la inclinacion del liquido se coloco la muestra en la pared del tubo, se enderezo y se mezclo por rotacion, posteriormente se tapo con algodón .
Figura 2: Siembra de un cultivo a un tubo con medio inclinado
Frotis, fijación y coloración de una muestra Se colocó 1 o 2gotas de agua en el portaobjetos con un asa estéril, se tomó una colonia del cultivo y se mezcló con el agua haciendo movimientos circulares del centro de la gota hacia afuera y al pie del mechero, se dejo secar, el frotis fue fijado pasando el portaobjetos rápidamente sobre la flama del mechero. Se cubrió el frotis previamente fijado con cristal violeta, se dejó actuar durante 1 minuto, se lavó con agua para eliminar el exceso de colorante. Se agregó lugol y se dejó un minuto, se lavó con agua nuevamente Se inclinó el portaobjetos y se aplicó gota a gota el decolorante alcohol - acetona, inmediatamente se lavó. El frotis se cubrió con fucsina por 20 segundos para la coloración de contraste, se lavó y se dejó secar al aire.
RESULTADOS
Siembra en fondo en tubo, por picadura
(Figura 3)
En esta siembra se observò: El crecimiento de las bacterias en la puntura no fueron muchas, pero las que se lograban observar eran de forma punteada, en la superficie se notaron en mayor cantidad las bacterias . estas poseian un colo amarillo bajo.
Siembra en caldos En esta siembra se apreciaron bacterias adheridas a las paredes del tubo de ensayo y en el interior del liquido, crecieron en forma de flòculos y comparandola con la siembra en fondo en tubo por pocadura, en esta ( siembra en caldos) se notò un mayor creciemiento y cantidad de bacterias. Hubo poca turbidez.
(Figura 4.)
Metodo de estrias por agotamiento
Las caracteristicas morfologicas de las bacterias que se observaron en la caja de petri son de forma fusiforme (lenticular ) . se noto una gran cantidad de micrroganismos, (muchas colonias)
OBSERVACION DE BACTERIAS EN EL MICROSCOPIO
Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: se vieron cocos estafilococos, y bacilos esporulados.
Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: seobservaron bacilos esporulados En forma de cerillos( tienen un aspecto parecido A un fosforo) Gram negativos, pues poseen un color futsia
Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: seobservaron bacilos esporulados y no Esporulados ( gram +), ademas de estas formas Bacterianas tambien se notan cocos
Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: se percibio una gran cantidad de cocos, la mayoria gram negativos y algunos gram positivos
Cultivo: solido Aumento : 100 X Descripcion: En esta muestra se vieron muchos C cocos
cocos gram negativos.
CONCLUSIÓN
De la anterior experiencia se aprendió a diferenciar un caldo de una agar, el caldo es para muestras liquidas y el agar para solidas. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles estas bacterias. Existen diversas formas de obtener cultivos puros en este laboratorio se utilizaron tres: método de estrías, siembra en fondo en tubo y siembra en caldo. Además se analizaron las características tanto macroscópicas como las microscópicas de las colonias de bacterias
BIBLIOGRAFÌA
1- Técnica para inocular un tubo de caldo de cultivo. Universidad nacional Federico Villa real. Laboratorio de microbiología I.
2- Manual de prácticas de microbiología I. Instituto tecnológico de Santo Domingo. 2005. Pág. 20.
RECOMENDACIONES
No hablar cuando se este realizando una siembra, ni exponer los medios al aire fuera del área aséptica Siempre se debe trabajar al pie del mechero, por tanto se debe tener cuidado con él.
Evitar acumulación sobre la mesa de trabajo de objetos no relacionados con la práctica de laboratorio. Todos estos objetos se colocan en un lugar especificado por el profesor.
Debe tenerse precaución y tomar medidas necesarias al manipular ciertos reactivos ( utilizados en la coloración de una muestra)
