PROPIEDADES Y REACCIONES DE CARACTERIZACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS. Jennifer Riaño Ortiz Jorge Luis Acosta Acosta Escuela de Química Universidad Tecnológica de Pereira Risaralda Junio ! de !"#$
INTRODUCCIÓN.
Las proteínas proteínas son las bo!ole"# bo!ole"#las las !$s ab#n%antes ab#n%antes %esp#&s %esp#&s %el a'#a ( %ese!pe)an %ese!pe)an #n 'ran %e *#n"ones+ ,#e las "ara"ter-an "o!o "o!ponentes esen"ales e n%spensables para la %a. S#s prope%a%es ,#í!"as ( *sol/'"as %epen%en no solo %e s# ta!a)o+ *or!as ( prope%a%es %e los a!no$"%os ,#e las "o!ponen. Por la estr#"t#ra peptí%"a ( la presen"a %e %eter!na%os 'r#pos 'r#pos las proteínas proteínas p#e%en rea""onar rea""onar "on #na are%a% are%a% %e a'entes a'entes or'n$n or'n$n%ose %ose pro%#"tos pro%#"tos "olorea%os. Estas rea""ones son las bases para la %eter!na"/n "#anttata "#anttata ( "#altata %e las proteínas. To%os los a!no$"%os ,#e presentan al !enos #n 'r#po a!no ( #no "arbo0lo lbre+ rea""onan "on las %*erentes pr#ebas %e "ara"ter-a"/n. I%ent*"a"/n %e estr#"t#ra La %eter!na"/n %e la estr#"t#ra %e #na proteína+ es #n pro"eso "o!ple1o ,#e "o!pren%e el e!pleo %e !&to%os nstr#!entales ( ,#í!"os. La 2%r/lss %e proteínas por los %*erentes !&to%os 3$"%a+ b$s"a o en-!$t"a4 propor"ona 56 a!no$"%o a!no$"%oss 3alanna+ 3alanna+ prolna+ prolna+ lsna+ lsna+ $"%o asp$rt"o asp$rt"o++ $"%o 'l#t$!"o 'l#t$!"o++ aspara'na aspara'na++ 'l#ta!na 'l#ta!na++ 2st%na+ 'l"na+ serna+ alna+ trosna+ trpt/*ano+ *enlalanna+ treonna+ sole#"na+ le#"na+ "st "steí eína na++ !et !eton onn naa ( ar' ar'n nna na44 "o!o "o!o "ons "onst tt# t#((ente entess #n #ner ersa sale less %e las las prot proteí eína nas. s. Depen%en%o %el tpo %e a!no$"%os ,#e "onten'a #na proteína se p#e%en real-ar %*erentes an$lss7 8. Rea""/n %e la nn2%rna. Rea""/n %e 9#ret :. Rea""/n ;antoprot&"a <. Rea""/n %e Mll/n =. Rea""/n %e Sa>a'#"2
Tpos %e rea""ones ,#e ,#e nos per!ten %ent*"ar a!no$"%os ( proteínas7 8. Reacción con la ninhidrina: Los 'r#pos a!no lbres %e los a!no$"%os+ %e los p&pt%os ( las proteínas rea""onan "on la nn2%rna a #n p? entre < ( @+ para %ar #n "o!p#esto %e ntenso "olor a-#l a-#l prp prp#r #ra. a. La pr#e pr#eba ba ta!b ta!b& &nn es po pos st ta a "on "on a!n a!nas as pr! pr!ar ara ass ( a!on a!onía ía"o "o pero pero sn sn %espren%!ento %e CO 5. Los a!no$"%os prolna prolna e 2%ro0prolna %an #n "olor a!arllo en l#'ar l#'ar %el "olor prp#ra "on la nn2%rna. La rea""/n es !#( sensble ( es %eal para la %ete""/n %e a!no$"%os en "ro!ato'ra!as ( para s# "#ant "#ant*" *"a" a"/n /n !e%an !e%ante te t&"n t&"n"as "as espe"t espe"tro* ro*oto oto!&t !&tr" r"as as %e las *ra"" *ra""one oness ,#e se obte obtenen nen %e "ol#!nas "ro!ato'r$*"as. 5. Reacción a!no$"% "%os+ os+ ,#e "on "onte tenen nen #n n" n"leo leo aro!$ aro!$t" t"oo *or!an *or!an Reacción xantopro xantoproteica teica7 Los a!no$ ntro%era%os %e "olor a!arllo "#an%o "#an%o se "alentan "on $"%o nítr"o "on"entra%o. Las sales %e estos %era%os %era%os son %e "olor "olor naran1a naran1a ntenso en !e%o al"alno. al"alno. La *enlalanna *enlalanna++ la trosna trosna ( en "erto 'ra%o el Trpt/*ano+ así "o!o to%as las proteínas ,#e los "ontenen+ %an posta la pr#eba. :. Reacción del ácido glioxílico para trpt/*ano7 El 'r#po n%/l"o %el trpt/*ano rea""ona "on $"%o $"%o 'lo0 'lo0íl íl"o "o en presen presen"a "a %e $"%o $"%o s#l*r s#l*r"o "o "on "on"en "entra tra%o %o %an %an%o %o #n "o!ple "o!ple1o 1o %e "olor "olor prp#ra. El $"%o a"&t"o 'la"al 'la"al ,#e 2a s%o e0p#esto a la l#- "ontene $"%o 'lo0íl"o. 'lo0íl"o. <. Reacción para el triptófano 7 Este a!no$"%o se "on%ensa *$"l!ente "on aros al%e2í%os en presen"a %e $"%os *#ertes para %ar "o!p#estos "olorea%os. En la rea""/n se #tl-a el rea"to %e E2rl"2 3pB%!etla!noben-al%e2í%o al 86 en ?CL "on".4 ,#e rea""ona "on #n b#en n!ero %e "o!p#estos "o!p#estos or'$n"os or'$n"os tales tales "o!o n%oles+ n%oles+ a!nas a!nas aro!$t"a aro!$t"ass ( "o!p#esto "o!p#estoss #re"os #re"os para %ar "o!ple1os "olorea%os. =. Reacciones para cisteína cistina 7 C#an%o C#an%o los a!no$"%os a!no$"%os ( las proteínas ,#e "ontenen "ontenen 'r#pos t/l"os se "alentan en !e%o *#erte!ente al"alno+ el a-#*re presente rea""ona para *or!ar s#l*#ros. Este s#l*#ro p#e%e %ete"tarse por la *or!a"/n %e #n pre"pta%o ne'ro %e s#l*#ro %e plo!o por a%"/n %e a"etato a"etato %e plo!o. Los 'r#pos toles ta!b&n rea""onan "on el ntropr#sato %e so%o en presen"a %e #n e0"eso %e a!onía"o para %ar #n "o!ple1o %e "olor ro1o. . !r"e#a para $rginina 7 El a!no$"%o Ar'nna "ontene #n 'r#po '#an%no en la "a%ena lateral+ este 'r#po rea""ona "on el rea"to %e Sa>a'#"2 3aBna*tola'#a %e 9ro!o4 en !e%o al"alno para %ar #n "o!p#esto %e "olor ro1o.
Pr#ebas 'enerales %e las proteínas7
%. !r"e#a de &i"reth7 Los "o!p#estos ,#e tenen %os 'r#pos "arba!%os 3BCON?B4+ (a sea #n%os %re"ta!ente o a tra&s %e #n $to!o %e "arbono o ntr/'eno+ %an #n "olor oleta "on el s#l*ato %e "obre al"alno 3Rea"to %e 9#ret24. 9#ret24. Los trp&pt%os son las las !ol&"#las !$s pe,#e)as "apa"es %e %ar #na pr#eba %e 9#ret2 posta+ !entras ,#e esto no o"#rre "on los a!no$"%os.
La pr#eba %e 9#ret2 es #na b#ena pr#eba 'eneral para las proteínas ( la ntens%a% %el "olor oleta es #na !e%%a %el n!ero %e enla"es peptí%"os. Al'#nas s#stan"as "o!o la o0a!%a p#e%en %ar *alsos res#lta%os postos en ensa(os "#altatos %e proteínas.
5. Desnat"rali'ación por calor p( extre)os 7 La %esnat#ral-a"/n es "#al,#er pro"eso por el "#al el arre'lo espa"al %e #na proteína "a!ba %e la estr#"t#ra or%ena%a %e la !ol&"#la nata a #na *or!a tr%!ensonal %esor%ena%a. D#rante la %esnat#ral-a"/n se per%en las estr#"t#ras %e or%en s#peror %e las proteínas+ "on p&r%%a %e la a"t%a% bol/'"a. Las en-!as por e1e!plo+ ,#e real-an traba1os "atalít"os en las "&l#las+ tenen #na te!perat#ra ( #n p? /pt!o en el "#al presentan #n !$0!o %e a"t%a%+ pero la a"t%a% %s!n#(e s'n*"ata!ente 2a"a alores e0tre!os %e p? ( a ba1as o elea%as te!perat#ras. :. !recipitación con cationes aniones pesados sales concentradas 7 Los "atones %e !etales pesa%os ( los anones %e elea%o peso !ole"#lar son !#( #sa%os en la separa"/n %e proteínas ( en la prepara"/n %e *ltra%os lbres %e proteínas. A p? ne#tro por lo 'eneral las proteínas tenen "ar'a neta ne'ata ( se "o!bnan *$"l!ente "on ones %e !etales pesa%os ,#e+ al ne#tral-ar la "ar'a pro%#"en la pre"pta"/n. A p? por %eba1o %el p#nto soel&"tr"o en "a!bo+ se "o!bnan "on anones por,#e presentan "ar'a neta posta. Sol#"ones "on"entra%as %e sales+ %e s#l*ato %e a!ono+ por e1e!plo+ re%#"en en 'ran !e%%a la sol#bl%a% %e las proteínas+ por,#e "o!pten por las !ol&"#las %e a'#a %e %sponbles para la solata"/n ( las ntera""ones proteínaBproteína se 2a"en !$s !portantes.
Reporte %e %atos !#estra
Pr#ebas (o an$lss real-a%os Nn2%rna 0antoprote"a R0n Mllon F B B F F F B F F B
Á"%o 'lo0l"o B B B B
R0n %e sa>a'#"2 B F
R0n %e E2rl"2 F B F B
'l"na trosna trpto*ano *enllalann a alb!na F F F F F F Sln 'elatna F B B B B B ?%rol-a%o B B B B protena alna B Tabla 8+ "ons'na"/n %e %atos obten%os en el laboratoro+ para a!no$"%os ( proteínas.
!#estra
Pr#ebas (o an$lss real-a%os R0n *or!al%e2 Por 9#ret %o "oa'#la" /n
'l"na trosna trpt/*ano *enlalanna alb!na
Coa'#la"/ Desnat#ral-a" n por /n al"o2ol Por p? 8G *or!a"/n %e #na pasta 'ran#la%a blan"a. F 5Gsol#"/n a!arlla p$l%o B :Gsol#"/n n"olora "on *or!a"/n %e #na pasta blan"a
Pre"pta"/n sales !et$l"as
T#bos 8B54 NaCl B sat#ra%a. Sln. F transl#"%a. B F+ "apa en F"oa'#l/ :B el *on%o <4pb3C?:COO Sln 'elatna Fa-#l B B 45 ?%rol-a%o Ne'ata F Pre"pta%o proteína a!arlla blan"o alna =4 C#SO<+ pre"pta%o blan"o 4C#SO< pre"pata%o a-#l re( Tabla 8+ "ontn#a"/n. Cons'na"/n %e %atos obten%os en el laboratoro+ para a!no$"%os ( proteínas. Pr#ebas para al"alo%es pr#eba Color *or!a%o Ma(er A!arllo 3F4 9o#"2ar%at A!arllo 3B4 Man%eln A!arllo 3B4 Dra'en%or** A!arllo naran1a. 3FB4 Tabla 5. Pr#eba para al"ol%es+ a partr %e lo obten%o "on el H9orra"2ero.
Disc"sión de res"ltados (idrolisis de "na proteína. La proteína ,#e se #tl-/ en la pr$"t"a *#e lana a-#l+ en la "#al se %e"oloro en el re*l#1o+ se real-/ la pr#eba %e 9#ret ( %o ne'ata.
J'#ra 8. ?%r/lss %e lana+ *or!a"/n %e a!no$"%os. J#ente7 los a#tores.
J'#ra 5. re"o'%o %e 2%rol-a%o %e proteína. 8. Reacción
con
Ninhidrina
Esta es #na rea""/n 'eneral para "#al,#er a!no$"%o ( es %eb%o a la presen"a %el 'r#po a!no 3N?54+ %e !anera %e ,#e to%os los al*a a!no$"%os ( por s#p#esto las proteínas %an posta a esta rea""/n. No obstante+ "#al,#er s#stan"a prote"a ,#e "onten'a #n 'r#po al*aBN?5 ta!b&n %e posta a esta rea""/n+ la rea""/n se e*e"ta en tres etapas. 8.8 .B Re%#""/n %e la nn2%rna o0%a%a por la a""/n %el al*a a!no$"%o 8.5.B ?%r/lss %el A!no$"%o pro%#"%o para *or!ar #n al*a "eto$"%o+ el "#al se
"arbo0la
ba1o
las
"on%"ones
%e
la
rea""/n.
8.:.B Jnal!ente+ el A!ona"o 3N?:4 re%#"%o rea""ona "on "ant%a%es e,#!olares %e nn2%rna o0%a%a ( nn2%rna re%#"%a para *or!ar #n "o!p#esto %e "olor a-#l oleta+ la ntens%a% %el "olor es propor"ona%a a la "ant%a% %e a!no$"%os presentes. Esta rea""/n se %esarrolla !e1or a p? ne#tro 3
J'#ra :. Rea""/n "on la Nn2%rna+ para el trpt/*ano ne'ata 38+ -,#er%a4+ trosna+ posta3t#bo 54+ la 'l"na+ posta3t#bo :4. J#ente7 los a#tores+ laboratoro KTP.
J'#ra <. Me"ans!o 'eneral %e rea""/n %e la Nn2%rna "on los a!no$"%os al*a.
J'#ra =. Me"ans!o %e rea""/n %e la 'l"na "on la nn2%rna. J#ente7 'oo'le !$'enes. Para los "asos en los "#ales la pr#eba res#lt/ posta %e %ebe a ,#e la nn2%rna se es re%#"%a por los a!no$"%os al*a. As7
J'#ra . Rea""/n 'eneral %e la Nn2%rna "on #n a!no$"%o al*a ( s# re%#""/n. J#ente+ 'oo'le !$'enes.
5. Reacción *antoprot+ica Con esta rea""/n po%e!os %ent*"ar la presen"a %e los a!no$"%os aro!$t"os 3trosna+ trpt/*ano4. La rea""/n se basa en la ntra"/n %el anllo ben"&n"o "on $"%o nítr"o+ pro%#"en%o %era%os %el ntroben"eno %e "olor a!arllo. Estos %era%os a!arllos se tornan anaran1a%os a la al"aln%a% %e la sol#"/n "on N?
Esta pr#eba sre para %ent*"ar a,#ellos a!no$"%os ,#e sean aro!$t"os "o!o lo son la trosna+ trpt/*ano+ *enlalanna.
Jenlalanna
trpt/*ano
trosna
l"na
ooalb!na+ proteína prn"pal %e la "lara.
$l#,)ina de clara de h"e-o En esta sol#"/n la pr#eba ta!b&n *#e posta+ sn e!bar'o "on el ba)o María ( NaO? el "olor se ntens*"/. Esto se %ebe a la *or!a"/n %e #n "o!p#esto aro!$t"o ntra%o+ por !e%o %e #na s#stt#"/n n#"leo*íl"a. Los a!no$"%os aro!$t"os en esta sol#"/n son7 Jenlalanna+ Trosna ( Trpt/*ano.
J'#ra . pr#eba posta para la alb!na %e 2#eo !e%ante rea""/n %e 0antoprot&"a.
. Reacción de /illon AL9MINA7 Al a're'arle = 'otas %e rea"to %e !ll/n la sol#"/n obt#o #n pre"pta%o "on #na "olora"/n %e a!arllo "laro. Al "alentar la sol#"/n se obt#o #n "a!bo a s!ple sta+ se obser/ ,#e el rea"to %e Mllon a"t#/ sobre la alb!na esto %e!#estra ,#e es pr#eba posta.
La Alb!na+ es #n tpo %e proteína s!ple+ "o!p#esta %e "arbono+ 2%r/'eno+ o0í'eno+ ntr/'eno ( #n pe,#e)o por"enta1e %e a-#*re. La alb!na es "oa'#lable por el "alor+ los $"%os !nerales+ el al"o2ol ( el &ter+ ( es sol#ble en a'#a ( en %sol#"ones %l#%as %e sal. Es parte !portante %e la al!enta"/n+ ( est$ presente en la "lara %e 2#eo+ la le"2e+ el !s"#lo ( el plas!a san'#íneo ta!b&n se pro%#"e en las plantas+ espe"al!ente en las se!llas. P#esto ,#e la alb!na se "oa'#la "#an%o se "alenta a 8 C+ es tl para separar pre"pta%os ,#e ent#rban %sol#"ones así se a"laran %sol#"ones en el re*na%o %el a-"ar ( otros pro"esos. La alb!na *or!a "o!p#estos nsol#bles "on !#"2as sales !et$l"as+ "o!o el "lor#ro %e !er"#ro+ el s#l*ato %e "obre ( el ntrato %e plata. TIROSINA7 Al a're'arle = 'otas %e rea"to %e !ll/n la sol#"/n obt#o #n pre"pta%o "on #na "olora"/n %e ro1o la%rllo. Al "alentar la sol#"/n se no obt#o #n "a!bo en la "olora"/n ro1o la%rllo (a ,#e las 5 s#stan"as se %soleron %e1an%o "o!o res#lta%o pr#eba posta para rea""/n %e a!no$"%os. La trosna pertene"e al 'r#po %e a!no$"%os "on 'r#pos polares sn "ar'a. Part"pa "o!o pro!e%o en #n :+= 3en rela"/n "on to%os los a!no$"%os4 %e la "o!pos"/n %e las proteínas. Los !a!í*eros p#e%en sntet-ar la trosna+ #n a!no$"%o no esen"al+ a partr %e la *enlalanna+ #n a!no$"%o esen"al ,#e %ebe obtenerse a tra&s %e la al!enta"/n. JENILANINA7 Al a're'arle = 'otas %e rea"to %e !ll/n la sol#"/n no presento #n "a!bo notable en la "olora"/n. Al "alentar la sol#"/n no se obt#o #n "a!bo a s!ple sta+ solo se obser/ ,#e el rea"to %e !ll/n no a"t#/ sobre la *enlanna esto %e!#estra ,#e es pr#eba ne'ata para rea""/n %e a!no$"%os. La *enlanna *or!a parte %el 'r#po %e a!no$"%os "on 'r#pos no polares 32%r/*obos4. Este a!no$"%o part"pa "o!o pro!e%o en #n :+= 3en rela"/n "on to%os los a!no$"%os4 %e la "o!pos"/n %e las proteínas. El pre"#rsor para s# bosíntess es el "ors!ato+ #na !ol&"#la en *or!a %e anllo ,#e se obtene+ entre otros+ a partr %e pro%#"tos nter!e%os %e la 'l"/lss. No p#e%e ser sntet-a%o por los !a!í*eros+ por lo ,#e "onstt#(e #no %e los a!no$"%os esen"ales. La a#sen"a %e #na en-!a+ la *enlalanna 2%ro0lasa+ ,#e "atal-a la %e'ra%a"/n %e *enlalanna a trosna+ proo"a #na en*er!e%a% %eno!na%a *enl"eton#ra.
0ig"ra 1. Reacción entre la al#,)ina de la clara con el reacti-o de /illon. 0"ente: google i)ágenes.
J'#ra Q. Pr#eba %e Mllon para la *enla!na ne'ata 38+ -,#er%a4+ trosna+ posta 35+ -,#er%a a %ere"2a4+la alb!na %e 2#eo posta3t#bo :4 ( 'l"na ne'ata3%ere"2a4. J#ente7 los a#tores+ laboratoro KTP.
R2$CCION D23 4CIDO 53IO*63ICO I!pl"a la rea""/n %el 'r#po n%ol %el trpt/*ano "onel $"%o 'lo0íl"o ( las proteínas ,#e lo "ontenen+ en presen"a %e $"%o s#l*r"o "on"entra%o. La post%a% se re"ono"e por la apar"/n %e #n anllo"olor oletaBro1-o
J'#ra 86.pr#eba posta para la alb!na %e 2#eo+ para la 'l"na+ trosna ( trpt/*ano. Rea""/n %el $"%o 'lo0íl"o para trpt/*ano7 El 'r#po n%/l"o %el trpt/*ano rea""ona "on $"%o 'lo0íl"o en presen"a %e $"%o s#l*r"o "on"entra%o %an%o #n "o!ple1o %e "olor prp#ra. El $"%o a"&t"o 'la"al ,#e 2a s%o e0p#esto a la l#- "ontene $"%o 'lo0íl"o.
7. Reacción de &i"ret Esta rea""/n es "ara"teríst"a para a,#ellos "o!p#estos ,#e poseen %os o !$s enla"es peptí%"os. La %eno!na"/n H9#ret se %ebe a ,#e el "o!p#esto or'$n"o 9#ret ta!b&n %a posta a esta rea""/n. La rea""/n %e 9#ret se basa en las *or!a"ones en !e%o al"alnas+ %e #n "o!ple1o %e "oor%na"/n %e "olor oleta entre el /n "pr"o 3C# 5F4 ( < $to!os %e ntr/'eno+ proenentes %e las "a%enas peptí%"as. Es la *or!a"/n %e "o!p#estos "olorea%os %e oleta %e las proteínas en !e%o *#erte al"alno %e las sales %e C# la rea""/n e!plea%a !e%ante ROON? 5+ R CS N?5. El ensa(o %e 9#ret %o posto por lo "#al enten%e!os ,#e 2a( por lo !enos !$s %e %os enla"es peptí%"os.
J'#ra 88. Rea""/n %e la alb!na %e la "lara %el 2#eo en la pr#eba %e 9#ret. Esta pr#eba %o posta para la *enlalanna ( la 'elatna %a%o ,#e poseen !as %e #n enla"e peptí%"o+ !entras ,#e la alb#!na %e la "lara %e 2#eo no posee enla"es %e ese tpo.
J'#ra 85. Pr#eba %e 9#ret para la alb!na %e 2#eo posta3-,#er%a4 ( *enla!na ne'ata3%ere"2a4. J#ente7 los a#tores+ laboratoro KTP.
R2$CCION CO3OR2$D$ D23 0OR/$3D2(IDO !$R$ !ROT26N$8 La rea""/n "olorea%a %el *or!al%e2í%o para proteínas es #n a'ente n%"a%or %e anllos aro!$t"os en la se"#en"a %e a!no$"%os ,#e presenta la proteína %eb%o a ,#e la rea""/n %el *or!al%e2í%o "on el $"%o s#l*r"o en presen"a %e #n anllo aro!$t"o rea""ona *or!an%o #na sol#"/n "olorea%a *$"l!ente %stn'#ble. Para la alb!na %e la "lara %e 2#eo Se *or!an %os *ases+ a!bas *or!an #na sal espesa ( blan"a+ torn$n%ose la parte n*eror #n po"o a!arllosa. Para la 'elatna No se *or!a nn'#na *ase ,#e%a n"olora.
0ig"ra %. 0or)ación de "na capa en el fondo9 separada por "na línea de color narana.
202CTO D2 DI;2R8O8 $52NT28 2N 3$8 !RO!I2D$D28 D2 3$8 !ROT26N$8. CO$5U3$CIÓN !OR C$32NT$/I2NTO Alb#!na F "alor "oa'#lo blan"o. Al %epostarlo en el ba)o %e !ara se *or!a #n "oa'#lo blan"o en la alb!na %e 2#eo+ para la 'elatna ( para el trpt/*ano la pr#eba *#e ne'ata.
J'#ra 8<. Coa'#la"/n por "alenta!ento %e la alb#!na %e 2#eo. La !#estras no presentaron "a!bos por el ta!a)o %e s#s !ol&"#las (a ,#e Las proteínas %eb%o al 'ran ta!a)o %e s#s !ol&"#las *or!an "on el a'#a sol#"ones "olo%ales
D28N$TUR$3I<$CIÓN !OR !( = C$32NT$/I2NTO8 2*TR2/O8. La %esnat#ral-a"/n %e proteínas se %a en la "lara %e los 2#eos+ ,#e son en 'ran parte alb!nas en a'#a. En los 2#eos *res"os+ la "lara es transparente ( lí,#%a pero al "o"narse se torna opa"a ( blan"a+ *or!an%o #na !asa s/l%a nter"o!#n"a%a. Esa !s!a %esnat#ral-a"/n p#e%e pro%#"rse a tra&s %e #na %esnat#ral-a"/n ,#í!"a+ por e1e!plo ol"$n%ola en #n re"pente "on a"etona.
R2$CCION !OR 8$328 /2T$3IC$8 En #n t#bo %e ensa(o se a're'a alb!na ( l#e'o se le e"2a A'NO: a otro t#bo %e ensa(o alb!na ( C#SO< %e esta *or!a obsera!os s se *or!a al'#n pre"pta%o. S esto o"#rre enton"es se trata %e #na proteína.
> D23 TU&O
8O3UCIÓN 8$3IN$
R28U3T$DO
8
NaCl sat#ra%o 386'otas4
Pre"pta%o blan"o
5
NaCL sat#ra%o 386'otas4
No 2a( Jor!a"/n pre"pta%o
:
Pb. 3C?:COO45 AL = 3< No rea""ona 'otas4
<
Pb. 3C?:COO45 AL = 3< Jor!a"/n 'otas blan"o
=
C#SO< al = 3<'otas4
No rea""ona
C#SO< al = 3<'otas4
Jor!a"/n %e pre"pta%o
A'NO: al 5 3<'otas4
@
A'NO: al 5 3<'otas4
Tabla :+ res#lta%os %e los !etales pesa%os
%e
No 2#bo rea"to
%e
pre"pta%o
#? con el Nitrato de plata9 $gNO B$l#,)ina.
2*TR$CCIÓN = C$R$CT2RI<$CIÓN D2 $3C$3OID28 Pr#ebas para al"alo%es pr#eba Ma(er 9o#"2ar%at Man%eln Dra'en%or**
Color *or!a%o A!arllo 3F4 A!arllo 3B4 A!arllo 3B4 A!arllo naran1a. 3FB4
0ig"ra %@. 2xtracción soxhlet de la planta. La e0tra""/n ,#e se obt#o *#e s#*"ente para real-arle las pr#ebas+ en las pr#ebas %e "ara"ter-a"/n %e al"alo%es se e%en"an "a!bos %e "olor a!arllo+ res#ltaron postas para Ma(er ( Dra'en%or**+ a#n,#e para esta lt!a no se p#e%e %stn'#r !#( ben. las pr#ebas se le 2"eron tanto a la *ase or'$n"a "o!o a la a"#osa para ase'#rarse %e ,#e no *#era error en el !o!ento %e es"o'er la *ase.
!R25UNT$8. 8. C#$l es el solente !as apropa%o para %soler a!no$"%osU. S#stentar s# resp#esta. El solente !$s apropa%o para %soler los a!no$"%os es el a'#a o s#stan"as ,#e ten'an #n p? alre%e%or %e la ne#tral%a%+ p#es la !a(or parte %e la bo,#í!"a se pro%#"e en el !ar'en %e p? *sol/'"o pr/0!o a ne#tral%a%. El pVa %e los 'r#pos "arbo0los ( a!no %e los 3al*a4Ba!no$"%os son apro0!a%a!ente 5 ( 86 respe"ta!ente. Por "ons'#ente en la pro0!%a% %e p? ne#tro el 'r#po "arb0lato abra per%%o #n prot/n ( el 'r#po a!no abra "apt#ra%o #n prot/n+ para a%optar la *or!a %e ZWtteron. 5. Es"rbr las rea""ones para "a%a ensa(o real-a%o. In%"ar el 'r#po *#n"onal prn"pal ,#e rea""ona en "a%a #na %e las pr#ebas. rea""/n "on la Nn2%rna7
Rea""/n ;antoprote"a7
Rea""/n %e Mllon7
Rea""/n %e E2rl"27
:. Estable"er %os %*eren"as ( %os se!e1an-as entre7 a!no$"%os+ p&pt%o ( proteína.
a!no$"%os Los a!no$"%os !$s *re"#entes ( %e !a(or nter&s son a,#ellos ,#e *or!an parte %e las proteínas. Dos a!no$"%os se "o!bnan en #na rea""/n %e "on%ensa"/n entre el 'r#po a!no %e #no ( el "arbo0lo %el otro+ lber$n%ose #na !ol&"#la %ea'#a ( *or!an%o #n enla"e a!%a ,#e se %eno!na enla"e peptí%"o La #n/n %e aros a!no$"%os %a l#'ar a "a%enas lla!a%as p&pt%os o polp&pt%os+ ,#e se %eno!nan proteínas "#an%o la "a%ena polpeptí%"a s#pera #na "erta lon't#% 3entre =6 ( 866 res%#os a!no$"%os4
Se!e1an-as p&pt%o Proteína Son #n tpo %e !ol&"#las *or!a%as por Son !ol&"#las *or!a%as por la #n/n %e "a%enas lneales %e a!no$"%os. aros a!no$"%os !e%ante enla"es peptí%"os. Los p&pt%os+ al '#al ,#e las proteínas+ est$n presentes en la nat#rale-a ( son responsables %e #n 'ran n!ero %e *#n"ones+ !#"2as %e las "#ales to%aía no se "ono"en.
El enla"e peptí%"o es #n enla"e "oalente entre el 'r#po a!no 3N? 54 %e #n a!no$"%o ( el 'r#po "arbo0lo 3COO?4 %e otro a!no$"%o. Los p&pt%os ( las proteínas est$n *or!a%os por la #n/n %e a!no$"%os !e%ante enla"es peptí%"os.
D*eren"as a!no$"%os p&pt%o Los a!no$"%os se Es %e %esta"ar este "o!porta!ento en en"#entran los en-!as+ p&pt%os ,#e *#n"onan !a(ortara!ente en s# "o!o "atal-a%ores bol/'"os %e las *or!a "at/n"a 3"on rea""ones !etab/l"as+ (a ,#e tenen "ar'a posta4+ #na "apa"%a% %e *#n"ona!ento
Son los a!no$"%os+ %e los "#ales e0sten ente espe"es %*erentes ( ,#e se #nen entre sí !e%ante enla"es peptí%"os. Centos ( !les %e estos a!no$"%os p#e%en part"par en la *or!a"/n %e la 'ran !ol&"#la pol!&r"a %e #na proteína.
Proteína Las proteínas se sntet-an %epen%en%o %e "/!o se en"#entren re'#la%os los 'enes ,#e las "o%*"an. Por lo tanto+ son s#s"eptbles a se)ales o
!entras ,#e a p? alto %entro %e "ertos neles %e p?. En 3b$s"o4 se en"#entran "aso %e s#perarse se pro%#"e #na en s# %es"o!pensa"/n %e "ar'as en la *or!aan/n"a 3"on s#per*"e %e la en-!a+ ,#e per%e s# "ar'a ne'ata4. Para estr#"t#ra !as no s# *#n"/n alores %e p? nter!e%os+ "o!o los propos %e los !e%os bol/'"os+ los a!no$"%os se en"#entran 2abt#al!ente en #na *or!a %e on %polar o -Wtter/n 3"on #n 'r#po "at/n"o ( otro an/n"o4 La o0%a"/n %e los Los p&pt%os se %*eren"an %e 9CAA tene "o!o las proteínas en ,#e son !$s pe,#e)os *#n"/n propor"onar 3tenen !enos %e %e- !l o %o"e ener'ía !etab/l"a a !l Daltons %e !asa4 ( ,#e las los !s"#los así "o!o proteínas p#e%en estar *or!a%as por la a otros /r'anos #n/n %e aros polp&pt%os ( a sol"tantes %e ella+ así e"es 'r#pos prost&t"os. Kn e1e!plo "o!o %e ser %e polp&pt%o es la ns#lna+ pre"#rsores %e la "o!p#esta por =8 a!no$"%os ( síntess %e los "ono"%a "o!o #na 2or!ona %e a!no$"%os sen%o #n a"#er%o a la *#n"/n ,#e tene en *aore"e%or %e la el or'ans!o %e los seres 2#!anos. síntess %e la alanna ( la'l#ta!na en los esta%os "atab/l"os
*a"tores e0ternos. El "on1#nto %e las proteínas e0presa%as en #na "r"#nstan"a %eter!na%a es %eno!na%o proteo!a.
Las proteínas son ne"esaras para la %a+ sobre to%o por s# *#n"/n pl$st"a 3"onstt#(en el @6 %el protoplas!a %es2%rata%o %e to%a "&l#la4+ pero ta!b&n por s#s *#n"ones borre'#la%oras 3*or!an parte %e las en-!as4 ( %e %e*ensa 3los ant"#erpos son proteínas4
<. Il#strar la síntess %el s'#ente pentap&pt%o3 P2eBAlaBlBe#T(r4 real-a%a en el laboratoro. M#estre to%os los pasos así "o!o las prote""ones real-a%as para lo'rar la síntess %el pentap&pt%o. =. X#& son las en-!asU C/!o se las p#e%e aslar ( p#r*"arU. C#$l es la !portan"a %e las !s!as en la n%#stra al!entaraU. Las en-!as son !portantes proteínas "#(a *#n"/n es acelerar la -elocidad de las reacciones A"í)icas ,#e se pro%#"en en el or'ans!o ( ,#e son ne"esaras para !antener s# a"t%a% bol/'"a+ lo "#al real-an al dis)in"ir la energía de acti-ación.
Las rea""ones "atal-a%as por en-!as o"#rren a elo"%a%es 86 86 a 86 8< e"es !$s r$p%as ,#e las no "atal-a%as. Por e1e!plo+ la #reasa a"elera la 2%r/lss %e la #rea en la orna por #n *a"tor %e 868<. Este *a"tor s'n*"a ,#e #na rea""/n "atal-a%a ,#e to!a I se'#n%o en pro%#"rse po%ría to!ar #n te!po %e : !llones %e a)os sn estar "atal-a%a. En to%a rea""/n ,#í!"a se pro%#"e la trans*or!a"/n %e #na s#stan"a n"al+ %eno!na%a s#strato 3S4+ en #na s#stan"a *nal o pro%#"to 3P4+ se'n la s'#ente nota"/n7
Esta trans*or!a"/n o"#rre a tra&s %e aras etapas. En pr!er l#'ar+ la en-!a Hatrae el s#strato 2a"a s# s#per*"e %esp#&s lo H*1a en #na pos"/n %eter!na%a+ ( en este paso nter!e%o se *or!a #n "o!ple1o en-!aBs#strato 3ES4. Ense'#%a+ el s#strato se a"ta+ %e !o%o ,#e s#s enla"es se %ebltan+ %an%o paso a s# trans*or!a"/n. Kna e- ,#e la en-!a 2a real-a%o la trans*or!a"/n+ lbera r$p%a!ente el pro%#"to %e rea""/n para se'#r s# labor "on otras !ol&"#las %e s#strato.
!URI0IC$CIÓN = $I83$/I2NTO D2 2N
Co!bnan%o estos pro"e%!entos "on otros a base %e ele"tro*oress %e alta tens/n+ "ata*oress ( ele"tro%$lss se lo'ran a"t#al!ente separa"ones %e !e-"las "o!ple1as %e en-!as. El "ontrol %e to%as estas etapas en s# *or!a !$s r'#rosa+ es ne"esaro para ase'#rar el !$0!o %e ren%!ento ( repro%#"bl%a%+ se'#r%a% ( "al%a% %e los pro%#"tos en-!$t"os obten%os. La !portan"a %e las en-!as para la "en"a %e los al!entos est$ %eter!na%a por las "on%"ones ,#e preale"en en el nteror ( en el e0teror %el pro%#"to. Para re'#lar la a"t%a% en-!$t"a %#rante la "onsera"/n ( pro"esa%o+ es ne"esaro "ontrolar tales "on%"ones. Te!perat#ra En 'eneral las en-!as operan !#( lenta!ente a te!perat#ras %e "oa'#la"/n ( s# a"t%a% a#!enta "#an%o lo 2a"e la te!perat#ra. La !a(or parte %e las en-!as presentan s# a"t%a% !$0!a en el nteralo %e :6 a <6 C ( por en"!a %e <=C "o!en-an a %esnat#ral-arse. La na"ta"/n %e las en-!as por el "alor est$ rela"ona%a "on la ,#í!"a %e las proteínas ( s# %esnat#ral-a"/n t&r!"a. La %esnat#ral-a"/n %e #na proteína se 2a %e*n%o "o!o7 HKn "a!bo %e !portan"a en la estr#"t#ra or'nal+ sn rot#ra %e nn'#no %e los enla"es ,#í!"os pr!aros ,#e #nen entre sí a los a!no$"%os H El t&r!no na"ta"/n %e #na en-!a se re*ere a la p&r%%a %e la a"t%a%. El trata!ento t&r!"o %e los al!entos s#ele tener "o!o ob1eto la na"ta"/n %e las en-!as %e !anera en-!as rreersble!ente. DESNATKRALIZACIÓN La !a(oría %e las en-!as se %esnat#ral-an *$"l!ente por el "alor a te!perat#ras %e 6 ( @6 C se !p%e la a"t%a% en-!$t"a. De
a,#í
,#e
se
"onseren
!e1or
los
al!entos
"o"na%os
,#e
los
"r#%os.
Por e1e!plo7 %e "ontn#ar la presen"a %e en-!as en #n al!ento lo ,#e ten%ría!os es "a!bos en la "loro*la o en los "arotenos o #na !o%*"a"/n en el sabor %e las 'rasas 3ran"%e-4 o #n "a!bo en el alor n#trto %e las proteínas o ta!nas o s!ple!ente #na !o%*"a"/n en la te0t#ra %e los al!entos. El "alenta!ento es #n !&to%o "onenente para %estr#r a los !"roor'ans!os %e los al!entos %e a,#í ,#e "on el !s!o pro"e%!ento se lo'ran %os ob1etos %*erentes 8BLapresera"/n!"robol/'"a 5B
La
establ-a"/n
en-!$t"a
%e
los
al!entos
3na"ta"/n
en-!$t"a4.
Sn e!bar'o se %an "asos en ,#e las en-!as %esp#&s %el "alenta!ento se re'eneran.
La n a"ta"/n t&r!"a se basa a la p&r%%a %e la estr#"t#ra ( por tanto %e los stos a"tos. La re'enera"/n se %ebería+ enton"es a #n pro"eso %e reor'an-a"/n %e la !ol&"#la %e proteína ,#e "on%#"e a la resta#ra"/n %e los stos a"tos La establ%a% %e los al!entos *rente a la a""/n en-!$t"a %epen%e %e la te!perat#ra+ p?+ %el esta%o *ís"o %e la en-!a. Consera"/n por *río La prn"pal ra-/n por la ,#e los al!entos se e0ponen a ba1as te!perat#ras+ espe"al!ente los pro%#"tos "on'ela%os+ es la %e etar el "re"!ento %e !"roor'ans!os !antenen%o en lo posble atrb#tos %e "al%a% %el al!ento así "o!o #na p&r%%a par"al %e la a"t%a% en-!$t"a. Al'#nas en-!as se %esnat#ral-an en #n 'ra%o s'n*"ato %#rante la "on'ela"/n ( %es"on'ela"/n !#"2as otras no se en a*e"ta%as. Kn !a(or %es"enso en la te!perat#ra %a "o!o res#lta%o #na re%#""/n %e la a"t%a% en-!$t"a. E*e"to %el p? Los p? e0tre!os s#elen na"tar a las en-!as por lo 'eneral+ las en-!as presentan #na !$0!a a"t%a% a #n alor %eter!na%o %e p?+ al ,#e se le %eno!na Hp? /pt!o. A p? e0tre!os+ la a"t%a% en-!$t"a s#ele %e"aer rreersble!ente %eb%o a pro"esos %e %esnat#ral-a"/n prote"a. En #n pro"eso n%#stral+ el p? p#e%e ser "ontrola%o para etar n2br o poten"ar al !$0!o #na rea""/n en-!$t"a. Por e1e!plo p#e%e !pe%rse la a"t%a% %e la *enolasa re%#"en%o el p? %el sste!a por %eba1o %e tres. En los *r#tos s#ele "onse'#rse esto por el e*e"to %e a"%*"antes nat#rales+ "o!o el $"%o "ítr"o+ !$l"o o *os*/r"o
!R25UNT$ D2 $3C$3OID28
8. En#!erar "#atro %*eren"as entre !etaboltos pr!aros ( se"#n%aros. R7 Los !etaboltos se"#n%aros son !ol&"#las sntet-a%as por %eter!na%os !"roor'ans!os+ nor!al!ente en #na *ase tar%ía %e s# ""lo %e "re"!ento+ "#(as "ara"teríst"as son7
No son ne"esaros para el "re"!ento %el !"roor'ans!o ,#e los pro%#"e. En esta%o nat#ral+ s#s *#n"ones se 2allan or%ena%as a la s#peren"a %e la espe"e+ pero "#an%o los !"roor'ans!os ,#e los pro%#"en se %esarrollan en "#lto p#ro los !etaboltos se"#n%aros no %ese!pe)an esa !s/n. eneral!ente se pro%#"en "o!o !e-"las %e pro%#"tos !#( rela"ona%os ,#í!"a!ente entre sí. Por e1e!plo+ #na n"a "epa %e #na espe"e %el '&nero Strepto!("es pro%#"e :5 antra""lnas %*erentes. Ca%a #no %e estos pro%#"tos es pro%#"%o por #n 'r#po !#( re%#"%o %e or'ans!os. La pro%#""/n p#e%e per%erse *$"l!ente por !#ta"/n espont$nea 3%e'enera"/n %e la ra-a4+ por lo ,#e son !#( !portantes las t&"n"as %e "onsera"/n %e estos !"roor'ans!os. De to%os los pro%#"tos tra%"onales obten%os por *er!enta"/n+ los !$s !portantes para la sal#% 2#!ana son los !etaboltos se"#n%aros. Don%e se n"l#(en+ a%e!$s %e los antb/t"os+ "ertas to0nas 3!"oto0nas4+ al"alo%es 3$"%o ls&r'"o4+ *a"tores %e "re"!ento e'etal 3'berelnas4 ( p'!entos.
9blo'ra*ía 8. Pe)a A 3566<4+ 9o,#í!"a.Se'#n%a e%"/n. M&0"o7 E%toralLIMKSA+ P$'. B5 5. Man"lla+ C 9lan"o E P&re-+ SRosas+ T ( Castre1/n+ C. 3566Q4Prope%a%es ,#í!"as (*s"o,#í!"as %e las proteínas.M& 0"o. Cons#lta%o el :6 %e O"t#bre%e 566Q en7 :. 2ttp7WWW.s"rb%."o!%o"8=Q=@85=8B PROPIEDADESBXKIMICASBYBJISICOXKIMICASB DEBLASBPROTEINAS
:. De la e'a. 3566Q4 Prope%a%es%e la 2arna %e tr'o7 Clas*"a"/n (prope%a%es *#n"onales. Cons#lta%oel < %e Noe!bre %e 566Q en7 =. 2ttp7WWW.#t!.!0e%GanteroresTe!as:@5 NOTAS56:@B8.p . Kners%a% Na"onal %e RoC#arto 3566@4 X#í!"a bol/'"a5886. M"robolo'ía ( t&"n"o %elab oratoro. Rea""ones %epre"pta"/n %e proteínas.Cons#lta%o el %ía : %e noe!bre %e566Q en7 . Ca!pbell Mar( V [ Jarrell S2aWnO. 3566:4. 9o,#í!"a C#arta E%"/n.M&0"o7 e%toral T?OMSON. \ones [ Manson 3566:4+ Loesen"al en "&l#la ( 'en&t"a.Se'#n%a e%"/n. Ma%r%7 E%toralELSE]IER+ P$'.8
