Identificación de las bacterias Corineformes Janet Salazar L. Bacterióloga IUCMde A.
BACILOS GRAM POSITIVOS NO FORMAOR!S ! !SPORAS
BACILOS GRAM POSITIVOS NO FORMAOR!S ! !SPORAS
CLASIFICACI"N ! LAS BACT!RIAS ● Reino: Móneras.
miembros son Procariotas cel!las sin n"cleo# ● P$%l!m: B&I' Actinobacteri a ● Clase: I Actinobacteria ● S!bclase: ' Actinobacteridae ● (rden: I Actinomicetales ● S!borden: 'II Corynebacterienae ● )amilia: I Corynebacteriaceae ● *enero: Corynebacerium
BACILOS GRAM POSITIVOS COR#N!FORM!S ● *enero korynebacterium +el *riego ,or%ne- /orra o cla0a12 ba3terion bacilos /e4!e5os1. ● 6st7 com/!esto /or 89 es/ecies- de las c!ales solo ; son de im/ortancia m
Los gr7n!los meta crom7ticos incl!siones de /oli>os>ato# /!eden ser 0istos con coloraciones es/eciales Az!l de metileno#. Las cor%nebacterias son A6 o A?A >ac!ltati0as. )ermentan carbo$idratos- /rod!ciendo 7cido L7ctico. Los organismos son no mó0iles % catalasa /ositi0o crecen lentamente en medios enri4!ecidos.
@.incion de *ram .Catalasa .Pr!eba de >ermentacion ! oidacion en medio semisolido CA agar cistina tri/ticasa# o en agar tri/le az!car $ierro mo0ilidad D. Red!ccion de los nitratos 8. Eidrólisis de la !rea
@.Eidrólisis de la esc!lina .Prod!ccion de acido /artir de la gl!cosamaltosa- sacarosamanitol- % ilosa .Reaccion de CAMP
● 6n la tinción de *ram: Bacilos *ram /ositi0os Alg!nos ligeramente c!r0ados- con lados no /aralelos- >orma ti/ica de /orra o cla0a. ● A /artir de !n medio lF4!ido se 0en:
Solos- en /ares- en >orma de ' o G- en /alizadas o en gr!/os letras c$inas#.
Corynebacterium diphtheriae
CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE ● 6l +. de la di>teria es ante clFnico. TOMA !todo M$!STRA ● La mta. se toma con a/licador de algodón o dacron de 0arias 7reas in>lamadas de la naso= >aringe. ● Si la membrana esta /resente % /!de ser remo0ida- esta mta. 6s de ma%or 0alor. ● Colocar en !n medio de trans/orte semisólido Amies#. 6n0iar r7/idamente al lab. /ara c!lti0o. ● Eacer !n etendido % debe ser te5ido con az!l de metileno de Loe>>ler. La sensibilidad del eamen microscó/ico es
COR#N!BACT!RI$M IP%T!RIA! ● 6s !n bacilo /leomor>ico- *ram /ositi0o- irreg!lar- con gr7n!los meta crom7ticos- inmó0il- no ca/s!lado- no es/or!lado- con !na /ared rica en lF/idos. ● 6l aislamiento /rimario /!ede ser AS /l!s conteniendo @HH !g de >os>omicina#. Cto. A 8gc a las D $. 6n atmos>era de C(. Los medios selecti0os em/leados son el As C%stine=ell!rite o Agar insdale ell!rite.
COR#N!BACT!RI$M IP%T!RIA! ● 6l AS C%stine=ell!rite CBA# no es es/eci>ico /arael C. diphteriae %a 4!e m!c$as corinebacterias red!cen el ell!rito de ,. ● 6l meor medio /ara el c!lti0o directo de el C. di/$teriae es el medio deinsdale modi>icado. Limitación: 0ida media corta K de D semanas s!ero de
C diphteriae 6'ALUACI? +6 L(S CULI'(S: ● Si el a/licador 0iene seco o en silica gel- caldo ood= Eeitt con sangre de coneo
era de C(. ● Si $a% colonias sos/ec$osas $aga !n coloración con Az!l de metileno de Loe>>ler Por !n min!to. La0e con ag!a % dee secar. Coloración: disol0er H. gs de az!l de metileno en H
!VAL$ACI"N ! LOS C$LTIVOS ● Si la morfolo&'a cel(lar es t')ica de C diphteriae en*ie (n re)orte )reliminar+ , !l e-amen microscó)ico es )res(nti*o de C diphteriae !sta tinción no es es)ecifica )ara este or&anismo./ ● es)(0s de 12324 5/ s(bc(lti*e a (na se&(nda ca6a de CTBA )ara reaislar/ ● !-amine las ca6as a 12 7 24 5/ )ara colonias ti)icas de C diphteriae !ue "on cata#a"a po"iti$a" y e%hiben una mor&o#o'(a tipica en
el Gram8 )roceda a la Id/ Por )r(ebas bio9(imicas8 en*iar Lab/ Referencia )ara )r(ebas de to-i&enecidad/
I!NTIFICACION # SIST!MAS ! TIPIFICACI"N ● La tinción de *ram sir0e /ara determinar el genero correcto- seg"n la mor>ologFa cel!lar. ● La mor>ologFa- tama5o- /igmento- olor- % $emólisis de las colonias son criterios im/ortantes /ara la di>erenciación de bacterias corine>ormes. ● La /r!eba de la catalasa- /r!eba de >ermentación oidación es meor en agar c%stina ri/ticasa semisólido#.
TIPIFICACI"N ● 'arios ti/os de sistemas comerciales se em/lean /ara la I+ de las bacterias corine>ormes. ● Sistema API cor%ne. ● Paneles de MicroScan. ● 6l sistemaCr%stal de BBL. ● 6l sistema API cor%ne identi>ica D9 es/ecies de bacterias cor%ne>ormes.
+66CCI? +6 LA (&I?A +I)6RICA PRU6BA +6 I?MU?(+I)USI? +6 6L6, ● Se basa en la doble di>!sión de la toina di>terica % la antitoina en !n medio de agar. ● Una tirilla de /a/el de >iltro sat!rada de la antitoina es colocada en el medio del c!lti0o % los aislamientos. ● Los aislamientos de C. diphteriae son inoc!lados en >orma de ra%a en !n ang!lo de 9H OC. ● La /rod!cción de la toina di>terica /!ede ser detectada a las D a D
Listeria
!SCRIPCI"N !L G!N!RO ● Las bacteria gicados. ● Se obser0an indi0id!al o >ormando cadenas cortas. ● 6n c!lti0os 0ieos >orman >ilamentos de ;=H mm de longit!d.
COL!CCI"N8 TRANSPORT! # ALMAC!NA:! ! LAS M$!STRAS MU6SRAS CLQ?ICAS: @. Casi siem/re es aislada de sitios estetal#. @.C!lti0ar de inmediato a 8OC o g!ardar a DOC $asta D $. .Las m!estras de M) /!eden ser inoc!ladas en @HHml de !n caldo selecti0o o en PALCAM#: Polimiina= acri>la0in=clor!ro de litio=ce>tazidime esc!lin % dear a OAm $asta el en0io. Si no es /osible congelar o $ielo seco $asta el en0io.
IAGNOSTICO ! LABORATORIO ● MICR(SC(PI(: Coloración de *ram: 6n el LCR /!eden no 0erse los organismos %a 4!e estos est7n en concentraciones @HH a @HHH 0eces menos 4!e otras bacterias 4!e ca!san meningitis.
Ea% 4!e tener m!c$o c!idado con la inter/retación del *ram %a 4!e este organismo es semeante a Corynebacterium, S. pneumoniae, Enterococo, o con haemophilus si 4!eda
decolorada la /laca.
IAGNOSTICO ! LABORATORIO CULI'(S:
● La Listeria crece medios con0encionales. ● Sobre AS en @ a dFas de inc!bación se obser0a colonias redondas lisas % /e4!e5as. ● La $emólisis beta es derenciar entre Corynebacterium /res!miblemente contaminante# % Listeria.
IAGNOSTICO ! LABORATORIO PRU6BA +6 LA M('ILI+A+ 6? CAL+( *ota s!s/endida: M
IAGNOSTICO ! LABORATORIO PRU6BA +6 M('ILI+A+ 6? CAL+( Pr!eba de la gota s!s/endida: ●I?6RPR6ACI?: ●Las cel!las de la L. monocytogenes giran en cFrc!los a s! alrededor- 0oltearse=dearse caer- % dar 0olteretas demostrando !n ti/o de mo0ilidad caracterFstica.
+IA*?(SIC( +6 LAB(RA(RI( ● +66CCI? RPI+A: ● Comercialmente $a% /r!ebas dis/onibles /ara la detección r7/ida de es/ecies de Listeria de caldos enri4!ecidos de m!estras de alimentos. ● Las /r!ebas est7n basadas en inm!noensa%os 4!e !san antic!er/os monoclonales.
IAGNOSTICO ! LABORATORIO I+6?I)ICACI?: I+6?I)ICACI? +6 *T?6R( ● Una I+ sim/le esta basada en las sig!ientes /r!ebas: ● Coloración de *ram. ● Mo0ilidad en caldo % mo0ilidad en medio semisólido. ● Catalasa /ositi0a. ● Eidrólisis de la 6sc!lina /ositi0a. ● 'P % roo de metilo son /r!ebas con>irmatorias ● + gl!cosa /ositi0a.
+I)6R6?CIACI? +6 6L *T?6R( LISTERIA +6 (R(S *T?6R(S
● +el gerenciarse /or la tinción de *ram bacilo gram=/ositi0o#- la mo0ilidad mó0il#- la /r!eba de la catalasa /ositi0a# % la sensibilidad a la gentamicina sensible#.
● +e Erysipelothrix rhusiopathiae /!ede di>erenciarse /or el crecimiento a DC crece#- catalasa /ositi0a#- la mo0ilidad mó0il# % la sensibilidad a la 0ancomicina sensible#. ● +e las corinebacterias mó0iles- /or la $idrólisis de la !rea negati0a#- 'oges=Pros3a!er /ositi0a# % /or la /rod!cción de 7cido de la +=gl!cosa en condiciones estrictamente A6 /ositi0a#.
I+6?I)ICACI? +6 6SP6CI6 ● La identi>icación de es/ecie es im/ortante %a 4!e todas los miembros del gicación se realiza mediante !nas /ocas reacciones bio4!Fmicas % la ca/acidad de /rod!cir $emólisis caracterFstica esencial /ara disting!ir L.
%!M"LISIS ● Sólo tres es/ecies son $emolFticas- L. monocytogenes, L. seeligeri y L. ianoii .
● Las dos /rimeras /rod!cen !na estrec$a zona de $emólisis- a 0eces limitada al di7metro de la colonia.
● L. i0ano0ii m!estra !na $emólisis am/lia. La /r!eba de CAMP es /ositi0a /ara L. monocytogenes y L. seeligeri en la /roimidad
de !na estrFa de Staphylococcus aureus-
mientras 4!e L. ianoii sólo da /ositi0a la /r!eba de CAMP en /resencia
+IA*?(SIC( +6 LAB(RA(RI( PRU6BA +6 CAMP: ● Se coloca !na ra%a de la ce/a de la ACC de S. a!re!s /rod!ctor de la beta= toina en el centro del AS. ● Inoc!le sim/les ra%as de la Listeria perpendiculares al
S. a!re!s. ● Inc!bar A6 a 8OC /or !na noc$e o /or ; $oras en C(. ● (bser0e si $a% !na zona de incremento de la beta $emolisis en la !nion de la listeria y el S.
ia&rama de fl(6o )ara la identificacion de )i"teria monocyto'ene" Identi>icacion a /artir de !n c!lt!ii0o /!ro en agar sangre de cordero ASC# Colonias beta $emoliticas Coloracion de gram Bacilos gram /ositi0os
Catalasa Positi*a
Motilidad a C: /ositi0a>orma de sombrilla# Motilidad a C: /ositi0a Pr!eba de cam/: /ositi0a SI: AVA - gas=#- ES =# Ureasa: negati0a ?itratos: negati0o Eidrólisis de esc!lina: /ositi0a Roo de metilo: /ositi0o )ermentacion de: gl!cosa:/osti0a maltosa:/ositi0a rammnosa:/ositi0a
ACTINOMICETO*
"ocardia
ACI?(MGC66S ● Bacilos *ram /ositi0oscatalasa /ositi0os.
● 6str!ct!ra de s! /ared cel!lar % s! sensibilidad Antimicrobiana bacterias#.
● Son aislados del s!elo● Los miembros 7cido Micolico mat. 0egetal de este gr!/o son descom/osicióntres >amilias: sistemas de 0entilación % = Corinebacteriaceae. colonizan: animales % = ?ocardiaceae. $!manos. = Micobacteriaceae. ● Alg!nos >ilamentos similares a los $ongos
● Ea% D generos:
"$CAR%IA ● 6s !n organismo /arcialmente AAR. ● 6sta caracterFstica le sir0e /ara di>. +e otros actinomicetos. ● Son catalasa /ositi0os.
● Crecen en medios no selecti0os.
+& +6 LAB(RA(RI( ● Las m!estras de las c!ales se /!ede aislar ?ocardia son: secreciones res/iratorias - bio/sias de /iel o as/irados ● 6n el etendido se /!ede 0er la bacterias >ilamentosasrami>icadas- *ram /ositi0as- generalV acido resistentes ● Crece en los medios no selecti0os de r!tina /ero se a!menta la /robabilidad de s! $allazgo !tilizando agar $a%er martin con antibioticos ● Las colonias se 0en de =8 dias. @.Coloración de *ram. &."ocardia spp., micobacterias de cto. R7/ido- % alg!nos Rhodococcus spp. Son /ositi0os /ara la coloración de 3in%o!n modi>icado.
; ! LABORATORIO @.M(R)(L(*QA:
= Streptomices, Actinomadura, y nocardiopsis spp.' bacterias (ilamentosas ) * um. + Micobacterias de cto. R7/ido % "ocardia spp.,
rami>icaciones- >ragmentos de >ilamentos % >ormas cocobacilares K @ !m. = *r7n!los: >ilamentos rami>icados entrelazados 4!e 0arFan en tet!ra % color de/endiendo del agente etiológico.
M6+I(S +6 CULI'( ● PRIMARIOS +
= Medios: BEI agar con cloran>enicol % ciclo$eimide. = Agar C?A
● ANA!ROBIOS+ BAP A?A. EI( Agar C?A. ● M!IOS ! R$TINA: Sabo!ra!d detrosa agar. AS BEI SA
M6+I(S +6 CULI'( ● (R(S M6+I(S: Loenstein=ensen Middlebroo3 Medio selecti0o de Middlebroo3 E@H E@@#. Medio selecti0o "ocardia. I?CUBACI?: Medios A6: HOC /or @D a @ dias. Re0isar cada o D dias. A?A OC @H a @D dias.
BACILOS GRAM POSITIVOS FORMAOR!S ! !SPORAS
TA;ONOMilos &.aenibacillus' s/.
. polymyxa- . macerans, . alei - . puli(aciens % . larae las n!e0as s!bs/. de . larae.# -.reibacillus' @H s//.
. breis % . laterosporus. /. Aneurinibacillus' con A. aneurinilyticus %
otras dos s//.
TA;ONOM
8. 0irgibacillus' con 0. pantothenticus % otra s/. 1. #racilibacillus Cada !na tiene dos s//.
de $aló>ilos. 2. Salibacillus *.#eobacillus' s/. de termó>ilos . stearothermophilus. &.3reibacillus' con dos s/. termo>ilicas.
G=N!RO BACILL$S Contiene H s/. Los m7s conocidos son: .subtilis, . anthracis, .cereus, . licheni(ormis, . megaterium, . pumilus, . sphaericus, y el . thuringiensis.
Baci##u" anthraci" IAGN"STICO BACT!RIOL"GICO ● 6s im/ortante in0estigar la $istoria laboral % de e/osición. ● +e las lesiones c!t7neas tomar la m!estra en medio de trans/orte con a/licador del >l!ido de la 0esFc!la. C!lti0o AS /ara aislar el . anthracis. Coloración de *ram.: obser0ando al microsco/io los bacilos *ram. /ositi0os grandes- >ormando cadenas. ● 6n la >orma /!lmonar: M!estras de es/!to o >rotis >arFngeo. ● LCR. ● Sangre.
BACILL$S ANT%RACIS ●6s no mó0il. ●Red!ce los nitratos a
●?o >ermentadores de: %losa- manitol- lactosa % salicina.
nitritos. ●'oges /ros3a!er /ositi0o. ●Sensible a la
●Son >ermentadores de: gl!cosa- s!crosa % maltosa.
IAGN"STICO BACT!RIOL"GICO Cultio acillus anthracis
● 6n AS de carnero las colonias son circ!lares % tienen as/ecto de cabellera de med!sa. ● Cada colonia es !na $ilera contin!a de bacilos con a/ariencia de 0idrio /!lidoalcanzando !n di7metro de mm- des/!
IAGN"STICO BACT!RIOL"GICO acillus anthracis
● C!ando la bacteria se inoc!la en agar n!triti0o con bicarbonato al H.N % se le c!lti0a toda la noc$e a OC en atmós>era de dióido de carbono al 8= HN- el germen /!ede sintetizar s! c7/s!la in 0itro % las colonias obtenidas son de as/ecto
