IDENTIFICACIÓN DE HONGOS POR LA TÉCNICA DE RIDELL
(MICROCULTIVO)
Los hongos viven como saprofitos en el suelo y agua donde contribuyen a la descomposición de la materia orgánica y al reciclado de materia orgánica, utilizando enzimas extracelulares como celulasas y pectinasas, manteniendo de esta manera la fertilidad del suelo.
Los hongos se aprovechan directamente como alimento (por ejemplo los champiñones) e indirectamente en la elaboración de cerveza, vino y pan (Saccharomyces cerevisiae o especies relacionadas con ésta). Además el queso Roquefort se produce inoculándolo con Penicillium durante su elaboración y otros quesos suaves como el Camembert se producen inoculando Penicillium camemberti. El hongo crece sobre la superficie produciendo una proteasa que descompone la estructura del queso. Otros ejemplos en cuanto al uso de los hongos, es el interés en la producción de proteína de origen unicelular a partir de ellos, ya sea para alimento del hombre o del ganado, por ejemplo el uso de Candida utilis y la levadura desecada Saccharomyces cerevisiae.
Además de la producción de alimentos, los hongos producen ácido cítrico para bebidas embotelladas, que se basa en el crecimiento de Aspergillus niger. El descubrimiento de penicilinas como productos metabólicos de Penicillium notatum revolucionó la medicina moderna, hoy en día se produce con una variedad denominada Penicillium chrysogenum. Existen otros antibióticos producidos por hongos estos son las cefalosporinas, griseofulvina, ácido fusídico
La identificación de los hongos unicelulares o filamentosos se realiza a través de:
Morfología colonial
Morfología microscópica
Microcultivo
Pruebas metabólicas (levaduras)
Composición de la pared celular
Respiración
Nutrición
Reproducción
Genética molecular.
Morfología colonial: Los hongos unicelulares, tienen colonias semejantes a las bacterias, el diámetro oscila entre 2-4 mm, de color blanco, crema, amarillo, rojo, etc. cóncavas de aspecto brillante o mate, opacas, de bordes lisos.
Morfología colonial: Los hongos filamentosos (mohos), tienen colonias de 2-3 cm de diámetro, de color olivo, verde claro, grises, blancas, rojas, amarillas, etc. con aspecto polvoso, rugoso, terroso, aterciopelado,algodonoso, generalmente mates, opacas de bordes irregulares.
Morfología microscópica: La morfología microscópica se observa con la ayuda del microscopio a seco fuerte mediante la realización del microcultivo, observándose las siguientes estructuras:
1.- Según su nivel de organización celular pueden ser:
- Unicelulares (levaduras)
- Pluricelulares (hongos filamentosos)
- Dimórficos (posee ambos tipos de micelio)
a) Unicelular b) Pluricelular
2. Por su tamaño
Microscópicos Macroscópicos
3. Por su forma
Amorfos (masa algodonosa) Definida (crecimiento circular)
4. Por la ausencia o presencia de septos en las hifas.
5. Por su localización
Aéreo fuera del sustrato y profundo dentro del sustrato.
6. Por su aspecto
Algodonoso, aterciopelados, terrosos, húmedo, seco.
7. Por su función:
- Micelio vegetativo: se encarga de la captación de nutrientes.
- Micelio aéreo o reproductor: producción de esporas (sexual y asexual)
7. De acuerdo al color de las hifas:
- Hialino: cuando no está pigmentado.
- Dematiáceo: cuando posee color café oscuro.
8. Sistema de reproducción asexual y sexual:
- Las esporas asexuales son:
Talosporas.
a) Artrosporas: Son esporas que se forman por fragmentación de las hifas.
b) Blastospora: Se forman en las levaduras por la gemación a partir de una célula ya preexistente.
c) Clamidospora: Estas esporas son redondas y tienen doble pared gruesa que les confieren resistencia.
d) Conidiosporas
a) Microconidias: Son esporas unicelulares
b) Macroconidias: Son esporas multinucleadas.
e) Esporangiosporas: son esporas producidas en estructuras especializadas llamadas esporangios, que son sacos redondos unidos al micelio vegetativo, por una estructura llamada esporangióforo.
- Las esporas sexuales son:
Zigosporas: esporas contenidas en cigosporangios en los Zimomycetes.
Ascosporas: esporas contenidas en saquitos denominados ascas en los Ascomicetes.
Oosporas: esporas contenidas en oosferas correspondientes a los Oomycetes.
Basidiosporas: esporas contenidas en basidios correspondientes en Basidiomicetes.
Morfología colonial de hongos y levaduras
OBSERVACIÓN MACROSCÓPICA:
Determinar: tamaño, forma, aspecto, color, producción de pigmento difusible y anotar los días de incubación. A continuación se muestran dibujos de hongos filamentosos.
Una vez realizadas las observaciones las cepas se pueden sembrar en tubo para su conservación o para la realización del microcultivo
TÉCNICA DE RIDELL PARA LA IDENTIFICACIÓN DE HONGOS
(MICROCULTIVO)
1. Cortar cuadros de medio Sabouraud de una caja Petri de 1 cm de lado y 3 mm de espesor con un bisturí estéril y caliente.
Fig. 1 Forma en que se cortan los cuadros de agar par el microcultivo
2. Colocar el cuadro de PDA en un portaobjetos que está sobre una varilla de vidrio doblada en forma de "V" en una caja de Petri (previamente esterilizada).
Fig. 2 Material parta el microcultivo y puesta del cuadro de agar
3. Tomar con el asa él inoculo del moho previamente seleccionado.
4. Inocular por picadura en cada uno de los lados del cuadro de agar.
5. Colocar sobre el agar un cubreobjeto y presionar ligeramente para que se adhiera al medio.
Fig. 3 Inoculación del cubo de agar, y colocación del glicerol para mantener la humedad
6. Adicionar 5 ml de glicerol al 10% en la caja Petri.
7. Incubar la caja a 28° C durante 48 h.
REALIZAR OBSERVACIONES MÍNIMO CADA 12 h PARA IDENTIFICAR LOS CUERPOS FRUCTÍFEROS.
8. Si el moho ya se ha desarrollado y se puede identificar, retirar el glicerol con una pipeta Pasteur.
Fig. 4 Observación del crecimiento del hongo y retiro del glicerol para su inactivación
9. Adicionar 5 ml de formaldehído para inactivar el moho durante 15 minutos.
10. Desprender con cuidado el cubreobjetos que se encuentra sobre el cuadro de agar y colocarlo sobre un portaobjetos que contenga una gota de azul de algodón, sellar la preparación con barniz de uñas transparente.
11. Desprender con cuidado el cuadro de agar y colocar una gota de azul de algodón, colocar un cubreobjetos sobre el colorante y sellar la preparación. Observar las preparaciones a 10X y 40X.
Fig. 6 Realización de la preparación en fresco del microcultivo.
12. Dibujar las estructuras observadas y con ayuda de la bibliografía realizar la comparación de las estructuras reproductoras y vegetativas, identificar de que hongo se trata.
Fig. 6 Aspergillus Penicillium Alternaria
