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15-04-16
ALUMNAS: Bustinza Damiano, Rocío Gonzales Rosales, Brisayda Huiza Acosta, Karen Briguit Lázaro Mendoza, Carmen Janeth Rocha Yupanqui, Ruth Milagros DOCENTE: Alexandra Muñoz MATERIA: Microbiología Ambiental CICLO: IV
LIMA, 2016
I.
OBJETIVOS
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El objetivo principal del presente informe es aprender a identificar hongos .Los objetivos específicos con los siguientes: 1. A partir de las muestras obtenidas en en diferentes lugares o espacios, espacios, evidenciar la presencia de hongos. 2. Aprender a identificar las estructuras de los hongos. 3. Aprender a diferenciar las morfologías de las colonias de los hongos. hongos. 4. Aprender a realizar la técnica de impronta de hongos hongos y asimismo la técnica de antagonismo entre hongos y bacterias. 5. Diferenciar un hongo de un un alga, bacteria bacteria u otro microorganismo. 6. Aprender a diferenciar diferenciar la actividad enzimática enzimática de los hongos frente a una bacteria. 7. interpretar los resultados de las muestras obtenidas en campo u otro otro lugar.
II.
MATERIALES
Practica 4. Hongos I Audio y video
Azul de lactofenol
Incubadora
2 agares almidon
Microscopios
3 agares PDA
Espectrofotómetro
2 mL de Pseudomonas o
con
cubetas
Streptomyces x mesa
Pizetas con agua
2 mL de Bacillus x mesa
Set de microcultivo x mesa
Cámaras de Neubauer
Cinta adhesiva para impronta
Practica 5. Hongos II y Algas I
Audio y video
Incubadora
Microscopios
Espectrofotómetro con cubetas
Pizetas con agua
Beaker 1L x mesa Probetas 100 mL x mesa
Balanzas
Espátulas
Agua destilada 1L x mesa
III.
METODOLOGÍA
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Los hongos trabajados fueron nombrados y codificados como: HONGOS
CÓDIGO
Hongo negro del techo
HNT
Hongo verde verde del techo techo
HVT
Bacteria Bacillus
Hongo rosado del techo Bacteria Pseudomonas
BB HRT BP
Hongo negro de la ventana
HNV
Hongo de arroz vaso 2
HAV2
Hongo de arroz de vaso 1
HAV1
2: Quinta práctica de laboratorio:
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IV.
RESULTADOS:
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EVALUACION DEL CULTIVO DE HONGOS EN MEDIO DE ARROZ SEMICOCIDO Muestras
caracterización
HAV1
Se observó el crecimiento de hongos de color verde oscuro posible trichoderma, amarillo, rosado posible posible fusarium y negro así como como también el crecimiento de micelios que tienen una forma de tela de araña. Se observó el crecimiento de hongos de color rosado posible fusarium y gris posible rhisoctonia, así como también el crecimiento de algo blanquecino que eran bacilos.
HAV2
EVALUACION DEL CULTIVO DE DE HONGOS EN MEDIO DE AGAR MUESTRAS DE HONGOS EN AGAR Agar expuesto en el techo
CARACTERISTICAS Y MORFOLOGIA DE HONGOS Se observó el crecimiento de diversas colonias de hongos, ya que estos estaban expuestos al lado de animales. Los hongos cultivados tenían la forma circular y esponjosa, de consistencia suave y pequeña expansión. Los colores de los hongos observados fueron: verde oscuro, verde claro, negro, amarillo y rozado, así como también se observó la presencia de bacilos.
Agar expuesto en la ventana ventana
Se evidencio el crecimiento de tres tipos de colonias de hongos de color negro, verde militar y verde oscuro, la forma que tenían t enían los hongos era ovalada y tenían una gran expansión. En este cultivo también se observó la presencia de bacilos.
Fig.1 Colonia de hongos proveniente de la ventana
Fig.2 Colonia de hongos proveniente del techo
IDENTIFICACION DE HONGOS OBSERVADOS EN EL MICROSCOPIO
Fig.3 Es una cepa semejante a Fusarium.
Fig.5 Es una cepa semejante a Trichophyton Trichophyton
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Fig.4 Es una cepa semejante a Cladosporium
Fig.6 Es una cepa semejante a un Curvularia
RESULTADOS DE LA PURIFICACION DE MICROCULTIVOS X1 Color inicial: verde oscuro Color final: negro
Y1 Color inicial: verde amarillento Color final: verde amarillento
X2 Color inicial: rosado Color final: rosado anaranjado
Y2 Color inicial: verde claro Color final: negro
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RESULTADOS DEL ANTAGONISMO DESPUES DE UNA SEMANA
HNT vs HVT
Se observó la dominancia del HNT sobre el HVT, esto se comprobó al observar que el HVT había muerto y el HNT se expandió, sin dejar crecer al otro.
HNV vs BB
Se determino que el HNV es muy dominante, ya que no dejo crecer a la colonia de BB, se observo que el HNV se expandio casi por toda la superficie de la placa petri, a pesar de que solo sembramos en la mitad.
BB vs BP y al centro HRT
El HRT no se esparcio, ya que las bacterias se lo impedian, ademas el HRT HRT se torno de un color negro negro amarillento con un un punto rosado al centro.En cuanto a las bacterias la que mas se desarrollaron fueron las BP,mostrando una dominancia sobre HRT y sobre BB.tambien se observo el crecimiento de otro tipo de hongo de color verde amarillento, esto pudo deberse a la contaminacion al momento de inocular a los hongos.
RESULTADOS DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA BB vs HAV2 Se observo que la BB domino al hongo, ya que no se aprecia algun crecimiento del hongo en el agar, con ello se demuestra que la colonia de la BB es dominante sobre el HAV2, ya que es probable que la colonia inhibe las actividades enzimaticas del HAV2, por por lo tanto no permite su desarrollo.
BP vs HAV1 Se aprecia el crecimiento de la BP, pero no de algun hongo, esto nos determina que la BP pudieron inhibir el funcionamiento de algunas actividades enzimaticas como lo es el crecimiento y desarrolllo de los hongos.Tambien se observa el crecimiento de BB, esto puede ser debido a que la muestra del vaso dos contenia bacilos.
V.
DISCUSIONES
1. CULTIVO DE HONGOS EN MEDIO DE ARROZ ARROZ SEMICOCIDO Con respecto a los resultados obtenidos de los 2 vasitos de arroz colocados en diferentes lugares y obteniendo distintas muestras de hongos; como bien sabemos, los hongos son afectados por distintas influencias o factores ambientales, como son la humedad, el pH, la temperatura, la luz, la cantidad concentración de nutrientes y otros, todo ello ello dependiendo del lugar lugar o tipo de suelo en el que fue colocado, lo que implica que la morfología de los hongos varíen unos de otros.
En cuanto al vaso vaso 1 que fue colocado colocado cerca al huerto de tomates de villa 2 cerca al invernadero, con respecto a los resultados encontramos al hongo malo (fusarium), el cual lo demostramos con lo observado en el huerto; ya que el lugar donde se colocó el vaso, no había plantas de tomate y algunas cerca del lugar donde se colocó el vaso tenían pocos tomates mientras que el resto si estaba en buenas condiciones. Por otro lado, se encontró al hongo bueno (Trichoderma), el cual es un enemigo del fusarium, que se encarga de proteger a la planta, por ello deducimos que las plantas cercanas no están siendo muy afectadas gracias a la acción del trichoderma contra el fusarium.
En cuanto al vaso 2 que que fue clocado en villa 1 frente del pabellón pabellón de laboratorio debajo de una palmera, nos muestra la presencia de dos hongos malos como son el fusarium y rhizoctonia, que estarían afectando a la palmera, al gras y a las plantas presentes en ese lugar.
2. CULTIVO DE HONGOS EN MEDIO DE AGAR
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Con respecto a los resultados obtenidos de los 2 agares, uno de ellos ubicado en la ventana de la casa como se pueden observar en los resultados la evidencia de 3 tipos de hongo, debido a que solo se contamino con el aire y factores ambientales (temperatura, humedad, luz); mientras que el segundo agar ubicado en el techo de la casa presenta más de 5 tipos de hongos, el cual se debe a que este estuvo expuesto y siendo contaminado no solo por el viento y factores ambientales(temperatura, luz y humedad), sino por las mascotas (perros y gato) que viven ahí.
3. PURIFICACION DE MICROCULTIVOS Para la purificación de los micro cultivos de hongos en nuestra muestra se pudo distinguir el cambio de coloración de los hongos como lo observado en los resultados, lo que fue influido por: no mantener todo el tiempo encendido el mechero, no inoculamos correctamente las muestres, por la distancia al realizar el procedimiento y el mechero, al mismo tiempo este método nos facilitó la observación de las estructuras microscópicas de los hongos filamentosos.
X1: cambio de coloración de hongo verde oscuro a hongo negro
Con respecto a esta muestra, no debió haber cambio de coloración pero lamentablemente si la hubo, debido a que cuando se realizaba dicho procedimiento, es probable que no inoculamos bien las muestras, o que esta muestra de hongo verde se vio contaminada con el hongo negro, o también por que no mantuvimos encendido el mechero todo el tiempo del procedimiento.
Y1: no hubo cambio de coloración del hongo verde amarillento
Durante este procedimiento, se puede notar que se tomó las precauciones correctas y que no hubo error al realizar el procedimiento.
X2: cambio de coloración de hongo rosado a hongo rosado anaranjado
En cuanto a esta muestra podemos observar que también hubo cambio de coloración, de tal modo que también no debió suceder este cambo de coloración, entre nuestras probabilidades a este cambio de color, puede deberse a que el hongo rosado se contamino con otro hongo, o por no mantener una buena distancia cercana con el mechero durante el procedimiento.
Y2: cambio de cloración de hongo verde claro a hongo negro
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En esta muestra hubo un cambio de coloración muy fuerte, razón que no debió pasar; lo más probable es que no inoculamos correctamente las muestras y que hubo contaminación por el hongo negro.
4. ANTAGONISMO Como nos dicen Wisniewski y Wilson en 1992: “los microorganismos antagonistas ya sean bacterias, levaduras u hongos, tienen la capacidad de ejercer un efecto de control biológico sobre diferentes patógenos de interés y se han empleado para controlar diversas enfermedades en frutos y vegetales”. Para seleccionar a los microorganismos antagonistas se deben considerar las siguientes características generales: a) capacidad para colonizar rápidamente la superficie de los frutos y de persistir en ellas de manera efectiva. b) mayor habilidad que el patógeno para adquirir los nutrientes. c) capacidad de sobrevivencia bajo diferentes condiciones ambientales. Por otro lado, Wilson y Wisniewski también mencionan en 1999 que “estos microorganismos antagonistas cuentan con otras características específicas como son: la estabilidad genética, la efectividad a bajas concentraciones, capacidad de sobrevivir a condiciones adversas o extremas que presente el medio ambiente, efectividad para un amplio rango de microorganismos patógenos en una variedad de frutos f rutos y hortalizas, capacidad de reproducirse r eproducirse en medios de crecimiento económicos, que sea fácil de aplicar sin producción de metabolitos secundarios que causen daños a la salud humana, resistente a los fungicidas y compatible con los procedimientos comerciales y no patogénico sobre el hospedero”.
Con respecto al hongo negro sobre el hongo verde:
El hongo negro tuvo la capacidad de poder colonizar más rápido que el hongo verde, adquiriendo hábilmente sus nutrientes para su alimentación y rápida reproducción y expansión, asimismo adaptarse a este ambiente y facilitar su adaptación, dominando al hongo más débil (hongo verde), ya que este es más lento en cuanto a la habilidad de adquirir su alimentación.
Con respecto al hongo negro sobre el bacilo:
Se notó muy clara la dominancia y fácil expansión de este hongo negro, considerando que un buen microorganismo antagonista es resistente ante
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cualquier condición ambiental, asi como también su rápida reproducción, expansión y habilidad para poder alimentarse y colonizar en el agar dominando al bacilo.
Bacterias pseudomonas sobre el hongo rozado:
Como se puede observar en las imágenes del resultado, podemos identificar que esta bacteria se mostró como microorganismo antagonista y poder dominar al hongo, si bien sabemos sabemos
las bacterias tiene un gran capacidad capacidad de poder
adaptarse ante cualquier cambio y presencia de factores ambientales mostrando poder y resistencia para su adaptación y una posterior colonización como es al hongo de color rosado.
5. ACTIVIDAD ENZIMATICA Bacteria bacillus vs hongo de arroz de vaso 2
Como se observó tanto la bacteria como el hongo se encuentran en el mismo agar, en cuanto a la actividad enzimática del HAV2 frente a la BB, podemos decir que el HAV2 no es un buen catalizador para facilitar su r eacción, ya que su velocidad para las reacciones químicas es lenta comparada con la BP, lo que no puede realizar un proceso de inhibición contra la BB. Por tal motivo, como se ve en los resultados la BB tuvo mayor expansión en el agar, indicando que no le afecto la actividad enzimática que realizo el HAV2.
Bacteria pseudomonas vs hongo de arroz de vaso 1
Como sabemos tanto bacteria como hongo se encuentran en el mi smo agar, pero En caso del HAV1 tienes una baja velocidad para sus reacciones químicas ello hace que no sea un buen catalizador, por ello no puede inhibir el desarrollo y expansión de la BP. Por tal motivo, como se observó en los resultados la BP se observó que se reprodujo más y no tuvo ningún impedimento impedimento por parte del HAV1.
VI.
RECOMENDACIONES:
1.
En la práctica número 4 de cultivo de hongos en diferentes ambientes, es necesario que el arroz este bien escurrido; ya que será el medio donde se proliferarán los hongos, pero si queda con agua aumentará la probabilidad de contaminarse con bacterias.
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2.
Es necesario que los vasos con arroz estén bien tapados con la gasa, porque estos serán enterrados debajo de la tierra en posición invertida durante un lapso de tiempo y podrían contaminarse con otros microorganismos.
3.
Anotar en un cuaderno de trabajo las referencias del lugar donde se enterraron los vasos con arroz para facilitar su ubicación.
4.
Para la obtención de hongos colocar las placas petri con agar en lugares por donde transiten personas y animales.
5.
También es necesario trabajar con guantes, puesto que estamos expuestos a contraer muchas enfermedades. enfe rmedades.
6.
Es recomendable esterilizar el bisturí, para facilitar el corte del agar en forma cuadrada que irá en el portaobjeto.
7.
Es necesario utilizar una varilla metálica sin asa ayuda a no maltratar el hongo que se será impregnado en los extremos del cuadrado de agar. Y para sembrar bacterias es recomendable usar la varilla con asa ya que esta ayudará a su mejor dispersión.
VII.
BIBLIOGRAFÍA:
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