La tinc tinció ión n de Papa Papani nico cola laou ou es un méto método do de tinc tinció ión n muy muy importante en citología.
La fija fijaci ción ón se real realiz iza a al mome moment nto o de la toma toma de mues muestr tra a del del Papanicolaou aplicándole alcohol por Spray evitando una fijación inadecuada por exeso o falta de esta. demás! es fundamental fundamental "ue el tiempo entre la toma de muestra y fijación sea el mínimo posi#le $menos de % segundos&.
La colo colora raci ción ón nucl nuclea earr se real realiz iza a medi median ante te la apli aplica caci ción ón de hemato matox xilin ilina a de 'arr 'arris is com como ante antes s ya
mencio cionad nado! es
un
colorantes alcohólico #asófilo.
La
tinc tinció ión n
citop itopllasm asmátic tica
se
reali ealiza za
media diante nte
color oloran ante tes s
alcohó alcohólic licos os de los cuales cuales ti(en ti(en de forma forma difere diferenci ncial al cada cada tipo tipo celular de la muestra de#ido a la existencia de una diferencia en la afini afinida dad d elec electr troe oest stát átic ica a
por por las las prot proteí eína nas s "ue "ue tiene tiene cada
colorante. demás! demás! la diferencia en los tamaos moleculares de los colorantes determina la tinción diferencial de citoplasma seg)n el grado de diferenciación celular. *l orange +! ti(e citoplasmas de células maduras #ien diferenciadas con hiper"ueratosis las "ue pose poseen en
"uer "uerat atin inas as
de
alto alto
peso peso
mole molecu cula larr
gene genera rand ndo o
una una
coloración orangeofílica.
*l colo colora rant nte e *,% *,%- es una una mezc mezcla la de colo colora rant ntes es "ue "ue ti(e ti(en n cito citopla plasm sma a y está está compu compues esto to por eosin eosina! a! verde verde luz luz
y pard pardo o
ismarc/ como antes ya mencionado. La eosin eosina a posee posee mayor mayor afinid afinidad ad electr electrost ostáti ática ca despla desplazan zando do al orange +! por lo "ue ti(e los citoplasmas de todas las células pero finalm finalment ente e son las super superfic ficial iales es e interm intermedi edias as las "ue "ue poseen poseen coloración eosinofila o acidofila. *l verde luz ti(e el citoplasma de
las células menos diferenciadas ya "ue poseen una matriz permea#le "uedando finalmente las células #asales y para#asales 0e(idas de azul. *l pardo ismarc/ tiene afinidad por la tinción de la
mucina!
por
lo
"ue
es
el
citoplasma
de
las
células
endocervicales las "ue se ti(en con este colorante.
*l aclaramiento es el paso final de la tinción donde se produce la transparencia celular! para lo cual! se utiliza 1ilol como solución aclaradora.
2inalmente las muestras se montan por medio de la unión del portao#jetos con resina o #alsamo la cual es un medio de montaje solu#le en el agente aclarante y de#e tener un índice de refracción "ue coincida con am#os.
3. Lavado en agua corriente4 es utilizado para hidratar y limpiar las muestras y darle un cierto carácter acuoso. *s importantes estilar #ien las muestras para evitar la dilución y pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado.
5. 'ematoxilina de 'arris4 utilizado para realizar la tinción nuclear de las células del frotis.
6. lavado en agua corriente4 utilizado para eliminar los exesos de colorante "ue "ueden en la muestra. *s importante estilar #ien las muestras
para
evitar
diluir
y
por
lo
tanto!
disminuir
la
concentración del reactivo del paso siguiente.
7. agua acida4 utilizado para realizar una diferenciación de la coloración nuclear por la hematoxilina! proceso llamado coloración regresivo. *s importante "ue las inmersiones sean rápidas para evitar una disminución exesiva de la tinción nuclear.
%. alcohol 8%94 utilizado para darle carácter alcohólico a las muestras para "ue reaccionen con el colorante del siguiente paso. *s importante estilar #ien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes y la pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado en el paso siguiente.
:. ;range +4 colorante alcohólico "ue ti(e el citoplasma de color anaranjado! el cual tiene afinidad electrostática con las proteínas! de todas las células en una primera instancia. 2inalmente son las células escamosas superficiales "ueratinisadas alas "ue o#tienen una tinción orangeolica. <. alcohol 8%94 utilizado para eliminar el exceso de colorante de las muestras. *s importante estilar #ien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes y la pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado en paso siguiente.
=. *,%-4 es una mescla de colorantes "ue tienen afinidad por el citoplasma de las células.
8. alcohol 8%94 *s importante estilar #ien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes! alteración del xilol y su pérdida de capacidad como mordiente. Las inmersiones no de#en ser por mucho
tiempo
ya
"ue
puede
disminuir
la
coloración
citoplasmática.
3-. 1ilol4 utilizado para el aclaramiento de la muestra! se tiene tres depósitos para una inmersión en cada recipiente! esto es para la mejor aclaración con la importancia "ue tiene el oxígeno de ayudar al aclaramiento de las células! para cada inmersión de xilol.
