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Coloración PAPANICOLAOU
Juego de soluciones para la coloración de citologías por el método de Papanicolaou
PRINCIPIO La tinción de Papanicolaou es el método de tinción más utilizado para material citológico. En el primer paso se tiñen los núcleos con una solución de hematoxilina. Los núcleos aparecen azules a violeta. El segundo paso es la tinción del citoplasma con una solución anaranjada, que presenta especialmente las células maduras y queratinizadas. Las estructuras diana se tiñen de anaranjado con diferentes intensidades. En el tercer paso de tinción se usa la llamada solución polícroma, que es una mezcla de eosina, verde luz SF y pardo de Bismarck. Con la solución polícroma se muestra la diferenciación del epitelio escamoso simple.
MUESTRAS Muestras ginecológicas, cada muestra (fondo, cervix y endocervix) se extiende muy suavemente para evitar destrucción de estructuras. Los extendidos no deben ser grumosos y deben cubrir, por lo menos, 1/3 parte de la placa cada uno. Se deben usar láminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para quitar la grasa. Toda muestra biológica potencialmente infecciosa.
debe
se
considerada
como
CONTENIDOS PAPANICOLAOU PAPANICOLAOU HEMATOXILINA –Listo HEMATOXILINA –Listo para su uso
Hematoxilina Certificada Potasio y Alumino Sulfato 12-H R.A. Mercurio II Oxido R.A. Acido Acetico R.A. Alcohol al 96% Agua desmineralizada Tipo II
PROCEDIMIENTO
5g/l 100 g/l 2.5g/l 12 ml 50 ml csp
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21.
PAPANICOLAOU PAPANICOLAOU NARANJA G –Listo para su uso Anaranjado G Certificado Acido Fosfotungstico al 0.015% Sol Alcoholica
5g/l 0.15g/l
PAPANICOLAOU PAPANICOLAOU SOLUCION EA-50 –Listo EA-50 –Listo para su uso Eosina Y certificada al 0.5% Bismark Bronw certificado al 0.5% Verde FCF amarillento cerfificado al 0.5% Acido fosfotungstico al 0.2% Sol alcoholica
450 ml 100 ml 450 ml 100 ml
CONDICIONES CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Las soluciones solucion es deben almacenarse almacen arse entre 15°C y 30°C y protegidos protegid os de la luz. Después de abierto abie rto el contenido almacenado alma cenado entre 15°C y 30°C y protegidos de la luz es estable estab le hasta la fec ha de caducidad caducid ad indicada en la etiqueta. La presencia de un ligero precipitado precipitado en los colorantes de Hematoxilina y Naranja G, debido a los cambios de temperatura, no altera su capacidad de tinción. Fi ltrar en caso necesario Temperaturas inferiores a 15°C pueden precipitar c olorantes de las soluciones colorantes. Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados. •
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10 pases (ni lentos ni rápidos) en el alcohol de 80 %. 10 pases en alcohol al 70 %. 10 pases en alcohol al 50 %. 10 pases en agua destilada. Hematixilina de Harris por 3 minutos (tiempo variable). Pases en agua destilada (hasta quitar el exceso de colorante). 6 pases en Hcl al 0.5 %. Agua corriente por cinco min. (chorro lento). 10 pases en agua destilada. 10 pases en alcohol al 50 %. 10 pases en alcohol al 70 %. 10 pases en alcohol al 80 %. 10 pases en alcohol al 96 %. Colocar en Naranja G por 1 ½ minutos (tiempo variable). 10 pases en alcohol al 96 %. 10 pases en alcohol al 96 %. Colorear en EA-50 por 3 min. (tiempo variable). 10 pases en alcohol al 96 %. 10 pases en alcohol al 96 %. 10 pases en alcohol al 96 %. 10 pases muy lentos en Isopropanol (dejar un rato para que se deshidraten y después secar bien. 10 pases muy lentos y dejando un buen rato para que se deshidraten bien, en la mezcla de Isopropanol-Xilol. (secar bien gradilla) Montar las laminas.
RESULTADO Los núcleos se tiñen en a zul a violeta, mientras que el citoplasma muestra varios tonos de azul, naranja, rosa o rojo asi:
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS Observe la simbología en los rótulos de las soluciones. Los colorantes EA, que contienen metanol, y el colorante colorante OG 6, que contiene etanol, son tóxicos por ingestión e inflamables. Manipular con precaución. Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para el desecho de compuestos peligrosos.
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Citoplasma Basofilo Citoplasma Acidofilo Citoplasma Queratinizado Eritrócitos Núcleos
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Verde azulado Rosa Rosa a Naranja Rojo Azul a violeta
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
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Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos Cubetas de tinción Agua Cronometro y/o timer
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CONTROL DE CALIDAD El control de calidad en la microscopia de extendidos sanguíneos depende directamente de la formación y experiencia del profesional que validara la calidad de los extendidos, coloración, etc.…
Alcohol al 96% Alcohol al 80% Alcohol al 70% Alcohol al 50% HCl al 5% Isopropanol Xilol
NOTAS SOBRE EL EMPLEO El microscopio microscopio usado debe cumplir los requisitos requisitos de un laboratorio laboratorio de diagnóstico médico. La técnica técnica descrita descrita anteriormente anteriormente puede modificarse modificarse de acuerdo con con las preferencias del operador para lograr mayor o menor intensidad de coloración, lo cual implica variaciones en los tiempos de tinción, decoloración, lavado,...
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Juego de soluciones para la coloración de citologías por el método de Papanicolaou
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Si las muestras pasan de 3 días de tomadas, antes de colorearlas deben hidratarse sumergiéndose en agua destilada entre 8 y 15 minutos. Nunca debe realizarse citologías vaginales durante el periodo menstrual. Los alcoholes del paso 18 al 20 del proceso de la coloración. Deben cambiarse muy frecuentemente. Siendo lo ideal cada vez que se coloree. Una buena coloración, además de contar con un buen colorante, depende del extendido. Este no debe ser muy grueso y se debe evitar la formación de grumos o estrías. El espesor de cada extendido implica a cada laboratorio en particular a establecer los tiempos ideales de coloración. Usar placas preferiblemente nuevas, desprovistas de ralladuras y grasa. Las soluciones de tinción empleadas para la tinción de Papanicolaou están listas para el uso, la dilución de las soluciones no es necesaria, disminuye la calidad de la tinción y la estabilidad. Si se utiliza un aparato automático de tinción, deben tenerse en cuenta las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del software. Eliminar el aceite de inmersión en exceso antes de archivar.
BIBLIOGRAFÍA
1. Street CM: Papanicolaou Techniques in Exfoliative Cytology. IN Laboratory Technique in Biology and Medicine, 3rd ed. EV Cowdry Editor, Williams & Wilkins, Baltimore, 1952, p 253 2. Johnson PL, Klein MN: Ap plication of Papanicolaou stain to paraffin sections. Stain Technol 31:223, 1956 3. Liu W: A simplified cytologic staining technic. Am J Clin Pathol 54:767, 1970 4. A Manual for Cytotechnology, C Keebler, J Reagen, Editors, American Society of Clinical Pathologists Press, Chicago (IL), 1983, p 323
Índice de Símbolos Producto para diagnóstico in-vitro Para usar consulte las instrucciones
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