El plásmido pBR 322 es el más ampliamente usado para clonar, es de pequeñas dimensiones y lleva los genes para la resistencia a los antibióticos ampicilina (amp) y tetraciclina (tet) !ontiene un solo sitio de restricción "#$ para el %st& en el interior del gen amp y sitios 'nicos de restricción para Bam& y al& "*$ en el interior del gen tet +a introducción de un gen en los sitios arriba citados determina la prdida de la resistencia en los en-rentamientos de dic.os antibióticos permitiendo, a travs de la placa a reproducir "/$, la selección de los clones que .an recibido el nuevo gen El vector pBR322 -ue uno de los primeros plásmidos diseñados que se utili0ó en 1 recombinante Este plásmido tiene un origen de replicación (ori4), dos genes de selección (resistencia a los antibióticos ampicilina y tetraciclina), y algunos sitios de restricción 'nicos 1entro del gen de resistencia a tetraciclina .ay sitios de restricción 'nicos para las en0imas Bam&, p.&, al&, 5ma&&& y ru&, y dentro del gen de resistencia a ampicilina .ay sitios de restricción 'nicos para las en0imas Rru&, %vu& y %st& i se introduce pBR322 en una clula bacteriana sin plásmidos y sensible a antibióticos, la clula se convertirá en resistente a la tetraciclina y a la ampicilina i se inserta un -ragmento de 1 en los sitios de restricción Rru&, %vu&, o %st&, se inactivará el gen de resistencia a ampicilina, pero el gen de resistencia a tetraciclina seguirá activo i este plásmido recombinante se trans6ere a una clula bacteriana que no contenga plásmidos, las clulas que contengan el plásmido recombinante podrán identi6carse, ya que serán resistentes a tetraciclina y sensibles a ampicilina El plásmido bacteriano más ampliamente usado es el pBR322 (plásmido de Bolívar y Rodríguez), éste posee un origen de replicacin en E.coli multicopiativo multicopiativo o rela!ado, un tama"o pe#ue"o pe#ue"o y posee 2$ sitios de corte %nicos para enzimas de reestriccin de los cuales & se encuentran dentro del gen de resistencia resistencia a la tetraciclina, otros dos dentro de su promotor y tres dentro del gen de resistencia a la ampicilina' e modo #ue las células de E'coli #ue porten este plásmido serán resistentes a ambos antibiticos mientr mientras as #ue #ue las #ue #ue porte porten n un plásm plásmido ido recom recombin binan ante te serán serán sensi sensible bles s a a#ue a#uell antibitico en cuyo gen se a producido la insercin de *+ egeno y resistentes al otro' otro' +sí resulta sencilla la selecci seleccin n de bacteria bacterias s trans-orm trans-ormada adas s con el plásmido plásmido recombinante' .ara esta seleccin por resistencia a antibiticos se an desarrollado desarrollado plásmidos #ue permiten la seleccin directa en un solo medio como los #ue tienen !unto con un gen de resistencia a un antibitico antibitico el -ragmento lacZ' su-iciente su-iciente para completar la seleccin del operon lac de de E.coli #ue #ue codi-ica para la /galactosidasa' En el lacZ' se a creado un sitio de clona!e m%ltiple, pe#ue"a zona de *+ donde están presentes sitios de
corte %nicos de varias enzimas de restriccin en los cuales se introduce el *+ egeno'
*+ pBR322 es un plásmido de uso com%n vector de clonacin en E. coli (0)'1a molécula es una doble cadena círculo '3&0 pares de bases de longitud (2)' pBR322 contiene los genes para la resistencia a la ampicilina y tetraciclina, y se puede ampli-icar con cloran-enicol' El peso molecular es 2,43 0$ &daltons' 1os datos de secuenciacin de 5atson (con-irmada en el *e6 England Biolabs, 7nc') a demostrado ser pBR322 '3&0 pares de bases, y no '3&3 pares de bases #ue se in-orm anteriormente' *+89 y +ddgene son depsitos centrales de clones de plásmidos y colecciones #ue también pueden ser %tiles' Fuente producto pBR322 se aísla de E. coli ER2&4& (dam dcm : : Eco; < =) mediante un procedimiento de puri-icacin de plásmidos estándar'
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