MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL PRÁCTICA N° 01 ENSAYOS PARA EL ESTUDIO MORFOANATÓMICO DE UNA ESPECIE VEGETAL TIPOS DE CORTE Y TÉCNICA T ÉCNICAS S DE TINCIÓN I.
INTRODUCCIÓN
Para el estudio morfo-anatómico de una especie vegetal, es fundamental una adecuada técnica de colección, herborización y conservación de las muestras a estudiar. El estudio de la estructura interna de los vegetales requiere de adecuadas preparaciones microscópicas, lo que permitirá la observación detallada de los diferentes tejidos y estructuras. Realizando buenos cortes y siguiendo los procedimientos adecuados, se podrá obtener láminas histológicas de calidad.
Colección Herborización Clasificación taxonómica
Estudio Botánico
Estudio morfológico (organografía) Estudio anatómico (citología e histología) Estudio histoquímico
Fig.1 Etapas del estudio morfo-anatómico de una especie vegetal
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MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL Tabla 1. Tipos de cortes histológicos
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MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL
Lavado 2 Decolorar
Lavado 1
Hipoclorito de sodio 50%
Agua destilada 56 veces
Teñir
Alcohol de diferente graduación: 50º, 70º y 96
Montar
Lavado 3
Colocar los cortes en colorante diluido de 2-5 min.
Agua destilada 56 veces
GelatinaGlicerina-> Esmatado
Fig. 2 Procedimiento general de técnica de tinción
fresco
lugol
safranina y verde Janus
esqu ema
Fig. 3 Tinción de raíz de
fresco Fig. 4 Tinción de tallo de
Verde brillante
safranina (lirio) con diferentes colorantes
Iris florentino
H e l i an t h u s a n n u u s
safranina (girasol) en fresco y safranina 1
MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL II.
III.
IV.
COMPETENCIAS Conoce las diversas técnicas de colección y herborización Prepara cortes histológicos utilizando técnicas de tinción. MATERIALES Microscopio compuesto Cámara fotográfica (mínimo zoom óptico 5 mpx) Laminas portaobjetos, cubreobjetos, placa de toques, caja porta lámina, tijeras, pinzas, frasco gotero, pincel Nº 0-1, papel lente, plumón, indeleble, hojas de afeitar nueva (Gillete, etc), mechero de alcohol. Reactivos: etanol 70º, 96º, alcohol isopropílico, glicerina ,hipoclorito de sodio (lejía), esmalte transparente Colorantes: safranina, fast green, lugol, rojo de metilo, verde Janus Muestras vegetales : -Hoja de eucalipto, tallo de hinojo y raíz de diente de león -Muestras colectadas en el Jardín Botánico. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. RECOLECCIÓN, HERBORIZACIÓN Y CONSERVACIÓN Se dará una breve explicación de las técnicas de recolección, conservación, herborización. 2. PREPARACIÓN DE CORTES Se trabajara la preparación de cortes con las muestras vegetales colectadas del jardín Botánico y las solicitadas en la práctica. Tabla 2. Preparación de cortes histológicos y técnica de tinción.
a. PREPARACIÓN DE CORTES HISTOLÓGICOS Realizar los cortes histológicos con la técnica a mano libre, se seleccionan los cortes más finos y se colocan sobre la placa portaobjetos y se agrega 1-2 gotas de agua, luego se coloca el cubreobjetos lentamente desde un ángulo de 45º con respecto al portaobjeto para evitar la formación de burbujas de aire. b. OBSERVACIÓN –TINCIÓN-OBSERVACIÓN Observar al microscopio a diferentes aumentos (4X, 10X y 40X). Aplique la técnica de tinción y de montaje a los cortes de mejor calidad. Según la Fig.2 c. MONTAJE Colocar el corte seleccionado sobre un portaobjetos (limpio y seco), agregar una gota de glicerina, deslizar el cubreobjetos y observe. Ubicar el corte seleccionado sobre la gota, pasar por la llama para evitar la formación de burbujas, deslizar el cubreobjetos, dejar secar. Quitar el excedente, limpiar y observar. Una vez fijado y realizado el montaje se procede a conservar las láminas aplicando esmalte, secar y guardar en caja portalaminas. 2
MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL Tabla 3. Tipos de cortes para diferentes de órganos vegetales ÓRGANO Raíz Tallo
TIPO DE CORTE transversal
fresco, safranina y lugol
transversal, longitudinal
fresco, safranina y fast green o verde janus
paradermal, transversal
Hoja
HISTOQUÍMICA (TÉCNICA DE TINCIÓN)
fresco, safranina, rojo de metilo y lugol
Flor
Paradermal, transversal y longitudinal,
fresco, safranina, lugol
Fruto
paradermal , transversal, longitudinal
fresco, safranina y lugol
Semilla
V.
Raspado
fresco y lugol
RESULTADOS
Dibuje en la Ficha de Observaciones Nro. 1 las muestras identificadas en el microscopio y de una de las Observaciones proceda a completar el Formato de Protocolo Botánico.
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MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL FICHA DE OBSERVACIÓN N°01 TEMA:………………………………………………………NOMBRE:……….……………………
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Nombre común: Nombre científico: Muestra: Corte: Tinción: Aumento: Descripción:
Revisado:………………………………….
Fecha: ……………………………………….
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MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL VI.
INVESTIGACIÓN BIBLIOGRÁFICA (Sustentar con libros, revistas científicas y bases de datos sugeridas) 1. Indique los fundamentos del microscopio electrónico y compuesto: grafique y señale sus partes. 2. Describa brevemente las últimas técnicas de recolección de especies vegetales. 3. Mencione mediante un cuadro 10 plantas medicinales, toxicas y/o alimenticias endémicas o nativas del Perú, con los siguientes datos: Nombre Común 1.
VII.
Nombre Científico
Familia
Usos
Coloque autor y año de estudios botánicos
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Libros, revistas y manuales: 1. BRACK E., A. 1999. Diccionario enciclopédico de las plantas útiles del Perú. Edit. PNUD – CBC, Cusco – Perú. 2. CASTAÑEDA C. B, RAMOS LL. E., IBAÑEZ V. L. 2008. Evaluación de la capacidad antioxidante de plantas medicinales peruanas nativas e introducidas. Rev. Acad. Perú Salud 15(1),2008 , ISSN 1990-4614 3. ESAU, K. 2008. Anatomía vegetal. Tercera Edición. Editorial Omega. Barcelona. 4. MOSTACERO L., J. 2011. Plantas Medicinales del Perú. Primera Edición. 5. PEREZ T., E y Col. 2003. Introducción a la Biología Vegetal. Edit. UNMSM. Lima – Perú. 6. SORIA, R. 1997. Farmacobotánica. Lima 7. SORIA, R., CARHUAPOMA, M. 2005. Manual de prácticas de Botánica General y Sistemática. Lima 8. SOUKUP, J. 1971. Vocabulario de Nombres Vulgares de Plantas Peruanas, Ed. Salesiana, Lima. 9. THOMAS-DOMÉNECH, J.M. 1997. Atlas Temático de Botánica. Barcelona. 10. VALDIZAN H.; MALDONADO A. 1922. La Medicina Popular Peruana Imp. Torres Aguirre, Lima. Páginas Web 1. Plantas endémicas del Perú: http://www.regionamazonas.gob.pe/sicre/documentos/archivos/3_Especies_endemicas.pdf 2. Libro Rojo de Plantas Endémicas del Perú: http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/biologia/v13n2/contenido.htm 3. Biblioteca virtual EBSCO HOST Research Databases: http://search.ebscohost.com/ 4. Blog de la Cátedra de Botánica (Botanica FFyBB): https://plus.google.com/u/0/+BotanicaFFyBB/posts 5. Fieldmuseum: http://fm1.fieldmuseum.org/vrrc/ 6. Raintree's Tropical Plant Database: http://www.rain-tree.com/plistbot.htm#.Ux9nDD95NPI 7. Revistas de investigación UNMSM: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/ 8. ScienceDirect: http://www.sciencedirect.com/ 9. The Plant List: www.theplantlist.org 10. Trópicos, Missouri Botanical Garden: www.tropicos.org 11. Revista Cubana de Plantas Medicinales. http://bvs.sld.cu/revistas/pla/indice.html
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MANUAL DE PRÁCTICAS DE BOTÁNICA GENERAL PROTOCOLO DE ANÁLISIS BOTÁNICO TEMA DE LA PRÁCTICA:………………………………………………………………………. Elaborado por (Apellidos y Nombres):
Nombre común: Nombre científico: Familia: Fotografías Planta completa
Fotografías del corte Menor aumento
Fecha: / / Señale y dibuje el corte (sin colorear) Menor aumento
Órgano utilizado
Mayor aumento
Mayor aumento
Lugar de origen: Habitad: Lugar de recolección:
Tipo de corte Coloración Aumento
INTERPRETACIÓN DE OBSERVACIONES
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (aplicar normas Vancouver) 6
