PRACTICA 2 SEDIMENTACION

PRACTICA Nº 2: TECNICAS DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACION Una de las maneras de diagnosticar diagnosticar las parasitosis parasitosis de localización localización gastrointestinal gastrointestinal y glándulas glándulas anexas anexas,, es mediant mediantee la aplicac aplicación ión de técnicas técnicas coprop coproparas arasitol itológ ógicas icas de enrique enriquecimie cimiento nto (de sedimentación y flotación), que permiten concentrar huevos, quistes y larvas en el menor volu volume men n de mate materia ria fecal, fecal, deter determin minar ar su pres presen encia cia e iden identif tifica icarlo rloss corre correcta ctame mente nte.. La recupe recuperaci ración ón de estas estas formas formas parasit parasitarias arias plantea plantea un proble problema ma de difícil difícil solució solución n a todo todo microscopista. Si bien es posible preparar frotis fecales a partir de heces frescas o material fecal conservado en SAF o formol, los métodos de concentración permiten que los quistes de protozoos protozoos y huevos huevos de helmintos helmintos no pasen inadvertidos inadvertidos cuando están presentes presentes en escaso número.

Técnicas de Sedimentación: 

La sedimentación de parásitos intestinales en heces se logra por centrifugación ligera o por gravedad gravedad del material material fecal, conduciendo conduciendo a la recuperación recuperación de todos todos los protozoarios protozoarios,, huevos y larvas, especialmente huevos de tremátodos. Conce Concentr ntraa bien bien estas estas forma formass y elimi elimina na bast bastant antes es detri detritu tuss orgá orgánic nicos os.. Aunq Aunque ue se  inactivan las formas móviles de los protozoarios, se mantiene la integridad de los organismos. Es efectivo aún en heces con cantidades excesivas de grasas y pueden observarse la  mayoría de los quistes de protozoarios, así como huevecillos y larvas de helmintos, incluyendo los huevos con opérculo y tiene una eficacia moderada para los huevos de Esquistosoma. La técnica es útil para examinar heces que contienen substancias grasas que interfieren  en los métodos de flotación. La técnica de sedimentación concentra los parásitos presentes en la muestra fecal. La  técnica incluye tamizar primeramente las heces para separar los residuos grandes, tratar con formol para matar y preservar los organismos, y adicionar un solvente como éter o acetato de etilo para disolver las grasas. Sin embargo, durante la sedimentación, aparte de concentrarse los parásitos, se quedan  reunidos también algunos otros materiales, abundando los artefactos durante la observación. Debido a que se usan varios reactivos resulta antieconómica, no obstante su eficacia. Las técnicas de sedimentación, se utilizan para la observación de quistes de protozoos,  huevos y larvas de helmintos, pero la desventaja de estas técnicas consiste en que los preparados contienen contienen más residuos residuos que los procesados procesados por flotación. En este caso, el acetato de etilo se usa para extraer extraer los residuos residuos y las grasas grasas de las las heces y llevar llevar los parásitos parásitos al fondo fondo de la suspensión. suspensión. Estas técnicas entonces son recomendadas por ser fáciles de realizar, tener baja probabilidad de errores técnicos y recuperar un amplio rango de organismos.

Métodos físicos •

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Dilución minuciosa heces en líquido o solución de densidad: •

Inferior a la de los parásitos (Técnicas de sedimentación)

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Superior (Técnicas de flotación)

Ventajas: •

Realización muy simple

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Precisan poco material

Inconvenientes: •

Procesos largos

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Exigen mucha manipulación

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No aplicables a series grandes de muestras

TÉCNICA DE BAERMAN MODIFICADA EN COPA POR LUMBRERAS:

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Homogeneizar la muestra de heces. Adicionar una copa para sedimentación con una gasa mojad jada (o una malla lla de diám iámetro calib librad rados, según el tama amaño del parás rásito ito que busquemos). busquemos).Coloc Colocar ar heces sobre sobre la rejilla rejilla con la gasa.

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Verte por las paredes solución salina fisiológica hasta cubrir las heces. Se deja reposar 30





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Observación al microscopio.

RESULTADOS 1. Se observan huevos embrionados de Hymenolepis Hymenolepis nana y quistes tetranucleados de Giardia lamblia. 2. No hay concentración de estructuras parasitarias.

Ventaja: Con ella se recuperan larvas de Strongyloides y Trofozoitos de Protozoos de las muestras fecales.

Inconveniente: No concentra concentra las las formas formas parasitarias parasitarias y lleva mucho mucho tiempo. tiempo. Recomendado: Para larvas de Strongyloides y trofozoitos de Balantidium. TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN RÁPIDA: 

Se emulsionan heces junto a un volumen de agua 10-20 veces superior, en un matraz.





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Se filtra a través de una gasa mojada (o una malla de diámetro calibrados, según el tamaño del parásito que busquemos), a una copa cónica que se llena con agua hasta 2.5 cm del borde. borde. Se agita agita para suspend suspender er uniformemen uniformemente. te. Se deja reposar 10 minutos, minutos, se elimina el sobrenadante y se vuelve a llenar de agua. Se  repite 3- 4 veces hasta que el sobrenadante aparezca claro.

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Extraer el Sedimento. Observación al microscopio.





RESULTADOS 1. Se observan huevos embrionados de Hymenolepis Hymenolepis nana y huevos larvados de Trichuris trichura. 2. Presencia de Huevos operculados por su gran densidad.

Ventaja: Con ella se recuperan todos los huevos de helmintos, larvas de Nematodos y quistes de Protozoo de las muestras fecales sin distorsión.

Inconveniente: No concentra concentra las las formas formas parasitarias parasitarias y lleva mucho mucho tiempo. tiempo. Recomendado: Para huevos de trematodos y operculados de cestodos (de gran densidad). TÉCNICA DE SEDIMENTACIÓN DE RITCHIE

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Mezclar heces con 10 ml de solución salina. Se filtra a través de dos dos capas de gasa quirúrgica en un tubo de centrífuga de 15 ml Se centrifuga 5 min. A 1500 r.p.m.. El sedimento se vuelve a suspender y centrifugar  en solución salina. Se lava el sedimento y se mezcla con 10 ml de formalina al 10 % (= formol al 4%), se  deja reposar 5 mint. (Así se matan y preservan los Protozoos, larvas y mayor parte de huevos).





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Se agrega 3 ml de éter (cuidado con las llamas, vapores explosivos), y se coloca un tapón (no soluble en éter). Se invierte y agita con fuerza y centrifugar 1 minuto a 1.500 r.p.m. (Aquí se extraen las grasas de las heces y disminuye el volumen de las mismas). Se quita con cuidado el tapón (Atención, al salir los vapores de éter pueden arrastras y salpicar de restos fecales). Puede sustituirse el éter por acetato de etilo, que no es inflamable, además aumenta la obtención de huevecillos de Himen de Himenolepis olepis nana nana y de quistes de Giardia lamblia. lamblia. Se invierte totalmente el tubo desde la centrifugadora con un movimiento suave, pero  en un solo tiempo. Se mezcla una gota del sedimento fecal y una tintura de Iodo en el portaobjetos. portaobjetos. Se coloca un cubreobjetos y se pasa al microscopio, buscándose los parásitos. También  debe de observarse sin teñir, ya que los quistes se ven mejor de ésta manera.

RESULTADOS 1. 2.

Se observan quiste tetranucleados de Giardia lamblia. lamblia. Concentración de quistes.

Ventaja: Muy útil para la concentración de quistes, huevos y larvas, puede aplicarse a muestras fijadas. de Himenolepis olepis nana nana y de quistes de Recomendado: Aumenta la obtención de huevecillos de Himen Giardia lamblia. lamblia.







Restos fecales Formalina

Sedimento (Parásitos)

PRACTICA 2 SEDIMENTACION

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