TUGAS MIKROBIOLOGI PANGAN LANJUT
MALDI-TOF MALDI-TOF SPEKTROMETRI MASSA SEBUAH TEKNOLOGI BARU UNTUK DIAGNOSIS DAN IDENTIFIKASI MIKROBA
OLEH: NAM A
: ER ERIKA ARISETIAN A DEWI
NIM
: 156100100111022
PROGRAM MAGISTER TEKNOLOGI HASIL PERTANIAN FAKULTA FAKULTAS S TEKNOLOGI PERTANIAN UNIVERSITA UNIVERSI TAS S BRAWIJAYA BRAWIJAYA MALANG 2015
MALDI-TOF SPEKTROMETRI MASSA : Se!"# Te$%&'&() B"*! U%+!$ D)"(%&,), D"% Ie%+).)$",) M)$*&" Neelja Singhal 1 , Manish Kumar 2 , Pawan K. Kanaujia 1 and Jugsharan S. Virdi 1* 1 Department o Mi!ro"iolog#, $ni%ersit# o Delhi, New Delhi, &ndia, 2 Department o 'ioph#si!s, $ni%ersit# o Delhi, New Delhi, &nd i a
Saat ini cara mengidentifikasi mikroorganisme terbaik adalah menggunakan 16S rRNA 18S rRNA dan sequencing gen. Namun, dalam beberapa tahun terakhir matri( assisted laser desorption i oni) at ion*t ime o light mass spe!trometr# (A!"#$%&' S telah muncul sebagai alat )ang potensial untuk diagnosis dan identifikasi mikroba. Selama proses A!"#$%&' S, mikroba diidentifikasi dengan menggunakan sel utuh atau ekstrak sel. *roses ini cepat, sensitif, dan ekonomis dalam hal tenaga ker+a dan bia)a )ang digunakan. %eknologi ini telah siap digunakan oleh ahli mikrobiologi )ang telah melaporkan penggunaan A!"#$%&' S untuk beberapa tu+uan seperti, identifikasi t)pe strain dan mikroba, studi epidemiologi, deteksi agen sen+ata biologis, deteksi patogen air dan makanan, deteksi resistensi antibiotik dan deteksi patogen darah dan saluran kemih dll. eterbatasan teknologi ini adalah bah-a identifikasi isolat baru han)a mungkin +ika database spektral mengandung peptida sidik +ari massa strain +enis genera spesies sub spesies strain tertentu. /lasan ini memberikan ikhtisar tentang status dan aplikasi terbaru dari spektrometri massa untuk identifikasi mikroba. 0al ini +uga mengeksplorasi kegunaan teknologi baru )ang menarik untuk diagnosis pen)akit )ang disebabkan oleh bakteri, irus, dan +amur. Pe%"#!'!"%
#nformasi genomik dalam sel mikroba diter+emahkan ke dalam lebih dari 2333 protein, se+umlah besar dapat dipela+ari dengan menggunakan proteomik (4asinger et al., 155. "iperkirakan bah-a untuk genom )ang mengandung kurang dari 1.333 gen, lebih dari 37 dari prediksi proteoma mungkin diidentifikasi dari genom. "emikian pula diperkirakan 137 $ 37 proteoma kemungkinan diidentifikasi dari genom )ang masing$masing memba-a gen ca. 233 dan ca. 9333 (:ungblut dan %hacker, 2339. "engan demikian, genom mikroba )ang mengandung 633$;333 gen, diprediksi merupakan sistem menengah )ang kompleks di mana aplikasi proteomik dapat memberikan pengetahuan tentang bagian penting dari proteoma mikroba ini. arakterisasi dan diferensiasi dari proteoma mikroba dikembangkan dan berkembang dengan metode pemisahan berbasis gel dan gel bebas protein. S"S$*A<= protein sel utuh, dibantu dengan analisis komputer digunakan dalam beberapa penelitian untuk identifikasi dan klasifikasi mikroorganisme (>andamme et al., 1556. etika dilakukan dalam kondisi standar, teknik ini dilaporkan men+adi cukup berhasil. #dentifikasi spesies menun+ukkan korelasi )ang baik dengan hibridisasi "NA$"NA (>andamme et al., 1556. Namun, profil protein S"S$*A<= tidak men+adi populer di kalangan ahli mikrobiologi. #ni mungkin dikaitkan dengan? (a kurangn)a database )ang luas untuk mengetahui identifikasi mikroorganisme, (ii pers)aratan kondisi )ang sangat standar, )ang termasuk pertumbuhan mikroorganisme )ang tidak diketahui pada media )ang identik, standar kondisi elektroforesis, prosedur pe-arnaan, dan analisis pola berikutn)a, (iii teknik itu tidak cukup tepat untuk membedakan strain )ang sangat mirip. =lektroforesis dua dimensi (2$"= +uga gagal men+adi populer di kalangan ahli mikrobiologi karena metode ini menggunakan tangan )ang sangat melelahkan, bahkan setelah ketersediaan produksi gel secara komersial dan soft-are analisis untuk meningkatkan gel (@ash, 2335. euntungan dan kerugian dari pendekatan proteomik kuantitatif lainn)a telah dibahas di tempat lain (%i-ari dan %i-ari, 2319. Analisis proteome seluler adalah metode )ang menempati posisi perantara fenotipik$ genot)pic dikotomi, se+ak produk gen )ang mencerminkan fungsi metabolisme protein dianalisis. erbagai metode )ang dimiliki telah digunakan untuk deteksi mikroorganisme dalam set$up mikrobiologi klinis, dengan keuntungan dan kerugian )ang telah tercantum dalam tabel 1. *eningkatan menggunakan metode sidik +ari "NA telah ditegaskan dalam dua dekade terakhir untuk penerapan dan identifikasi utilitas dan klasifikasi mikroorganisme. Namun, otomatisasi teknologi proteomik, tahun$tahun terakhir ini telah meningkat melalui penggunaan dan potensi untuk se+umlah tu+uan seperti, penentuan t)pe strain dan epidemiologi, identiBkasi mikroba )ang menghuni ekosistem tertentu, deteksi agen perang biologis, deteksi air dan makanan )ang mengandung patogen dan deteksi patogen dalam darah dan saluran kemih,
deteksi resistensi antibiotik dll. /lasan ini memberikan gambaran tentang status dan aplikasi terbaru dari spektrometri massa (S untuk identifikasi mikroba dan mengeksplorasi manfaat dari teknologi ini untuk diagnosis pen)akit )ang disebabkan oleh bakteri, irus dan +amur. S/e$+*&e+*) M",,"
Spektrometri massa adalah teknik analisis untuk menentukan struktur kimia di mana sen)a-a kimia terionisasi men+adi molekul berdasarkan perhitungan massa dari molekul tersebut serta pola fragmentasin)a (mC. eskipun S ditemukan pada a-al 1533$an dengan ruang lingkup terbatas pada ilmu kimia. Namun, pengembangan electron spra) ioniCation (=S# dan matriks dibantu matriD assisted laser desorption ioniCation (A!"# di tahun 1583 meningkatkan penerapan S untuk analisa molekul biologis )ang besar seperti protein. "alam =S# dan A!"#, peptida diubah men+adi ion, baik dengan penambahan, atau menghilangkan lebih dari satu proton. eduan)a didasarkan pada Eionisasi lunakE )aitu metode di mana pembentukan ion tidak men)ebabkan hilangn)a integritas sampel secara signifikan. A!"#$ %&' S memiliki kelebihan tertentu dibanding =S#$S )aitu (i A!"#$ %&' S menghasilkan ion bermuatan tunggal, sehingga interpretasi data mudah dikomparatif dengan =S#$S, (ii untuk analisis oleh =S#$ S, pemisahan sebelum kromatografi diperlukan sedangkan untuk analisis A!"#$%&' S tidak diperlukan (=erl) et al., 2338. Akibatn)a, dengan bahan proses )ang lengkap dan dengan kecepatan otomatisasi )ang tinggi telah membuat A!"#$%&' massa spektrometer adalah pilihan )ang +elas untuk analisa proteomik pada skala besar (=kstrFm et al., 2333. %A=! 1 G etode deteksi mikroba )ang digunakan dalam mikrobiologi klinik. No etode "eteksi euntungan erugian 1 onensional, kultur Sensitif *roses memakan -aktu pada media mikrobiologi urah )ang pan+ang dan identifikasi dengan ungkin membutuhkan u+i biokimia -aktu 29$98 +am 2 etode berbasis !ebih cepat daripada metode %idak spesifik, sensitif, dan imunologi konensional cepat sebagai dasar "apat mendeteksi organisme metode deteksi nukleat$ acid )ang mencemari dan embutuhkan se+umlah racunn)a besar antigen "ikembangkan han)a untuk se+umlah kecil mikroorganisme 'lorescent in situ "eteksi cepat dan identifikasi /+i dibatasi oleh h)bridiCation ('#S0 langsung dari slide smears ketersediaan antigen @epat dan kemudahan spesifik untuk deteksi penggunaan metode pe-arnaan konensional dikombinasikan dengan kekhususan metode molekuler 9 etode berbasis molekular *embiakan sampel tidak @)cler termal )ang tepat Real$time (i diperlukan sangat dibutuhkan *@R Spesifik, sensitif, cepat, dan pega-ai laboratorium (ii ultipleD$ akurat terlatih diperlukan untuk *@R Sistem tabung tertutup melakukan tes mengurangi risiko kontaminasi "apat mendeteksi patogen secara bersamaan Sequen.urutan "NA sequen 16S r"NA dan 18S "iperlukan pega-ai •
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
r"NA adalah standar utama "apat mengidentifikasi kondisi dan pemilihan mikroorganisme
• •
6
;
ikroarra)
/+i loop$mediated isothermal amplification (!A*
•
•
• •
8
/+i metagenomic
•
Skala sistem pen)aringan besar untuk diagnosis simultan dan deteksi patogen "apat menghasilkan salinan besar "NA dalam -aktu kurang dari satu +am udah digunakan %idak diperlukan peralatan canggih erguna untuk deteksi acak patogen
• •
•
•
•
5
A!"#$%&' S
• • •
•
@epat %epat !ebih murah daripada metode deteksi molekuler dan berbasis imunologi pega-ai laboratorium terlatih tidak diperlukan
•
laboratorium terlatih dan interpretasi soft-are )ang kuat ahal %idak cocok untuk penggunaan klinis rutin ahal pega-ai laboratorium terlatih diperlukan "ikembangkan untuk han)a se+umlah kecil mikroorganisme
"ata akuisisi dan analisis data memakan -aktu pega-ai laboratorium terlatih diperlukan ia)a a-al )ang tinggi dari peralatan A!"#$%&'
MALDI P*)%,)/ "% Me+&&'&()
Sampel )ang akan dianalisis oleh A!"# S disiapkan dengan mencampur atau melapisi dengan larutan energi dari absorben dan sen)a-a organik )ang disebut matriks. etika matriks mengkristal pada pengeringan, sampel )ang terperangkap dalam matriks +uga mengkristal. Sampel dalam matriks otomatis terionisasi dengan sinar laser. "esorpsi dan ionisasi dengan sinar laser menghasilkan ion tunggal terprotonasi dari analit dalam sampel. #on$ion terprotonasi kemudian dipercepat pada fiDed potensial, di mana sampel terpisah satu sama lain atas dasar rasio massa$analit bermuatan (m C. Analit bermuatan kemudian dideteksi dan diukur dengan menggunakan perbedaan +enis analisis massa seperti analisis massa quadrupole, analisa perangkap ion, analisis time of flight (%&' dll. /ntuk aplikasi mikrobiologi analisis massa terutama menggunakan %&'. Selama analisis A!"#$%&', rasio m C dari ion diukur dengan menentukan -aktu )ang diperlukan untuk untuk menghantarkan sepan+ang tabung flight. eberapa analisis %&' menggabungkan cermin ion di bagian belakang tabung flight, )ang berfungsi untuk memantulkan kembali ion melalui tabung flight ke detektor. "engan demikian, cermin ion tidak han)a meningkatkan pan+ang tabung flight, +uga mengoreksi perbedaan$ perbedaan kecil energi antara ion (Hates, 1558. erdasarkan informasi %&', karakteristik spektrum )ang disebut peptide mass Bngerprint (*' dihasilkan untuk menganalisa sampel (
#dentifikasi mikroba dengan A!"#$%&' S dilakukan baik dengan membandingkan *' organisme )ang tidak diketahui dengan *'s terkandung dalam database, atau dengan cara mencocokkan massa biomarker organisme )ang tidak diketahui dengan database proteome. *encocokan *', spektrum S dari isolat mikroba )ang tidak diketahui dibandingkan dengan S spektrum isolat mikroba )ang diketahui dalam database. /ntuk identifikasi mikroba tingkat spesies, digunakan berbagai t)pe massa m C 2$23 k"a, )ang me-akili protein terutama ribosom bersama dengan beberapa turunan protein. *ola karakteristik protein ribosom sangat melimpah, )ang me-akili sekitar 63$;37 dari berat kering sel mikroba, di kisaran massa 2$23 k"a (urra), 2312 digunakan untuk mengidentifikasi mikroorganisme tertentu dengan mencocokkan pola *' dengan *'s protein ribosom )ang terdapat dalam database. "engan demikian dalam ban)ak kasus untuk spesies dan leel strain, identitas mikroorganisme dapat dibentuk ke genus ('agerquist et al.,2313. *endekatan ini ban)ak digunakan dalam identifikasi mikroba karena sederhana dan dapat dengan mudah diadopsi dalam laboratorium diagnostik mikroba, dibantu oleh ketersediaan ban)ak perpustakaan *'s organisme komersial. #dentifikasi mikroba dengan mencocokkan biomarker massa dengan massa molekul protein dengan memperkirakan urutansequen genom tidak populer dilakukan di laboratorium diagnostik mikrobiologi, karena membutuhkan pengetahuan tentang urutansequen genom lengkap dari suatu organisme sebelum prediksi database massa molekul protein bisa dibuat. eskipun, kondisi kultur mungkin memberikan efek fisiologi pada mikroba dan profil ekspresi protein (4elker, 2311 tetapi tidak berpengaruh pada identifikasi mikroba oleh A!"#$ %&' S. >alentine et al. (233 kultur tiga bakteri spesies pada empat media kultur berbeda dan ditemukan identifikasi mikroba dengan kondisi independen kultur oleh A!"#$%&' S. elompok penelitian lain (@arbonnelle et al., 233; +uga melaporkan bah-a kedua kondisi kultur dan -aktu kultur tidak memberi pengaruh pada identifikasi mikroba oleh A!"#$ %&' S. Se+umlah sen)a-a organik telah digunakan sebagai matriks pada A!"#$%&' S tetapi untuk aplikasi mikrobiologi, a$siano$9$h)droD)cinnamic asam (@0@A, 2,$dihidroksi asam benCoat ("0, dan ,$dimetoksi$9$h)droD)cinnamic asam (acid sinapinic paling ban)ak digunakan. !arutan matriks terdiri dari air dan campuran organik pelarut )ang mengandung ethanol methanol atau asetonitril dan asam kuat seperti tri fluoro asam asetat (%'A, )ang melarutkan matriks. *elarut menembus dinding sel mikroorganisme dan ekstrak protein intraseluler keluar. etika pelarut menguap, Ico$kristalisasiI molekul protein dan sen)a-a selular lainn)a terperangkap dalam larutan matriks (0orne ff er et al., 2331. *roses persiapan sampel untuk identifikasi mikroba dengan A!"#$%&' S tergantung pada sumber dari mana terisolasin)a, atau pada sifat kimia dari konstituen pada dinding sel n)a. *eneliti telah mengealuasi perbedaan metode persiapan sampel untuk membedakan kelompok mikroorganisme. eberapa mikroba mungkin diidentifikasi langsung oleh S, )ang disebut profil langsung sel (pro filing, sementara untuk beberapa sel lisat lain atau ekstrak sel mentah harus disiapkan. "alam identifikasi sel secara langsung, koloni tunggal mikroorganisme diambil dan dilihat langsung ke plate sampel dan segera dilapisi dengan larutan matriks. akteri gram negatif seperti Neisseria spp. (#lina et al., 2335, Hersinia spp. (Stephan et al., 2311, dan >ibrio spp. (=ddabra et al., 2312 )ang diidentifikasi oleh A!"#$%&' S menggunakan profil sel langsung. *ersiapan ekstraksi mikroba dengan asam format ('A dikabarkan meningkatkan kemampuan A!"#$%&' S dalam mengidentifikasi spesies
2311.. =kstraksi persiapan mikroba dengan asam format +uga digunakan untuk persiapan sampel spesies bakteri gula$non fermentasi (ellmann et al., 2338 dan Staph)lococcus spp. ("ubois et al., 2313. arena sifat kompleks dari dinding sel aerobik maka actinom)cetes, Nocardia dan m)cobacteria memerlukan prosedur pengolahan khusus sebelum analisis A!"#$%&'. >erroken dkk.(2313 men+elaskan prosedur modifikasi untuk identifikasi dari Nocardia spp. oleh A!"#$ %&' S. akteri dipecah dalam air mendidih, diikuti oleh presipitasi etanol dari protein. *rotein )ang diendapkan, dikeringkan, disuspensi dalam ;37 asam format dan asetonitril dan dianalisis oleh A!"#$%&' S. *ara peneliti telah melaporkan perbedaan metode untuk persiapan sampel untuk identifikasi mikobakteri oleh A!"#$%&' S, mulai dari profil bakteri untuk treatmen dengan asam format, keselamatan men+adi perhatian utama bagi penelitian. =# hKchine et al. (2311 men+elaskan prosedur )ang dikombinasikan inaktiasi dan metode pengolahan. oloni mikrobakteri dikumpulkan dalam tabung secre- )ang mengandung air dan 3,7 %-een 23 )ang diinaktif dengan pemanasan pada suhu 5L@ selama 1 +am. Sampel tidak aktif disentrifugasi dan diorteD dengan kaca beads untuk mengganggu dinding sel mikobakteri, pelet )ang dihasilkan kembali disuspensikan di asam format, asetonitril, dan disentrifugasi lagi. Akhirn)a, supernatan disimpan ke plat target A!"# dan dilapisi dengan matriks. Seperti dalam bakteri, berbagai metode pengolahan sampel telah diselidiki untuk identifikasi ragi oleh A!"#$%&' S, dari mulai ekstraksi persiapan dengan asam format )ang dilaporkan paling cocok (Steenson et al, 2313bJ. %heel et al., 2312. @assagne dkk. (2319 mengealuasi lima metode untuk persiapan sampel untuk hifa +amur dan spora. ereka akhirn)a merancang protokol dimana +amur )ang dibudida)akan pada sabouraud gentamisin$ kloramfenikol agar selama ;2 +am pada suhu 2;M @, diekstraksi dengan asam format berikut inkubasi dalam etanol. Asetonitril ditambahkan, campuran disentrifugasi dan supernatan digunakan untuk analisis A!"#$%&' S. !au dkk. (231 melaporkan metode berdasarkan mekanisme lisis untuk persiapan sampel dari +amur hifa dan spora. Spesimen kecil dari isolat +amur disuspensikan dalam etanol dan Cirkonia$silika beads, di orteD kembali dan disentrifugasi. sampel kembali disuspensi dengan ;37 'A, di orteD kembali, dan disentrifugasi. Supernatan digunakan untuk analisis selan+utn)a oleh A!"#$%&' S. edua metode tersebut dilaporkan memberikan hasil )ang baik dalam studi masing$masing. Analisis sel utuh anggota genus *enicillium menghasilkan sedikit spektrum A!"#, tetapi disuspensi kembali dengan konidia dan spora pada tri fluoroacetic asam$asetonitril dan dikacaukan dengan diskriminasi spesies pada glass beads dengan akurasi 1337 (0ettick et al.,2338a. *enemuan matriks )ang sesuai, penggunaan seluruhsel utuh untuk merekam *' mikroba dalam kisaran massa khas (m C 2$23 k"a, diikuti oleh ketersediaan database )ang didedikasikan untuk identifikasi mikroba telah membuat A!"#$%&' S menguntungkan sebagai alternatif untuk identifikasi mikroba. Hang pertama sistem A!"#$%&' S mampu mengidentifikasi mikroba, disebut EA!"# iot)per Edikembangkan oleh ruker "altonics. A!"# iot)per terdiri dari dasar platform A!"#$%&', operasi analisis dan soft-are, database didalamn)a dan metode )ang sederhana untuk persiapan ekstraksisampel (Seng dkk., 2335. Soft-are dan database )ang terintegrasi dengan mudah dengan instrumen ruker A!"#$%&' dan operasi )ang terkait dan analisis soft-are. Sistem ini +uga memungkinkan untuk gradasi dengan men)ediakan pilihan untuk menambahkan organisme pada perpustakaan internal. Selain itu platform A!"# untuk identifikasi mikroba +uga diperkenalkan oleh ShimadCu beker+asama dengan bioerieuD. ShimadCu men)ediakan instrumentasi dan perangkat lunak analisis E!aunchpad,E sementara bioerieuD men)ediakan dan mempertahankan "atabase terpusat, ESARA#SE )ang bisa terus diperbarui. emudian, Andromas memperkenalkan perbedaan +enis database dan soft-are untuk identifikasi bakteriologis )ang kompatibel dengan kedua ruker dan instrumen ShimadCu (=monet et al., 2313. %erobosan terbesar dalam pengembangan A!"#$%&' S datang dengan persetu+uan peraturan untuk identifikasi bakteri dan +amur di laboratorium mikrobiologi klinis. "alam 2 tahun terakhir, sistem A!"# iot)per @A (ruker "altonics #nc telah disetu+ui oleh /S 'ood dan "rug Administration ('"A untuk identifikasi kultur bakteri dari spesimen manusia (in itro diagnosis. "emikian pula, >#%= R S (bioerieuD #nc telah disetu+ui oleh '"A AS untuk identifikasi kultur bakteri dan ragi (*atel, 231. "aftar mikroorganisme )ang disetu+ui untuk identifikasi untuk sistem unik indiidual (*atel, 231. A!"#$%&' S adalah identifikasi pertama )ang disetu+ui untuk penggunaan klinis di @ina pada tahun 2312 ketika bioerieuD Sistem >#%= S telah disetu+ui oleh '"A Negara @hina untuk tu+uan in itro diagnostik (#>" (!uo et al., 231. emudian, '"A Negara
@hina +uga men)etu+ui Sistem ruker #>" A!"# iot)per untuk identifikasi mikroorganisme )ang diisolasi dari spesimen manusia. "atabase organisme adalah komponen kunci dari platform A!"# komersial. ereka terus meningkat dalam ukuran dan secara teratur diperbarui oleh produsen dengan penemuan spesies mikroba baru dan pen+elasann)a. eduan)a, ruker dan sistem ShimadCu mempun)ai koleksi organisme )ang reperesentatif di database mereka dan menghasilkan hasil positif )ang sebanding, dengan tingkat kesalahan sangat rendah (@arbonnelle et al., 2312. "engan beberapa pengecualian, isolat +arang tidak dapat diidentifikasi oleh perangkat ini. "alam studi identifikasi berbasis A!"#, beberapa organisme tidak bisa diidentifikasi. egagalan ini disebabkan oleh organisme )ang tidak termasuk dalam database a-al karena kesalahan metodologis (@arbonnelle et al., 2312. elemahan penting dari soft-are dan database dengan hak milik adalah aksesibilitas mereka )ang terbatas untuk para peneliti s-asta karena bia)a tinggi. Namun demikian, beberapa kelompok penelitian telah mengembangkan beberapa soft-are open$source dan database )ang tersedia secara bebas untuk mas)arakat ilmiah menggunakan beberapa nama ini, mASS, ass$/p, pk"A@!ASS, A!"#quant, Spectraank, #&S*=AN, dll (Strohalm et al.,2338J Ndukum et al, 2311.J Fhme et al, 2312.J
"iagnosis infeksi bakteri secara konensional pada fluida tubuh dilakukan atas dasar biokimia dan profil metabolik )ang membutuhkan -aktu 29$98 +am untuk mengidentifikasi spesies bakteri. Sementara itu, pasien diberikan antibiotik empiris, )ang kadang$kadang tidak pantas. !aboratorium mikrobiologi klinik membutuhkan metode )ang efektif, cepat dan handal serta bia)a )ang rendah, untuk identifikasi patogen potensial dalam sampel klinis sehingga terapi antimikroba )ang tepat dapat dimulai dari a-al. Se+umlah peneliti telah menun+ukkan bah-a A!"#$%&' S dapat digunakan untuk identifikasi a-al bakteri dalam kultur darah, infeksi saluran kemih (#S, fluida cerebrospinal, infeksi saluran pernapasan, sampel tin+a dll. an)ak penelitian telah menun+ukkan bah-a A!"#$%&' S men)amai atau bahkan melampaui metode diagnostik konensional dalam kecepatan dan akurasi dalam mendeteksi infeksi aliran darah (!a Scola dan Raoult, 2335J Steenson et al, 2313a.J 'oster, 231J 0aigh et al, 231.J %adros dan *etrich, 231. eberapa penelitian men)arankan bah-a tambahan pra$ pera-atan fluida tubuh oleh amonium klorida (*rodIhom et al., 2313, asam format (@hristner et al.,2313, atau inkubasi +angka pendek pada media padat (#deleich et al., 2319 agar lebih ditingkatkan untuk potensi diagnostik A!"#$%&' S. etika metode konensional digunakan untuk mengidentifikasi patogen dari saluran urin dengan diagnosis menggunakan #S dibandingkan dengan A!"#$%& S berdasarkan sistem identifikasi, ditemukan bah-a A!"#$%&' S memerlukan -aktu pemrosesan minimal dan bahkan identifikasi bakteri dari sampel urine didapati lebih dari dua uropathogens ('erreira et al, 2313J.. Fhling et al, 2312J urillo et al., 2319. eberapa peneliti telah men)arankan prosedur )ang melibatkan perbedaan sentrifugasi sampel urin (Rossello et al., 2319 atau di infiltrasi ("emarco dan urnham,2319 untuk lebih meningkatkan sensitiitas klinis dan berdasarkan perputaran saat diagnosis menggunakan A!"#$%&' S #S. "iagnosis infeksi diare di laboratorium biasan)a dilakukan oleh kultur dan identifikasi bakteri dalam sampel tin+a. #ni adalah proses )ang memakan bia)a dan dibutuhkan -aktu $ hari untuk mendeteksi dan mengidentifikasi bakteri patogen enterik. "ia et al. (2313 melakukan studi banding dari identifikasi oleh A!"#$%&' S dibandingkan metode fenotipik biasa untuk identifikasi koloni )ang mencurigakan dari sampel tin+a. ereka menemukan bah-a seluruh prosedur untuk identifikasi oleh A!"#$ %&' S, mulai dari persiapan smear untuk pelaporan hingga hasil final akan selesai dalam -aktu 3 menit, sehingga memperpendek -aktu pen)elesaian tes )ang sebelumn)a 2$ hari. akteri meningitis adalah neurologis darurat. A-al diagnosis sangat penting untuk inisiasi cepat antimikroba untuk terapi )ang tepat. A!"#$%&' S telah digunakan untuk deteksi langsung bakteri pen)ebab meningitis pada fluida cerebrospinal (Sega-a et al.,2319. #ni +uga telah digunakan untuk identifikasi cepat dari atipikal, organisme lingkungan gram negatif dan patogen saluran pernapasan kronis )ang menginfeksi pasien dengan c)stic fibrosis (Alb) et al, 231J.. aillie et al, 231. aru$baru ini, penerapan baru A!"#$%&' S ditun+ukkan oleh
#dentifikasi cepat pada mikroorganisme patogen penting untuk memastikan keamanan dan kualitas air dan produk makanan. A!"#$%&' S telah terbukti berguna untuk deteksi dini baha)a bakteri )ang mungkin mencemari air minum.
%es berdasarkan sifat biokimia biasan)a gagal untuk mengidentifikasi mikroba )ang diisolasi dari sampel lingkungan, karena keragaman mikroba di habitat ini sangat besar (%orsik et al., 2332. erbagai penelitian telah menun+ukkan bah-a seluruh sel A!"#$%&' S dapat digunakan sebagai alat )ang efisien untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi isolat )ang berasal dari ekosistem spesifik. *ara peneliti telah melaporkan penggunaan A!"#$%&' S dalam identifikasi mikroba )ang diisolasi dari lumpur limbah (Ruelle et al., 2339, untuk pengelompokan bakteri )ang diisolasi dari spons laut ke dalam kelompok proteotaDanomic ("ieckmann et al., 233 dan untuk mengidentifikasi bakteri )ang mendiami tanah )ang terkontaminasi oleh pol)chlorinated biphen)l (/hlik et al., 2311. elompok penelitian lain melakukan analisis S A!"#$%&' )ang diolah dari fraksi sampel lingkungan. ereka memperoleh regangan$spesifik spektrum )ang membantu dalam pengelompokan aerobik dan halofilik prokariota ke dalam kelompok fenotipik dengan taksa )ang berbeda. ereka men)arankan bah-a, +ika perbedaan kondisi kultur )ang tidak radikal, terlepas dari usia atau kualitas kultur, S mencerminkan ulang spektrum mikroba dengan takson spesifik dan di+amin menghasilkan identifikasi sifat fenotip (unoC et al., 2311. "alam studi lain A!"#$%&' S digunakan untuk membedakan spesies bakteri dari keluarga RhiCobiaceae dan membagin)a dalam tiga generasi, spesies bakteri ini membentuk simbiosis atau interaksi saproph)tic dengan kelompok tanaman. "atabase dibuat bagi )ang termasuk t)pe strain spesies ini dan dialidasi dengan mengidentifikasi semua strain rhiCobial )ang diisolasi dari nodul dan tumor ('erreira et al., 2311. De+e$,) "% Ie%+).)$",) A(e% Pe*"%( B)&'&()
#dentifikasi mikroba )ang cepat dan handal diperlukan sebagai agen bioterorisme )ang menimbulkan ancaman, tidak han)a untuk memerangi serangan biologis, tetapi +uga untuk mencegah -abah alam )ang disebabkan oleh organisme ini. Secara konensional, organisme )ang menimbulkan ancaman )ang berat sebagai agen bioterorisme telah diidentifikasi oleh fenot)pe, genot)pe, dan identifikasi sistem imunologi )ang lambat, rumit dan menimbulkan risiko )ang signifikan untuk personil laboratorium. aru$baru ini berbagai peneliti melaporkan A!"#$%&' S sebagai pendekatan sederhana, cepat dan dapat diandalkan untuk mengidentifikasi organisme )ang sangat patogen seperti rucella spp, @oDiella burnetii, acillus anthracis, 'rancisella tularensis, dan H. pestis (Sha- et al, 2339J.. *ierce dkk ., 233;J !asch et al, 2335J.. A))adurai et al, 2313J. Seibold et al, 2313J. !ista et al, 2311J. >ranakis et al, 231.
*eker+aan lebih lan+ut sedang dilakukan untuk mengembangkan S$protokol )ang aman dan kompatibel untuk inaktiasi sel egetatif dan organisme spora )ang sangat patogen, )ang dapat diintegrasikan ke laboratorium mikrobiologi. !asch dkk. (2338 mengusulkan tri fluoro asam asetat (%'A berdasarkan inaktiasi protokol untuk sel egetatif dan spora dari organisme patogen, tapi @ouderc dkk. (2312 menemukan bah-a untuk isolat Hersinia, inaktiasi menggunakan etanol secara signifikan menghasilkan spektrum A!"#$%&' S dengan kualitas tinggi dari inaktiasi %'A. :eong et al. (2319 melaporkan langsung pada situs A!"#$ %&' S )ang memungkinkan mendeteksi +umlah bahan )ang tinggi dan identifikasi dari acillus aerosol spora, tanpa proses pre treatment. Spora dari acillus spp. langsung terlihat pada plate target A!"# dan plate kiri untuk udara$pengeringan, sampel kemudian dilapisi dengan larutan matriks. Setelah larutan matriks udara kering, maka sampel akan terlihat dan dianalisis oleh S (:eong et al., 231, 2319. A!"#$%&' S +uga telah terbukti berguna untuk deteksi toksin protein, seperti enterotoksin staph)lococcal , neurotoksin botulinum, @lostridium perfringens epsilon toksin, toksin shiga dll )ang dapat digunakan sebagai agen potensial untuk bioterorisme saat dikirim melalui rute aerosol (. ull et al, 2313J Alam et al, 2312.. "alam perang biologis deteksi racun dari aerosol diperlukan untuk memulai penanggulangan medis. Alam dkk. (2312 mengembangkan metode sederhana pengolahan sampel untuk identifikasi protein racun dengan metode A!"#$%&'%&' S. NebuliCer digunakan untuk menghasilkan aerosol )ang dikumpulkan menggunakan kolektor siklon. "ata S tandem dengan informasi dari urutan peptida digunakan untuk mendeteksi racun )ang berasal dari organisme dari setiap lokasi geografis. De+e$,) Re,),+e%,) A%+))&+)$ /"" B"$+e*)
A!"#$%&' S telah menun+ukan hasil file *"' )ang mampu membedakan garis keturunan dari methicillin$resistant S. aureus strain (4olters et al., 2311. "alam kondisi eksperimental )ang hati$hati, telah menun+ukan subt)ping )ang berguna untuk methicillin resistant strain S. aureus (@roDatto et al., 2312. "emikian pula, A!"#$%&' S telah terbukti sangat bermanfaat dalam mengidentifikasi ankomisin )ang tahan terhadap enterococci (
urutan peptida biomarker untuk beberapa kelas P$laktamase seperti kelompok @%Q$$1 memperpan+ang spektrum P$laktamase, P$laktamase %=, ># sebuah etallo$P$laktamase dan @H$2 sebuah P$ amp@ laktamase. Selain menggunakan pendekatan ini mereka +uga mendeteksi peptida spesifik aminoglikosida untuk memodifikasi enCim an$R. irip dengan beta$laktam, resistensi mikroorganisme untuk aminoglikosida terutama karena modifikasi enCimatik antibiotik oleh bakteri ac)ltransferases, aden)ltransferase, dan phosphotransferases. Se+ak enCim ini menun+ukkan perbedaan istime-a untuk substrat @oA pada aminoglikosida, belum memungkinkan untuk membangun pengu+ian men)eluruh untuk mendeteksi resistensi aminoglikosida berbasis S. Selan+utn)a upa)a untuk mengembangkan dan standarisasi A!"#$%&' S untuk deteksi resistensi aminoglikosida di laboratorium masih berlangsung. T"$,&%&) "% T3/e S+*")% B"$+e*)
lasifikasi konensional bakteri telah dilakukan pada biokimia dasar, metabolisme dan sifat antigenik. Namun, spesies mikroba diidentifikasi terutama atas dasar informasi genomik. Sequencing dari 16Sr "NA dianggap sebagai Istandar emas,I karena itu hadir dalam setiap prokariota dan memungkinkan rekonstruksi dari filogeni global (4oese et al, 1553J. Stacke randt dan
A!"#$%&' S tidak han)a digunakan untuk identifikasi spesies namun +uga memiliki aplikasi dalam t)pe strain. umar et al. (2339 menun+ukan bah-a A!"#$%&' S mungkin men+adi alat )ang berguna untuk membedakan strain beta hemolitik streptokokus, dan +uga untuk karakterisasi strain unt)pable kelompok streptokokus A. =ddabra dkk. (2312 menggunakan A!"#$%&' S untuk membedakan 3 strain lingkungan >ibrio spp. Stephan et al. (2311 menggunakan A!"#$%&' S untuk identifikasi cepat strain spesies dari H. =nterocolitica, dan subt)ping ke tingkat biot)pe. etode A!"# berdasarkan %&' S telah men+elaskan diskriminasi dan strain mikobakteri, t)pe resisten dan t)pe strain . pneumonia, )ang bertanggung +a-ab atas -abah nosokomial A. baumannii (Shitiko et al, 2312J. erraCeg et al, 231.J encacci et al., 231. Spektrum A!"#$%&' S pada indiidu mikroba adalah takson properti $ spesifik organisme )ang independen dari lokasi geografisn)a, kondisi kultur (harus tidak ada perbedaan )ang drastis atau metodologi persiapan sampel. "engan pendekatan ini, identifikasi tidak han)a bagi anggota spesies isolat baru )ang ada tetapi mungkin +ika +enis strain mereka sebelumn)a telah dipela+ari (Ruelle et al., 2339, pengakuan pola fenotipik koheren mungkin +uga mencerminkan kembali identitas taksonomi. emudahan dan kecepatan dalam identifikasi dari se+umlah besar isolat dapat digunakan untuk mempela+ari taksonomi dan keragaman spesifik luar dan dalam ('eli dan "allaglio, 233;. MALDI-TOF MS /"" V)*&'&() V)*&'&() $')%),
>irus secara tradisional terdeteksi oleh kultur sel, )ang meskipun men+adi standar emas, sering embutuhkan -aktu beberapa hari atau bahkan minggu sebelum hasil apapun tersedia. #a kemudian diganti atau dilengkapi dengan metode imunologi dengan tingkat sensitif lebih rendah, berdasarkan analisis antibodi (oleh immunoassa) atau immuno fluorescence dan dengan metode molekuler berdasarkan *@R dan hibridisasi dot blot )ang lebih sensitif. *enggunaan A!"#$%&' S dalam irologi sudah ma+u seperti )ang telah dilakukan pada bakteriologi atau mikologi. #ni mungkin men+adi konsekuensi dari kandungan protein irus )ang relatif rendah (liem dan Sauer, 2312, bobot molekul protein irus )ang lebih tinggi ( 23.333 "a dan kemungkinan akumulasi larutan dari substrat sel di mana irus )ang dikultur secara in itro. Namun demikian, ban)ak peneliti telah membuktikan kegunaan A!"#$%&' S untuk diagnosis berbagai irus menular dalam sampel klinis seperti dalam irus influenCa, enteroirus, papillomairuses manusia (0*>, irus herpes, hepatitis irus dll (S+Fholm et al, 2338J. Hi . et al, 2311J *iao et al, 2312. enarikn)a di sebagian besar penelitian, analisa materi genetik irus itu dianalisis oleh *@R dan diperkuat dengan identifikasi oleh A!"#. S+Fholm dkk. (2338 mengembangkan metode skrining efisien berdasarkan A!"#$%&' S untuk deteksi multipleks dari semua irus herpes manusia )ang hadir dalam sampel biologis dibandingkan dengan data arsip. Sensitiitas dan batas deteksi irus dengan metode A!"#$%&' S tinggi dan sebanding
dengan metode referensi seperti microarra) oligonukleotida dan *@R multipleks (S+Fholm et al.,2338. Hi et al. (2311 melaporkan penggunaan metode berbasis *@R S untuk mendeteksi 0*> berisiko tinggi, pen)ebab utama dari kanker seriks pada manusia. ereka mengklaim bah-a bahan proses tinggi dan efektifitas bia)a terkait dengan metode )ang membuatn)a cocok untuk diagnosis dalam pengaturan klinis rutin dan untuk studi epidemiologi. *iao et al. (2312 menggabungkan *@R multipleks dengan A!"#$%&' S dan mengembangkan u+i *@R$assa )ang bersamaan mendeteksi delapan irus )ang berbeda terkait dengan infeksi enterik pada manusia. emudian, *eng et al. (231 membuktikan utilitas multipleDing A!"#$ %&' untuk mendeteksi +enis$spesifik enteroirus manusia )ang berhubungan dengan pen)akit tangan, kaki dan mulut. aru$baru ini, @alderaro dkk. (2319 men)atakan bah-a A!"#$ %&' S adalah alat )ang efektif, cepat dan murah untuk mengidentifikasi berbagai serot)pe irus polio dari perbedaan sampel klinis. !ebih lan+ut mereka melaporkan bah-a A!"#$%&' S, melalui biomarker spesifik irus dapat membantu mendeteksi dan membedakan antara sel )ang terinfeksi irus dan sel$sel )ang sehat. V)*"' (e%&+3/e4 S!+3/)%(4 "% S+!) e/)e)&'&()
%erlepas dari identifikasi irus, A!"#$%&' S +uga telah digunakan dalam irologi untuk genotip dari :@ pol)omairuses (a)liss et al, 2313., 0epatitis dan irus hepatitis @ (#lina et al, 233J..
Studi mengeni hal ini adalah langka. Namun, A!"#$%&' S telah membuktikan keampuhan dalam mendeteksi resistensi obat untuk gansikloir pada c)tomegaloiruses )ang sering menginfeksi penerima transplantasi (Trcher et al., 2312. MALDI-TOF MS /"" M)$&'&() M)$&'&() $')%),
etode konensional untuk identifikasi +amur didasarkan pada sifat morfologi, biokimia, dan imunologi mungkin membutuhkan rentang -aktu 2$ hari, atau lebih, dan sering membutuhkan penggabungan beberapa metode fenotipik untuk interpretasi konklusif. etode molekuler berdasarkan analisis internal dan gen pen)andi 18S rRNA ditulis spacer -ila)ah 1 dan atau 2 (#%S 12 )ang membosankan dan memakan ban)ak -aktu (Sendid et al., 231. identifikasi cepat dan akurat spesies +amur diperlukan untuk inisiasi a-al terapi anti +amur. #dentifikasi +amur oleh A!"#$%&' S dalam laboratorium medis mikologi telah bergerak pada kecepatan )ang lebih lambat untuk identifikasi bakteri, arena kompleksitas biologis mereka )ang membuat sulit untuk mempela+ari mereka secara keseluruhan, dan +uga karena keberadaan perbedaan fenotipe +amur (h)phae danatau conidia dalam organisme )ang sama (Santos et al., 2313. /ntuk mendapatkan hasil *' , maka direproduksi parameter seperti media kultur, kuantitas +enis bahan koloni dan -aktu inkubasi, sesuai standar prosedur. :uga,
sel$sel +amur mungkin memerlukan pengobatan tambahan dengan asam format, atau asetonitril bersama aliran darah untuk mengganggu dinding sel )ang kuat. Studi pertama )ang men+elaskan penggunaan A!"#$%&' S untuk identifikasi dan karakterisasi +amur bersel tunggal, Saccharom)ces cereisiae dilaporkan oleh Amiri$=liasi dan
'enselau (2331. "i antara +amur, spektrum *' telah direproduksi dan dilaporkan untuk ascom)cetous dan basidiom)cetous ragi termasuk organisme seperti @andida, @r)ptococcus, dan *ichia.
#dentifikasi prediksi untuk anti +amur oleh A!"#$ %&' S belum ma+u seban)ak seperti dalam memprediksi resistensi pada bakteri. #ni mungkin disebabkan fakta bah-a resistensi antim)cotic pada +amur tidak sesering pada bakteri karena tidak adan)a obat untuk menurunkan enCim. 0an)a beberapa spesies +amur seperti @.glabrata atau @.krusei dan @.parapsilosis telah dilaporkan masing$masing secara intrinsik resisten terhadap aColes dan echinocandins (ader, 231. "emikian pula, resistensi spesies spesifik untuk agen antim)cotic diamati pada +amur dan C)gom)cetes (*faller et al, 2332J.. Alastrue)$#Cquierdo et al, 2313. "engan demikian, resistensi obat pada isolat +amur dapat diprediksi han)a dengan identifikasi pada spesies +amur oleh A!"#$%&' S (ader,231. J"!* T3/e S+*")% "% T"$,&%&)
*enggunaan A!"#$%&' S untuk t)pe strain dari isolat +amur masih dalam masa percobaan dan tidak sesukses pada bakteri. erbeda dengan ragi t)pe +amur lebih sulit karena mereka memiliki hubungan filogenetik rumit (Samson dan >arga, 2335 dan morfologi lebih rumit. agaimanapun, metode A!"#$%&' S, dilaporkan la)ak untuk +enis t)pe strain dengan @. albicans dan @. parapsilosis (Uian et al, 2338J. *ulcrano et al,.2312. Pe*,/e$+). "," e/"%
eskipun upa)a S berdasarkan identifikasi bakteri dan diagnosis mikrobiologi dari pertengahan 15;3$an hingga dalam beberapa tahun terakhir, tetapi telah disadari potensi dan penerapan A!"#$%&' S di laboratorium mikrobiologi. Standar emas 16S rRNA$18S rRNA saat identifikasi mikroba dan sequencing gen tidak menguntungkan dari segi bia)a dan -aktu. iCCini dkk. (2311 men)atakan bah-a termasuk bia)a bahan habis pakai, ga+i, dan depresiasi aparat, identifikasi dari isolat bakteri tunggal dengan 16S rRNA sequencing +ika dihitung
bia)an)a sekitar 133 dolar AS di laboratorium mereka dan hasil tersedia setelah 98 +am. "i sisi lain identifikasi dari isolat bakteri tunggal dengan A!"#$%&' S dapat dilakukan dalam hitungan menit dan +ika dihitung bia)an)a han)a beberapa dolar AS (Seng et al, 2335J.. @herkaoui et al, 2313. *erbandingan isolat *' diketahui untuk referensi fingerprinting massa )ang ada dalam database adalah langkah paling penting untuk identifikasi spesies )ang membutuhkan database )ang berisi tidak han)a referensi fingerprinting massa dari semua spesies, tetapi +uga fingerprinting massa beberapa strain masing$masing spesies (!artigue et al., 2335. %eknologi A!"#$%&' S gagal untuk membedakan =. coli dan Shigella spp. (iCCini et al., 2313 atau membedakan antara spesies kompleks S.mitis dari Streptococcus (Seng et al, 2335J. >an >een et al, 2313.. egagalan sebelumn)a telah di+elaskan oleh fakta bah-a =. coli dan Shigella adalah salah satu spesies filogenetis namun karena kendala se+arah dan klinis mikrobiologi telah dikelompokkan men+adi dua spesies. Alasan untuk deliniasi )ang tidak tepat dari S. pneumoniae dan S. mitis adalah hubungan erat antara dua spesies (kendala mikrobiologi )ang tidak dapat dibedakan oleh update database, kecuali tes seperti sensitiitas optochin atau kelarutan empedu (ilian et al., 2338 . endala A!"#$%&' S seperti itu tentu perlu ditangani di masa depan. endala utama tidak menggunakan A!"#$%&' S untuk diagnosis mikrobiologis rutin adalah reproduksibilitas *'s dari spesies mikroba )ang sama selama percobaan di laboratorium )ang sama atau selama percobaan pada laboratorium )ang menggunakan peralatan )ang samaA!"#$ %&'. Studi reproduktifitas intra$laboratorium telah menun+ukkan konkordansi tingkat )ang lebih tinggi pada *'s selama pengulangan percobaan dengan peralatan S )ang sama menggunakan teknik persiapan sampel se+enis (4alker et al., 2332. Studi lain melaporkan bah-a reproduktifitas intra$laboratorium *'s tergantung han)a pada kualitas sampel mikroba dan teknik independen persiapan sampel (@roDatto et al., 2312. Namun, mempela+ari tentang reproduksibilitas *'s antar laboratorium penelitian telah menghasilkan hasil )ang saling bertentangan. "ua studi penelitian independen menun+ukkan tingkat reproduktifitas mikroorganisme identik *'s )ang lebih tinggi, diidentifikasi di laboratorium terpisah menggunakan persiapan sampel dengan teknik )ang sama, peralatan S )ang sama dan perangkat lunak analisis )ang sama (4ang et al, 1558J.. 4alker et al, 2332. "i sisi lain, studi antar laboratorium lain melaporkan konkordansi rendah selama analisis A!"#$ %&' dari aliquot identik =. @oli oleh tiga laboratorium terpisah menggunakan teknik persiapan sampel )ang sama, tapi terdapat perbedaan peralatan A!"#$%&' komersial (4unschel et al., 233. elompok riset ini lebih lan+ut menggabungkan spektrum *' pada laboratorium indiidu dan membentuk beberapa master laboratorium *'. *ada beberapa laboratorium master spektrum *' digunakan untuk mengidentifikasi =. coli, identifikasi diamati 133 persen pada setiap laboratorium (4unschel et al., 233. "engan demikian, studi ini memberikan solusi )ang sangat penting untuk pertan)aan mengenai potensi A!"#$%&' S untuk perbedaan identifikasi mikroba, perbedaan lokasi geografis dan dengan perbedaan peralatan A!"#$%&'. "engan menggunakan protokol standar untuk analisis A!"#$%&' S dan menciptakan sebuah perpustakaandatabase )ang berisi *'s dari beberapa laboratorium (dengan perbedaan peralatan A!"#$%&', kendala ini bisa diatasi dengan mudah. "alam beberapa tahun terakhir telah muncul se+umlah informasi besar tentang A!"#$ %&' S dan aplikasin)a untuk spektrum )ang luas terhadap mikroba mulai dari bakteri gram positif dan gram negatif, dari sampel klinis untuk halophiles ekstrim dan dari organisme S!$ untuk isolat lingkungan. Alam !uar dunia mikroba, studi terbaru menun+ukkan bah-a A!"#$ %&' S bahkan dapat diterapkan untuk mengidentifikasi alga (on ergen et al., 2335, n)amuk (Hssouf et al., 2319, nematoda (*erera . et al, 233, dan serangga ('eltens et al, 2313J. 0oppenheit et al., 231. ebebasan kondisi kultur, formulasi kultur, -aktu kultur, +umlah inokulum )ang dibutuhkan untuk identifikasi, telah membuat A!"#$%&' S sebagai teknik pilihan di laboratorium mikrobiologi. etentuan untuk mengintegrasikan database )ang dibangun dalam database publik A!"#$%&' S, serta pengembangan soft-are denga bia)a murah serta dengan penggunaan )ang mudah untuk perbandingan dan analisis akan lebih meningkatkan kredibilitas A!"#$%&' S di masa depan. Apa )ang tampak berlebihan kadang$kadang kini telah kembali men+adi realitas. A!"#$%&' S telah men+adi alat )ang berharga untuk laboratorium mikrobiologi, )ang berpotensi menggantikan teknik identifikasi molekuler dalam -aktu dekat.
