I.
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Seiring berkembangnya teknologi, maka pengolahan resin yang berasal dari lebah pun menjadi lebih unggul yaitu diproses menjadi propolis yang memiliki banyak keunggulan, yaitu sebagai obat mata, obat anti ketombe, dan lainnya. Propolis adalah campuran sejumlah lilin lebah dan resin yang dikumpulkan oleh lebah madu dari tanaman, terutama dari bunga dan kuncup daun. Lebah membawa resin pelindung bunga dan tunas daun dengan menggunakan rahang mereka dan membawanya ke sarang dalam bentuk seperti pelet serbuk sari pada kaki belakang lebah. Propolis dapat dikomersialisasikan menjadi produk yang bernilai dengan harga penjualan yang terjangkau. Penggunaan propolis dapat mengurangi kemungkinan infeksi pada anak-anak dan pertumbuhan bakteri dalam jaringan hewan mati, sehingga masyarakat senang menggunakan produk propolis, Selain dari harga yang terjangkau, manfaat dari propolis itu sendiri sangat efektif bagi penyakit dan juga bentuk kemasannya yang mudah dibawa kemana saja.
B.
Tujuan Kegiatan
Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mempelajari dan mengetahui proses pembuatan propolis hingga pemasaran yang dilakukan.
1
II.
PROSES PRODUKSI
A. Bahan Baku
Propolis diolah dapat digunakan dalam bentuk bongkahan, atau mungkin dibekukan dan dipatahkan atau butiran bubuk halus. Potongan besar propolis murni dapat dikunyah, tetapi hanya dapat dikonsumsi dalam jumlah kecil, karena dapat menyebabkan gangguan perut. Potongan kecil dan bubuk dapat dikemas dalam kapsul atau dicampur dengan makanan atau minuman. Persyaratan dasar untuk pengolahan skala kecil adalah botol kapasitas besar yang dapat tertutup rapat, skala (lebih sensitif jika bekerja dengan jumlah yang lebih kecil) dan saringan (kertas filter khusus, beberapa lapisan kain katun yang bersih atau bola kapas). Sebuah kulkas atau freezer dibutuhkan, tetapi tidak penting. Sebuah sumber panas diperlukan untuk menguapkan pelarut tetapi lebih baik menggunakan peralatan distilasi, pengering vakum atau pembekuan kering.
B. Teknologi Produksi 1. Cairan Ekstrak
Sebagian besar penggunaan propolis secara komersial didasarkan pada persiapan yang dibuat dari cairan ekstrak primer. Bahan baku jarang sesuai untuk dimasukkan langsung dalam produk akhir. Demikian pula, dalam penggunakan skala yang paling pribadi atau kecil, propolis mentah biasanya mengalami perlakuan dengan pelarut dan hanya digunakan ekstrak yang dihasilkan. Berbagai jenis pelarut organik dapat digunakan, tetapi hanya sedikit yang tidak beracun dan dapat digunakan dengan aman untuk aplikasi internal dan eksternal pada manusia dan hewan. Yang paling umum digunakan adalah etanol. Seorang apoteker berpengetahuan atau apotik kosmetik dapat memilih beberapa pelarut non-toksik lainnya untuk aplikasi khusus. Sebagai contoh, pengurangan atau penghapusan pelarut diperlukan dan (pada skala industri) oleh lyophilization, (pengeringan beku) atau distilasi vakum, serta (dalam skala kecil produksi) oleh penguapan atau distilasi. Aditif dan tablet
Propolis atau ekstrak yang dapat diambil dengan, atau digunakan sebagai aditif untuk persiapan obat, dietetik dan kosmetik lainnya. Ekstrak etanol dapat langsung 2
II.
PROSES PRODUKSI
A. Bahan Baku
Propolis diolah dapat digunakan dalam bentuk bongkahan, atau mungkin dibekukan dan dipatahkan atau butiran bubuk halus. Potongan besar propolis murni dapat dikunyah, tetapi hanya dapat dikonsumsi dalam jumlah kecil, karena dapat menyebabkan gangguan perut. Potongan kecil dan bubuk dapat dikemas dalam kapsul atau dicampur dengan makanan atau minuman. Persyaratan dasar untuk pengolahan skala kecil adalah botol kapasitas besar yang dapat tertutup rapat, skala (lebih sensitif jika bekerja dengan jumlah yang lebih kecil) dan saringan (kertas filter khusus, beberapa lapisan kain katun yang bersih atau bola kapas). Sebuah kulkas atau freezer dibutuhkan, tetapi tidak penting. Sebuah sumber panas diperlukan untuk menguapkan pelarut tetapi lebih baik menggunakan peralatan distilasi, pengering vakum atau pembekuan kering.
B. Teknologi Produksi 1. Cairan Ekstrak
Sebagian besar penggunaan propolis secara komersial didasarkan pada persiapan yang dibuat dari cairan ekstrak primer. Bahan baku jarang sesuai untuk dimasukkan langsung dalam produk akhir. Demikian pula, dalam penggunakan skala yang paling pribadi atau kecil, propolis mentah biasanya mengalami perlakuan dengan pelarut dan hanya digunakan ekstrak yang dihasilkan. Berbagai jenis pelarut organik dapat digunakan, tetapi hanya sedikit yang tidak beracun dan dapat digunakan dengan aman untuk aplikasi internal dan eksternal pada manusia dan hewan. Yang paling umum digunakan adalah etanol. Seorang apoteker berpengetahuan atau apotik kosmetik dapat memilih beberapa pelarut non-toksik lainnya untuk aplikasi khusus. Sebagai contoh, pengurangan atau penghapusan pelarut diperlukan dan (pada skala industri) oleh lyophilization, (pengeringan beku) atau distilasi vakum, serta (dalam skala kecil produksi) oleh penguapan atau distilasi. Aditif dan tablet
Propolis atau ekstrak yang dapat diambil dengan, atau digunakan sebagai aditif untuk persiapan obat, dietetik dan kosmetik lainnya. Ekstrak etanol dapat langsung 2
dicampur dengan sejumlah besar makanan, obat-obatan atau kosmetik. Ekstrak cair (air) atau glikol jarang digunakan. Pasta ekstrak propolis dengan mudah dapat dimasukkan dalam tablet atau permen (pemanis). Injeksi
Untuk tujuan percobaan pada hewan, ekstrak istimewa dari propolis disuntikkan secara subkutan atau intramuskular. Hasil menunjukkan positif dan nantinya injeksi ekstrak bagi manusia menjadi layak untuk dilakukan.
2. Metode Ekstraksi
Terdapat beberapa metode ekstraksi dasar yang dapat divariasikan dengan menggunakan pelarut yang berbeda. Pemilihan pelarut tergantung pada penggunaan akhir dari ekstrak dan kelayakan teknis. Bahan yang paling aktif sepertinya akan larut dalam propilen glikol dan etanol. Sedikit bahan adalah merupakan bahan yang larut dalam air, tetapi bahkan ekstrak air menunjukkan setidaknya beberapa efek bakterisida dan fungisida, serta sifat penyembuhan luka. Ekstrak aseton telah digunakan untuk produksi shampoo dan lotion . Bahan kimia tertentu atau kelompok kimia dan efek biologisnya lebih mudah dipahami, ekstrak lebih baik dan lebih spesifik, dan dapat disiapkan untuk aplikasi sejenis yang spesifik. Aksi antimikroba ekstrak alkohol dipengaruhi oleh metode ekstraksi, misalnya durasi periode perendaman atau jumlah pemanasan Konsentrasi alkohol yang digunakan dan sifat pengadukan selama ekstraksi tampaknya kurang berpengaruh (Obreg6n dan Rojas, 1990). Debuyser (1984) melaporan bahwa ekstraksi dengan larutan 70% alkohol merupakan yang paling aktif, tanpa menyebutkan apa jenis aktivitas yang dimaksud. Secara umum, dapat dikatakan bahwa semakin lama propolis yang direndam dalam alkohol, semakin banyak bahan yang dapat dilarutkan. Namun, perendaman lebih dari dua atau tiga minggu tidak meningkatkan tingkat ekstraksi. Dalam literatur ilmiah dan non-ilmiah sejenis, metode untuk menentukan konsentrasi ekstrak propolis tidak selalu spesifik. Sebuah metode ilmiah harus mempertimbangkan rasio berat kering materi terlarut dengan berat pelarut (A) atau menghitung ppm (bagian per juta) dari bahan aktif. Namun, cara yang lebih praktis adalah menggunakan rasio (berat) dari keseluruhan propolis yang ditambahkan ke dalam pelarut dengan berat pelarut (B). Metode yang terakhir ini tentu kurang tepat, 3
karena pelarutan tidak lengkap dari propolis, dan konsentrasi final sehingga sangat tergantung pada metode ekstraksi, pelarut dan kualitas propolis tersebut. Jadi, untuk standardisasi, selain konsentrasi, diperlukan deskripsi mengenai pelarut, suhu dan durasi ekstraksi. Namun, metode praktis (B) menghasilkan bahan kurang aktif untuk konsentrasi yang sama ditentukan menurut ukuran konsentrasi ilmiah (A). Standardisasi juga memerlukan parameter terukur untuk control, sebagai contoh senyawa yang stabil tertentu yang diambil dalam proporsi yang sama dengan konsentrasi total bahan aktif. Suatu standardisasi kuantitatif diperlukan untuk komersialisasi nantinya dari propolis dan ekstraknya. Lima dan sepuluh persen larutan menggunakan metode kedua (B) yaitu rasio total berat propolis dengan berat pelarut, yang paling sering digunakan dalam produksi skala kecil. Namun, berat alkohol diasumsikan sama dengan air, yaitu 1 ml alkohol diasumsikan untuk menimbang 1 g. Berat etanol absolut diperkiraan kurang dari 20% dari volume air yang sama. Perbedaan berat juga dapat mengakibatkan perbedaan besar dalam konsentrasi bahan aktif. Untungnya, ketepatan dosis dari propolis umumnya tidak penting. Namun, komersialisasi mengharuskan penggunaan nilai ukuran yang tepat. Belum terdapat keseragaman dalam aplikasi kosmetik, karena banyak resep didasarkan pada ekstrak propolis pasta dan lainnya pada cairan ekstrak pada berbagai konsentrasi. Namun pada aplikasi dalam kosmetik, mengandung tidak lebih dari 1% ekstrak propolis pilihan yang artinya paling sedikit terdapat 0,05% sampai 0,06% bahan aktif. Beberapa metode ekstraksi untuk penggunaan propolis secara komersial akan dijelaskan di bawah ini. Pelarut tambahan mungkin digunakan untuk mengekstrak komponen khusus. Obat dan proses teknologi makanan atau studi yang hampir selalu dilakukan adalah dengan menggunakan etanol atau aqueous extracts. Ekstrak glikol merupakan bahan yang praktis untuk aplikasi kosmetik, karena meningkatkan kelarutan dalam emulsi berbasis air.
3. Preuaration untuk ekstraksi
Persiapan propolis dengan membuang kotoran kasar dan lilin yang berlebihan. Kemudian, dipecah-pecah menjadi potongan-potongan kecil atau ditumbuk sampai menjadi bubuk halus. Jika propolis terlalu liat untuk dipatahkan, maka propolis harus disimpan terlebih dahulu dalam lemari es atau freezer selama beberapa jam. 4
Alternatif lainnya adalah dengan menarik potongan menjadi lembaran tipis atau strip untuk meningkatkan permukaan kontak antara propolis dan alcohol guna pelarutan. Pilihan pelarut yang benar sangat penting jika produk akan digunakan untuk konsumsi manusia. Biasanya, hanya etanol atau glikol yang digunakan. Alkohol lain dapat digunakan hanya jika interaksi fisiologis internal dan eksternalnya telah diketahui dengan pasti dan aman. Pada denaturasi, rubbing atau metil alkohol tidak boleh digunakan. Jika ekstrak dimaksudkan hanya untuk aplikasi eksternal, maka alkohol dapat digunakan, namun negara-negara yang berbeda menggunakan bahan kimia yang berbeda untuk membuat alkohol murni yang lezat untuk minum atau untuk konsumsi internal. Demikian pula, terdapat berbagai jenis alkohol terdenaturasi untuk tujuan yang agar bahan kimia yang digunakan untuk denaturasi itu kompatibel dengan penggunaan akhir yang direncanakan. Bahan kimia yang ditambahkan ke alkohol terdenaturasi dapat berinteraksi negatif dengan bahan lain sehingga mengurangi manfaatnya dan dapat menyebabkan iritasi, luka bakar atau bahkan keracunan. Terdapat kecelakaan fatal yang disebabkan oleh ekstrak propolis yang dibuat dengan menggunakan alkohol tidak sesuai. Untuk sejumlah besar tahapan persiapan yang ditujukan untuk penggunaan internal, gin, rum, cachasa, arak, dapat digunakan cairan distilasi lokal. Cairan ini biasanya mengandung kurang dari 70% alkohol, tetapi untuk keperluan rumah tangga, propolis dapat memberikan hasil yang dapat diterima. Namun, untuk produk komersial berkualitas tinggi, terutama untuk kosmetik atau obat-obatan, kualitas laboratorium tingkat tinggi atau minuman alkohol (etanol) harus digunakan. Etanol 70% telah memberikan hasil terbaik dalam beberapa penelitian yang menguji ekstrak propolis untuk mengetahui efek bakterisida dan fungisidanya. Alkohol dengan konsentrasi yang berbeda mengekstrak senyawa yang berbeda dan mempengaruhi kelarutan ekstrak kering. Dengan demikian, ekstrak dibuat dengan konsentrasi alkohol yang lebih tinggi, sehingga ketika dikeringkan, secara dominan larut dalam pelarut organik dan minyak. Tetapi, ekstrak kering dari ekstraksi dengan konsentrasi etanol yang sangat rendah jauh lebih larut dalam air. Sosnowski (1984) dalam permohonan patennya menjelaskan bahwa filtrat ekstrak kering yang terbuat dari 10-25% alkohol merupakan ekstrak kering yang benar-benar larut dalam air. 5
Pada beberapa negar, hukum khusus berlaku untuk pembuatan produk yang mengandung alkohol.. Untuk produksi dan penggunaan di dalam rumah, sebagian besar negara tidak memerlukan izin khusus.
4. Metode 1: Ethanol Extracted Propolis (EEP) - metode paling sederhana untuk ekstraksi propolis
Pertama harus diputuskan konsentrasi yang tepat dari ekstrak yang diinginkan. Konsentrasi awal propolis untuk diekstraksi tidak boleh melebihi 30%, karena ekstraksi akan menjadi kurang efisien atau kurang lengkap pada konsentrasi yang lebih tinggi. Kuantitas propolis yang benar ditimbang dan volume alkohol yang tepat diukur. Hal ini akan memudahkan dalam menimbang alkohol dalam jumlah yang benar karena alkohol jauh lebih ringan daripada air. Specific gravity etanol murni adalah 0,794 dibandingkan dengan 1,00 untuk air. Untuk penyederhanaan, seseorang dapat berasumsi bahwa satu liter alkohol 100% memmiliki berat 800 g, 11 dari alkohol 70% kira-kira 860 g, 11 dari alkohol 50% sekitar 900 g, dan sebagainya. Alkohol dan pelarut lainnya memiliki specific gravity yang berbeda dan ukuran kuantitas yang berbeda-beda. Oleh karena itu, pembobotan
propolis dan pelarut
merupakan metode yang disukai. Alkohol dan propolis dituangkan ke dalam kontainer, bagian atas disegel dan dikocok sebentar. Pengocokan diulang sebanyak satu atau dua kali sehari,selain itu menyimpannya di tempat gelap dan hangat selama setidaknya tiga hari. Untuk mencapai hasil terbaik, propolis harus diekstraksi untuk satu atau dua minggu. Perendaman selama lebih dari satu minggu, menurut beberapa penulis, dan selama dua minggu, tidak memberikan manfaat tambahan. Beberapa produsen merebus campuran alkohol dan propolis selama delapan jam untuk melarutkan semua resin. Jika propolis mengandung lilin, sebagian besar akan terlarutkan dengan pemanasan atau harus dihilangkan sebelum ekstraksi. Untuk produk berkualitas tinggi, pemanasan harus dihindari. Setelah satu atau dua minggu, cairan disaring menggunakan kain bersih dan sangat halus, filter kertas atau bola kapas. Kain dapat dilipat menjadi beberapa lapisan untuk meningkatkan efektivitas. Filtrasi kedua mungkin menguntungkan dan jika ekstrak dapat didinginkan sampai kurang dari 40C tetapi tidak beku, selama beberapa jam atau sehari sampai tahap filtrasi, hasil yang lebih baik dapat tercapai. 6
Filter juga harus didinginkan sebelum digunakan. Sisa-sisa penyaringan pertama dapat dicuci atau direndam dalam alkohol lagi. Filtrat harus berupa cairan bening, bebas dari partikel dan berwarna coklat gelap atau agak kemerahan. Propolis harus dijaga tetap bersih, disimpan di tempat gelap, serta botol kedap udara. Jika botol berwarna gelap tidak tersedia, botol-botol harus disimpan di tempat gelap dan dingin atau dibungkus dengan kertas, kain atau jerami, untuk menjaga produk dari cahaya.
Bahan untuk ekstrak 10% : Propolis
1 part
Alcohol
9 parts
or
100 g
or
900 g
1 kg 9 kg
Bahan untuk ekstrak 5% : Propolis
1 part
Alcohol
19 parts
Dikarenakan
pelarut
or
100 g
or
1900 g
relatif
mahal,
harus
1 kg 19 kg
ada
pertimbangan
untuk
mempersiapkan ekstrak pertama lebih terkonsentrasi (<30%) Ekstrak akhir dapat diencerkan atau lebih terkonsentrasi tergantung pada tujuan penggunaannya. Kebanyakan ekstrak digunakan dengan pelarut yang telah dikurangi, yaitu konsentrasi propolis sangat tinggi, dimulai dengan larutan pekat yang membutuhkan penguapan lebih sedikit, namun kurang efisien dalam mengekstrak semua komponen. Konsentrasi yang lebih tinggi dari ekstrak dapat dicapai dengan meninggalkan ekstrak dalam wadah terbuka bermulut besar, yang cocok untuk melindungi terhadap kotoran, debu dan serangga untuk sementara waktu. Sebagian besar alkohol akan menguap pada suhu kamar dalam beberapa jam.
5. Metode 2 : Ekstraksi Cepat
Untuk ekstraksi ini, potongan halus atau propolis bubuk diletakkan dalam filter besar atau tas kain dan alkohol murni (lebih dari 95% etanol) dituangkan melalui filter. Hal ini dapat diulangi beberapa kali. Ekstrak yang dihasilkan, kemudian harus disimpan.Ekstraksi jauh kurang efektif pada konsentrasi alkohol yang lebih rendah. 7
Setelah ekstraksi selesai, nantinya ekstrak dapat diencerkan dengan air. Namun, konsentrasi bahan aktif tidak dapat dibandingkan dengan ekstrak yang dihasilkan dengan metode 1, karena tingkat ekstaraksi yang lebih rendah. Tidak terdapat referensi untuk perbandingan kuantitatif dari efektivitas metode ini dengan metode 1. Karena efisiensi ekstraksi meningkat seiring dengan waktu dalam metode 1, dapat diasumsikan bahwa untuk beberapa metode aplikasi 2 memiliki penggunaan yang terbatas, terutama ketika bahan aktif yang diinginkan kurang larut. Metode 2 dapat digunakan dengan sedimen dari filtrasi padaa metode 1.
6. Metode 3: Glycol extracted propolis (GEP)
Metode ini mirip dengan metode 1 dan hanya berbeda dalam hal pelarut yang digunakan. Alih-alih etanol, glikol (propilena glikol) yang digunakan pada metode ini. Namun, konsentrasi propolis tidak boleh melebihi 10% dan ekstraksi lebih efisien di bawah partikel vakum (Sangalli, 1990) Kerugian dari glikol dibandingkan dengan etanol adalah kebutuhan untuk suhu tinggi selama penguapan dari pelarut, yang mempengaruhi banyak senyawa volatil dari ekstrak propolis. Glikol biasanya lebih murah daripada minuman alkohol berkualitas, karena pajak yang lebih rendah, tetapi lebih sulit untuk mendapatkannya pada beberapa negara. Beberapa produsen kosmetik lebih memilih ekstrak etanol dari ekstrak glikol untuk persiapan tertentu. Ekstrak glikol lebih mudah dicampur dengan beberapa lotion, terutama yang memiliki fase air besar. Ekstrak lebih mudah untuk digunakan
dengan semprotan hidung atau mulut, karena glikol menguap lebih lambat dan tidak beracun untuk aplikasi eksternal. Namun, harus selalu dipertimbangkan bahwa glikol dianggap aman untuk konsumsi manusia, yaitu penggunaan internal yang hanya mencapai 1,5 g glikol per hari per orang dewasa (Sangalli, 1990).
7. Metode 4 : Aqueous (water) extracted propolis (AEP)
Ekstrak aqueous dapat diperoleh dengan merendam propolis selama beberapa hari atau direbus dalam air. Rendmen bahan aktif lebih rendah dibandingkan dengan alkohol, namun ekstrak air telah menunjukkan efek bakterisida dan fungisida.
8
8. Method 5: Oil extracted propolis (OEP)
Ekstrak dibuat menurut metode yang dijelaskan oleh Marchenay (1977), dan dikutip oleh Debuyser (1984) kurang tepat untuk komersialisasi, tapi ada beberapa cara persiapan sederhana yang murah, jumlah kecil dari ekstrak untuk aplikasi internal maupun eksternal. Campuran 10 g propolis dibersihkan dengan 200 ml (sekitar 200 g) zaitun atau minyak almond, atau dengan 100 ml minyak biji rami berkualitas (kualitas makanan olahan) atau dengan 100 g mentega. Minyak nabati dapat diganti. Campuran dipanaskan perlahan dalam bak air selama sekitar 10 menit pada suhu tidak lebih dari 500C sambil diaduk terus-menerus. Ekstrak disaring dan simpan dalam wadah tersegel di tempat gelap. Penyimpanan berpendingin dianjurkan.
9. Metode 6 : Pasta Propolis
Metode ini adalah sama dengan metode 1 sampai ekstrak cair terfiltrasi diperoleh. Cairan tersebut kemudian diuapkan sebagian untuk menghasilkan produk dengan konsistensi seperti pasta. Pasta ini cocok untuk dicampurkan dengan berbagai pengemulsi untuk aplikasi dalam kosmetik. Penguapan dapat dilakukan dengan pemanasan perlahan dari ekstrak dalam wadah terbuka di atas api kecil. Alkohol sangat mudah terbakar, sehingga tindakan pencegahan perlu dilakukan dengan nyala api terbuka dan ventilasi yang cukup. Sebuah alat distilasi sederhana, seperti yang digunakan untuk menyiapkan sulingan minuman keras lokal,memungkinkan adanya pengumpulan sebagian besar alkohol yang mahal untuk digunakan kembali. Penguapan yang paling canggih dan paling merusak adalah evaporator vakum tekanan rendah atau pengering beku. Jika kontrol kualitas dilakukan, ekstrak propolis dalam bentuk pasta dapat lebih mudah dipasarkan dan harus dijual dengan harga jauh lebih tinggi.
10. Metode 7: Ekstrak Propolis Kering
Ekstrak kering adalah dengan jumlah pelarut kurang dari 5%. Ekstrak diperoleh dari ekstrak sesuai dengan metode 1, 2, atau 3 diikuti dengan penguapan, pengeringan beku atau pengeringan semprot (Sangalli, 1990). Vacuum drier dan spray drier memerlukan peralatan laboratorium yang relatif mahal.
9
Pengeringan yang tidak menghasilkan serbuk adalah propolis yang diekstraksi dengan menggunakan alkohol yang sangat terkonsentrasi. Sebaliknya, residu berupa pasta yang elastis dan lengket. Bubuk kering akan lebih mudah untuk digunakan dalam aplikasi farmasi atau kosmetik. Masalahnya adalah bahwa metode ini dapat mengganggu proses ekstraksi dan belum diuji untuk efektivitas biologisnya.
11. Metode 8: Air-larut, ekstrak etanol bubuk kering
Propolis disiapkan dan diekstraksi seperti yang dijelaskan dalam metode 1 tetapi menggunakan larutan etanol 10-25% (Sosnowski, 1984). Setelah 1 sampai 10 hari pada 0-370C (lebih baik pada batas suhu hangat) dengan agitasi periodik, larutan disaring untuk pertama kalinya melalui kertas saring Whatman No. 1 atau lapisan ganda kain katun yang sangat halus. Filtrat didinginkan sebanyak mungkin (tanpa pembekuan) selama 24 jam dan kemudian disaring lagi dengan kertas saring Whatman No.50. Filtrasi ketiga dan terakhir dapat dilakukan pada suhu dingin atau pada suhu kamar. Akhirnya, pelarut dihilangkan dengan penguapan atau pengeringan beku. Untuk metode ekstraksi seperti ini, di mana produk akhir adalah pasta atau bubuk, proporsi awal propolis dan pelarut tidak terlalu penting. Jumlah propolis yang lebih besar dapat digunakan untuk ekstraksi yang lebih cepat, misalnya 500 g propolis dalam 1000 ml pelarut. Namun, bahan aktif biasanya tetap berada dalam residu filter untuk ekstraksi lebih lanjut dengan alkohol bersih. Beberapa resep menggunakan bubuk kering. Tidak ada publikasi ilmiah atau penelitian yang dikutip oleh Sosnowski (1984) tentang aktivitas kemanjuran atau biologis dari ekstrak ini, meskipun ia mengklaim bahwa sifat antioksidan dari ekstrak propolis dari etanol atau etanol encer terkonsentrasi adalah sama.
12. Metode 9: Free-flowing, bubuk propolis non-higroskopis
Bagi mereka yang memiliki akses ke peralatan yang sesuai dan, ekstrak propolis dapat dibuat lebih mudah dan lebih stabil terhadap panas dengan pengompleks dengan Bcyclodextrin. Hasilnya adalah bubuk atau serbuk yang free flowing dan non-higroskopis (Szente dan Szejtli, 1987).
10
13. Method 10: Water soluble derivatives (WSD)
Ekstrak propolis yang larut dalam air sangat penting untuk beberapa aplikasi obat dan kosmetik. Dimov et. al., (1991) menerbitkan sebuah metode yang telah dipatenkan oleh Nikolov et. al., (1987)., yaitu metode yang menghasilkan bubuk kering ekstrak propolis dengan lisin terkomplekskan, yang dikenal sebagai water soluble derivatives (WSD). Sebuah terjemahan dari paten Bulgaria diberikan oleh
Dr.Ivanovska : 100 g propolis diekstrak tiga kali dengan metanol mendidih selama satu jam, dengan menggunakan 800 ml metanol setiap kali. Ekstrak disaring panas, disimpan semalaman pada suhu 40C dan disaring lagi. Endapan-endapan yaitu residu penyaringan dingin, dicuci dengan etanol dingin (40C)dan disaring. Kedua filtrat digabung dan diuapkan sampai kering, menghasilkan 60 g produk, resin berwarna cokelat. 10 g produk kering secara bertahap diaduk ke dalam 150 ml larutan L-lisin 8% pada suhu 50-600C. Larutan beku-kering menghasilkan 22 g bubuk kering berwarna kuning-coklat. Karakteristik antibiotik WSD masih diuji. Ekstrak WSD diketahui berguna untuk menginduksi agen perlindungan non-spesifik terhadap bakteri gram negatif, yaitu, Klebsiella neumoniae, Proteus vularis, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa (Dimov et. al., 1992).
Jika ekstrak terkonsentrasi diperlukan, lebih baik digunakan ethanol terkonsentrasi untuk ekstraksi karena menguap pada suhu lebih rendah dari pelarut lain. Dengan demikian, risiko kerusakan beberapa bahan aktif akibat panas menjadi berkurang. Hal ini penting, meskipun beberapa senyawa aktif termostabil (tahan terhadap panas) karena gaya sinergis dari semua bahan dalam propolis belum sepenuhnya dipahami. Untuk operasi skala besar, penguapan di bawah tekanan rendah ( partial vacuum) atau dengan pengeringan beku (lebih disukai) karena kerusakan akibat
pemanasan dapat dihindari. Namun, sebuah studi Hungaria menunjukkan beberapa aktivitas antibakteri terdapat dalam uap suling minyak esensial dari propolis (Petri et. al., 1988).
Pelarut lain dapat digunakan untuk mengekstrak propolis, misalnya alkohol, eter, asam asetat, aseton, benzena, 2% natrium hidroksida dan amonia (pembersih
11
rumah tangga) (Anon, 1982). Pelarut-pelarut tidak boleh digunakan jika ekstrak ditujukan untuk konsumsi manusia atau hewan.
C. Tingkat Produksi
Rata-rata produksi per koloni propolis per tahun telah mencapai 10 sampai 300g (Ochi, 1981 dan Andrich et. al, 1987). Produksi tergantung pada lebah, iklim, sumber daya hutan dan mekanisme perangkap. Lebah yang dipilih adalah lebah yang menghasilkan propolis dalam jumlah yang lebih besar. Kontaminasi propolis dengan lilin, potongan kayu, dan bahan lainnya harus dihindari. Metode pengumpulan terbersih menggunakan perangkap khusus yang ditempatkan di atas sarang atu dinding lateral sarang. Sehingga, lebah tidak mencampur lebih banyak lilin dengan propolis dan tidak terjadi kontaminasi selama panen. Perangkap panen juga lebih cepat dan lebih produktif. Perangkap pada dasarnya berupa layar atau lempengan khusus dengan lubang kecil yang mensimulasikan celah di dinding sarang. Lebah mencoba untuk menutup lubang dan dengan demikian mengisi perangkap dengan propolis. Desain perangkap paling ekonomis adalah sebuah lubang besar yang ditutupi dengan layar nilon biasa, ditempatkan di tempat dengan point of nails dan kerangka perforasi. Namun, untuk menghindari kontaminasi dengan lilin, layar sebaiknya tidak menyentuh bagian atas frame. Total area terpapar oleh layer harus bervariasi sesuai dengan lebah dan kondisi sekitar. Pemanenan propolis dengan perangkap memberikan harga yang lebih baik karena bersih dan kualitas lebih baik. Cahaya, dan sirkulasi udara sangat penting untuk merangsang penggunaan propolis. Oleh karena itu, perangkap ditempatkan di atas sarang dan terlindung, tetapi penutup sarang perlu disangga, sehingga sedikit terbuka untuk meningkatkan sirkulasi udara dan untuk memberikan peluang cahaya untuk masuk. Di daerah tropis, dilakukan tindakan untuk mencegah masuknya air hujan terlalu banyak. Juga, ketika menggunakan jenis lebah yang sensitif terhadap gangguan atau kemungkinan melarikan diri, tutup tidak boleh dibuka terlalu besar agar lebah tidak dapat melarikan diri. Koloni-koloni yang baru dibentuk harus diberikan waktu untuk membangun diri sebelum mereka digunakan untuk menjebak. Propolis dihilangkan dari perangkap dengan pendinginan lembaran plastik atau layar selama beberapa jam dalam lemari es atau freezer . Setelah didinginkan, 12
propolis menjadi rapuh dan dapat dihapus dari layar dengan meregangkan dan menyikatnya, menarik sepanjang tepi meja atau dengan menggunakan tekanan udara tinggi dengan perangkat khusus yang dirancang oleh Pechhacker dan Huettinger (1986). Perangkap tersebut kemudian siap untuk digunakan kembali. Sebelum munculnya desain perangkap baru, propolis dikumpulkan dengan cara menggesekkan lem lebah dari dinding, frame, pintu masuk dan penutup. Marletto (1983) mencatat bahwa propolis yang dikumpulkan dari penutup atau frame atas biasanya lebih bersih daripada propolis yang dikumpulkan di dekat pintu masuk. Bahkan terkontaminasi dapat digunakan dan dimurnikan dengan ekstraksi dan penyaringan berulang-ulang. Untuk menghindari kontaminasi dengan lilin terlalu banyak, kerokan dari frame atau papan bawah dan tutup harus disimpan terpisah satu sama lain dan dari propolis yang dikumpulkan dengan perangkap. Potongan-potongan tidak boleh digabungkan menjadi bola besar. Untuk
propolis
dengan
kualitas
yang
lebih
baik,
beberapa
penulis
merekomendasikan pengkoleksian setelah aliran nektar utama (Donadieu, 1979 ). Hal ini dimungkin pada daerah beriklim sedang, di mana lebah sedang mempersiapkan musim dingin dan karena itu mengumpulkan propolis dalam jumlah lebih. Pada iklim tropis, penelitian yang ada menunjukkan adanya variasi musiman, atau ketiadaan. Hal ini mungkin terjadi pada awal musim hujan, propolizing akan lebih
aktif.
Penggunaan
perangkap
internal
lebih
menguntungkan,.
tetapi
membutuhkan beberapa penelitian. A. mellifera telah dilaporkan sebagai penghasil propolis yang sangat sedikit.
13
Gambar 1. Desain sederhana perangkap propolis dari nilon atau jarring nyamuk
D.
Pembelian
Propolis yang belum diolah harus selalu berada dalam bentuk potongan atau potongan-potongan kecil dan tidak pernah disamakan menjadi potongan-potongan yang lebih besar atau bola. Beberapa pembeli lebih memilih potongan. Pembelian ekstrak propolis berkualitas adalah sulit, karena warna kecoklatan dari ekstrak alkohol tidak mengungkapkan kuantitas dan kualitas propolis yang diperoleh dari pengekstraksiannya. Bahkan analisis kimia hanya dapat memberikan penilaian kuantitatif berkaitan dengan senyawa utama (tes antioksidan sederhana) dan tes aktivitas biologis yang lambat dan mahal. Ekstrak harus dibeli hanya dari produsen dengan metode dan komitmen yang telah dikenal luas.
14
III. PEMASARAN
A. Prospek Pasar
Perlu dicatat bahwa pendapat yang diungkapkan di sini tidak didasarkan pada survei pasar yang luas, namun antara pembeli dan produsen. Pasar untuk bahan baku dan produk sekunder yang mengandung propolis mungkin akan terus tumbuh karena adanya penerimaan lebih dalam aplikasinya bagi obat dan produsen kosmetik dengan menyadarii manfaat dan nilai pemasaran yang dimilikinya. Saat ini, permintaan lebih tinggi dari pasokan di kebanyakan negara. Pemasaran tidak terstruktur dan tidak terorganisir, tidak menciptakan banyak keuntungan harga bagi produsen. Kesulitan menetapkan aturan seragam dan standar kontrol kualitas mungkin merupakan hambatan lebih lanjut untuk pengembangan pasar. Kekhawatiran dari importir atau pembeli tentang efektivitas produk dapat dihindari dengan kolaborasi atau kerjasama awal dengan laboratorium terpercaya atau peneliti. Harga internasional untuk propolis mentah turun. Setelah mencapai tingkat setinggi US $ 160/kg atau bahkan US $ 300/kg, kurang dari 20 tahun yang lalu (Crane, 1990) harga beberapa pembeli pada tahun 1992 adalah lebih rendah yaitu US $ 4-12/kg. Di beberapa negara harga US $ 30 masih diperbolehkan pada tahun 1991. Beberapa produsen mengatakan ada pasar untuk ekstrak yang sudah difraksinasi, yaitu ekstrak yang dipisahkan ke dalam berbagai kelompok komponen. Fraksi dibeli oleh perusahaan farmasi. Meskipun ekstrak khusus memiliki harga yang jauh lebih tinggi, produksi ekstrak tersebut membutuhkan pemrosesan di laboratorium kimia yang dilengkapi dnegan peralatn dan staf terlatih. Terdapat kesempatan untuk menghasilkan dan mengembangkan pasar lokal. Jenis produk yang dibuat dan luasnya pasar lokal akan tergantung pada bahan dasar yang tersedia dan kemampuan pengusaha untuk menyesuaikan produk mereka dengan penerimaan lokal dan kegunaannya. Setelah standar mutu di negara-negara konsumen besar tercapai, ekspor dapat menjadi layak. Berdasarkan pengalaman pasar saat ini, kompetisi masih relatif rendah dan akan memberikan keuntungan di masa depan ketika kompetisi dan kontrol kualitas menjadi lebih ketat. Ini berlaku untuk bahan baku maupun untuk produk yang diproduksi.
15
B. Peringatan
Hausen et. al., (1987) mengemukakan bahwa terdapat hampir 200 kasus di mana orang telah menunjukkan reaksi alergi terhadap propolis. Dalam beberapa kasus berupa kontak langsung dengan propolis, yang merupakan hasil dari kontaminasi dengan produk lebah lainnya seperti serbuk sari atau bulu lebah. Namun, ekstrak dan produk yang mengandung ekstrak propolis telah terbukti menyebabkan reaksi alergi juga (Hausen, et. al., 1987, Hausen dan Wollenweber, 1987 dan Ko NLG, 1988) sebagian besar dalam bentuk dermatitis. Hashimoto et. al., (1988) mengidentifikasi asam caffeic dan turunannya sebagai agen alergis utama. Oleh karena itu, penggunaan dalam jumlah kecil harus diidentifikasi selama hari-hari pertama, perlahan-lahan meningkat menjadi dosis penuh (setengah untuk anak-anak) dalam rangka untuk menguji kompatibilitas reaksi preparatino atau alergi. Penghentian perawatan medis yang diresepkan oleh dokter harus bertahap, perlahan-lahan mengurangi dosis harian. Mengunyah jumlah besar propolis mentah secara berkepanjangan dapat menyebabkan mual dan gangguan perut. Donadieu (1979) menganjurkan mengunyah satu gram pada suatu waktu, tiga kali sehari.
C. Paten
Ilmu Farmasi Anti-inflammatory (topical)
Busciglio, 1988
Antibiotic ointment (dermatitis)
Iwasaki, 1990
Anti-inflammatory and cell growth
Nakanishi et al., 1989
inhibitor Tissue regeneration agent (veterinary)
Dubaj et al., 1988
Propolis-stabilized vitamin C (Tablets
Dubovsky et al., 1988
of 91.5% glucose, 5% vitamin C and 3.5% ethanol exract of propolis) Drug for muscle hypoplasia in piglets
Musci et al., 1989
16
Kosmetik Deodorant
Vol’Fenzon et al., 1989
Deodorant mouthwash
Cho et al., 1988
Lainnya Germicide, insecticide for food
Mizuno, 1989a, b
packaging
Metode Ekstraksi WSD - Water Soluble Derivatives
Nikolov et al., 1987
17
IV. PEMBAHASAN
A. Deskripsi Propolis
Propolis adalah campuran sejumlah lilin lebah dan resin yang dikumpulkan oleh lebah madu dari tanaman, terutama dari bunga dan kuncup daun. Dikarenakan sulit untuk mengamati lebah pada saat mencari makan, maka sumber-sumber resin umumnya tidak diketahui secara tepat. Pengamatan yang telah dilakukan menunjukkan bahwa lebah membawa resin pelindung bunga dan tunas daun dengan menggunakan rahang mereka dan membawanya ke sarang dalam bentuk seperti pelet serbuk sari pada kaki belakang lebah. Hal ini dapat diasumsikan bahwa dalam proses pengumpulan dan pemodelan resin, resin pelindung bercampur dengan beberapa air liur dan sekresi lain dari lebah serta lilin. Lebah madu sering menggunakan propolis untuk mengurangi ukuran pintu masuk untuk difence yang lebih baik. Resin ini digunakan oleh lebah pekerja untuk melapisi bagian dalam rongga sarang dan semua induk sisir, memperbaiki sisir, menyegel retakan kecil di dalam sarang, mengurangi ukuran pintu masuk sarang, menutupi binatang yang mati di dalam sarang atau serangga yang terlalu besar untuk ditangani, dan yang terpenting dari semua adalah untuk campuran sejumlah kecil propolis dengan lilin untuk menutup sel-sel induk. Kegunaan yang signifikan ini karena resin tersebut memiliki keuntungan memberi efek antibakteri dan antijamur dari propolis dalam memberikan perlindungan terhadap koloni penyakit. Propolis telah terbukti dapat membunuh bakteri paling aktif yang menjadi musuh lebah, yaitu larva Bacillus penyebab busuk Brood Amerika (Mlagan dan Sulimanovic, 1982; Meresta dan Meresta, 1988). Penggunaan propolis dapat mengurangi kemungkinan infeksi pada anak-anak dan pertumbuhan bakteri dalam jaringan hewan mati. Komposisi propolis tergantung pada jenis tanaman yang dapat diakses oleh lebah. Propolis mengubah warna, bau dan karakteristik obat, menurut sumber dan musim dalam setahun. Selain itu, beberapa lebah dan beberapa koloni merupakan koloni yang giat mengumpulkan, umumnya merupakan lebah ternakan, karena propolis adalah zat yang sangat lengket, sehingga sulit untuk menghapus rangka dari kotak sarang.
18
Lebah madu dari bagian barat Apis mellifera merupakan spesies yang mencari makanan berupa propolis. Spesies Asian Apis tidak mengumpulkan propolis. Hanya lebah bersengat atau lebah Meliponine yang diketahui mengumpulkan zat lengket semacam resin, untuk menyegel sarang dan membangun pot madu dan serbuk sari untuk penyimpanan. Sebaran alami dari Apis mellifera, memiliki banyak kegunaan tradisional yang dikenal karena zat tersebut memiliki sifat serbaguna. Orang Yunani dan Romawi telah mengetahui bahwa propolis dapat menyembuhkan abses kulit dan selama berabad-abad digunakan dalam kedokteran. Bangsa Mesir kuno telah mengetahui tentang manfaat propolis dan di Afrika saat ini propolis masih digunakan sebagai obat, perekat untuk drum tuning, penyegelan wadah air retak atau kano dan berbagai kegunaan lain. Propolis dapat dimasukkan dalam pernis khusus seperti yang digunakan oleh Stradivarius untuk biola nya (Jolly, 1978).
Gambar 2. Lebah menggunakan propolis untuk mengurangi ukuran pintu masuk sarang guna pertahanan yang lebih baik
B. Karakteristik fisik propolis
Warna propolis berkisar antara kuning hingga coklat tua, bergantung pada sumber resin. Propolis transparan sendiri telah dilaporkan oleh Coggshall dan Morse (1984). Pada suhu 45-2500C propolis bersifat lentur, lembut dengan substansi sangat lengket. Pada suhu kurang dari 150C dan terutama ketika beku, propolis menjadi
19
keras dan rapuh. Propolis akan tetap rapuh bahkan pada suhu yang lebih tinggi. Di atas suhu 450C propolis akan menjadi semakin lengket dan bergetah. Biasanya propolis akan menjadi cair pada suhu 60-700C, tetapi untuk beberapa sampel, titik lelehnya dapat mencapai 1000C. Pelarut yang paling umum digunakan untuk ekstraksi komersial adalah etanol (etil alkohol), eter, glikol dan air. Untuk analisis kimia berbagai macam pelarut dapat digunakan untuk mengekstrak berbagai fraksi. Banyak komponen bakterisida yang larut dalam air atau alkohol.
C. Komposisi propolis
Dalam salah satu analisis propolis dari Inggris, 150 senyawa yang diidentifikasi hanya dalam satu sampel (Greenaway, et al., 1990), namun lebih dari 180 telah diisolasi sejauh ini. Resin propolis dikumpulkan dari berbagai macam pohon dan semak-semak. Setiap daerah dan koloni tampaknya memiliki pilihan sumber resin tersendiri, yang menghasilkan variasi warna, bau dan komposisi. Sebuah studi di Kuba menunjukkan bahwa resin tanaman yang dikumpulkan setidaknya telah dimetabolisme sebagian oleh lebah (Cuellar dkk, 1990.). Kehadiran gula (Greenaway et al., 1987) juga menunjukkan beberapa metabolisme oleh lebah, yaitu sebagai hasil dari penambahan air liur selama menghisap dan mengunyah. Senyawa-senyawa utama resin terdiri dari flavonoid dan asam fenolat atau esternya, yang sering terbentuk hingga 50% dari semua bahan. Variasi dalam konten lilin lebah juga mempengaruhi analisis kimia. Selain itu, kebanyakan studi tidak berusaha untuk menentukan semua komponen, tetapi membatasi diri untuk kelas bahan kimia atau metode ekstraksi.
D. Efek fisiologis dari propolis Bukti belum dikonfirmasi
Propolis atau ekstrak yang telah ditemukan dalam literatur, tetapi tanpa bukti atau referensi yang menguatkan untuk penelitian ilmiah : anti-asma pengobatan di semprotan
mulut,
dukungan
sistem
paru,
anti-rematik
(Donadieu,
1979),
penghambatan melanoma dan karsinoma sel tumor, regenerasi jaringan, penguatan kapiler, aktivitas anti-diabetes, phytoinhibitor, menghambat perkecambahan biji
20
tanaman dan (Donadieu, 1979) perkecambahan biji kentang dan daun salad (Bianchi, 1991).
Tabel 1. Komponen mayor dalam propolis
21
Bukti ilmiah
Salah satu sifat yang paling banyak dikenal dan diuji secara luas dari propolis adalah aktivitas antibakteri. Banyak test ilmiah telah dilakukan dengan berbagai bakteri, jamur, virus dan mikroorganisme lainnya. Banyak dari tes telah menunjukkan kontrol positif dari organisme dengan berbagai ekstrak dan konsentrasi propolis. Efek sinergis telah dilaporkan dari ekstrak propolis yang digunakan secara bersama dengan antibiotik (Chernyak, 1971). Kadang-kadang, ekstrak propolis lebih efektif dibandingkan obat yang tersedia secara komersial (Millet-Clerc, et al., 1987). Dalam semua kasus, kondisi khusus dan ekstrak harus sangat dipertimbangkan. Meskipun ada berbagai macam efek dikaitkan dengan propolis, banyak laporan didasarkan pada studi pendahuluan. Sebagian besar penelitian dilakukan di negaranegara Eropa Timur. Banyak kerja praktek dan penelitian juga sedang dilakukan di Cina, tetapi sulit untuk memperoleh informasi, tidak sedikit karena hambatan bahasa. Studi lebih rinci diperlukan untuk menentukan manfaat potensial dari penggunaan obat propolis, terutama untuk usus, aplikasi dermatologi dan gigi. Sebagian besar penelitian bersifat in vitro, tetapi uji klinis juga dilakukan.
E. Manfaat Propolis Pada kosmetik
Aplikasi dermatologi dan kosmetik saat ini mungkin merupakan penggunaan paling umum dari propolis dan ekstrak nya (Lejeune, et al., 1988). Dampaknya pada regenerasi jaringan dan renovasi telah diteliti dengan baik. Karakteristik bakterisida dan fungisida memberikan banyak manfaat dalam berbagai aplikasi dalam kosmetik.
Pengobatan
Obat yang umumnya menggunakan propolis termasuk pengobatan sistem kardiovaskular dan darah (anemia), aparatus pernapasan (untuk berbagai infeksi), perawatan gigi, dermatologi (jaringan regenerasi, borok, excema, penyembuhan luka - luka bakar khususnya, mikosis, infeksi selaput lendir dan lesi), pengobatan kanker, pendukung sistem kekebalan tubuh dan perbaikannya, saluran pencernaan (bisul dan infeksi), perlindungan hati dan dukungan dan banyak lainnya. Aplikasi eksternal langsung dari ekstrak etanol atau salep terkonsentrasi (sampai dengan 33% propolis) telah memberikan hasil yang baik dalam penggunaan 22
untuk penyembuhan luka. Operasi plastik juga menggunakan ekstrak propolis untuk penyembuhan luka, perbaikan dan pengembangan jaringan.
23
24
Tabel 2. Mikroorganisme dalam propolis dan ekstraknya yang memberikan efek positif
25
Tabel 3. Efek medis dan lainnya dari propolis
Penggunaan tradisional
Di Eropa dan Afrika Utara, sifat-sifat khusus penyembuhan luka oleh propolis sudah dikenal orang Mesir, Yunani dan Romawi dan di zaman kuno. Dalam catatan abad ke-12, persiapan obat dengan propolis disebutkan kegunaan propolis untuk mengobati infeksi mulut dan tenggorokan, serta karies. Propolis mungkin telah lebih umum digunakan dalam pengawet kayu atau pernis seperti yang dikutip Stradivarius (Jolly, 1978). Di Sahara Afrika, propolis masih digunakan sebagai obat-obatan herbal dan aplikasi lain seperti pelapis anti-air dan pelapis kayu, perekat, persiapan busur dan untuk drum tuning.
Teknologi Pangan
Antioksidan, antimikroba dan antijamur dari propolis dapat diaplikasikan dalam teknologi makanan. Satu keuntungan istimewa adalah bahwa, tidak seperti beberapa pengawet konvensional, residu propolis memiliki efek yang bermanfaat pada kesehatan manusia. Namun, hanya sedikit penelitian yang telah dilakukan menyebutkan mengenai kemungkinan efek samping peningkatan konsumsi propolis. Secara tersendiri, beberapa komponen yang diidentifikasi dalam propolis bisa sangat merusak kesehatan manusia. Mizuno (1989), mendaftarkan paten yang mencakup propolis sebagai bahan pengawet dalam makanan kemasan. Propolis diizinkan sebagai pengawet untuk ikan beku. Oleh berbagai penulis di Jepang, penambahan hanya 30 ppm (bagian per juta) dari propolis untuk pakn ayam petelur dapat meningkatkan produksi telur, konversi makanan dan berat badan ayam oleh S mencapai 6% (Bonomi, et al., 1976 ). Ghisalberti (1979) melaporkan peningkatan berat badan tambahan untuk ayam broiler hingga 20% ketika 500 ppm propolis ditambahkan dalam pakan diet.
Lainnya
Pencarian penggunaan baru dari propolis masih terus berlanjut. Sangalli (1990) menyebutkan penggunaan propolis untuk pengobatan pasca panen dan konservasi buah-buahan. Aplikasi dalam pestisida dan fungisida masih dalam tahap pengujian. 26
Peternak lebah menggunakan propolis, dilelehkan bersama-sama dengan lilin atau dalam larutan amonia (Anon, 1982) untuk dimasukkan ke bagian dalam sarang atau perangkap untuk menarik segerombolan kawanan lebah. Ventilasi yang memadai dan aerasi diperlukan setelah penggunaan larutan amonia.
F.
Penyimpanan
Secara umum, propolis cukup stabil, namun penyimpanan yang benar merupakah hal yang penting. Propolis dan ekstraknya harus disimpan dalam wadah kedap udara pada tempat gelap, sebaiknya kurang dari 100C-120C dan jauh dari panas yang berlebihan dan langsung. Untuk alasan serupa, propolis yang telah lama di sarang tidak boleh dicampur dengan propolis segar. Penyimpanan yang benar adalah lebih dari 12 bulan penyimpanan, dimana propolis akan kehilangan sangat sedikit atau tidak terjadi kehilangan aktivitas antibakteri. Ekstrak alkohol dapat disimpan lebih lama lagi. Lyophilization (pengeringan beku) dari ekstrak telah digambarkan sebagai
sebuah metode yang mempertahankan karakteristik antibakteri, tetapi tidak ada yang menuliskan mengenai efek jangka panjang dari penyimpanan bahan tersebut. Metode ini dapat digunakan untuk skala yang lebih besar dan formulasi tertentu, namun ada kemungkinan bahwa beberapa karakteristik sinergis propolis tersebut dapat hilang selama lyophilisasi. Daur hidup produk yang mengandung propolis sangat tergantung pada komposisinya dan harus ditentukan untuk setiap kasus. Semakin banyak komponen lain dari produk yang rentan terhadap dekomposisi, menyebabkan daur hidup produk lebih singkat. Ini adalah alasan yang diperlukan dalam pemilihan bahan buatan atau alami dan tradisional, pengawet dan produksi yang lebih besar untuk pasar berkelanjutan. Propolis dan ekstraknya berfungsi sebagai pengawet ringan karena kandungan antioksidan dan antimikroba yang dimilikinya dan dapat memperpanjang daur hidup beberapa produk.
G. Quality Control
Karena propolis tersedia dalam berbagai warna, bau dan komposisi, sangat sulit untuk memberikan pedoman yang tepat. Propolis yang paling segar memiliki bau resin menyenangkan. Kontaminasi lilin dan kontaminasi visual harus serendah 27
mungkin. Propolis yang lama sangat keras dan rapuh dan juga mungkin sangat gelap. Namun, propolis beku atau baru beku juga sangat rapuh. Standar kualitas resmi dari propolis di negara-negara Eropa Timur merupakan standar paling merujuk pada kebersihan atau pemalsuan produk mentah dan kadangkadang ekstrak nya. Batas maksimum dan minimum untuk kelompok kimia tertentu telah ditetapkan, tetapi beberapa tes standar tersedia untuk menentukan aktivitas biologis dari berbagai komponen. Tikhonov et. al., (1978). Franco dan Kurebayashi (1986) mengusulkan metode untuk kontrol kualitas dan Hollands et. al., (1988). Untuk pengujian efek coccidiostatic . Vakikonina et. al., (1975)., Petri et. al., (1984). Dan Bianchi (1991), menggambarkan perubahan warna 0.1 N larutan kalium permanganat yang dapat diandalkan untuk efek antioksidan dari propolis dan ekstraknya, dan deteksi dari beberapa adulterants . Tes bakteriologis dapat dilakukan dan hasilnya dibandingkan dengan mereka berasal dari sampel kemurnian dan asal-usul yang telah diketahui, tetapi tes ini hanya berlaku untuk sebagian kecil dari propolis. Manipulasi baru-baru ini dan pemanenan oleh perangkap lebah menghasilkan propolis segar yang berkualitas tinggi dan yang paling terkontaminasi, jika dikumpulkan secara teratur.
Tikhonov et al,
RSFSR
Extractable substances
21.93 +/- 2.22%
Oxidizability value
17.08 +/- 5.52%
Resinous-balsam substances
46.18 +/- 1.15%
Waxes
27.11 +/- 7.68%
< 30.0%
Polyphenols
14.66 +/- 2.34%
> 20.0%
Plysaccharides
2.26 +/- 0.32%
Mechanical impurities
9.76 +/- 1.81%
< 22.0%
< 20.0%
28
Iodine number
> 35.0 Tabel 4. Standar mutu Sumber : RSFSR, 1977
Salah satu cara mudah untuk determinasi kualitas, terutama kualitas rendah seperti cacat adalah dengan homogenitas produk yang mengandung ekstrak propolis. Tanpa peralatan yang baik, emulsi yang baik dan stabil sulit untuk didapatkan. Pencampuran emulsi dengan tangan cenderung stabil hanya untuk jangka waktu yang singkat. Pemisahan setelah penyimpanan singkat tidak dapat diterima konsumen dan juga mempengaruhi kinerja produk. Jadi perlakuan khusus harus dilakukan untuk memastikan kompatibilitas metode ekstraksi dan bahan-bahan dari produk akhir. Pengemulsi yang cocok dan teknik pencampuran yang lebih baik, yaitu kecepatan yang lebih tinggi, waktu yang lebih lama, suhu hangat dan urutan pencampuran yang berbeda harus ditentukan dengan pengujian.
H. Produk Turunan
Ointments Ointments, terdiri dari :
1. Simple Vaseline-based ointment Terbuat dari propolis yang terdiri dari ekstrak konsentrasi etanol 96% dari 10% propolis (method) kemudian mengurangi cairan sebanyak 30% dari konten beratnya. Ektrak tersebut dicampur dengan Vaselin dalm jumlah yang sedikit. Percampuran dilakukan sekali saja hingga semua menjadi homogen atau terelmulsi dengan baik lalu dapat ditambahkan vaselin dengan perlahan. Jiak tidak tercampur dengan baik maka ektrak propolis akan memisah dan meninggalkan sisa yang kotor pada krimnya.
Gunakan
emulsifier
atau
mikser
elektrik
untuk
mempermudah
pencampuran. Ektrak propolis dapat memperbaiki 10% dari berat akhir ointment . 10% dari lanolin dapat juga dilelehkan dengan vaselin mengikuti prosedur yang sama.
29
2. Simple ointment based on vaseline or animal fat Krim ini dapat digunakan dalam aplikasi pemotongan. Vaselin dilelehkan hingga mencapai titik didih, dingin hingga 50-60oC, lalu ditambahkan propolis, dipanaskan pada suhu 70-80oC, diaduk selama 10 menit dan ditutup hingga 10 menit. Kemudian disaring menggunakan layer dari kaos yang tipis .
3. Simple oil-based ointment Lilin lebah dilelehkan pada air mandi, diaduk secara perlahan pada lanolin yang telah meleleh dan campurkan dengan baik. Ketika percampuran sudah dingin maka dapat dicampurkan dengan mentega. Pencampuran yang terbaik dari ekstrak propolis adalah dengan sejumlah kecil mentega dan penambahan campuran sekali pada suhu dingin sekitar 400C.
Oral and nasal spray
D dan G. Barral (1992) merekomendasikan untuk mempersiapkan 2 hingga 10% solution dari propolispada glikol propilen. Untuk flavour, ekstrak dari herbal pada glikol atau etanol dapat difiltrasi. Dua ekstrak alkohol dicampur dengan menggunakan sejumlah kecil dari ekstrak tanaman, melalui rasa. Solution dari alkohol dapat terdilusi lebih jauh sebelum proses pembotolan dalam mesin spray yang berukuran kecil. Glikol lebih dipilih dari etanol pada resep ini karena evaporasinya lebih lambat setelah penerapan. Sebuah penyebab tentang penggunaan yang sangat berlebihan dari eksesiv glikol berdasarkan spray yang sebaiknya dimasukkan dalam label (lihat metode 3 untuk alasan).
Suntan lotion
Memilih suntan lotion dan menambahkan ekstrak propolis-glikol untuk memperbaiki 2-5% pada berat kering propolis.
Sirup atau madu propolis
Untuk sirup diambil secara oral menggunakan propolis di dalam ekstrak etanol dan mencampurnya dengan glukosa/fruktosa (contohnya madu atau sirup gula
30
invert). Sebuah pencampuran gula dapat bekerja lebih baik daripada sirup yang dibuat dari gula mandiri. Alkoholnya dapat bersifat preservatif. Mencampur ekstrak propolis dengan madu yang terdilusi dapat bekerja lebih baik, ketika komplemen mereka dapat memberikan fungsi satu sama lainnya. Untuk menemukan ekstrak soluble air dengan semua nilai yang akurat dari bahan – bahn propolis akan menjadikan yang terbaik. Satu dari metode yang telah diungkapkan dapat digunakan (7-10). Ekstrak propolis juga dapat dicampur dengan madu yang tidak terdilusi. Untuk membuat pencampuran atau emulsifikasi menjadi lebih mudah, hanya dengan mengambil sedikit madu dan mengekstraknya. Pencampuran yang dilakukan sekali hingga homogen.
Tablet propolis
Formula dasar ini dapat digunakan serbuk yang tidak terkorporasi, dimana gula dapat diganti dengan itu, tetapi 10 hingga 20% kontennya dapat dilindungi. Sedikit tablet yang dibungkus dengan lem atau barrier yang sejenisnya, madu memiliki manfaat karena struktur higroskopiknya yang terbentuk secara alami. Untuk memlindungi dari infeksi dan inflamasi terhadap mulut dan tenggorokan, setelah ekstraksi pada gigi, satu pil dapat dengan mudah melarutkan ke dalam mulut sekitar 3 hingga 4 kali per harinya. Ukuran dari pil tidak begitu penting, sejak dosis yang tepat dari propolis itulah yang dibuthkan dan penting.
Shampoo propolis
Sampo propolis dapat digunakan sebagai sampo anti ketombe. Ekstrak propolis disiapkan dari alkohol yang terdilusi (lebih sedikit dari 25%) atau glikol, dapat dicampurkan dengan banyak sampo yang telah tersedia. Ketika dicampur dengan alkohol, bergantung pada gel agennya, beberapa sampo banyak kehilangan viskositasnya. Melarutkan sodium klorin pada 20
bagian air, menyaring larutan dan
menambahkan asam laktik. Fase minyak dicaelah itu, campur setelah memanaskan o
comperlan di dalam air bersuhu 40 C. Pertama, tambahkan Texapon dan kemudian
minyak ke dalam comperlan. Campur secara perlahan untuk menghindari bentuk yang terlalu berbusa. Setelah itu, ekstrak propolis juga ditambahkan ke dalam dua 31
likuid yaitu yaitu fase minyak dan air yang dapat menjadi satu dan volum naik menjadi 100 bagian pada air. Hasilnya adalah sampo berwarna coklat dengan aroma yang menyenangkan dan dapat dimasukkan ke dalam botol gelap hingga 12 bulan.
Lotion anti ketombe
10% ekstrak propolis disiapkan mengikuti metode 1 dan cairan dikurangi untuk menyediakan 50% ekstrak propolis dari berat keringnya. Campur ekstrak propolis dengan 37 bagian etanol dan laurylasulphate dengan 57 bagian air hujan yang telah direbus. Kemudin campur dua cairan secara bersamaan. Jika ekstrak propolis terdiri dari paling sedikit 50% berat keringnya, mendekati kalkulasinya dapat menghindari pengurangan cairan dan penambahan dari beberapa cairan, contohnya penambahan bagian dari 10% EEP dan hanya 32 bagian dari etanol. Selain itu, konsentrasi dari ekstrak propolis tidak penting selama terdiri dari paling sedikit 0,5% berat propolis. Konten alkohol losionnya sebaiknya sekitar 45% dari volumnya.
Pasta gigi
Propolis dapat diekstrak dengan etanol atau alternative lain yaitu glikol. Borax dapat digunakan sebagai emulsifier, tetapi membahayakan mengonsumsi borax dalam jumlah yang cukup besar dan inclusion pada produk boleh jadi dapat digunakan secara ilegal di USA dan negara lainnya. Sekali lagi komponen yang dapat dicampurkan adalah komponen yang sebaiknya dikemas sebaik mungkin. Cepuk pada sikat gigi lebih dipilih, tetapi jika konsumen dapat menerima alternativ pengemasan lain dapat menjadi botol yang memiliki tekanan yang lembut dengan semprotan yang dapat ditutup.
Anaesthetic propolis paste
Aplikasi utama dari pasta adalah pada dokter gigi. Propolis mendukung untuk memberikan pasta yang anastetik dan dampak yang bersifat regeneratif. Hal ini juga berkontribusi terhadap antimikrobial dan perlengkapan analgesik. Ekstrak propolis dapat dicampurkan dengan krim benzocaine yang telah siap dibuat berkisar 30%
32
hingga 50% dari cairan propolis-etanol. Pasta ini secara umum tidak terdiri dari air. Propolis dapat ditambahkan busa dengan persentasi yang tinggi dari ekstrak alkohol. Cairan propolis dapat disiapkan dari konsentrasi yang benar. Untuk tujuan ekstrak asli disiapkan 10 hingga 30% konsentrasi propolis yang dievaporasi hingga 50% konsentrasi dapat dicapai. Lelehan lilin lebahn dan mencampurnya dengan petroleum di dalam air, melanutkan dengan pengadukan selama pendinginan dan pencampuran secara lambat pada lanolin, ketika dicampurkan pada saat dingin 40oC, memulai dengan pengadukan secara cepat ketika mencampur di dalam ekstrak propolis, diikuti dengan penambahan inggridien lainnya.
Krim
Ekstrak propolis dapat dicampurkan dengan krim. Moisturise, rejuvvenating atau krim yang curative dapat dirubah dengan menambahkan 1 hingga 5 % (berat kering) ekstrak propolis, banyak persiapan komersial yang terdiri dari sedikit dari pada ini. Beberapa ektrak meminta emulsifier dan lainnya dicampur secara langsung tergantung juga dengan formulasi dasar dari krimnya. Antibakterial, antifungal, menstimulasi dari propolis dapat dengan mudah diterima oleh kulit wajah . Ekstrak krim pharametik dapat digunakan oleh manusia dan hewan.
Masker wajah
1.Masker wajah Mencampur gliserol dan ekstrak propolis . Mencampur dengan filler dan petyume. Etrak tanaman lain yang menguntungkan pada alkohol juga dapat ditambahkan dalam jumlah yang sedikit. 2. Masker Wajah Untuk Kulit Berminyak Ektrak propolis disini dapat disiapkan dengan etanol yang telah terdilusi (sedikitnya 25%) atau glikol, sehingga lebih seperti cairan air, atau satu dari formulasi bubuk yang digunakan. Air mawar dapat disiapkan dengan beberapa tetes minyak ke dalam air atau menyiapkan infusi teh dingin dari beberapa daun bunga mawar ke air yang bersih.
33
Micro-encapsulation
Beberapa pengarang mendeskripsikan enkapsulasi ekstrak alkohol sebagai mekanisme untuk diperpanjang, pelepasan secara lambat.. Mikro-enkapsulasi propolis dapat juga digunakan pada makanan sebagai preservatif melindungi dari bakteri.
Pengujian kualitas aktivitas antioksidan
Tes rumahan yang sederhana yang disarankan oleh Canadian bee newslater (CHRA, 1988) :”Untuk mengetahui apakah propolismu masih aktiv , letakkan
setengh sendok teh dari propolis ke dalam secangkir susu segar yang kecil dan biarkan susu berada di dalam ruangan dengan suhu ruang selama empat hari. Jika susu masih segar setelah empat hari berarti propolismu masih bagus”.
34
V.
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Propolis adalah campuran sejumlah lilin lebah dan resin yang dikumpulkan oleh lebah madu dari tanaman, terutama dari bunga dan kuncup daun. Dikarenakan sulit untuk mengamati lebah pada saat mencari makan, maka sumber-sumber resin umumnya tidak diketahui secara tepat. Pengamatan yang telah dilakukan menunjukkan bahwa lebah membawa resin pelindung bunga dan tunas daun dengan menggunakan rahang mereka dan membawanya ke sarang dalam bentuk seperti pelet serbuk sari pada kaki belakang lebah. Penggunaan propolis dapat mengurangi kemungkinan infeksi pada anak-anak dan pertumbuhan bakteri dalam jaringan hewan mati. Komposisi propolis tergantung pada jenis tanaman yang dapat diakses oleh lebah. Propolis mengubah warna, bau dan karakteristik obat, menurut sumber dan musim dalam setahun. Metode yang digunakan dalam pembuatan propolis yaitu cairan ekstrak, metode ekstraksi, Oil extracted propolis (OEP), Pasta Propolis , Ekstrak Propolis Kering Air-larut, ekstrak etanol bubuk kering Free-flowing , bubuk propolis nonhigroskopis Water soluble derivatives (WSD) , penetration untuk ekstraksi, dan ekstraksi cepat. Produk turunan yang dihasilkan dari propolis adalah masker wajah, krim, sampo anti ketombe, mikro-enkapsul, lotion ketombe, pasta gigi, anastheutic propolis pasta, tablet propolis, serta sirup propolis. Selama 20 tahun belakangan ini produksi propolis menurun dan berdasarkan pengalaman pasar, persaingan dalam penjualan propolis relatif menurun.
B. Saran
Diperlukan penetapan standar mutu bagi setiap negara sehingga ekspor propolis dapat dilaksanakan, dan dikembangkan terus teknologi produksi propolis karena propolis dapat memberikan banyak manfaat bagi kesehatan manusia. Selain itu perlu juga diciptakan pasar yang kompetitif dan bervariasi dalam pemasaran propolis ini.
35
DAFTAR PUSTAKA
Apimondia 1975a. A valuable product of beekeeping: propolis. Researches and views on its composition, properties and therapeutic value. Apimondia Publishing House, Bucharest, Rumania, 167 pp. Apimondia 1978 A remarkable hive product: propolis. Apimondia Publishing House, Bucharest, 250 pp. Asis, M. 1989. [Propolis: the purple gold of honeybees.] Centro de Informaci6n y Documentaci6n Agropecuano, Havana, Cuba, 255 pp. Bankova, V. and 7 others. 1988. [On the chemical composition of some propolis fractions with antiviral action.] Acta Microbiologica Bulgarica, 23: 52-57 Bankova, V. and 4 others. 1991. A study on the origin of Bulgarian propolis. Apiacta, 26(1): 13-17 Bankova, V., Dyulgerov, A., Popov, S., Evstatieva, L. Kuleva L., Purb 0. and Zamjansan, Z. 1992. Propolis produced in Bulgaria and Mongolia: Phenolic compounds and plant origin. Apidologie, 23 :79-85 Bankova, V. Dyalgerov, A., Popov, S. and Marekov, N.L. 1987. [A GC/MS study of the propolis phenolic constituents.] Z. f. Naturforschung, 42:147-151 Barral, G. and D. 1992. Propolis ointment with Vaseline. Pers. communication. Benkova, M., Boroskova', Z., Dubaj, J. and Sze'chenyi, S. 1989. The immunomodulative effect of propolis preparations on guinea pigs with experimental ascaridosis. Helminthologia 26(2): 163-172 Bonomi, A., Marletto F. and Bianchi, M. 1976. [Use of propolis in the food of laying hens.] Revista di Avicultura, 45 (4): 43-55 Canadian Honeybee Research Association (CHRA), 1988. The propolis trap. CHRA, B.C. Newsletter, June, 2-3 Chernyak, N.F. 1973. On synergistic effect of propolis and some anti-bacterial drugs. Antibiotiki, 18 : 259-261 Contari, G. 1987. [Process for the propolis extract preparation]. Apicolt. Mod., 78 :147-150 Cuellar Cuellar, A. and Rojas Hernandez, N.M. 1987. [Chemical components of Cuban propolis, 1.] Revista Cubana de Farmacologia, 21(3): 365-372 Cue llar Cue llar, A., Rojas Hernandez, N.M. and Martinez Perez, J. 1990. p[New antimicrobial structure from propolis collected in Cuba.] Revista Cubana de Farmacia, 24 (1): 51-58
36
Debuyser, E. 1984. La propolis. These pour dipl6me de docteur en Pharmacie. Fac. Pharmacie, Univ. Nantes, France, 34 pp. Dimov, V., Ivanovska, N., Bankova, V. and Popov, 5. 1992. Immunomodulatory action of propolis: IV. Prophylactic activity against Gram-negative infections and adjuvant effect of the water-soluble derivative. Vaccine, 12 (V): 1-7 Dimov, V., Ivanovska, N., Manolova, N., Bankova, V., Nikolov N. and Popov, 5. 1991. Immunomodulatory action of propolis: Influence on anti-infectious protection and macrophage function. Apidologie, 22:155-162 Donadieu, Y. 1979. La propolis. Editions Maloine, Paris. Dubaj, J. and 7 others. 1988. [Agent for the regeneration of damaged tissue containing pantothenic acid, zinc, and extract of propolis.] Czech Patent No. CS 253 424, 13 pp. Dubovsky, I. and 6 others. 1988. [Propolis-stabilized vitamin C.] Hungarian Patent No. HU 46 849, 8 pp. Filho, O.M. and Carvalho, A.C.P. de. 1990. Application of propolis to dental sockets and skin wounds. Journal of Nihon University School of Dentistry, 32(1): 4-13 Franco, T.T. and Kurebayashi, A.K. 1986. [Isolation of the main active constituents of propolis by two-dimensional paper chromatography and spectrophotometry]. Revista do Inst. Adolfo Lutz, 46 (1/2): 81-86 Gabrys, J. and 4 others 1986. Free amino acids in bee hive products (propolis) as identified and quantified by gas-liquid chromatography. Pharmac. Research Communications 18 (6): 513-518 Gafar, J., Sacalus, A., David, E. and David, N. 1986. [Treatment of simple pulp gangrene with the apitherapy product "Propolis'.] Stomatologie, 33(2): 115-117 Gasparri, F. 1983. [Beekeeping and cosmetics. Elements for an evaluation of the use of honey and propolis in cosmetics, criteria for the choice of their application and qualitative analysis methods for the original material and the final product.] Italy, Proc. Conf. Erboristeria e Cosmetico, Bologna. Erboristeria Domani - Quaderni, 3035 Ghisalberti, E.L. 1979. Propolis: a review. Bee World, 60 (2): 59-84 Giurgea, R. and 4 others. 1987. Biochemical effects of standardized propolis extract (SPE) and of silymarin on the liver of ethyl alcohol intoxicated rats. Agressologie, 28(8): 831-832. Gorbatenko, A.G. 1971. [Treatment of ulcer patients with a 30% alcohol solution of propolis.] Vrach. Delo, 3: 22-24 Grange, J.M. and Davey, R.W. 1990. Antibacterial lproperties of propolis (bee glue). J. Roy. Soc. Medicine, London, U.K. 83(3): 159-160
37
Grange, J.M. 1990. Honey and propolis as possible promotors of the healing of ulcers in leprosy (reply letter, comment). Lepr. Rev. 61(2): 195. Greenaway, W., Scaysbrook, T. and Whatley, F.R. 1988. ~omposition of propolis of Oxfordshire, lU.K. and its relation to poplar bud exudate. Zeitschrift fur Naturforschung, C 43: 301-304 Greenaway, W., May, J., Scaysbrook, T. and Whatley, F.R. 1990a. Identification by gas chromatography - mass spectrometry of 150 compounds in propolis. Zeitschrift fu~r Naturforschung, C, 46:111-121 Greenaway, W., Scaysbrook, T. and Whatley, F.R. 1990b. The composition and plant origins of propolis: a report of work at Oxford. Bee World, 71:107-118 Grohmann, F. and Spitznagel, H.U. 1988. Processing your propolis the right way. Canadian Honeybee Research Association of British Columbia Newsletter, August : 5-6 Gubicza, A. and Molnar, P. 1987. [Propolis in the rearing of calves.] Magyar Mezo~gazdasa'g, 42(17): 14 Gueorguieva, E. and Vassilev, V. 1990. Traitement de l'ulce're par la propolis. Revue fran~aise d'apiculture, 499: 394-397 Hausen, B.M., Wollenweber, E., Senff, H. and Post, B. 1987. Propolis allergy. (I). Origin, properties, usage and literature review. Contact Dermatitis, 17:163-170 Hausen, B.M. and Wollenweber, E. 1988. Propolis allergy: (III) Sensitization studies with minor constituents. Contact Dermatitis, 19: 296-303 Hill, R. 1977. Propolis, the natural antibiotic. Thorsons, Wellingborough, U.K. Holderna, E. and Kedzia, F. 1987. Investigations upon the combined action of propolis and antimycotic drugs on Candida albicans. Herba Polonica, 33(2): 145-151 Hollands, I., Miyares, C., Sigarroa, A. and Perez, A. 1984. [Efficacy of propolis against infection by intestinal Eimeria in rabbits.] Revista Cubana de Ciencias Veterinarias, 15(2): 157-163 Hollands, I., Miyares, C. and Sigarroa, A. 1988. [Comparative analysis of the action of propolis, sulphaquinoxaline and sulphamethazine in rabbits with coccidiosis.] Rivista Cubana de Ciencias Veterinarias, 19(2): 99-104 Hollands, I., Miyares, C. and Pimienta, R. 1988. [Quality ;control of Propolisina (alcoholic extract of propolis) used as a coccidiostat, by means of a biological method.] Revista Cubana de Ciencias Veterinarias, 19(4): 319-326 Inoue, H. 1988. [Propolis, its chemical constituents and biological activity.] Honeybee Science, 9(3): 115-126 Jolly, V.G. 1977. Propolis violin varnish. Strad, 88: 713-719
38
Jolly, V.G. 1978. Propolis varnish for violins. Bee World, 59 (4): 158-161 Kedzia, A. 1986. [Effect of ethanol extract of propolis (EEP) on anaerobic bacteria.] Herba Polonica, 32(1): 53-58 Kedzia, B, and Holderna, E. 1986. [Investigations on the combined action of antibiotics and propolis on Staphylococcus aureus.] Herba Polonica, 32(3/4): 187-195 Kedzia, B., Iwaszkiewicz, J. and Geppert, B. 1988. [Pharmacological investigations on ethanolic extract of propolis.] Herba Polonica, 34(4): 243-253 König, B. and Dustmann, J.H. 1985. Fortschritte der Celler Untersuchungen zur antivirotischen Aktivita~t von Propolis. Apidologie, 16 (3): 228-230 Köm.g, B. 1988. (News about propolis: Anti-tumor effect and allergies from caffeic acid derivates). Heilkunst, 101(10): 453-456 La Torre, A., Guccione, M. and Imbroglini G. 1990. (Preliminary observations on the action of propolis based preparations against Botrvtis cinerea Pers. on Strawberries. Apicoltura, 6:169-177 Lejeune, B. and 5 others 1984. [Propolis: extracts and uses in shampoos and lotions.] Parfums, Cosmetiques, Aromes, (56): 65-68 Lejeune,
B.,
Pourrat,
A.
and
Dehmouche,
H.
1988.
Propolis
utilisation
en
dermocosmetologie. Parfums, Cosmetiques, Aromes, 8~2: 73-77 Makarov, F.D. 1972. (Propolis treatment of ulcer disease and pyloroduodenitis). Vrach. Delo, 4: 93-96 Maksimova-Todorova, V. and 7 others. 1985. [Antiviral effects of some fractions isolated from propolis.] Acta Microbiologica Bulgarica 17: 79-85 Meresta, L. and Meresta, T. 1985/1986. Antibacterial activity of flavonoid compounds of propolis, occurring in flora in Poland. Bulletin of the Veterinary Institute in Pulawy, 28-29(1-4): 61-63 Meresta, T. and Meresta, L. 1988. [Sensitivity of Bacillas larvae to an extract of propolis in vitro.] Medycyna Weterynayjna, 44(3): 169-170 Meresta, L., Meresta, T., Burdzinski, J. and Chmurzunski, P.1989. [Treatment of mastitis in cows using an extract of propolis.] Medycyna Weterynaryjna, 45(7): 392-3905 Milena, L., Leifertova, I. and Baloun, I. 1989. [Fungistatic effect of propolis.] Folia Pharm. Univ. Carol, 13: 29-44 Millet-Clerc, J., Simeray, J., Michel, D. and Chaumont, J.P. 1986. (Antifungal properties of propolis against fungi causing mycoses). Bulletin de Ia Socie'te' Fran~aise de Mycologie Me'dicale, 15(2): 517-521.
39
Millet-Clerc, J., Michel, D., Simeray, J. and Chaumont, J.P. 1987. [Preliminary study of the antifungal properties of propolis compared with some commercial products.] Plantes Me'dicinales et Phytothe'rapie, 21(1): 3-7 Mizuno, M., linuma, M. and Kato, H. 1987. [Useful ingredients and biological activity of propolis.] Fragrance Journal, 15(2): 20-28 Mizuno, M. 1989a. [Propolis- or its extract-containing resin compositions.] Japanese Patent No. JP Ol 245 058 [89 245 058], 5 pp. Mizuno, M. 1989b. [Food packaging materials containing propolis[as a preservative].] Japanese Patent No. JP Ol 243 974 [89 243 974], 5 pp. Mlagan, V. and Sulimanovic, D. 1982. Action of propolis solutions on Bacillus larvae. Apiacta, 17:16-20 Mucsi, I. and 4 others. 1989. [Drug for treating muscle hypoplasia in piglets, based on propolis extract and vitamins.] Hungarian Patent No. HU 49 809, 13 pp. Munoz, L.G. 1989. Prevention of legs' affections in ovines using propolis. Apiacta 24(3: 8081 Nagy, M. and S others 1989. Constituents of propolis of Czechoslovak origin. V. Chemical Papers, 42 (5): 691-696 Neumann, D., Go~tze, G. and Binus, W. 1986. [Clinical study of the testing of the inhibition of plaque and gingivitis by propolis.] Stomatologie der DDR, 3612): 677-681 Nikolov, N., Marekov, N., Bankova, V., Popov, S., Ignatova, R. and Vladimirova, I. 1987. Method for the preparation of a water-soluble derivative of propolis. BuIg. Patent AppI. 79903/28,05 Obreg6n Fuentes, A.M. and Rojas Herna'ndez, N. 1990. [Antimicrobial action of alcoholic extracts of propolis.] Revists Cubana de Farmacia, 24(1): 34-44 (Es) Ochi, T. 1981. A new method to collect propolis. Honeybee Science, 2 (1): 16 Okonenko, L.B. 1988, [Salmonella infections and propolis.] Zdravookhr. kaz. 1: 55-57 Okonenko, L.B. 1986. [Propolis as an inhibitor of lipid free-radical oxidation in salmonellosis.], Voprosy Meditsinskoi Khimii, 32(3): 45-48 Olarin, T., Palos, E. and Olarin, A.I. 1989. Treatment of giardiosis [Giardia infection] with propolis tincture. Proc. 31st Intern. Congr. Apic. Warsaw, Poland, August 1987: 470473 Omar, M.O.M. 1989. Some characteristics of propolis from Upper Egypt. Proceedings of the Fourth International Conference on Apiculture in Tropical Climates, Cairo, Egypt, 610 November 1988, 88-92 Papay, V. and 3 others 1987. Chemical and pharmacological study of propolis from various locations. Acta Pharmac. Hung., 57:143-151
40
Pectihacker, H. and Huettinger, E. 1986. [Harvesting propolis with high pressure air.] Bienenvater, 107 (5): 160-161 Petri, G., Lemberkovics, E. and Foldvari, M. 1988. Examination of differences between propolis (bee glue) produced from different floral environments. In Flavours and Fragrances: a world perspective (eds. Lawrence, B.M., Mookherjee, B.D., Willis, B.J.). Elsevier Sci. PubI., Amsterdam, 439-446 Popravko, S.A. 1977. [Chemical composition of propolis and its standardization.] Pchelovodstvo, 97 (8): 21-23 Proserpio, G. and Martelli, A. 1982a. Propolis: Its use in cosmetics. Part I. Il Prodotto Chimico, 9:15-21 Proserpio, G. and Martelli, A. 1982b. Propolis: Its use in cosmetics. Part II. II Prodotto Chimico, 10: 25-30 Przybylaski, J. and Scheller, 5. 1985. [Early results in treatment of Legg-Calve-Perthes illness with intra-articular injections of aqueous solutions of propolis.] Zeitschrift fur Orethopa~due, 123(2): 163-167 Rojas Herna'ndez, N.M. and Cue'tara Bernal, K. de la. 1990. [Antibiotic effect of propolis against strains of Staphylococcus aureus of human clinical origin.] Revista Cubana de Farmacia, 24(1): 45-50 Ross, P.B. 1990. The effects of propolis fractions on cells in tissue culture. M.Phil. Thesis, University of Wales College of Cardiff, U.K. xii + 193 pp. RSFSR 1977. (Standard for propolis). RST RSFSR :317-77 Sangalli, A. 1990. La propoli. L'Ape Nostra Amica, 12 (4): 16-25 Savina, K.A. and Romanov, F.T. 1956. Propolis as a medicinal remedy. Pchelovodstvo 33(8): 59-60 Scheller, S. and 6 others. 1989a. The ability of ethanolic extract of propolis EEP to protect mice against gamma irradiation. Zeitschrift fur Naturforschung, C, 44:1049-1052 Scheller, S. and 5 others. 1989c. [Immunization trials in two cases of alveolitis fibroticans with decreasing conductivity of the immune system: effect of ethanol extract of propolis (EEP), Esberitox N. and a calcium-magnesium preparation.] Heilkunst, 102(6): 249-255 Scheller, S. and 7 others 1989d. Trace elements in propolis and in its ethanolic extract (EEP) as determined by neutron activation analysis. Z. f. Naturf., 44:170-172
Scheller, S. and 4 others. 1990. Free radical scavenging by ethanol extract of propolis. Int. J. Radiation Biol. 57(3): 461-465
41
