MAKALAH BAKTERIOLOGI PEMERIKSAAN MPN Coliform dan E.coli dan E.coli
DISUSUN OLEH : KELOMPOK 1 1. Agus Panca Saputra 2. Anna Purwaningrum 3. Anggun Wahyuni 4. Ardeta Puspasuli 5. Ariski Fajarido
POLTEKKES KEMENKES TANJUNG KARANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN TAHUN 2013 1
DAFTAR ISI Daft Daftar ar Isi Isi .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
2
I. Dasar Dasar Teori Teori ..... ....... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
3
II. II. Prin Prinsip sip Kerja Kerja ...... ........ .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
6
III. III. Alat Alat dan dan Bahan Bahan .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ..
6
IV. IV. Cara Cara Kerja Kerja .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
7
IV.1 IV.1 Presu Presump mpti tive ve Test Test .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ..
8
IV.2 IV.2 Conf Confir irma mato tory ry Test Test .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ..
9
IV.3 IV.3 Com Compl plet etee Test Test ... ..... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ..
10
V. Lamp Lampir iran an Gamb Gambar ar ... ..... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
11
VI. VI. Kesi Kesimp mpul ulan an .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
13
Daft Daftar ar Pust Pustak akaa .... ...... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... .... ....
14
2
I.
DASAR TEORI
Standar Air Minum, menurut standar WHO semua sampel tidak boleh mengandung E. coli dan sebaiknya juga bebas dari bakteri coliform. Standar WHO dalam setiap tahun, 95% dari sampel-sampel tidak boleh mengandung coliform dalam 100 ml, tidak ada sampel yang mengandung E. coli dalam 100 ml, Tidak ada sampel yang mengandung coliform lebih dari 10 dalam 100 ml, tidak boleh ada coliform dalam 100 ml dan dua sampel yang berurutan (AOAC,2000). Bakteri coliform adalah golongan bakteri intestinal, yaitu hidup dalam saluran pencernaan manusia. Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya, tepatn ya, sebena sebenarnya, rnya, bakteri colifo coliform rm fekal adalah bakte bakteri ri indik indikator ator adanya pence pencemaran maran bakteri patogen. Penentuan coliform fekal f ekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain (Dad,2000). 3
Contoh Con toh bak bakter terii col colifo iform rm ada adalah lah,, Esh Esheric erichia hia col colii dan Ent Entereo ereobac bacter ter aero aerogen genes. es. Jad Jadi, i, coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semak sem akin in ba baik ik.. Be Berd rdasa asara raka kan n la lata tarr be bela laka kang ng it itul ulah ah ma maka ka pr prak akti tiku kum m in inii pe pent ntin ing g un untu tuk k dilaksanakan. Hasill pem Hasi pemeri eriksaa ksaan n MPN Col Colifo iform rm met metode ode tab tabung ung gan ganda da din dinyat yataka akan n den dengan gan jum jumlah lah perkiraan terdekat kuman golongan coli yang terdapat dalam 100 ml contoh air atau 100 gr contoh makanan (MPN).Untuk contoh air yang bukan air minum, biasanya pemeriksaan rutin laboratorium, hanya bertujuan untuk mengetahui derajat kontaminasi dari bekteri atau untuk menentukan menen tukan sumber polus polusi.Pem i.Pemeriksaa eriksaan n MPN Colif Coliform orm metod metodee tabun tabung g ganda didasarkan bahwa bakteri golongan coli dapat meragikan laktosa, membentuk membentuk asam atau gas. Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki memili ki sifat fermentatif, diperlukan diperlukan uji konfi konfirmasi rmasi untuk meng mengetes etes kemba kembali li keben kebenaran aran adanya ada nya col colifo iform rm den dengan gan ban bantua tuan n med medium ium sele selekti ktiff dif difere erensi nsial. al. Uji kel keleng engkap kapan an kem kembal balii meyakinkan hasil tes uji konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak-berspora. (Fardiaz,1989). Output metode MPN adalah nilai MPN. Nilai MPN adalah perkiraan jumlah unit tumbuh (growth unit) atau unit pembentuk-koloni (colony-forming unit) dalam sampel. Namun, pada umumnya, nilai MPN juga diartikan sebagai perkiraan jumlah individu bakteri. Satuan yang digunakan, umumnya per 100 mL atau per gram. Jadi misalnya terdapat nilai MPN 10/g dala da lam m se sebu buah ah sam sampe pell ai air, r, art artin inya ya da dala lam m sam sampe pell ai airr te terse rsebu butt di dipe perk rkir irak akan an se seti tida dakn knya ya mengandung 10 coliform pada setiap gramnya. Makin kecil nilai MPN, maka air tersebut makin tinggi kualitasnya, dan makin layak minum. Metode MPN memiliki limit kepercayaan 95 persen sehingga pada setiap nilai MPN, terdapat jangkauan nilai MPN terendah dan nilai MPN tertinggi.(FDA, 1989).
Bakteri Coliform
Bakter Bak terii col colifo iform rm ada adalah lah bak bakteri teri ind indika ikator tor keb kebera eradaa daan n bak bakteri teri pat patoge ogenik nik lain lain.. Leb Lebih ih tepatnya, tepatn ya, sebena sebenarnya, rnya, bakteri colifo coliform rm fekal adalah bakte bakteri ri indik indikator ator adanya pence pencemaran maran bakteri patogen. Penentuan coliform fekal f ekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah 4
koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Contoh bakteri coliform adalah, Esherichia coli dan Entereobacter aerogenes. Jadi, coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan coliform, artinya, kualitas air semakin baik.(FRIEDHEIM, 2001). Bany Ba nyak akny nyaa ko kont ntam amin inan an da dala lam m ai airr me meme merlu rluka kan n sta stand ndar ar ter terte tent ntu u un untu tuk k me menj njam amin in kebersihannya. Air yang terkontaminasi oleh bakteri patogen saluran cerna sangat berbahaya untuk diminum. Hal ini dapat dipastikan dengan penemuan organisme yang ada dalam tinja manusia atau hewan dan yang tidak pernah terdapat bebas di alam. Ada beberapa organisme yang ya ng ter terma masu suk k ka kate tego gori ri in ini, i, ya yait itu u ba bakt kteri eri co coli lifo form rm (E (E.. co coli li), ), En Ente tero roco cocc ccus us fa faec ecali alis, s, Clostridium sp. Di Indonesia, bakteri indikator air terkontaminasi adalah E. coli. Terdapatnya bakteri coliform dalam air minum dapat menjadi indikasi kemungkinan besar adanya organisme patogen lainnya. Bakteri coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu faeca fa ecall co coli lifo form rm da dan n no nonn-fae faeca call co coli lifo form rm.. E. co coli li ad adal alah ah ba bagi gian an da dari ri fa faeca ecall co coli lifo form rm.. Keberadaan E. coli dalam air dapat menjadi indikator adanya pencemaran air oleh tinja. E. coli digunakan sebagai indikator pemeriksaan kualitas bakteriologis secara universal dalam analisis dengan alasan :
a) E. coli secara secara normal normal hanya hanya ditemukan ditemukan di saluran saluran pencernaan pencernaan manusia manusia (sebagai (sebagai flora flora normal nor mal)) ata atau u hew hewan an mam mamalia alia,, ata atau u bah bahan an yan yang g tela telah h ter terkon kontam taminas inasii den dengan gan tin tinja ja manusia atau hewan; jarang sekali ditemukan dalam air dengan kualitas kebersihan yang tinggi, b) E. coli mudah diperiksa di laboratorium dan sensitivitasnya tinggi jika pemeriksaan dilakukan dengan benar, c) Bila dalam dalam air tersebut tersebut ditemuka ditemukan n E. coli, coli, maka air tersebu tersebutt dianggap dianggap berbahaya berbahaya bagi bagi penggunaan domestik, d) Ada kemungk kemungkinan inan bakteri bakteri enterik enterik patogen patogen yang lain lain dapat ditemuk ditemukan an bersama-sama bersama-sama dengan E. coli dalam air tersebut
Bakteri pembusuk ini dimasukkan ke dalam golongan bakteri Coliform, salah satu yang termasu term asuk k did didala alamny mnyaa ada adalah lah Esc Escher herich ichia ia col coli. i. Bak Bakter terii col colifo iform rm ini men mengha ghasilk silkan an zat ethionine ethio nine yang pada penel penelitian itian menyebabkan menyebabkan kanke kanker. r. Bakte Bakteri-bakt ri-bakteri eri pembu pembusuk suk ini juga mempro mem produk duksi si ber bermac macam-m am-macam acam racu racun n sep sepert ertii Ind Indole ole,, ska skatol tolee yan yang g dap dapat at men menimb imbulk ulkan an penyakit bila berlebih didalam tubuh.(GAUSE, tubuh.(GAUSE, G. F. 1946). 5
Bakterii colifo Bakter coliform rm merup merupakan akan parameter mikro mikrobiolo biologis gis terpen terpenting ting kualitas air minu minum. m. Kelompok bakteri coliform terdiri atas Eschericia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter fruendii, dan bakteri lainnya. Meskipun jenis bakteri ini tidak menimbulkan penyakit tertentu secara langsung, keberadaannya di dalam air minum menunjukkan tingkat sanitasi rendah. Oleh karena itu, air minum harus bebas dari semua jenis coliform. Semakin tinggi tingkat kontaminasi bakteri coliform, semakin tinggi pula risiko kehadiran bakteri-bakteri patogen lain yang biasa hidup dalam kotoran manusia dan hewan. Salah satu contoh bakteri patogenyang kemungkinan terdapat dalam air terkontaminasi kotoran manusia atau hewan berdarah panas-adalah Shigella, yaitu mikroba penyebab gejala diare, deman, kram perut, dan muntahmuntah.(Official Chemical Method, 1979). Jenis bakteri coliform tertentu, misalnya E coli O:157:H7, bersifat patogen dan juga dapat menyebabkan diare atau diare berdarah, kram perut, mual, dan rasa tidak enak badan (Dad,2000).
II.
PRINSIP KERJA
Prinsipnya adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga didapatkan konsentrasi konsentrasi mikroorganisme mikroorganisme yang pas/sesuai pas/sesuai dan jika ditanam ditanam dalam tabung menghasilkaa menghasilkaan n frekensi frekensi pertumbuh pertumbuhan an tabung tabung positif positif “kadang-kada “kadang-kadang ng tetapi tetapi tidak selalu”. Semakin Semakin besar jumlah sampel yang dimasukkan (semakin rendah pengenceran yang dilakukan) maka semak semakin in “seri “sering ng”” tabu tabung ng posi positi tiff yang yang munc muncul ul.. Sema Semaki kin n kecil kecil juml jumlah ah sampe sampell yang yang dimasukkan (semakin tinggi pengenceran yang dilakukan) maka semakin “jarang” tabung positif yang muncul. Jumlah sampel/pengenceran yang baik adalah yang menghasilkan tabung positif “kadang-kadang tetapi tidak selalu”. Semua tabung positif yang dihasilkan sangat tergantung tergantung dengan dengan probabilita probabilitass sel yang terambil oleh pipet saat memasukkan memasukkannya nya ke dalam media. Oleh karena itu homogenisasi sangat mempengaruhi metode ini. Frekuensi positif (ya) atau a tau negatif (tidak) ini menggambarkan konsentrasi mikroorganisme pada sampel sebelum diencerkan.
III.
ALAT
ALAT dan BAHAN
: 6
Pipet ukur steril 1 ml dan 10 ml Lampu spritus Jarum ose
Kapas
Inkubator
Spidol + label
Rak tabung reaksi
Autoclave
Kertas copy
Tabung Durham
BAHAN
:
Lactosa Broth Single Strength
Lactosa Broth Triple Strength
Brilliant Green Lactosa Broth
Sampel Air
IV.
CARA KERJA
Pemeriksaan air metode MPN ada 3 tahapan : 1. Tes Perk Perkiraa iraan n (Pr (Presu esumti mtive ve Tes Test) t) Perben Per beniha ihan n yan yang g dip diperl erluka ukan n ada adalah lah lact lactose ose bro broth th yan yang g sin single gle stre strengt ngth h (SS (SS)) dan Double Strength (DS). LBDS dipakai untuk pengenceran yang lebih besar (10 ml) dan LBSS dipakai untuk pengenceran yang lebih kecil ( 1 ml dan 0,1 ml). Sedangkan jumlah tabung yang dipakai ada bermacam-macam kombinasi, seperti:
No. Jumlah Tabung 1. 5 tabung LB DS
2.
3.
Volume Air 10 ml contoh air
5 tabung LB SS
1 ml contoh air
5 tabung LB SS 5 tabung LB DS
0,1 ml contoh air 10 ml contoh air
1 tabung LB SS
1 ml contoh air
1 tabung LB SS 3 tabung LB DS
0,1 ml contoh air 10 ml contoh air 7
3 tabung LB SS
1 ml contoh air
3 tabung LB SS
0,1 ml contoh air
Sesudah masing-masing tabung diisi dengan contoh air dengan menggunakan pipet ukur secara asepti aseptis, s, kemud kemudian ian disim disimpan pan kedal kedalam am lemari pengeram (incubator) (incubator) deng dengan an suhu 35-37oC selama 1 x 24 jam. Tiap-tiap tabung yang menunjukkan peragian (keruh) dan adanya gas, maka tabung itu diperkirakan mengandung kuman golongan Coli, atau positif. Dari tabung ini perlu diteruskan pada tes penegaan (Confirmatory Test).
2. Tes Pen Penega egasan san (Co (Confi nfirma rmator tory y Test Test)) Pembenihan Pembe nihan yang dipak dipakai ai adalah B.G.L.B. B.G.L.B. Adapu Adapun n yang diperiksa adalah semua tabung yang positif (keruh + gas) pada Lactose Broth. Pindahkan dengan jarum ose dari tiaptiap tabung yang positif positif ke B.G.L.B kemudian masukkan masukkan ke dalam incubator 35-37 oC selama 1 x 24 jam. Tabung yang menunjukkan keruh dan gas dianggap positif. Hasil pemeriksaan pada tes penegasan ini i ni dapat dibaca dalam tabel PTD/MPN Coliform, sesuai dengan jumlah tabung yang dipergunakan. Misalnya dalam tabel kita mendapatkan angka MPN = 5, ini berarti bahwa dalam 100 ml contoh air terdapat 5 kuman golongan golongan Coli.
3. Te Tess Lengk Lengkap ap (Co (Comp mple lete te Test) Test) Pembenihan yang dipakai adalah :
Endo agar plate atau EMB agar plate
SIM untuk indol
Metil red
Voges Proskauer
Citrat media
Tes ini ditunjukkan untuk menentukan jenis dari coliform misalnya E. Coli, A.aerogenesis, E. freundii, dan lain-lain dengan melihat hasil peragian kuman (test biokimia) pada media : Media 1. Indol
E. Coli +
A. aerogenesis -
2.
Metil red
+
-
3.
Vogas Proskauer
-
+
4.
Citrat
-
+ 8
IV.I Presumptive Test (Test Perkiraan)
Presumptive Test terdiri dari 3 ragam pengenceran yaitu : i.
Raga Ra gam m I ( 5:1 5:1:1 :1)) unt untu uk air air min inu um
5 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
1 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanyak 1 ml sampel air.
1 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanya 0,1 ml sampel air.
ii.. ii
Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam
Raga Ra gam m II II (5: (5:5: 5:1) 1) un untu tuk k ai airr gal gali/ i/bo bor r
5 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
5 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanyak 1 ml sampel air.
1 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanya 0,1 ml sampel air.
iii. ii i.
Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam
Raga Ra gam m III III (3 (3:3 :3:3 :3)) unt untuk uk ai airr ber bersi sih h
3 tabung berisi media lactosa broth triple strength 5 ml masukkan pada masing – masing tabung sebanyak 10 ml sampel air.
3 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanyak 1 ml sampel air.
1 tab tabung ung berisi media lact lactosa osa bro broth th sin single gle str streng ength th 10 ml mas masukk ukkan an sebanya 0,1 ml sampel air.
Diinkubasi pada inkubator 37°C selama 24 Jam.
PEMBACAAN HASIL :
(+)) (+
: Ker Keruh uh da dan n ada ada ge gele lemb mbun ung g pad padaa tab tabun ung g dur durha ham m
( -)
: Jernih
0
: Keruh saja
9
IV.2 Confirmatory Test (Test Penegasan)
Darii mas Dar masing ing-ma -masin sing g tab tabung ung yan yang g pad padaa test per perkir kiraan aan din dinyat yataka akan n pos positi itif, f, dit ditana anam m masing-masing 2 ose ke dalam media BGLB sejumlah 2.
1 tabung diinkubasi ke dalam inkubator pada suhu 37 oC selama 2 x 24 jam.
1 tabung diinkubasi ke dalam inkubator pada suhu 44°C selama 2 x 24 jam.
Lihat reaksi yang terjadi Catat hasilnya dari tabung yang positif (+)
PEMBACAAN HASIL :
(+)) (+
: Keru Keruh h dan dan ad adaa gel gelem embu bung ng ud udar araa pada pada tab tabun ung g durh durham am
( -)
: Jernih
0
: keruh saja
Dari jumlah tabung yang (+) lihat dan tentukan jumlah E.coli pada tabel MPN, dapat juga dilakukan dengan menggunakan menggunakan fomula Thomas.
Rumus :
MPN = (A-B+C) x (√(s x n) )-1 x 100 Keterangan Keteranga n:
A = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 10 ml B = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 1 ml C = Jumlah tabung BGLB yang (+) pada tabung yang berisi sampel 0,1 ml S = Jumlah ml semua sampel yang ditanam N = Jumlah semua sampel yang negatif
IV.3 Compelete Test (Tes Lengkap)
Test lengkap bertujuan untuk mencari adanya E.Coli dalam sampel yang diperiksa.
Mengambil 1 ose cairan dari BGLB yang positif dan tanamkan pada endo agar atau EMB agar secara zigzag atau garis lurus.
Mengeramkan dalam incubator selama 1 x 24 jam Apabila tumbuh koloni berwarna merah metalik pada endo agar atau koloni berwarna hijau metalik dengan bagian tengah berwarna hitam pada EMB agar, kemudian koloni
10
ini ditanam pada TSI agar, SIM Medium dan citrate agar untuk memstikan adanya E. Coli.
Mengeramkan dalam incubator 1 x 24 jam
E. coli positif apabila hasil reaksi biokimia sebagai berikut : TSIA
= k/k, g(+), H2S(-)
SIM
= S(-), I(-), M(+)
Citrat
= (-)
V.
LAMPIRAN GA GAMBAR
1. Cara Kerja Ragam III
2. Contoh hasil
11
3. Tabel MPN
4. Cara Kerja
12
5. Media Lactose Broth
6. Media BGLB
13
7. Tes Lengkap (Complete Test)
VI.
KESIMPULAN
Dari Da ri ha hasi sill pe pema mapa para ran n da dapa patt di disi simp mpul ulka kan n ba bahw hwaa da dari ri ma maka kala lah h in inii ka kami mi da dapa patt melaksanakan praktikum MPN. Pada pemeriksaan kali ini ada beberapa metode, yaitu : a) Tes Perk Perkiraa iraan n (Pr (Presu esumti mtive ve Tes Test) t) b) Tes Penegasan (Confirmatory Test) c)
Tess Lengk Te Lengkap ap (Co (Comp mple lete te Test Test))
Bakteri coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya, sebena seb enarny rnya, a, bak bakteri teri col colifo iform rm fek fekal al ada adalah lah bak bakteri teri ind indika ikator tor ada adany nyaa pen pencem cemaran aran bak bakteri teri pathogen. Bakteri coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air minum.
14
DAFTAR PUSTAKA •
Aminah,Siti, dkk. 2004. Buku Penuntun Praktikum Bakteriologi. Bakteriologi . Lampung: Poltekkes Tanjungkarang Jurusan Analis Kesehatan.
•
Soemarno. 2004 . Penuntun . Penuntun Bakteriologi. Bakteriologi. Jakarta
•
http://analiskesehatan-pontianak.blogspot.com/2011/02/pengukuran-coliform-denganmpn.html
•
http://sutikno.blog.uns.ac.id/2009/06/21/cara-menghitung-nilai-mpn-uji-coliform/
15
