LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA KLINIK PEMERIKSAAN PEMERIKSAAN URIN ATAS INDIKASI BILIRUBIN
NAMA
:Nur Afriyani
NIM
: 08121006046
Dosen Pembimbing
:1. Dr.Budi Untari,Msi,Apt Untari,Msi,Apt 2. Dr.rer.nat Mardiyanto,Msi,Apt Mardiyanto,Msi,Apt
Asisten Pendamping
:Tri Wahyuningsih
LABORATORIUM KIMIA FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SRIWIJAYA 2014
PRAKTIKUM 7 PEMERIKSAAN URIN ATAS INDIKASI BILIRUBIN
I.
TUJUAN PERCOBAAN
1. Untuk mengetahui prinsip pemeriksaan terhadap bilirubin urin sebagai salah satu muatan kompetensi dalam bidang keahlian biokimia klinik. 2. Untuk mementukan adanya bilirubin dalam urin.
II.
PRINSIP KERJA
Pemeriksaan bilirubin urin dengan reagen schlisinger dan larutan lugol, hasil positif yang didapat bila terlihat flourescensi hijau pada filtrate.
III.
TINJAUAN PUSTAKA
Bilirubin ( sebelumnya disebut sebagai hematoidin ) adalah produk rincian kuning normal hemekatabolisme.Heme ditemukan dalam hemoglobin, komponen utama dari sel darah merah . Bilirubin diekskresikan dalam empedu dan urin, dan peningkatan kadar dapat mengindikasikan penyakit tertentu. Hal ini bertanggung jawab untuk warna
kuning memar , warna kuning air
seni (melalui produk pemecahan direduksi, urobilin), warna coklat dari kotoran (melalui konversi kepada stercobilin), dan perubahan warna kuning pada penyakit kuning. Bilirubin terdiri dari sebuah rantai terbuka dari empat pirol -seperti cincin (tetrapyrrole).Dalam heme , sebaliknya, keempat cincin yang terhubung ke sebuah cincin yang lebih besar, yang disebut porfirincincin.Bilirubin adalah sangat mirip dengan pigmen phycobilin digunakan oleh ganggang tertentu untuk menangkap energi cahaya, dan untuk pigmen fitokrom digunakan oleh
tanaman untuk merasakan cahaya.Semua ini mengandung rantai terbuka empat cincin pyrrolic. Seperti ini pigmen lainnya, beberapa ganda obligasi di bilirubin isomerize ketika terkena cahaya. Ini digunakan dalam fototerapi dari bayi kuning:. E, Z-isomer bilirubin yang terbentuk setelah terpapar cahaya lebih larut daripada, Z unilluminated Z-isomer, sebagai kemungkinan ikatan hidrogen intramolekul akan dihapus Hal ini memungkinkan ekskresi bilirubin tak terkonjugasi dalam empedu. Beberapa buku teks dan artikel penelitian menunjukkan isomer geometris salah bilirubin. Para isomer alami adalah Z, Zisomer. Fungsi bilirubin : Bilirubin dibuat oleh aktivitas reduktase biliverdin pada biliverdin, pigmen empedu hijau tetrapyrrolic yang juga merupakan produk katabolisme heme.Bilirubin, ketika teroksidasi, beralih menjadi biliverdin sekali lagi. Siklus ini, selain demonstrasi aktivitas antioksidan ampuh bilirubin, telah menyebabkan hipotesis bahwa peran utama fisiologis bilirubin adalah sebagai antioksidan seluler. Pemeriksaan bilirubin dalam urin berdasarkan reaksi antara garam diazonium dengan bilirubin dalam suasana asam, yang menimbulkan warna biru atau ungu tua. Garam diazonium terdiri dari pnitrobenzene diazonium dan p-toluene sulfonate, sedangkan asam yang dipakai adalah asam sulfo salisilat.Adanya bilirubin 0,05-1 mg/dl urin akan memberikan basil positif dan keadaan ini menunjukkan kelainan hati atau saluran empedu. Hasil positif palsu dapat terjadi bila dalam urin terdapat mefenamic acid, chlorpromazine dengan kadar yang tinggi sedangkan negatif palsu dapat terjadi bila urin mengandung metabolit pyridium atau serenium. Eritrosit secara fisiologis dapat bertahan/ berumur sekitar 120 hari, eritrosit mengalami lisis 1-2×108 setiap jamnya pada seorang dewasa dengan berat badan 70 kg, dimana diperhitungkan hemoglobin yang turut lisis sekitar 6 gr per hari. Sel-sel eritrosit tua dikeluarkan dari sirkulasi dan dihancurkan oleh limpa. Apoprotein dari hemoglobin dihidrolisis menjadi komponen asamasam aminonya. Katabolisme heme dari semua hemeprotein terjadi dalam fraksi mikrosom sel retikuloendotel oleh sistem enzym yang kompleks yaitu heme oksigenase yang merupakan enzym dari keluarga besar sitokrom P450.
Langkah awal pemecahan gugus heme ialah pemutusan jembatan α metena membentuk biliverdin, suatu tetrapirol linier. Besi mengalami beberapa kali reaksi reduksi dan oksidasi, reaksi-reaksi ini memerlukan oksigen dan NADPH. Pada akhir reaksi dibebaskan Fe3+ yang dapat digunakan kembali, karbon monoksida yang berasal dari atom karbon jembatan metena dan biliverdin. Biliverdin, suatu pigmen berwarna hijau akan direduksi oleh biliverdin reduktase yang menggunakan NADPH sehingga rantai metenil menjadi rantai metilen antara cincin pirol III – IV dan membentuk pigmen berwarna kuning yaitu bilirubin. Perubahan warna pada memar merupakan petunjuk reaksi degradasi ini.
Dalam setiap 1 gr hemoglobin yang lisis akan membentuk 35 mg bilirubin. Pada orang dewasa dibentuk sekitar 250 – 350 mg bilirubin per hari, yang dapat berasal dari pemecahan hemoglobin, proses erytropoetik yang tidak efekif dan pemecahan hemprotein lainnya. Bilirubin dari jaringan retikuloendotel adalah bentuk yang sedikit larut dalam plasma dan air. Bilirubin ini akan diikat nonkovalen dan diangkut oleh albumin ke hepar. Dalam 100 ml plasma hanya lebih kurang 25 mg bilirubin yang dapat diikat kuat pada albumin. Bilirubin yang melebihi jumlah ini hanya terikat longgar hingga mudah lepas dan berdiffusi ke jaringan.
IV.
ALAT DAN BAHAN
ALAT : 1. Gelas ukur 2. Pipet tetes 3. Kertas saring 4. Corong 5.
Tabung reaksi
6.
Rak tabung
BAHAN: 1. 2.
Zn (CH3COO)2 Alkohol 96%
3.
I2
4.
KI
5.
Aquades
6.
Urine segar (urine sewaktu)
V.
PROSEDUR KERJA
1. Pembuatan Reagen a. Reagen Schlesinger 10 g Zn(CH 3COO) 2 Disuspensikan dalam 100 ml alkohol
b. Larutan Lugol 0.5 g I2 dan 1 g KI Dilarutkankan dalam 100 ml alkohol Setelah larut, tmbahkan air sampai 150 ml
2. Cara Pemeriksaan 5 ml urin ditambah 2 tetes larutan lugol \ Tambahkan 7,5 ml reagen Schlesinger. Kemudian kocok Saring sampai didapat filtrat yang jernih Filtrat diperiksa / dilihat dengan latar belakang hitam
3. Pengamatan Hasil Positif bila didapat flourosensi hijau pada filtrat.
VI.
DATA HASIL PENGAMATAN
Sampe
Perlakuan
Hasil
l 2 teteslugol
Tetapwarnakuningsepertiaw al
5 ml urin
2tetes lugol + 7,5
3 lapisan
ml
Atasbening
reagenSchlesinge
Tengah putih
r
Bawahkuning
Kocok
Putihsusu
Gambar
Saring ( ambil
Ambil filtrate
filtrate jernih )
Filtrate jernih
Di amati
Positif (fluoresensihijaupada filtrate)
VII.
PEMBAHASAN
Pada praktikum kali ini melakukan percobaan mengenai pemeriksaan urin atas indikasi bilirubin. Adapun prinsip uji ini adalah melakukan Pemeriksaan bilirubin urin dengan mereaksikan urin dengan reagen Schlesinger dan larutan lugol, hasil positif ditunjukkan bila didapat flourescensi hijau pada filtrate. Diantara banyak macam test untuk menyatakan adanya bilirubin,terdapat 4 test dalam pemeriksaan bilirubin yaitu test busa,test Harrison,test lugol iodine dan test gemelin. Dari keempat test ini mempunyai prinsip masingmasing.Pada test busa prinspnya adanya bilirubin dalam urine bila dilakukan pengocokan akan timbul busa warna kuning yang tidak segera hilang, pada test Harrison adanya bilirubin dalam urine akan dioxidasi oleh reagen fouchet menjadi biliverdin
yang berwarna hijau dimana sebelumnya bilirubin
diendapkan oleh barium klorida (BaCL 2),pada test lugol iodin dimana iodine ditambahkan kedalam urine yang mengandung pigmen empedu akan membentuk warna hijau/peristiwa oxidasi sedangkan pada test gemelin adanya bilirubin dalam urine akan dioxsidasi oleh reagen asam nitrat menjadi warna pelangi. Bilirubin adalah pigmen kuning yang berasal dari perombakan heme dari hemoglobin dalam proses pemecahan eritrosit oleh sel retikuloendotel. Di samping itu sekitar 20% bilirubin berasal dari perombakan zat-zat lain. Sel retikuloendotel membuat bilirubin tidak larut dalam air; bilirubin yang disekresikan dalam darah harus diikatkan kepada albumin untuk diangkut dalam plasma menuju hati. Di dalam hati, hepatosit melepaskan ikatan itu dan mengkonjugasinya dengan asam glukoronat sehingga bersifat larut air. Proses konjugasi ini melibatkan enzim glukoroniltransferase. Bilirubin secara normal tidak terdapat dalam urine, namun dalam jumlah yang sangat sedikit dapat berada dalam urine, tanpa terdeteksi melalui pemeriksaan rutin. Bilirubin terbentuk dari penguraian hemoglobin dan ditranspor menuju hati, tempat bilirubin berkonjugasi atau tak langsung bersifat larut dalam lemak, serta ti dak dapat diekskresikan ke dalam urine. Bilirubinuria mengindikasikan kerusakan
hati atau obstruksi empedu dan kadarnya yang besar ditandai dengan warna kuning. Bilirubin terkonjugasi (bilirubin glukoronida atau hepatobilirubin) masuk ke saluran empedu dan diekskresikan ke usus. Selanjutnya flora usus akan mengubahnya menjadi urobilinogen dan dibuang melalui feses serta sebagian kecil melalui urin. Bilirubin terkonjugasi bereaksi cepat dengan asam sulfanilat yang terdiazotasi membentuk azobilirubin (reaksi van den Bergh), karena itu sering dinamakan bilirubin direk atau bilirubin langsung. Bilirubin tak terkonjugasi (hematobilirubin) yang merupakan bilirubin bebas yang terikat albumin harus lebih dulu dicampur dengan alkohol, kafein atau pelarut lain sebelum dapat bereaksi, karena itu dinamakan bilirubin indirek atau bilirubin tidak langsung. Jadi bila dalam urine ditemukan adanya peningkatan kadar bilirubin yang berlebih, dapat diduga pasien tersebut menunjukkan adanya gangguan pada hati (kerusakan sel hati) atau saluran empedu (batu atau tumor). Hasil yang positif harus dikonfirmasi dengan test Harrison dimana bilirubin telah diendapkan oleh Barium chloride akan dioksidasi dengan reagen Fouchet menjadi
biliverdin
yang
berwarna
hijau.
Hasil
positif
pada
tes
Harisson,ditandai dengan filtrate yang berwarna hijau pada kertas sa ring. Hasilnya pada praktikum ini positif
warna pada kertas saring yang di
dapatkan timbul warna hijau. Fungsi reagen fouchet pada pemeriksaan harrison untuk mengoksidasi bilirubin menjadi biliverdin. Untuk penyakit hati. Urin yang mengandung bilirubin tinggi tampak berwarna kuning pekat dan jika digoyang – goyang akan timbul busa. Hasilnya Jika menurun dijumpai pada kanker pankreas. Hasil ( + ) jika setelah olahraga / minum ataupun kelelahan / sembelit. Pada bilirubin mengindikasi pada gangguan hati atau saluran empedu. seperti pada hepatitis infeksma toksi hepar kanker hati.
VIII. KESIMPULAN
1. Pemeriksaan bilirubin urin dengan mereaksikan urin dengan reagen Schlesinger dan larutan lugol, hasil positif ditunjukkan bila didapat flourescensi hijau pada filtrate. 2. bilirubin dalam urine akan dioxidasi oleh reagen fouchet menjadi biliverdin
yang berwarna hijau dimana sebelumnya bilirubin
diendapkan oleh barium klorida (BaCL 2). 3. tempat bilirubin berkonjugasi atau tak langsung bersifat larut dalam lemak, serta tidak dapat diekskresikan ke dalam urine. 4. Bilirubinuria mengindikasikan kerusakan hati atau obstruksi empedu dan kadarnya yang besar ditandai dengan warna kuning. 5. Hasilnya pada praktikum ini positif warna pada kertas saring yang di dapatkan timbul warna hijau.
DAFTAR PUSTAKA
Baron, D.N.1990. Patologi Klinik Ed IV , Terj : Andrianto P dan Gunakan J, Penerbit EGC: Jakarta. Depkes.1991. Petunjuk Pemeriksaan Laboratorium Puskesmas. Depkes: Jakarta Guyton, A.C. 1983. Buku Teks Fisiologi Kedokteran, edisi V, bagian 2, terjemahan: Adji Dharma et al.,EGC: Jakarta.
LAMPIRAN
Sampel( urin )
Urin + lugol +
Urin + 2 teteslugol
Hasilsetelah di kocok
reagenschlesinger
Fluoresensiwarnahijau Di saring
