c c
c Pada suatu konsentrasi tertentu, antibiotika mempunyai efek menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Pertumbuhan mikroorganisme tersebut ditandai dengan adanya kekeruhan pada media yang digunakan. Pada kadar tertentu, dimana pertumbuhan mikroorganisme terhambat oleh jumlah antibiotik yang sesuai, tidak terjadi kekeruhan pada media. Dengan metode pengenceran, dapat dilihat pada konsentrasi berapa antibiotik tersebut mempunyai efek menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Pengamatan dilakukan berdasarkan intensitas kekeruhan yang terjadi pada setiap tabung berisi media dan suspensi kuman dengan konsentrasi antibiotika yang berbeda setelah diinkubasi selama 18-24 jam.
9ujuan penentuan kadar hambat minimum antibiotika adalah untuk mengetahui kadar minimal suatu antibiotika yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. Dalam praktikum kali ini dicari kadar minimal antibiotik Amoxicylin terhadap kuman u
c c
Penentuan kepekaan mikroba terhadap suatu antibiotika atau khemoterapeutik dipakai untuk menentukan pengobatan terbaik terhadap penyakit yang disebabkan oleh suatu mikroba tersebut pada manusia atau hewan. Ada dua cara untuk menentukan kepekaan kuman: 1. Cara cakram è 2. Cara tabung è Adapun yang dipakai dalam percobaan kali ini adalah metode cara tabung (tube dilution method). Penentuan Konsentrasi Hambat Minimal ( cara tabung ( dilakukan dengan cara membuat suatu penetasan antibiotik di pembenihan cair, kemudia ditanami kuman yang akan diperiksa. Kepekaan yang relatif diukur dengan melihat konsentrasi antibiotik yang terendah dimana pertumbuhan kuman tidak tampak (KHM). Contoh : 9abung A : larutan kuman dalam larutan antibiotik 10% ĺ jernih, kuman dalam tabung mati. 9abung B : larutan kuman dalam larutan antibiotika 5% ĺ keruh, kuman dalam tabung masih hidup. 9abung C : larutan kuman dalam larutan antibiotika 1% ĺ keruh, kuman dalam tabung masih hidup. Dengan demikian dapat ditentukan Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) antibotika tersebut adalah 5% yang merupakan konsentrasi obat terkecil yang dapat menghambat pertumbuhan kuman.
c c c Alat y y y y y y y y
9abung reaksi kecil sebanyak 16 buah se Pipet 3 buah Îilter bakteri mabu ukur upiritus åortex Ênkubator Bahan
y y y y y
Bakteri u Kaldu nutrisi (NB) Amoxicillin Air suling steril (NaCl) marutan buffer pospat pH 6-8
Ñ !" uediakan biakan kuman standar dalam kaldu nutrisi atau biakan pada agar miring pada 37°C selama 18-24 jam, buat inokulum dalam suspensi kuman standar sesuai dengan Mc.Îarland ÊÊÊ. y uiapkan 4 tabung reaksi secara berderet dan diberi nomor 1, 2, 3, dan 4; yang masing masing diisi dengan NaCÊ fisiologis/air suling steril sebanyak 9 ml. y Pada tabung pertama diisi suspensi kuman dengan menggunakan ose sesuai dengan Mc Îarland ÊÊÊ, kocok sampai homogen. y Ambil 1 ml dari tabung pertama dan masukkan pada tabung kedua, kocok sampai homogen., sehingga diperoleh suspense pengenceran 10x, 100x, dan 1000x (setara dengan 106 kuman per ml).
y
" ! !"! 9imbang seksama 25mg antibiotika dan larutkan dalam labu takar 25ml dengan pelarut yang cocok sehingga diperoleh konsentrasi 1mg/ml, saring dengan filter bakteri. Buat seri pengenceran kelipatan dua sehingga diperoleh kadar : 500mg/ml, 125mg/ml, 62,5mg/ml, 31,2mg/ml, 15,6mg/ml, 7,8mg/ml, 1,95mg/ml, 0,95mg/ml, 0,475mg/ml, 0,237mg/ml.
#$ uiapkan 24 tabung reaksi, isi tiap tabung dengan 0,8ml larutan kaldu nutrisi. $ 9ambahkan pada tiap tabung reaksi suspense kuman (106 kuman per ml) sebanyak 0,1ml. $ 9ambahkan 0,1ml larutan antibiotic hasil pengenceran pada tiap tabung reaksi, lakukan secara duplo. %$ Ênkubasi di incubator 18-24 jam 370C.
&'! Konsentrasi hambat minimal adalah konsentrasi obat terkecil yang menghambat pertumbuhan kuman. - : Keruh, ada pertumbuhan kuman - : Jernih, tidak ada pertumbuhan kuman
c c% c Pada gambar di bawah menggambarkan hasil pengamatan pada cawan petri yang telah mengalami proses inkubasi selama 24 jam. 9etapi hasil yang digunakan saat ni merupakan data dari kelompok lain yang mempunyai daya konsentrasi antibiotik rendah. C
A
B
D
zona bening
y ! () ( &
( &
( &
( &
#***'g/ml
+**'g/ml
+*'g/ml
#+'g/ml
A= 5,17 mm HC= 0,61mm åC= 0,61mm
A= 4,71mm HC= 0,65mm åC= 0,68mm
A= 3,59mm HC= 0,525mm åC= 0,61mm
A= 3,67mm HC=0,77mm åC= 0,69mm
B=
l l
B=
=0,61mm
l l
=0,665mm
B=
l l
=0,5675mm
B=
l l
=0,73mm
KHM= A-B
KHM= A-B
KHM= A-B
KHM= A-B
=5,17-0,61=4,56
=4,71-0,665=4,045
=3,59-0,5675=3,0225 =3,67-0,73=2,94
Keterangan: A= diameter cawan petri B= diameter zona bening, jarak horizontal ditambah jarak vertical kemudian dibagi 2. KHM= Kadar hambat minimal
c Kadar hambat minimum yang digunakan untuk menghambat pertumbuhan suatu mikroorganisme disebut Kadar Hambat Minimum (KHM). Anti mikroba dapat meningkatkan aktivitasnya dari bakteriostatik menjadi bakteriosid, apabila kadar anti mikrobanya ditingkatkan lebih besar dari Minimum Ênhibitory Concentration (MÊC) tersebut. uuatu anti mikroba, menunjukkan toksisitas yang selektif missal, obat lebih beraksi terhadap mikroorganisme/ obat pada reaksi biokimia penting dalam sel parasit lebih unggul daripada pengaruhnya terhadap sel hospes serta karena struktur sel mikroorganisme berbeda dengan struktur sel manusia/ hospescinamis. Pada praktikum kali ini, praktikan di harapkan mampu menentukan kadar hambat minimum suatu antibiotic yg telah di tentukan. Kadar hambat minimum itu sendri merupakan seberapa kuat antibiotic yang di gunakan dapat mencegah terjadinya pertumbuhan bakteri. Jika tidak terdapat bakteri yang tumbuh pada lingkungan yang telah dibuat, itu artinya antibiotic itu mempunyai kadar bunuh mikroba yang mengakibatkan tidak ada satu pun bakteri yang tumbuh. Maka hasil yang digunakan merupakan hasil dari kelompok lain yang telah sesuai dengan teori yang ditegaskan. ueperti yang telah dijelaskan pada bab sebelumnya, dalam penentuan kadar hambat minimum antibiotic ada beberapa metode yang dapat dilakukan. Pada praktikum kali ini cara yang kita gunakan yaitu. Metode difusi dengan cara kaca silinder dan kertas cakram. uebelumnya cawan petri yang akan digunakan diisi dahulu dengan medium yang telah d campur dengan suspensi bakteri. Jika menggunakan kaca silinder biarkan medium menjadi setengah padat kemudian letakkan kaca silinder diantara medium ( jangan sampai menyentuh dasar cawan petri ) dengan maksud agar larutan antibiotic dapat terdifusi dengan baik dan masukkan larutan antibiotic yang telah di buat kedalam kaca silinder menggunakan pipet mikro sebanyak 0,1ml. uedangkan jika menggunakan kertas cakram, kertas sebelum dibasahi dengan larutan antibiotic dan langsung dimasukkan dalam medium yang telah dibuat. Kadar hambat minimal suatu antibiotika dapat melihat kadar terkecil dari suatu antibiotika yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan kuman. Antibiotik yang digunakan dalam percobaan ini adalah Cyprofloxacin dimana konsentrasinya terlalu tinggi untuk percobaan ini sehingga tidak ada bakteri yang tumbuh, selain Êtu juga penataan medium yang terlalu tipis pada cawan petri juga menjadi faktor penentuan kadar hambat minimal antibiotika.
c c+ #$ Aplikasi KHM dalam bidang farmasi adalah pada penentuan dosis, untuk melihat sensitifitas antibiotic pada suatu bakteri. $ 9idak ada bakteri yang tumbuh karena konsentrasi antibiotic tinggi. $ Pada praktikum kali ini hasil yag di dapat setiap kelompok berbeda-beda karena antibiotic yang digunakan setiap kelompok berbeda-beda. %$ Pembuatan medium yang kurang tepat dapat menjadi faktor tidak tersebarnya antibiotic dengan baik untuk membentuk zona bening. +$ iona bening adalah daerah dimana tidak terdapat mikroba yang tumbuh karena penggunaan antibiotik tersebut. , - - -
Diktat penuntun praktikum mikrobiologi-virologi http ://www. ucribd.com/doc/37083951/kadar-hambat-minimum http ://www. Pharzone.com/blog/50-mikrobiologi
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI-VIROLOGI ͟PENENTUAN KADAR HAMBAT MINIMUM MIKROBA͟
p ½ Anggraini E 2 Asih sulistyowati 3 ahya Mulyati Dewi 4 Dea Lutfhiana Ulfa 5 Iis Sukaesih 6 Siska Fitrizah Universitas Muhammadiyah DR Prof HAMKA ( UHAMKA ) FMIPA FARMASI 20½0/20½½
