Isolasi Dna Metode Kitchen Preparation

ISOLASI DNA METODE KITCHEN PREPARATION

ISOLASI DNA DENGAN METODE  KITCHEN PREPA PREPARATION  I.

Tujuan

1. Melakukan isolasi DNA melalui metode kitchen preparation 2. Mengetahui ujud/ !o"il DNA II. Landasan Teo!i DNA daat diisolasi da!i #e!#agai sel atau ja!ingan #aik he$an% tum#uhan mauun manusia manusia.. Isolasi Isolasi DNA me!uaka me!uakan n teknik teknik a$al a$al dalam dalam eman"a eman"aatan atan DNA untuk untuk #e!#ag #e!#agai ai tujuan. Se#ena!n&a telah ada metode standa! dalam mengisolasi DNA% misaln&a teknik atau metode &ang dikemukakan oleh Sam#!ook '1()(*. Isolasi DNA da!i sel mauun ja!ingan euka!io euka!iotik tik%% misaln& misaln&aa da!i da!i ja!ing ja!ingan an tum#uh tum#uhan an mauun mauun he$an he$an dilaku dilakukan kan melalui melalui taha taha  enghan+u!an sel 'lisis*% enghilangan ,NA dan !otein se!ta emu!nian DNA. isolasi DNA ini mem#utuhkan alat-alat +anggih dan #ahan-#ahan &ang +uku mahal% misaln&a EDTA '  Etilendiamin tetra asetat   * &ang #e!"ungsi se#agai me!usak sel dengan +a!a mengikat ion Magnesium &ang #e!"ungsi meme!tahankan integ!itas sel% SDS ' Sodium dodesil sul"at * &ang &ang daat daat mela!u mela!utka tkan n mem#!a mem#!ane ne sel% sel% menden mendenatu atu!asi !asi !otein !otein%% enim enim !otei !oteinas nasee  &ang &ang mend mendeg eg!a !ada dasi si !ot !otein ein%% ,NAse ,NAse mend mendeg eg!a !ada dasi si ,NA ,NA se!ta se!ta Na0l Na0l dan dan +hlo +hlo!o !o"o "o!m !m untu untuk  k  memu!nikan DNA. Modi"ikasi teknik isolasi DNA telah dilakukan ada #e#e!aa la#o!ato!ium% misaln&a  ada taka!an #ahan-#ahan &ang digunakan atau engu!aian/ enggantian jenis #ahan &ang digunakan sesuai denga sel/ ja!ingan sum#e! DNA. Teknik/ metode isolasi DNA &ang sangat sede!h sede!hana ana adalah metode metode  Kitchen Preparation. Metode Metode isolasi isolasi ini meman"aatkan meman"aatkan #ahan #ahan &ang #iasan&a digunakan i#u !umah tangga &aitu sa#un +u+i '+ai!% #u#uk atau k!im* untuk untuk mengga mengganti ntikan kan #ahan #ahan utama utama &ang &ang #e!"un #e!"ungsi gsi untuk untuk melisis melisis sel% ekst!ak ekst!ak #uah #uah nanas nanas se#agai sum#e! enim !otease se!ta ga!am dau!. Isolasi DNA metode metode Kitchen  Kitchen Preparation menggunakan dete!gen se#agai alte!natie  engganti EDTA dan SDS% ga!am dau! se#agai engganti Na0l analitik dan jus nanas se#agai engganti enim !otease. Sedangkan #ahan &ang akan dilihat DNA n&a adalah st!o$#e!i% hal ini dika!enakan st!o$#e!i mudah dihan+u!kan. Selain itu% st!o$#e!i matang menghasilkan enim e+tinase dan selulase &ang mem#antu meme+ah dinding sel. St!o$#e!i &ang umum di#udida&akan adalah o+toloid dengan delaan set genom. al ini sangat #aik 

untuk menunjukkan ekst!aksi DNA ka!ena memiliki delaan da!i setia jenis k!omosom &ang  juga dikatakan #ah$a st!o$#e!i memiliki DNA &ang #e!limah. III. Alat dan #ahan 1. 3 4uah st!o$#e!i 2. 1 antong lasti+ 3. 15 ml Sa#un +ai!/ dete!gen 6. Ga!am 7. e!tas sa!ing 8. Ta#ung !eaksi 9. 25 ml etanol dingin '(8 :* dimasukkan dalam "!eee!  ). ;iet (. Gelas uku!  15. +o!ong ka+a 11. 1 gelas kimia 275 ml I<.0a!a ke!ja 1.

Men&iakan la!utan #u""e! dengan +a!a mengam#il 15 ml sa#un +ai! ditam#ah dengan seujung sendok teh ga!am dau! lalu ditam#ah ai! samai la!utan menjadi 155 ml.

2. Memasukkan 2-3 #uah st!o$#e!i kedalam kantong lasti+% kemudian menghan+u!kan dengan +a!a menekan-nekan samai homogen. antong lasti+ jangan samai #o+o!. 3.

Mengekst!aksi st!o$#e!i &ang telah dihan+u!kan dengan sa!ingan kemudian memasukkan hasil ekst!aksi te!se#ut kedalam ta#ung !eksi.

6. Menam#ahkan sedikit ai! se#agai ela!ut samai tinggi la!utan 2 +m. 7.

Menam#ahkan sa#un +ai! dan ga!am '#u""e!* kedalam ta#ung !eaksi #e!isi la!utan ekst!ak  st!o$#e!i.

8.

Menghomogenkan la!utan dengan +a!a mengo+ok ta#ung !eaksi mem#entuk angka delaan dengan menutu mulut la#ung !eaksi selama 7 menit.

9.

Menam#ahkan etanol dingin &ang #a!u dikelua!kan da!i lema!i endingin kedalam ta#ung !eaksi melalui dinding ta#ung !eaksi se+a!a e!lahan-lahan samai ki!a-ki!a sama dengan  #an&ak la!utan st!o$#e!i.

). Mengamati te!#entukn&a !esiitat ' gumalan utih diatas e!mukaan atas la!utan*. <. asil Taha kegiatan St!o$#e!i dihan+u!kan Mengekt!asi st!o$#e!i

asil engamatan St!o$#e!i lunak dan #e!ai! Ai! ekst!asi #e!$a!na me!ah

Menam#ah ai! Menam#ah sa#un +ai! dan ga!am dau!'#u""e!* Menghomogen la!utan Menam#ahkan etanol dingin

Ekst!asi le#ih en+e!   La!utan #e!$a!na me!ah ke#i!uan La!utan #e!$a!na ke#i!uan Menjadi 2 laian% laisan #a$ah #e!$a!na #i!u susu dan laisan atas utih. Lama kelamaan te!jadi  #e!$a!na

!esiitasi utih

ita-ita di

DNA

laisan

&ang atas.



asil isolasi DNA metode Kitchen Preparation #e!ua !esiitasi DNA &ang #e!#entuk  se!a#ut-se!a#ut #e!$a!na utih &ang tidak te!la!ut dalam etanol tai te!la!ut dalam ai!. 13. - Sm#!ook =% E. ?. ?!it+s and Mani+itis% T. 1()(.  !oleclar Klonin"# A $a%orator& !anal. ' nd   Edition. Old s!ing a!#o! La#o!ato!& ;!ess. @SA. - Ma"tu+hah. 2551. (trate"i Pemanfaatan Penanda !olekler dalam Perkem%an"an )idan"   Hortikltra. Makalah ;eman"aatan ;enanda Molekule! di 4idang o!tikultu!a. ;lant !eo!tesis 17 > )- 17.