CULTIVO IN VITRO DE MERISTEMAS DE Solanum tuberosum (papa), P!sal"s peru#"ana (u#"lla) $ TU%ERI&ACI'N IN VITRO VITRO DE Solanum tuberosum ECUNDACI'N IN VITRO DE *"b"s+us rosas"nens"s(+u+ar-a) rosas"nens"s(+u+ar-a)
.n/el Carrera Un"#ers"-a- Pol"t0+n"+a Sales"ana, In/en"er1a en %"ote+nolo/1a -e los RRNN 23453525 Resumen El cultivo in vitro de meristemas de Solanumtuber Solanumtuberosum osum (papa) y Physalis Physalis peruviana (uvilla)
se lo realiza con el fin de obtener plántulas libres de patógenos se inicia haciendo un protocolo de desinfección con lapsus controlados co ntrolados de exposición a alcohol y una solución de cloro y tween porterior a esto se introduce a un medio de cultivo en total asepsia. La fecunda fecundació ción n in vitro vitro se realiz realizaa aislan aislando do direct directame amente nte óvulos óvulos inmadur inmaduros os para para después después polinizarlos in vitro y cultivarlos hasta la obtención de embriones maduros.
Palabras clave: Physalis peruviana,Solanumtuberosum , Hibiscus Hibiscus rosa-sinensis rosa-sinensis ,tuberización, meristema.
Objetivo General: •
ultivar in vi v itro
de meri merist stem emas as de
Sola Solanu num m tube tubero rosu sum m ( papa ), Physalis peruviana ( uvilla uvilla ); tuberización tuberización in vitro de Sola olanum tuber berosum ( papa ) y fecu fecund ndac ació ión n in vitro de Hibiscus rosa sinensis( cucarda cucarda ).
Objetivos Específicos: •
!ealizar cultivo in vitro de vitro de meristemas para la obtención futura de plántulas completas sin patógenos con con el debi debido do prot protoc ocol olo o de
desinfección ( papa ) •
en
Solanu Solanum m tubero tuberosum sum ( papa# y Phys Physal aliis peruviana ( uvilla uvilla ).
Sola Solanu num m
tuber tuberos osum um
"eterminar si los medios de cultivos son los adecuados adecuados para cultivo cultivo de meristema meristemass para
•
$roporcionar la me%or forma de fecundación in vitro vitro pa para Hibiscus rosa sinensis ( cucarda cucarda ).
Introducción: Los primeros éxitos en &olanum tuberosum fueron fueron lograd logrados os por '(!ELL '(!ELL y ')!*+ ')!*+ -#, /uienes hicieron posible la rein reinco corp rpor orac ació ión n al cult cultiv ivo o come comerc rcia iall de variedades /ue hab0an sido desechadas por virosis, obteniéndose por este sistema papas libr libres es de los los viru viruss 1)1, 1)1, 121, 121, 1&1 1&1 e 131. 131. ombinando la termoterapia y el cultivo de merist meristema emass pudier pudieron on obtene obtenerr un elevad elevado o porcenta%e de plantas plantas sanas.
El desarrollo de un método para cultivar meristemas apicales y laterales, con la finalidad de obtener plantas libres de virus, se fundamenta en la evidencia encontrada por L+')&&E* y (!4E* -5#, /uienes determinaron /ue la concentración de part0culas v0rales de plantas de tabaco decrec0a medida /ue se acercaban al ápice vegetativo. '(!ELL y ')!*+ -# se basaron en estos estudios y cultivaron 1in vitro1 ápices meristemáticos de plantas de dalia, obteniendo plántulas /ue posteriormente fueron in%ertadas en plantas sanas comprobándose /ue estaban libres de virus. La fecundación in vitro se la ha realizado con buenos resultados uno de los primeros en realizarla fue, 6anta et al. -789# aislaron directamente óvulos inmaduros para después polinizarlos in vitro y cultivarlos hasta la obtención de embriones maduros. Esta técnica, denominada test de fertilización o polinización ovular in vitro, se realizó por primera vez en $apaver somniferum y desde entonces ha sido aplicada satisfactoriamente a otras muchas especies.
Materiales: Biológico •
$lanta
de
peruviana ) tuberosum ) • •
uvilla y papa
Physalis -Solanum
$apa brotada :lores maduras;inmaduras de cucarda - Hibiscus rosa-sinensis)
Material de aboratorio: < 9 matraz Erlenmeyer de =>> mL < 9 vasos de precipitados de 7>> o 9=> ml < 7 piceta de 9=> mL < 7 agitador de vidrio < ?ca%as de $etri < 7gasa < = tubos con medio de cultivo
E!uipos < ámara de flu%o laminar < )utoclave < Estereoscopio
Reactivos < Etanol al 5>@ < Al 7.> < *ween 9>
Metodología: "ultivo "n #"tro de meristemas de papa # uvilla: 7# Lavar con agua y %abón los tallos de las plantas de papa y uvilla. 9# &umergir los tallos en una solución de etanol al 5>@ por B minutos y en%uagar con agua estéril. B# &umergir los tallos en una solución de 9> mL de cloro al =@ con C> mL de agua estéril y 9 gotas de *ween 9> durante 7= min y en%uagar con agua estéril-Der :igura 7#. ?# Eliminar las ho%as de los tallos y con ayuda de un Estereoscopio en la parte apical cortarcon un bistur0 los meristemas de >.=mm aproximadamente y sembrar en los tubos con medio de cultivo-Der :igura 9#.
$uberi%ación "n #"tro de papa: 7# Lavar con agua y %abón la papa brotada-Der :igura B #. 9# &umergir la papa brotada en una solución de etanol al 5>@ por B minutos y en%uagar con agua estéril. B# &umergir la papa brotada en una solución de 9> mL de cloro al =@ con C> mL de agua estéril y 9 gotas de *ween 9> durante 7= min y en%uagar con agua estéril-Der :igura ?#.
?# ortar con un bistur0 los brotes de papa de aproximadamente 7 cm. &embrar en el medio de cultivo.
papa
B BB.B $abla ): $orcenta%e de tuberización y contaminación de brotes de papa.
especie
88.?
*vulos # ' ' polen fecundación contaminación sembrados
cucarda
?;? > $abla +: $orcenta%e de fecundación y contaminación de cucarda.
&ecundación "n #"tro de cucarda: 7# Lavar con agua y %abón la flor cerrada de cucarda.
9# &umergir la flor en una solución de etanol al 5>@ por B minutos y en%uagar con agua estéril.
B# &umergir la flor en una solución de 9> mL de cloro al =@ con C> mL de agua estéril y 9 gotas de *ween 9> durante 7= min y en%uagar con agua estéril.
?# En el Estereoscopio cortar las anteras para aislar el polen, cortar el ovario para aislar los óvulos -Der :igura =,8 y 5#.
En el cultivo de meristemas la papa tuvo =>@ de germinación pero no se desarrolló ya /ue se presentó fenolización y en la uvilla @> de germinación y contaminación. En la tuberización de los brotes de papa un brote es decir el BB.B@ se empezó a desarrollar, mientras /ue los 9 restantes se contaminaron. En la fecundación de cucarda ningn óvulo fue fecundado por el polen es decir >@ de fecundación y >@ de contaminación, es decir no existió respuesta.
,iscusión: El cultivo in vitro de meristemos sirve para la obtención de plantas libres de patógenos a partir de plantas contaminadas los resultados /ue obtuvimos fueron positivos en el caso de papa Solanum tuberosum en cuanto a
=# &embrar en el medio de cultivo con ayuda de una pinza ? óvulos y cuidadosamente encima de estos colocar el polen para /ue se produzca la fecundación en los d0as posteriores.
germinación segn -)!4*), 755# se debe a /ue los meristemos están Resultados: compuestos por células no diferenciadas /ue se dividen especie Meristemas ' ' activamente, también llamadas células sembradas germinación contaminación totipotentes por su habilidad de dar papa 9 => > lugar a todos los te%idos vegetales. uvilla
9
>
>
$abla (: $orcenta%e de germinación y contaminación de meristemas de papa y uvilla.
especie
Brotes ' ' sembrados tuberi%ación contaminación
El resultado negativo /ue obtuvimos en el caso de la fecundación in vitro se la puede comprender ya /ue se necesita realizar un procedimiento sumamente cuidadoso debido a /ue el óvulo es una estructura muy pe/ueFa y delicada /ue re/uiere microcirug0a para su aislamiento resultando relativamente fácil daFarla.
>
)demás, al tratarse de un te%ido altamente hidratado, no debe sufrir desecación durante su manipulación, /ue debe ser rápida y llevarse a cabo ba%o una lupa estereoscópica provista de una fuente de luz fr0a. Es importante recordar /ue el aislamiento de los óvulos y del polen -en el caso de llevarse a cabo una polinización in vitro# debe hacerse en el estado fisiológico y morfológico correcto ya /ue de otra forma el proceso no tendr0a lugar. $or ello, debe hacerse un estudio de la duración de los distintos estadios del desarrollo de los órganos a aislar para saber cuándo se encuentran en el estadio adecuado para su cultivo. -G(6, H and ')!&A, I. 7CC#.
"onclusiones:
&e obtuvo /ue la uvilla no presentó germinación ni contaminación debido a /ue los meristemas se /uemaron debido a una exposición brusca al hipoclorito en el protocolo de desinfección. o se obtuvo fecundación de las flores de cucarda debido a /ue el polen no estaba ubicado de forma correcta encima del óvulo y además el medio se encontró muy solidificado. &e concluye ba%o estos parámetros /ue una vez más el medio de cultivo y el protocolo de desinfección no son los más recomendables para este tipo de especies vegetales ya /ue sigue existiendo perdidas a nivel de cultivo in vitro.
Recomendaciones: •
•
&e recomienda para futuras investigaciones con el mane%o de estas plantas tener en cuenta el grado de solidificación de los medios de cultivo ya /ue han venido siendo un problema para la germinación de las mismas. !ealizar de manera adecuada y precisa el protocolo de desinfección ya /ue puede traer
problemas como /uemaduras y contaminación haciendo imposible determinar resultados positivos.
Bibliografía: L+')&&E*, $. y $. (!4E*. 'eristem culture and virus free plants. +nJ !einert, I., 3.$.&. Ga%a%. )pplied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture. &pringer Derlag. C>B pp. 755. '(!ELL 3. y . ')!*+. 'eristem culture and virusKfree plants. +nJ?7 !einert, I., 3.$.&. Ga%a%. )pplied and fundamental aspects of plant cell, tissue and organ culture. &pringer Derlag. C>B pp. 755. )!4*), . y I. :4E*E)LG). (btención de plantas de papa &olanum tuberosum. L. Libres de virus, medionte termoterapia y cultivo de meristemas. $hyton. B= -7#. =B K =. 755. G(6, H and ')!&A, I -Eds.# -7CC#. )pplications of $lant ell and *issue ulture. Iohn iley M &ons. ew 3orN.
-ne.os:
&igura (: *allos de papa y uvilla
&igura ): orte de meristemas &igura +J $apas brotadas del tallo de papa
&igura /: "esinfección brotes papas
&igura 0: orte transversal del
&igura 1: )islamiento de los
ovario de cucarda
óvulos de cucarda
&igura 2: )nteras de cucarda
