Cultivo in vitro de yemas de Minirosa (Rosa spp.) Castro W., Velásquez G. ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO Departamento de Ciencias de la Vida, Facultad de Biotecnología, Laboratorio de cultivo de tejidos vegetales
Sangolquí-Ecuador RESUMEN En el presente trabajo se estudió el cultivo in vitro de minirosa (Rosa spp.). La metodología utilizada durante este estudio consistió en dos tratamientos el primero consistió en tomar explantes de tallo tallo con yema axilares axilares de minirosa, los cuales fueron fueron desinfectados desinfectados con una solución al 1% de detergente más tres gotas de Tween 20 durante 10 minutos, se utilizó una solución germicida de savlon al 5 % durante durante 10 minutos, después se sumergió los explantes explantes en cloro al 1 % con cuatro gotas de Tween 20 durante 10 minutos. El segundo tratamiento diferenció en que primero se sumergió en el clora al 1 % con Tween durante 10 minutos y después en la solución germicida de savlon al 1 % durante 10 minutos. minutos. Para la siembra se utilizó medio MS -1 enriquecido con: 3 mg/L de BAP, 1 mg L de kinetina y 0,5 mg L-1 de ANA, 100 mg L-1 de mioinositol, 0,1 mg L-1 de tiamina, 2 mg L-1 de glicina, 30g L-1 de azúcar y 6,5 g L-1 de agar y pH ajustado a 5,7-5,8. Después de dos semanas de incubación en luz natural y a 23° C de temperatura y a 62% de humedad humedad ambiental se observó observó la aparición de callos (41,66 % de de los explantes) explantes) y de de brotes (16,66 % de los explantes) en varios medios de cultivo. INTRODUCCIÓN
les permite un descanso en verano. Si se les priva de agua entrarán en estado de reposo y perderán las hojas en verano, pero florecerán de nuevo en otoño (Sierra,R. 2002).
Las roas Miniatura son rosales pequeños, 3040 cm. Son reflorecientes y con ramilletes formados generalmente por 3-11 flores diminutas, simples a plenamente dobles. Su Floración es de primavera a otoño y presentan también hojas muy pequeñas. Hay muchísimas variedades. Cada vez se están plantando más (Marchandier, H. & Sigaud,P. 2005).
La Rosa ha sido sometida a lo largo de la Historia a una intensa selección e hibridaciones con el objetivo de crear nuevas variedades y formas. Es la planta más "trabajada" que existe.
Son adecuados para rocallas, borduras, pequeños espacios y también para su cultivo en macetas y jardineras. Las minirosas crecen muy bien en casi cualquier lugar fuera del trópico, en climas calurosos y secos prosperan y florecen tanto que tienden a tener una vida más corta, sobre todo si no se
La minirosa ha conquistado una popularidad que difícilmente puede disputarle cualquier otra flor. De hecho, está considerada como la reina de las flores. Además de su aroma, suave y exquisito, las minirosas tienen el atractivo de sus hermosas flores, y una apariencia elegante que la hace ser la planta
más cultivada en parques y jardines de todo el mundo, convirtiéndola en una especie de gran importancia económica a nivel mundial (Marchandier, H. & Sigaud,P. 2005). El objetivo del presente trabajo fue establecer in vitro yemas de minirosa (Rosa spp.) utilizando medio MS enriquecido con ciertos reguladores de crecimiento METODOLOGÍA Muestr eo
Como material experimental se utilizaron explantes de tallo con yema axilares de minirosa. Desinf ección
d el ex pl ant e
La metodología utilizada durante este estudio consistió en dos tratamientos el primero consistió en tomar explantes de tallo con yema de minirosa, los cuales fueron desinfectados con una solución al 1% de detergente más tres gotas de Tween 20 durante 10 minutos, se utilizó una solución germicida de savlon al 5 % durante 10 minutos, después se sumergió los explantes en cloro al 1 % con cuatro gotas de Tween 20 durante 10 minutos. El segundo tratamiento diferenció en que primero se sumergió en el clora al 1 % con Tween durante 10 minutos y después en la solución germicida de savlon al 1 % durante 10 minutos. Si embra e Incubación
Después de realizados los tres lavados dentro de la cámara para retirar los residuos de cloro y de germicida, se desinfectó los materiales con alcohol al 90 % y se utilizó todas las medidas asépticas, se colocó la muestra sobre la superficie estéril y se retiró las partes del explante quemadas por el cloro
al 1 %, dejando expuesta la yema lateral de la minirosa. Para la siembra se utilizó medio MS enriquecido con: 3 mg/L de BAP, 1 mg L-1 de kinetina y 0,5 mg L-1 de ANA, 100 mg L-1 de mioinositol, 0,1 mg L-1 de tiamina, 2 mg L-1 de glicina, 30g L-1 de azúcar y 6,5 g L-1 de agar y pH ajustado a 5,7-5,8. La siembra s e realizó de manera que la yema quede de manera vertical con el medio de cultivo. RESULTADOS: Como se muestra en la figura 1 los resultados del estudio fueron diversos, se obtuvo generación de callos (41,66%) y de brotes (16,66%), además de necrosis (16,66%) y contaminación bacteriana (24,99%). En las tablas 1 y 2 se muestran el resumen de resultados según el tratamiento 1 y 2 en los doce explantes totales y en la tabla 3 se muestran los porcentajes de los resultados del estudio según el tratamiento.
Figura 1: en la f igura se muestran los resultados de la inducción de brotes de mini rosa; A generación de brote; B necrosis; C generación de callo con contaminación bacteriana; D explante sin crecimiento; E generación de brote con contaminación bacteriana; F generación de callo.
Tabla 1: resumen de resultados de los explantes tratamiento 2
Tabla 2: resumen de resultados de los explantes con el con el tratamiento 1.
Tratamiento 1 Resultado: Numero de frascos: Sin crecimiento 1 Callo 3 Brote 1 Necrosis 1
Tratamiento 2 Resultado: Numero de frascos: Brote 1 Brote contaminado 1 Callo contaminado 2 Necrosis 1 Sin crecimiento 1
Tabla 3: resumen de los resultados en el estudio en porcentajes.
Resultados
Porcentaje de frascos
Sin crecimiento
8,33 %
Generación de callo
25,00 %
Generación de brote
8,33 %
Necrosis
8,33 %
Generación de brote
8,33 %
Generación de brote con contaminación
8,33 %
Generación de callo con contaminación
16,66 %
Necrosis
8,33 %
Sin crecimiento
8,33 %
Tratamiento 1
Tratamiento 2
100 %
DISCUSIÓN El material vegetal de partida más indicado para el cultivo in vitro de la minirosa (rosa spp.), son las yemas axilares, debido a su tamaño, tasa de supervivencia y crecimiento, además de la facilidad de aislamiento. No se debe descuidar la asepsia de modo que los explantes deben ser transferidos a los medios de cultivo previamente desinfectados. En este estudio en comparación a los realizados anteriormente, se observó un nivel mucho menor de contaminación ya que únicamente tres de los frascos sufrieron contaminación bacteriana y esta no fue en un alto porcentaje (24,99). Según Rivera, 2002 con esta especie se ha conseguido en esta fase éxitos de más del 90% y en el caso de aparecer contaminaciones por bacterias u hongos, se puede tratar en distintos sub cultivos mediante antibióticos y fungicidas hasta su desaparición. En el desarrollo de este trabajo no se observó la presencia de contaminantes fúngicos, lo que supone que las medidas asépticas y la calidad de trabajo del operador fueron las adecuadas. Ello constituye un ejemplo de cómo los contaminantes fungosos que no se encuentran asociados al explante inicial pueden ser prevenidos y controlados. Es importante citar que en tres francos se observaron explantes viables que dieron origen a brotes, sin embargo, se debe tener en cuenta que a futuro puede presentarse ennegrecimiento del tejido y necrosis, para evitar estos inconvenientes es recomendable disminuir la intensidad de luz, agregar antioxidantes al medio y al explante, sub cultivar con frecuencia, incrementar las sales de calcio, reducir el nivel de nitrato en el
medio y sumergir el explante en medio líquido por un día (Swartz, H. y Lindstrom, J. 1986). La formación de callos en algunos de los explantes se debe a la presencia conjunta de ANA y BAP en el medio MS que se da como una respuesta morfo génica de los explantes (Oriza., et al. 2000). La necrosis y la oxidación de los explantes tiene un porcentaje alto sobre todo al no incluir al medio de cultivo sustancias que los pueda contrarrestar como carbón activado al igual que el acido cítrico y el acido ascórbico respectivamente (Vega., et al, 2007). CONCLUSIONES Se determinó que la contaminación microbiana disminuyó considerablemente en comparación con la obtenida en estudios anteriores, de modo que las medidas asépticas tomadas por los operadores fueron las correctas. No se obtuvo contaminación fúngica en ninguno de los explantes sembrados, lo que permitió que en tres de los frascos se originen brotes (16,66) y en cuatro callos (41,66) a partir de los explantes de mini rosa, en los otros casos, los explantes sembrados sufrieron un nivel de necrosis (16,66) de modo que no lograron originar brotes. El medio a más de permitir la generación de brotes a partir de las yemas axilares de los explantes de mini rosa permite también la generación de callo debido a la presencia conjunta de BAP y ANA. Para la obtención de resultados favorables en el cultivo in vitro, es necesario tomar
condiciones extremadamente asépticas, como también utilizar correctamente protocolo de desinfección y el método siembra en la cámara, de modo que explantes logren ser viables y libres contaminación.
así el de los de
BIBLIOGRAFÍA Marchandier, H. y Sigaud, P. 2005. Los álamos en la investigación biotecnológica. Unasylva 221, v. 56, p. 38-39. Oriza, C. Buendía, L. Orozco, J. Lechuga, A. & F, Cruz. 2000. Induccion de callo en la planta (BERTONI) HEMSL. St evia r ebaudiana Productora de edulcorante Sierra, R. 2002. El Álamo temblón: bases para su cultivo, gestión y conservación. Editorial Aedos. Primera Edición. España. Swartz, H. J. y Lindstrom, J.T. 1986. Small fruit and grape tissue culture from 1980 to 1985: Commercialization of the technique. 201-220 p. Vega C., Bermejo J., Villegas G., Quezada G., Aguilar M., Conde E., 2007. propagación masiva de Polyle pis toment ell a Weddell ssp. nana mediante técnicas de cultivo in vitro
