Cultivo in vitro de hojas Violeta Africana ( Saintpaulia ionantha) para la inducción a organogénesis directa. Mosquera D. Katherine
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Laboratorio de Cultivo de Tejidos Tejidos Vegetales, Carrera de Ingeniería en Biotecnología, Departamento de Ciencias de la Vida, V ida, Escuela Politécnica del Ejército, Sangolquí-Ecuador
RESUMEN En el presente trabajo se estudió el desarrollo de organogénesis directa en violeta africana (Saintpaulia ionantha) para la obtención de brotes. La metodología utilizada durante este estudio consistió en tomar explantes de hoja de Saintpaulia ionantha, los cuales fueron desinfectados con una solución al 1% de detergente más tres gotas de Tween durante 20 minutos y una solución de cloro al 0,5% más 3 gotas de Tween durante 10 minutos. Para la siembra se utilizó medio MS enriquecido con: 0.8mg/L de tiamina, 0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de azúcar y 7.5g/L de agar. Después de una semana de incubación incubación en luz natural y a temperatura temperatura ambiente se observó la presencia de contaminación fúngica en uno de los frascos utilizados en este ensayo.
INTRODUCCIÓN Las plantas ornamentales han sido de interés
Inicialmente se reproducía por semilla o,
para el hombre desde tiempos antiguos, para
sobre todo, por esqueje foliar. Hoy la forma
la ornamentación de casas, parques y otros
más habitual de reproducirla es el cultivo in
lugares; además, de su valor ornamental
vitro de secciones de peciolo (Bianchini, F. &
estas plantas proporcionan bienestar social y
Pantano, A. 1991.).
psicológico (Pereira, C. et al., 2004). La obtención de plantas cultivadas in vitro La violeta africana (Saintpaulia ionantha) fue
surge
como
descubierta por el Barón Walter von Saint
producción a gran escala de material vegetal
Paul-Illaire en Tanganyika (ahora Tanzania)
de alta calidad genética y fitosanitaria en
en 1892, quien envió las semillas a su padre
cortos periodo de tiempo, respondiendo de
en Alemania, un botánico aficionado. Fue
esta
cultivada por primera vez como planta de
productores (Pereira, C. et al., 2004). Estas
interior y actualmente es una de las plantas
plantas
de flor de interior más populares (Pasqual,
patógenos e incluso es posible eliminar virus
M. et al. 1996).
endémicos (García, L. et al., 2002).
forma
una
a
resultan
alternativa
las
demandas
libres
de
para
de
la
los
gérmenes
La regeneración in vitro de plantas mediante
este proceso no implica la formación de callo
organogénesis directa es altamente deseable
(Roca, W. y Mroginski, L. 1993).
en los trabajos de micropropagación y de conservación de germoplasma. Mediante
El objetivo del presente trabajo fue inducir
este proceso se da la formación de brotes
organogénesis directa en explantes tomados
adventicios o de raíz a partir de un explante
de las hojas de violeta africana (Saintpaulia
de un órgano, los explantes más utilizados
ionantha) utilizando medio MS enriquecido
para este procedimiento son partes de la
con ciertos reguladores de crecimiento, para
plantas con rudimentos de yemas o potencial
la obtención de brotes.
para producción de meristemos adventicios,
METODOLOGÍA Muestreo
Siembra e Incubación
Como material experimental se utilizaron
Después de realizados los tres lavados
hojas (incluyendo el peciolo) de violeta
dentro de la cámara, se colocaron los
africana (Saintpaulia ionantha), tomando en
instrumentos metálicos sobre la superficie,
cuenta que las muestras presenten buen
se aspergearon con etanol 90% y se
color y aspecto en general.
flamearon. Se colocó la muestra sobre la superficie estéril, después de lo cual se
Desinfección del explante
procedió a realizar cortes pequeños en forma de cuadrado (>1cm), tomando en cuenta que
Se lavó las muestras con agua corriente para
se hayan eliminado tejidos necrosados. Los
retirar todas las impurezas, frotando el haz y
explantes fueron sembrados en frascos con
el envés con las manos. Posterior a esto se
medio MS ajustado a un pH de 5.7 –5.8 y
las sumergió en una solución al 1% de
enriquecido
detergente más tres gotas de Tween 20
0.2mg/L de KIN, 2mg/L de AIA, 20g/L de
durante 20 minutos en agitación. Se enjuagó
azúcar y 7.5g/L de agar, en el primer
las muestras, dos veces con agua destilada y
recipiente se colocaron dos explantes con el
una con agua estéril, se eliminó el agua y se
haz en contacto con el medio y en el
las sumergió en una solución de cloro al 0,5%
segundo
más 3 gotas de Tween 20, durante 10
explantes con el envés en contacto con el
minutos más en agitación. Finalmente se
medio. Se incubó en luz natural y a
procedió a realizar tres lavados con agua
temperatura ambiente durante una semana,
estéril dentro de la cámara de siembra.
después de lo cual se observaron los
con
0.8mg/L
recipiente
resultados obtenidos.
se
de
tiamina,
colocaron
dos
RESULTADOS
Figura 1. La figura muestra: A) Ausencia total de contaminación en el frasco en el que los explantes fueron colocados con el envés en contacto con el medio y B) Presencia de contaminación fúngica en el frasco en el que los explantes fueron colocados con el haz en contacto con el medio.
Tabla 1. La tabla muestra en cantidades la contaminación que existió en los medios de cultivo y explantes de hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha), obteniendo como resultado contaminación fúngica en uno de los explantes que fueron colocados con el haz en contacto con el medio.
Frasco 1 (envés en
Contaminación bacteriana (No. de explantes contaminados)
Contaminación fúngica (No. de explantes contaminados)
0
0
0
1
contacto con el medio) Frasco 2 (haz en contacto con el medio)
Tabla 2. La tabla muestra en porcentajes la contaminación que existió en los medios de cultivo y explantes de hojas de violeta africana (Saintpaulia ionantha), obteniendo como resultado contaminación fúngica en el 50% de los explantes que fueron colocados con el haz en contacto con el medio.
Contaminación bacteriana (Porcentaje de contaminación)
Contaminación fúngica (Porcentaje de contaminación)
0%
0%
0%
50%
Frasco 1 (envés en contacto con el medio) Frasco 2 (haz en contacto con el medio)
DISCUSIÓN La
contaminación
microbiana,
esporas de hongos y otros (Barker, P.et al.,
principalmente por hongos es una de las
1979)
o
puede
limitantes en el éxito del establecimiento
inadecuadas
aséptico de los cultivos in vitro. La presencia
(Alvarado, Y. 1998).
de
deberse trabajo
a del
técnicas operador
de microorganismos contaminantes ocurre principalmente cuando la planta donante
Estos resultados corroboraron el criterio de
crece directamente en el campo y está
que para el establecimiento de material
expuesta a plagas, enfermedades, polvo y
vegetal en condiciones in vitro se requiere de
otros agentes, sin ningún tipo de control
la existencia de un banco de donantes que
ambiental (Ramírez-Villalobos, M. y Salazar,
garantice su calidad fitosanitaria (Jiménez, E.
E. 1997).
1998), a pesar de ello cabe mencionar que no existió la presencia de contaminación
Danby et al. (1994) y Alvarado, Y. (1998) citaron
a
los
géneros
bacteriana en este ensayo.
Cladosporium,
y
También es importante citar que existió un
microorganismos
100% de viabilidad en los explantes, pero hay
fungosos más comúnmente introducidos al
que tener en cuenta que a futuro puede
cultivo de tejidos.
presentarse ennegrecimiento del tejido y
Aspergillus, Fusarium
Penicillium,
como
los
Curvularia
necrosis. Para evitar estos inconvenientes es Este tipo de contaminación se favorece por
recomendable disminuir la intensidad de luz,
las características anatómicas propias de la
agregar antioxidantes al medio y al explante,
violeta africana (Saintpaulia ionantha) como
subcultivar con frecuencia, incrementar las
la presencia de pelos en las hojas que
sales de calcio, reducir el nivel de nitrato en
impiden la penetración de los desinfectantes
el medio y sumergir el explante en medio
lo
líquido por un día (Swartz, H. y Lindstrom, J.
cual
dificulta
contaminantes como
la
eliminación
de
el polvo, bacterias,
1986).
CONCLUSIONES Se determinó que la contaminación fúngica
Los resultados obtenidos en este trabajo
tuvo una incidencia del 25% en la inducción
indican
de
utilizando
problemática en el cultivo in vitro de plantas
explantes tomados de las hojas de violeta
y de desarrollar estrategias para su control,
africana (Saintpaulia ionantha) y que los
como la utilización de muestras producidas
contaminantes
en condiciones in vitro.
organogénesis
directa
fungosos
predominaron
la
necesidad
de
atender
esta
sobre otros grupos microbianos.
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