Determinación de ácido úrico los métodos de determinación de acido úrico se basan en el poder reductor del urato, tanto en medio acido como como alcalino. Se puede medir el ácido úrico por métodos químicos o por métodos enzimáticos. Métodos químicos En medio acido, el acido úrico se descompone en aloxano y urea; en medio alcalino la oxidación del urato produce lanolina y peroxido de hidrogeno. La cuantificación se realiza por procedimientos colorimétricos empleando un cromógeno, como al acido fosfotungstico, iones ferricos o la neocuproina, que se reduce de manera simultanea con la oxidación del urato. Su principal inconveniente era la falta de especificidad, por la que han quedado relegados a un segundo plano.
Métodos enzimáticos. La enzima uricasa aislada de tejidos de mamíferos degrada el acido úrico en presencia del oxigeno del aire, en alantoina y peróxido de hidrogeno. Las restantes reacciones analíticas parten del peróxido de hidrogeno formado. Acido urico urico
uricasa
alantoina alantoina H 2O2
El método de Kageyama, el peróxido de hidrogeno oxida, presencia de catalasa, el metanol a formaldehido, el cual reacciona con la acetilcolina en presencia de iones amonio, dando un cromógeno amarillo, cuyo máximo de absorción se situa a 410 nm. En el método de Haeckel, el peróxido de hidrogeno oxida etanol a acetaldehído en presencia de la catalasa. El acetaldehído es oxidado a acetato por la enzima aldehído deshidrogenasa, y el NADP pasa a NADPH, que absorbe a 340 nm. En el método de trinder, el peróxido de hidrogeno reacciona un derivado fenolico clorado o sulfocrado y 4- aminofenazona, dando una quinonimida roja, cuyo máximo de absorción se encuentra en 500 nm. La determinación de la concentración de acido urico se debe realizar únicamente en muestras sericas extraidas por la mañana en condiciones de ayunas. De esta manera evitamos modificaciones circadianas en los niveles de uratos y la interferencia de los sueros turbios por presencia de triglicéridos exógenos (quilomicrones). 1 La urea es el principal producto de desecho del metabolismo de las proteínas, representando la forma mayoritaria de eliminación de nitrógeno. La urea es un compuesto relativamente inocuo para el organismo comparado con el amonio y es muy soluble en agua.
Los métodos para determinar urea pueden clasificarse en grandes grupos; métodos directos basados en la reacción de condensación de Fearon, según, la cual la urea se condensa con la diacetilmonoxima, para dar un compuesto coloreado; y métodos indirectos basados en la determinación del amonio liberado por acción de la ureasa sobre la urea. Actualmente solo presentan intereses los métodos enzimáticos basados en la acción catalítica de la enzima ureasa. La urea es hidrolizada por la ureasa, liberando anhídrido carbonico y amoniaco según la reacción: Urea + H2O
ureasa
CO2 + 2NH3
La urea se cuantifica a partir del amonio liberado, que puede ser medido en varios reactivos. La reacción de Berthelot es la mas utulizada: en ella el amonio reacciona con el hipoclorito dando cloramina que en presencia de fenol y catalizado por el nitroprusiato produce un derivado indofenolico de color azul en medio alcalino, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de urea. Existe un método enzimático cinético de medición de la urea que utiliza las enzimas ureasa y glutamato deshidrogenasa. El amonio liberado es convertido en glutamato por acción de la glutamato deshidrogenasa, en presencia de NADH y alfacetoglutarato, según la reacción: NH4 + NADH + alfacetoglutarato + H2O
glutamato deshidrogenasa
NAD + glutamato
Referencias bibliográficas: 1- Diaz J., Fernandez M., Parede F., 1997, “ Aspectos Basicos de Bioquimica Climica”, España, Editorial Diaz de Santos, pp - 83 y 95.
