“Año De La Consolidación Del Mar De Grau” “UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO” Facultad De Ciencias Biológicas Escuela Profesional De Biología
ALUMNA:
BENITES RUÍZ, STEFANY
CICLO: VI- “A” MESA: 01 TEMA: “DEMOSTRACIÒN DE ACCIÒN LISOSOMAL EN RATÒN ALBINO” DOCENTES: DR. JUAN CÉSAR MURO MOREY MSC. MANUEL PESANTES VERA DR. JOSÉ SALDAÑA JIMENEZ
2016 DEMOSTRACIÒN DE ACCIÒN LISOSOMAL EN RATÒN ALBINO
I. INTRODUCCIÓN:
Los lisosomas tienen una estructura muy sencilla, semejantes a vacuolas, rodeados solamente por una membrana, contienen gran cantidad de enzimas digestivas que degradan todas las moléculas inservibles para la célula. Funcionan como "estómagos" de la célula y además de digerir cualquier sustancia que ingrese del exterior, vacuolas digestivas ingieren restos celulares viejos para digerirlos también, llamados entonces vacuolas autofágicas. Los lisosomas son llamados bolsas suicidas porque si se rompiera su membrana, las enzimas encerradas en su interior, terminarían por destruir a toda la célula. Los lisosomas se forman a partir del retículo endoplásmico rugoso y posteriormente las enzimas son empaquetadas por el aparato de Golgi. (Granillo. V, 2011) La función de los lisosomas puede apreciarse en los glóbulos blancos de la sangre humana cuando engullen bacterias. Cuando las bacterias son ingeridas por la célula, quedan encerradas en vacuolas. Una vez ha ocurrido esto, los lisosomas de la célula se fusionan con las vacuolas y vierten sus enzimas hidrolíticas. Las bacterias son digeridas rápidamente. (Van Weert A.W.M. 1995) Las sustancias que penetran en la célula por fagocitosis o pinocitosis van a experimentar la acción de las enzimas digestivas intracelulares, contenidas en orgánulos llamados lisosomas. Estos orgánulos son corpúsculos esféricos que miden aproximadamente 0.5 micrómetros, están delimitados por una unidad de membrana y contienen enzimas hidrolíticas. Se han encontrado lisosomas en todas las células animales y vegetales. Los lisosomas promueven la digestión intracelular, tanto del material exógeno que penetra en la célula por pinocitosis, como también el material endógeno. Este último puede estar constituido por orgánulos degenerados o por productos de desasimilación del metabolismo celular. (John Ingraham y Catherine Ingraham,1998) El pH en el interior de los lisosomas es de 4,8 (bastante menor que el del citosol, que es neutro) debido a que las enzimas proteolíticas funcionan mejor con un pH ácido. La membrana del lisosoma estabiliza el pH bajo bombeando iones (H+) desde el citosol, así mismo, protege al citosol e igualmente al resto de la célula de las enzimas digestivas que hay en el interior del lisosoma. (Devlin, T. M. 2004.) Las enzimas lisosomales son capaces de digerir bacterias y otras sustancias que entran en la célula por fagocitosis, u otros procesos de endocitosis. Los lisosomas utilizan sus enzimas para reciclar los diferentes orgánulos de la célula, englobándolos, digiriéndolos y liberando sus residuos en el citosol. De esta forma los orgánulos de la célula se están continuamente reponiendo. El proceso de digestión de
los orgánulos se llama autofagia. Por ejemplo, las células hepáticas se reconstituyen por completo una vez cada dos semanas. (Granillo. V, 2011) El objetivo de esta práctica es demostrar y demostrar la fagocitosis que se da en el ratón. II. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
Materiales.
Ratón Albino Microscopio compuesto Ratón Albino Laminas porta y cubreobjetos. Pipeta de un ml. Mechero de Bunsen Estuche de disección Algodón Alcohol Gotero Torundas o hisopos Colorante Whright
Métodos.
Principalmente inyectamos al ratón de microorganismos patógenos (Straphylococcus aureus) en solución a través de la vía peritoneal antes de que el animal sea estudiado en el laboratorio. Luego extraemos el exudado peritoneal con la ayuda de un hisopo o torunda y lo esparcimos en 6 láminas porta objeto Dejemos que seque con la ayuda del mechero bunsen y de inmediato procedemos a la coloración Wight. En la coloración agregamos 10 gotitas de colorante Whright a la muestra y de inmediatamente agregamos 20 gotas de agua destilada, dejándolo en reposo unos 10 minutos. Por ultimo desechamos el sobrante, enjuagamos en agua ligeramente a chorro y dejamos secar la muestra. Dicha muestra está lista para la observación al microscopio.
III. RESULTADOS: Muestra: Exudado peritoneal de Mus musculus Observación: Fagocitosis (bacterias dentro del fagosoma) Preparado: en fresco Coloración: Whright Aumentos Focales: 1000 x
Muestra: Exudado peritoneal de Mus musculus Observación: Fagocitosis (bacterias dentro del fagosoma) Preparado: en fresco Coloración: Whright Aumentos Focales: 1000 x
Muestra: Exudado peritoneal de Mus musculus Observación: Fagocitosis (bacterias dentro del fagosoma) Preparado: en fresco Coloración: Whright Aumentos Focales: 1000 x
Muestra: Exudado peritoneal de Mus musculus Observación: Fagocitosis (bacterias dentro del fagosoma) Preparado: en fresco Coloración: Whright Aumentos Focales: 1000 x
IV. COMENTARIO:
Muchas células “comen” o digieren mediante fagocitosis, mecanismo que consiste en rodear con extensiones de la membrana a partículas extracelulares que pueden ser organelos defectuosos, sustancias dañinas o microorganismos infecciosos. Estas partículas ya rodeadas de membrana se mueven entonces dentro del citoplasma, dentro de sacos o dentro de vesículas membranosas que reciben el nombre de fagosoma, Los lisosomas (primarios) van a reconocer estas vesículas y se fusionaran con ellas (secundarios). El contenido de las dos vesículas de mezcla y las enzimas lisosómicas digieren la partícula extraña, convirtiéndolos en aminoácidos, monosacáridos, ácidos grasos y otras moléculas pequeñas. Las moléculas pequeñas se difunden luego fuera de esta vesícula hacia el citosol para nutrir a la célula. Cuando los microorganismos o sustancias extrañas no pueden digerirse se forman los cuerpos residuales.
VI CONCLUSIÓN:
o Determinamos que los lisosomas digieren el material intracelular o proveniente del exterior gracias a sus enzimas hidrolíticas las cuales intervienen en esta digestión celular. o Determinamos la presencia de bacterias gram positiva dentro y fuera del fagosoma, lo que indica una tinción violeta y un color azul.
VII REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
Van Weert A.W.M. (1995) Transport from late endosomes to lisosomes, but not sorting of integral membrane proteins in endosomes, depends on the vacuolar proton pum, Cell Biol 130:821
Granillo Velázquez, María del Pilar; Valdivia Urdiales, Blanca Alma; Villarreal Domínguez, María del Socorro. (2011). Biología general. Los sistemas vivientes. México: Grupo editorial patria. Devlin, T. M. (2004). Bioquímica. Barcelona: Reverté. John L. Ingraham, Catherine A. Ingraham. (1998). Introducción a la microbiología. España: Editorial Reverte.
VIII ANEXOS
Figura1. Colorante de whritght
Figura2. Estamos impregnando el colorante sobre la muestra
Figura3. Pasamos el hisopo por todo peritoneo y extraemos el exudado.
