Cuantificacion de paracetamol en saliva DMA

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
DESARROLLO ANALÍTICO LABORATORIO
ÁREA TERMINAL FARMACIA CLÍNICA

Adecuación de un método analítico para la cuantificación de paracetamol.

Objetivos:

a) Adecuar un método analítico para la cuantificación de paracetamol utilizado para muestras de orina en muestras de saliva.

b) Realizar la verificación del sistema para asegurar el correcto funcionamiento de los equipos e instrumentos y la calidad de los reactivos utilizados.

c) Aplicar el método adición de un estándar para la cuantificación de paracetamol en saliva.

d) Llevar a cabo un análisis estadístico de los resultados obtenidos y valorar si el método analítico desarrollado es candidato a validación.

Hipótesis

Si el método analítico que se desarrollara logra su objetivo al cuantificar el paracetamol en una muestra de saliva y además cumple con los parámetros de linealidad y especificidad, entonces se obtendrá un método analítico que posteriormente podrá ser validado.

ELABORÓ
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Metodología: Diagrama de Flujo
-Anteriormente se realizó un barrido para conocer la L.O para leer en el espectrofotómetro-Anteriormente se realizó un barrido para conocer la L.O para leer en el espectrofotómetro2211Verificación del SistemaVerificación del Sistema
-Anteriormente se realizó un barrido para conocer la L.O para leer en el espectrofotómetro
-Anteriormente se realizó un barrido para conocer la L.O para leer en el espectrofotómetro
2
2
1
1
Verificación del Sistema
Verificación del Sistema

¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción? Preparación Solución de NaOH sobresaturada Preparación Solución de NaOH sobresaturada
¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?
Preparación Solución de NaOH sobresaturada
Preparación Solución de NaOH sobresaturada

Solución de estándar de p-aminofenolSolución de estándar de p-aminofenol
Solución de estándar de p-aminofenol
Solución de estándar de p-aminofenol

Verificar que la solución tenga un pH de 14Verificar que la solución tenga un pH de 14 NO
Verificar que la solución tenga un pH de 14
Verificar que la solución tenga un pH de 14

Curva estándar de p-aminofenol a 5, 10, 20,40 y 50 µg/mlCurva estándar de p-aminofenol a 5, 10, 20,40 y 50 µg/ml
Curva estándar de p-aminofenol a 5, 10, 20,40 y 50 µg/ml
Curva estándar de p-aminofenol a 5, 10, 20,40 y 50 µg/ml
¿La solución tiene un PH 14?¿La solución tiene un PH 14?
¿La solución tiene un PH 14?
SI

33 NO
3
3
Solución de fenolSolución de fenol
Solución de fenol
Solución de fenol

SI

Reacción entre p-aminofenol+ fenol+ NaOH (Medio básico, pH 14)Reacción entre p-aminofenol+ fenol+ NaOH (Medio básico, pH 14)*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (15 muestras)*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (15 muestras)Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar
Reacción entre p-aminofenol+ fenol
+ NaOH
(Medio básico, pH 14)
Reacción entre p-aminofenol+ fenol
+ NaOH
*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (15 muestras)
Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar

¿Se disolvió el fenol?¿Se disolvió el fenol?Agitar cada tubo de ensayo durante un minutoAgitar cada tubo de ensayo durante un minuto
¿Se disolvió el fenol?
Agitar cada tubo de ensayo durante un minuto

*Dejar reposar durante 30 min cada reacción*Dejar reposar durante 30 min cada reacción NO
*Dejar reposar durante 30 min cada reacción

22
2
2
SI

11
1
1

ELABORÓ
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Metodología: Diagrama de Flujo
4433
4
4
3
3

¿Los resultados fueron satisfactorios para la verificación del sistema?¿Los resultados fueron satisfactorios para la verificación del sistema?*Espectrofotómetro Hitachi V-2400*Espectrofotómetro Hitachi V-2400Lectura de la absorbancia de cada nivel de concentración y sus repeticiones a 630nm Lectura de la absorbancia de cada nivel de concentración y sus repeticiones a 630nm
¿Los resultados fueron satisfactorios para la verificación del sistema?
¿Los resultados fueron satisfactorios para la verificación del sistema?
*Espectrofotómetro Hitachi V-2400
*Espectrofotómetro Hitachi V-2400
Lectura de la absorbancia de cada nivel de concentración y sus repeticiones a 630nm
Lectura de la absorbancia de cada nivel de concentración y sus repeticiones a 630nm

1: Agitación de cada tubo de ensayo durante un minuto1: Agitación de cada tubo de ensayo durante un minuto NO
1: Agitación de cada tubo de ensayo durante un minuto
1: Agitación de cada tubo de ensayo durante un minuto
¿La lectura de las muestras es lineal?¿La lectura de las muestras es lineal?
¿La lectura de las muestras es lineal?

NO
SI

Proseguir al desarrollo del método analíticoProseguir al desarrollo del método analítico SI
Proseguir al desarrollo del método analítico
Proseguir al desarrollo del método analítico

Análisis Estadístico de los resultados obtenidosAnálisis Estadístico de los resultados obtenidos
Análisis Estadístico de los resultados obtenidos
Análisis Estadístico de los resultados obtenidos
Repetir Verificación del sistemaRepetir Verificación del sistema
Repetir Verificación del sistema
Repetir Verificación del sistema

Discusión de ResultadosDiscusión de Resultados
Discusión de Resultados
Discusión de Resultados

ConclusionesConclusiones
Conclusiones
Conclusiones

44
4
4

ELABORÓ
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REVISÓ
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AUTORIZÓ
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11Metodología: Diagrama de Flujo
1
1
Desarrollo del método analíticoDesarrollo del método analítico
Desarrollo del método analítico
Desarrollo del método analítico

Solución de fenolSolución de fenol*Debe haber leído y firmado su consentimiento informado.*Administración de paracetamol durante 2 días 500mg cada 8 horas.*Debe haber leído y firmado su consentimiento informado.*Administración de paracetamol durante 2 días 500mg cada 8 horas.
Solución de fenol
Solución de fenol
*Debe haber leído y firmado su consentimiento informado.
*Administración de paracetamol durante 2 días 500mg cada 8 horas.
*Debe haber leído y firmado su consentimiento informado.
*Administración de paracetamol durante 2 días 500mg cada 8 horas.

Buscar un donante de salivaBuscar un donante de saliva
Buscar un donante de saliva
Buscar un donante de saliva

Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar Calentamiento a baño María de la solución para disolver el fenol en agua antes de aforar

Obtener 9ml de saliva del donante.Obtener 9ml de saliva del donante.
Obtener 9ml de saliva del donante.
Obtener 9ml de saliva del donante.

*Utilizar 9 tubos de ensayo, para hacer la reacción por triplicado*Utilizar 9 tubos de ensayo, para hacer la reacción por triplicado
*Utilizar 9 tubos de ensayo, para hacer la reacción por triplicado
*Utilizar 9 tubos de ensayo, para hacer la reacción por triplicado
¿Se disolvió el fenol?¿Se disolvió el fenol?

Hidrolisis acida a cada ml de la muestra.Hidrolisis acida a cada ml de la muestra.
Hidrolisis acida a cada ml de la muestra.
Hidrolisis acida a cada ml de la muestra.
NO

Centrifugar cada mililitro de saliva y separar el sobrenadante transvasándolo a un nuevo tubo de ensayo Centrifugar cada mililitro de saliva y separar el sobrenadante transvasándolo a un nuevo tubo de ensayo *Primero 5min a 3000 rpm.*Posterior 3 min a 2000rpm*Primero 5min a 3000 rpm.*Posterior 3 min a 2000rpm
Centrifugar cada mililitro de saliva y separar el sobrenadante transvasándolo a un nuevo tubo de ensayo
Centrifugar cada mililitro de saliva y separar el sobrenadante transvasándolo a un nuevo tubo de ensayo
*Primero 5min a 3000 rpm.
*Posterior 3 min a 2000rpm
*Primero 5min a 3000 rpm.
*Posterior 3 min a 2000rpm
SI

Preparación de la solución de NaOHPreparación de la solución de NaOH
Preparación de la solución de NaOH
Preparación de la solución de NaOH

Curva estándar de p-aminofenol a 3,4 y 5 µg/ml Curva estándar de p-aminofenol a 3,4 y 5 µg/ml
Curva estándar de p-aminofenol a 3,4 y 5 µg/ml
Curva estándar de p-aminofenol a 3,4 y 5 µg/ml
Verificar que la solución de NaOH tenga un pH 14Verificar que la solución de NaOH tenga un pH 14
Verificar que la solución de NaOH tenga un pH 14
Verificar que la solución de NaOH tenga un pH 14

2211
2
2
1
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ELABORÓ
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3
3
Espectrofotómetro Hitachi V-2400Espectrofotómetro Hitachi V-240022
Espectrofotómetro Hitachi V-2400
Espectrofotómetro Hitachi V-2400
2
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1: Preparación de la solución de NaOH sobresaturada1: Preparación de la solución de NaOH sobresaturadaProceder a leer la absorbancia de las 9 muestras a 630 nmProceder a leer la absorbancia de las 9 muestras a 630 nm¿La solución tiene un PH 14?¿La solución tiene un PH 14?
1: Preparación de la solución de NaOH sobresaturada
1: Preparación de la solución de NaOH sobresaturada
Proceder a leer la absorbancia de las 9 muestras a 630 nm
Proceder a leer la absorbancia de las 9 muestras a 630 nm

NO

¿La lectura de las muestras es lineal?¿La lectura de las muestras es lineal?

SI
*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (9 muestras)*Repetir por triplicado la reacción para cada nivel de concentración en tubos de ensayo (9 muestras) NO
Reacción entre muestra de saliva+ std. p-aminofenol+ fenol+ NaOH (Medio básico, pH 14)Reacción entre muestra de saliva+ std. p-aminofenol+ fenol+ NaOH (Medio básico, pH 14)
Reacción entre muestra de saliva+ std. p-aminofenol+ fenol
+ NaOH
Reacción entre muestra de saliva+ std. p-aminofenol+ fenol
+ NaOH

SI

Realizar el análisis estadístico por adición de un estándar. Realizar el análisis estadístico por adición de un estándar.
Realizar el análisis estadístico por adición de un estándar.
Realizar el análisis estadístico por adición de un estándar.
Agitar cada tubo de ensayo durante un minutoAgitar cada tubo de ensayo durante un minuto
*Dejar reposar durante 30 min cada reacción*Dejar reposar durante 30 min cada reacción

¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?¿Se manifestó la coloración azul característica de la reacción?
Discusión de resultadosDiscusión de resultados
Discusión de resultados
Discusión de resultados

NO
ConclusionesConclusiones
Conclusiones
Conclusiones

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SI
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ELABORÓ
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Los resultados fueron satisfactorios para el Desarrollo del método AnalíticoLos resultados fueron satisfactorios para el Desarrollo del método Analítico
Los resultados fueron satisfactorios para el Desarrollo del método Analítico
Los resultados fueron satisfactorios para el Desarrollo del método Analítico

Repetir el Desarrollo del Método Analítico Repetir el Desarrollo del Método Analítico
Repetir el Desarrollo del Método Analítico
Repetir el Desarrollo del Método Analítico

NO

SI

Validación del método analíticoValidación del método analítico
Validación del método analítico
Validación del método analítico

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