Cromatografía Cromatografía en columna Antecedentes Cromatografía en columna y capa na. Características y aplicaciones. Cromatografía de adsorción y de partición o reparto. Selecciona de Eluyentes para separar separar mezclas de compuestos por cromatografía en columna. Técnicas Técnicas de separación separación cromatográca cromatográca por elución, elución, adsorción adsorción y desplazamiento. desplazamiento. Eluyentes y adsorbentes para cromatografía en columna y capa na. actores !ue in"uyen en la separación por cromatografía. •
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La cromatografía de columna es una técnica basada en la adsorción y solubilidad. solubilidad. Es una técnica de partición sólido-liquido, puesto que existe un equilibrio equilibrio dinámico dinámico entre la adsorción adsorción y deserción deserción (elución. Existen diferentes clases de interacciones intermoleculares que originan que los compuestos orgánicos se unan a la superficie superficie del adsorbente adsorbente con mayor o menor fuer!a dependiendo de la la naturale!a polar o no polar de los compuestos. compuestos. La columna consiste en un tubo de "idrio en posición "ertical en el cual, por la la parte ba#a, se colectaran las diferentes diferentes fracciones. En el fondo fondo del tubo se introduce un peque$o tro!o tro!o de algodón que cumple cumple la función función de filtro que impide que el gel del sílice salga. %na %na "e! colocado el algodón, algodón, se coloca coloca una delgada capa de arena, la cual no permite que l algodón se mue"a de su posición. &osteriormente, &osteriormente, por la parte superior, superior, se introduce el adsorbente, el cual 'a sido sido pre"iamente suspendido en el disol"ente disol"ente seleccionado ("ía 'meda para la separación con el ob#eto de eliminar eliminar las burbu#as que se se encuentran en las partículas de adsorbente. Existen Existen otros tipos de empacados, el empacado por "ía "ía seca consiste consiste en introducir introducir el adsorbente y posteriormente el eluyente seleccionado. )e emplea para la separación de me!clas o purificación de sustancias a escala preparati"a. *omo fase estacionaria se usa, generalmente, gel de sílice o almina dentro de una columna como las que se pueden "er en la figuras. La elección del disol"ente es crucial para una buena separación. +ic'o disol"ente pasa a tra"és de la columna por efecto de la gra"edad o bien por aplicación de presión (cromatografía flas'. La columna se prepara me!clando e l soporte con disol"ente y se rellena la columna poniendo en el fondo de ésta un poco de algodón o lana de "idrio, para e"itar que la sílica o la almina queden retenidas en la columna y d el disol"ente se enrasada 'asta el ni"el del soporte. continuación continuación se introduce la muestra por la parte superior de la columna y se eluye con el disol"ente elegido, recogiéndose por lo general en tubos de ensayo
I. OBJETIVOS a) *onocer la cromatografía en columna como técnica de separación de me!clas de sustancias, sus características y los factores que en ella inter"ienen. b) %tili!ar la cromatografía en columna para la purificación de una sustancia contaminada con un colorante. c) *ontrolar con cromatografía en capa fina el proceso de separación de me!clas por cromatografía en columna. )e le proporcionará 0.5 g de una me!cla sólida, de la cual separará el producto principal, por *romatografía en *olumna. &ara empacar la columna su#étela en el soporte con las pin!as. Engrase la lla"e y manténgala en posición de cerrado. ntrodu!ca 'asta el fondo un peque$o peda!o de algodón ayudándose con la "arilla de "idrio, agregue / ml de acetato de etilo y presione sua"emente el algodón para que quede bien colocado y sin burbu#as
&repare una suspensión de 15 g de 0el de )ílice para columna en 1/ ml de acetato de etilo y agite 'asta eliminar las burbu#as. tra"és del embudo "ierta la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme. bra la lla"e para eliminar el exceso de disol"ente teniendo cuidado de no de#ar secar la 0el de )ílice. En el "aso de 1/ ml disuel"a la me!cla problema con la mínima cantidad de cetato de Etilo y ayudándose con el agitador "iértala con cuidado, para que quede colocada uniformemente por encima de la 0el de )ílice, abra la lla"e para que salga eluyente y se adsorba la muestra aplicada, cuidando que no se seque la 0el de )ílice, Eluya la muestra. *olecte fracciones (eluatos de / ml en los frascos "iales y controle la separación, 'aciendo cromatografía en capa fina a cada una de las fracciones ante una muestra de referencia (testigo. Eluya las cromatoplacas en me!cla de 2exano-cetato de Etilo (3, re"ele con lu! %.4. En cada cromatoplaca obser"e el cambio de la intensidad de coloración de la manc'a del producto principal. La elución y separación termina en el momento en que no aparece manc'a. En un matra! reuna las fracciones que contengan la misma sustancia. &ara recuperar la sustancia destile el exceso de disol"ente utili!ando una destilación simple, calentando el matra! con un ba$o maría eléctrico, de#e en el matra! un residuo de 1 ml aproximadamente y "iértalo en un "aso, para que termine de e"aporarse en la campana. &ese el producto recuperado, calcule el rendimiento.
5esultados +espués de este procedimiento se recolectan en / frascos "iales muestras de /ml para "erificar don de tenemos el compuesto de interés se 'ace una cromatografía en capa fina, obteniendo los siguientes resultados
$ #
testig
*omo se "e, las fracciones que destilamos fueron 67 y 68 ya que contienen al compuesto de interés. Las otras se descec'an al no contener el compuesto de interés. En la destilación simple se de#o una cola de aprox. 1ml ésta de cristali!a y se pesa ya que aquí es donde se encuentra el compuesto de interés que es el ácido ben!oico. El rendimiento fue (0.4 / 0.5) g *100 = 80% En la columna se quedo el a!ul de metileno que era el otro componente de la me!cla proporcionada. Concluson!s Este tipo de cromatografía también es parcial ya que 'ace uso de la ccf para distinguir los componentes y el eluyente una "e! 'ec'a la elución en columna. El tama$o de la partícula de fase sólida es muc'a más grande que la que se usa en ccf. La adicionar la me!cla el a!ul de metileno se queda en la parte superior de la me!cla, indicando que este componente tiene similar polaridad a la de gel de sílice9 porque al eluír con acetato de etilo, el componente que se "a es el ácido ben!oico.
Cu!s"ona#o 1.$s una !&cla '! an"#ac!no na"al!no s! s!a#a o# c#oa"og#a+a sob#! al,na- Cul '! las 'os sus"ancas !lu# #!#o cul ala ul"ocul !s s ola#
.$un colo#an"! '!sconoc'o- s! !nsa 2u! !s a&ul '! !"l!no- C3o s! o'#+a co#oba# !s"a suosc3n usan'o un #oc!'!n"o basa'o !n una "cnca c#oa"og#ca
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4.$ la #!cu!#ac3n cuan""a"a '!l #o'uc"o #ncal '! la #c"ca- s!#+a s col!"a s s! #!cog!#an #accon!s ao#!s o !no#!s '! 10l 9o# 2u
5.$ n'2u! algunas alcacon!s '! la c#oa"og#a+a '! a'so#c3n !n coluna caa na.
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