UNIVERSIDAD TECNICA DE MACHALA FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS ESCUELA DE ACUACULTURA
TESIS DE GRADO PARA OPTAR EL TÍTULO DE INGENIERO ACUACULTOR
CONTROL DE LA SAPROLEGNIOSIS EN OVAS DE TRUCHA ARCO IRIS (Oncorhynchmus mykis) APLICANDO UN DESINFECTANTE QUÍMICO
ALEJANDRO PASQUEL BAQUERO 2011 i
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CERTIFICADO Esta tesis ha sido aceptada en la forma presente por el tribunal de grado nominado por el Honorable Consejo Directivo de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Técnica de Machala, como requisito requisito parcial para optar al grado de:
INGENIERO ACUACULTOR
_______________________________ Ing. Acu. Cesar Valarezo Macías Mg Sc, Director
_______________________________ Dr. David Masache Narváez, Profesor Miembro.
_______________________________ Ing. Acuac. Dino Mauricio Yánez Morocho MBA, Profesor Miembro.
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La responsabilidad de esta investigación resultados y conclusiones del presente trabajo, pertenecen exclusivamente a su autor
________________________ Alejandro Pasquel Baquero
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DEDICATORIA Al Sumo Creador A Fernando y Alicia, gestores y pilares de mi paso por el mundo A Nando, Fercho y Gabo A mi familia entera A mis amigos de aquí y de allá A todos…
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AGRADECIMIENTO A las Autoridades de la Universidad Técnica de Machala y de la Facultad de Ciencias Agropecuarias, de manera especial a mi amiga Bióloga Norma Cecilia Serrano Campaín, Vicerrectora Académica de la Universidad. A Cesar, Mauricio, Leonor, Julio, José, Leonardo, David, otra vez Cesar, Juan, Patricio y otros muchos maestros que supieron dar su paciencia, sapiencia y afecto. A mi Director de Tesis, Ing. Ac. Cesar Valarezo; a los profesores miembros Dr. David Masache y al Ing. Ac. Mauricio Yanes; al blog. Leonardo Guevara; al personal administrativo, de limpieza y todos los amigos que hice en esta alma mater. A mis amigos y compañeros de aula, en los que encontré siempre un abrazo, un hombro y una familia. A Magdalena, Paul, Jorge, Cristóbal, Ligia, Isabel, Xavier y muchos amigos orenses que hicieron de mi vida en esta hermosa provincia de lo más emocionante. A Germania, Germania, Jorge, Patricia, Tatiana, Andrés, Pepucho, Tita y toda mi mi familia familia en estas tierras por abrirme su casa, su corazón y su vida. A todos mis más sinceros agradecimientos.
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ÍNDICE DE CONTENIDO Tema
Páginas
1. Introducción
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2. Revisión Literatura
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2.1. Saprolegniosis 2.1.1. Descripción 2.1.2. Forma de infección 2.1.3 Patogenia 2.1.4. Clínica 2.2. Trucha arco iris (Oncorhynchus mykis) 2.2.1. Descripción de la especie 2.2.2. Nombre común 2.3. Generalidades en la producción de ovas 2.3.1. Descripción del proceso de ovas ovas 2.3.2. Profilaxis, higiene y desinfección desinfección 2.3.3. Descripción de de la desinfección de ovas 2.4. Particularidades del compuesto 2.4.1. Desinfectantes 2.4.1.1. Definición 2.4.1.2. Tipos de desinfectantes 2.4.2. Composición química del compuesto 2.4.2.1. Peróxido de hidrógeno 2.4.2.2. Acetanilida 2.4.2.3. Ácido acético 2.4.2.4. Alcohol
3. Materiales y métodos 3.1. Materiales 3.1.1. Localización y ubicación geográfica 3.1.2. Equipos y materiales 3.1.3. Variables en estudio 3.1.4. Medición de la variable 3.2. Métodos 3.2.1. Análisis bibliográfico 3.2.2. Método de análisis estadístico 3.2.3. Análisis de fortalezas y desventajas desventajas 3.2.4. Procedimiento 3.2.4.1. Desove y siembra
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4. Resultados y discusión 4.1. 4.2. 4.3. 4.4.
Sobrevivencia de ovas Análisis del tratamientos Fortalezas y desventajas Experiencias
31 31 32 32 33
5. Conclusiones
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6. Resumen
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7. Summary
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8. Bibliografía
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Anexos
43 43 43 44 44 45 45 46 46 47 47 48 48 49 49
Anexo 1 Anexo 2 Anexo 3 Anexo 4 Anexo 5 Anexo 6 Anexo 7 Anexo 8 Anexo 9 Anexo 10 Anexo 11 Anexo 12 Anexo 13 Anexo 14
Análisis de varianza Análisis del tratamiento Análisis ortogonal Diario de mortalidades Piscinas de engorde y reproductores Canastillas de eclosión Recolección de huevos muertos Desinfección de ovas en diferentes soluciones Ovas en canastillas Ovas en canastas para desinfección Observación de ovas al microscopio Muestra de ovas infectadas Fotografía microscópica de ovas Alevines de trucha arco iris
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ÍNDICE DE CUADROS Tema Cuadro 1 Distribución de las canastillas Cuadro 2 Sobrevivencia
Páginas 28 31
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ÍNDICE DE FIGURAS Tema Figura 1 Foto microscópica de la saprolegnia Figura 2 Ciclo de vida de saprolegnia Figura 3 Ejemplar de trucha arco iris (Oncorhynchus mykis) Huevo embrionario y alevín de trucha en su Figura 4 nacimiento Figura 5 Alevines de truchas en tres estados diferentes Figura 6 Ovas de trucha Figura 7 Ovas de trucha infectadas con saprolegnia Figura 8 Enlace químico del peróxido de hidrógeno Figura 9 Composición química de la acetanilida Figura 10 Acido acético Figura 11 Alcohol en su enlace químico Figura 12 Estación CENIAC Figura 13 Reproductores de trucha arco iris Figura 14 Canastillas de eclosión Figura 15 Proceso de desinfección Figura 16 Piscinas de engorde y reproductores Figura 17 Canastillas de eclosión Figura 18 Recolección de huevos muertos Figura 19 Desinfección de ovas en diferentes soluciones Figura 20 Ovas en canastillas Figura 21 Ovas en canastas para desinfección Figura 22 Observación de ovas al microscopio Figura 23 Muestra de ovas infectadas Figura 24 Fotografía microscópica de ovas Figura 25 Alevines de trucha arco iris
Páginas 3 6 7 9 10 13 15 19 20 20 22 25 27 29 30 45 45 46 46 47 47 48 48 49 49
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ÍNDICE DE TABLAS Tema Tabla 1 Tabla 2 Tabla 3 Tabla 4 Tabla 5
Páginas Extracto del cuadro "Taxonomía de las especies de salmónidos" Análisis de varianza Análisis del tratamiento Análisis ortogonal Diario de mortalidades
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1. INTRODUCCIÓN La producción de camarón es la principal actividad acuícola en el Ecuador, siendo uno de los productos de exportación más importantes. Los problemas existentes en el cultivo y comercialización, obligan a buscar buscar nuevas alternativas de producción producción y mirar a otras otras fuentes de trabajo. La piscicultura es la rama que se ha fijado el sector acuícola para su desarrollo, tanto para monocultivos como para cultivos mixtos de tilapia, róbalo, corvina, chame y cachama, para la Costa; cachama y guanchince para la Amazonía; tilapia y truchas para la Sierra. Según un censo y estudio realizado en el 2007 por el departamento técnico del Centro Nacional de Investigaciones Acuícola (CENIAC), adjunto al Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca (MAGAP), en el Ecuador se producen 983,3 toneladas de truchas al año, de las cuales 332,7 T provienen de las piscinas piscinas que se ubican en la provincia de Pichincha (33,8 %) y 190 T en el Azuay (19,3 %). Sin embargo, la producción contrasta con el número de criaderos que se encuentran actualmente en las provincias de Azuay que que posee 47 plantas productoras productoras y Pichincha, que es la de mayor producción y tiene 26. La diferencia en la producción, se debe a que en Pichincha se realiza un trabajo más técnico y sofisticado que en Azuay, “donde la mayoría de los criaderos son artesanales y se ubican en sitios donde el agua es escasa, lo cual dificulta la actividad”; señalan los responsable del censo, funcionario del CENIAC. En los criaderos que poseen plantas para la obtención de alevines (crías de trucha), desarrollo y comercialización, lo ideal es que se utilice, por lo menos, un técnico por cada etapa del proceso productivo. Esto, a fin de que vayan corrigiendo los problemas que se presenten durante el proceso. Un técnico puede dar apoyo a tres o cuatro criaderos, pero lo ideal sería que se cuente con uno de forma permanente. En la actualidad más el 80 por ciento de los criaderos son construidos y manejados de forma artesanal. En la mayoría de criaderos del del país país se trabaja con con huevos importados, ya que pocos tienen animales reproductores y se autoabastecen. El único abastecedor nacional de huevos a gran escala es el CENIAC. La meta básica de un criadero comercial de truchas, es obtener un producto de alta calidad, con el menor costo posible, para venderlo a un valor que ofrezca la mayor rentabilidad, independientemente de las habilidades comerciales que se posean. Esta meta se consigue xviii
aplicando normas productivas, así por ejemplo; extremas condiciones sanitarias en el criadero; procedimientos de manejo de la producción eficientes; alimentos de alta convertibilidad; utilizar ovas de buen rendimiento, resistentes al hacinamiento, manipuleo y a las enfermedades. Un problema latente en la producción, es la limpieza de estanques y organismos, principalmente por el costo de los desinfectantes y el uso indebido de sustancias químicas perjudiciales para la salud humana y el ecosistema; tales como verde de malaquita, azul de metileno, otros menos perjudiciales son el yodo, sal común, en grano y otros. Por la falta de conocimientos científicos de la gran mayoría de productores, existe mal uso de las sustancias químicas, se suma la falta de productos especializados en el mercado, lo que incide en la fisiología de los peces. De manera especial el verde de malaquita que como algunos autores lo indican al referirse a su composición y uso, tiene potencial cancerígeno. Su uso es restringido, lo que nos obliga a buscar alternativas sustentables en la desinfección de los organismos. Se propone conocer la reacción de las ovas al uso de desinfectantes a base de peróxidos, en sustitución del yodo, para establecer el posible uso de este compuesto como desinfectante de medios de producción. El objetivo propuesto para esta investigación es: 1. Analizar la eficacia del compuesto de Peróxido de hidrógeno en el control de la saprolegniosis en ovas de Trucha Arco Iris (Oncorhynchus mykis).
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2. REVISIÓN DE LITERATURA 2.1. SAPROLEGNIOSIS 2.1.1. DESCRIPCIÓN Enfermedad infecciosa producida por varios hongos, principalmente oomicetos representantes del grupo de los saprolegniales. Utilizar como sinónimo: “saprolegniasis” a este tipo de micosis, no es del todo adecuado, porque si bien, el género saprolegnia es el más frecuentemente implicado en este tipo de lesiones, no debemos descartar al resto de hongos que pueden producir un cuadro similar. Los hongos productores de micosis superficiales pertenecen al filo “oomycota” (es decir, oomycetos), del reino “chormista”, estos hongos evolucionaron a partir de las algas que perdieron su clorofila, y por esto son más parecidos a los vegetales que a los animales. Dentro de este grupo hay que destacar tres órdenes Saprolegniales, Peronosporales y Leptomitales,
capaces de producir enfermedad en los peces de agua dulce. Las especies más
frecuentemente halladas en los peces son: saprolegnia (S. Parasítica, S. diclina y S. Ferax, principalmente), Achlya y Aphanomyces.
Saprolegnia sp. Figura 1. Foto Microscópica de la Saprolegnia
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Todas las especies de agua dulce son susceptibles de sufrir esta patología. Debemos mencionar también que los saprolegniales son los patógenos más frecuentes de los huevos
de cría en agua dulce. Este hecho puede hacer que se pierdan camadas completas, ya que los huevos poseen poca (o ninguna) protección frente a este tipo de patología. La gran excepción a este hecho está representada por las especies que “cuidan la prole”, ya que los progenitores les brindan una excelente protección. Esto no descarta que puedan infectarse, pero generalmente no ocurre y sólo se afectan unos pocos huevos. Las especies marinas no suelen padecer esta infección, ya que el agua salada resulta letal para estos hongos. Si bien se ha obtenido desarrollo de Saprolegnia parasítica con concentraciones de sal del 1,75 %; no se observó desarrollo a 3,5 % de NaCl. 1
2.1.2. FORMA DE INFECCIÓN Estos organismos son oportunistas, que viven en abundancia en el medio ambiente, y se alimentan de restos orgánicos en descomposición. De este modo, rara vez producirán lesiones en peces que se encuentren en perfectas condiciones de salud, y en un medio adecuado. Por grande que sea la cantidad de esporas en el agua, los peces “sanos” no sufrirán micosis superficiales. Entonces, ¿qué es lo que hace que nuestros peces puedan padecer esta patología? Todos los factores que disminuyan la resistencia del animal y de sus tejidos, toda depresión del sistema de defensa (inmune) sea de causa intrínseca o extrínseca producirá un medio adecuado en el animal para que las esporas del hongo se desarrollen produciendo lo que conocemos como saprolegniasis. La puerta de entrada para estos microorganismos es cutáneo-mucosa, e ingresan por lesiones macro o microscópicas relata Stevenson (1986).
2.1.3. PATOGENIA La infección comienza cuándo las esporas del hongo alcanzan tejidos necróticos (muertos) en un individuo incapaz de hacer frente a estos hongos. De este modo se produce la colonización de los tejidos superficiales, principalmente la epidermis. Entonces la espora comienza a desarrollarse, formando el micelio compuesto por hifas que darán lugar a la formación de 1
http://www.fao.org.com.
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nuevas esporas, perpetuando el ciclo biológico del hongo (reproducción asexuada). En algunas especies de hongos también existe una reproducción de tipo “sexual” en la que se conjugan hifas femeninas y masculinas, es decir que existen “hongos macho” y “hongos hembra” (dioicos). Algunos hongos poseen también la fase de reproducción sexual en ellos mismos, produciendo un mismo organismo, tanto hifas macho como hifas hembras (monoicos). Cuándo el micelio se desarrolla, se puede ver macroscópicamente la típica masa
"algodonosa" que nos facilitará el diagnóstico de ésta afección (Stevenson 1986). En los tejidos del pez puede observarse ulceración y necrosis, a causa de las enzimas que los hongos secretan para digerir el alimento antes de consumirlo. Esto produce una leve reacción inflamatoria de tipo mononuclear, en la que participan linfocitos, monocitos y macrófagos. La muerte puede sobrevenir a consecuencia de las micosis superficiales, esto no es frecuente, pero en individuos intensamente afectados, y con algunas cepas particulares de hongos puede ocurrir. Esto sucede porque los hongos destruyen la barrera osmótica que constituye la piel de los peces, alterando así la osmorregulación, y produciendo una alteración hidroelectrolítica letal. La invasión de los tejidos profundos no suele ocurrir en este tipo de micosis, por lo que las micosis profundas no se consideran un grado avanzado de saprolegniasis. 2
2.1.4. CLÍNICA Astudillo (1990) Una vez que el hongo coloniza los tejidos del huésped y comienza a desarrollarse, se pueden observar una o más “masas algodonosas” en la superficie del pez afectado. Estas masas son los micelios del hongo, y su coloración que suele ser blanca, puede aparecer de color gris, marrón, rojo o verde, dependiendo de si tienen o no sedimentos atrapados, y de qué tipo de sedimentos sean. Las zonas más afectadas del pez suelen ser la cabeza y el dorso, siguiendo en frecuencia la afección de boca, aletas y branquias. En las ovas, esas masas algodonosas se forman alrededor cubriendo su contexto y empiezan a colonizar los huevos circundantes (Astudillo, 1990).
A esto se suma el antecedente frecuente de otras afecciones previas, como enfermedades, heridas o situaciones de estrés. Por esto, las micosis superficiales suelen afectar a uno o dos individuos, y no suele propagarse al resto de habitantes del acuario. Lo que sí puede ocurrir en 2
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este sentido, es que tengamos micosis sucesivas, es decir, se afecta un individuo, muere o cura, y al tiempo se afecta otro. En estos casos debemos buscar el origen en las condiciones de mantenimiento y en los parámetros del agua. “Los oomycetos son también los principales patógenos de los huevos reproductivos; en este caso, la infección suele propagarse rápidamente y determinar la pérdida de la carnada completa si no se aplica un tratamiento efectivo y oportuno” (Astudillo, 1990).
Figura 2. Ciclo de vida de Saprolegnia sp. Fuente: Romero (2001)
2.2. TRUCHA ARCO IRIS (Oncorhynchus mykis) 2.2.1. DESCRIPCIÓN DE LA ESPECIE Blanco (1995) Los Salmónidos son peces fáciles de conocer por poseer un grueso pliegue cutáneo, desprovisto de radios (aleta adiposa) situado sobre el dorso, entre la aleta dorsal y la caudal. Cuerpo rollizo, cubierto de pequeñas escamas. Boca grande, el maxilar sobrepasa el borde posterior del ojo. Presencia de dientes cónicos en ambas quijadas. Vómer dentado. Dos aletas dorsales, la segunda adiposa. Aletas pectorales bajas y las ventrales de posición xxiii
posterior al origen de la primera dorsal. Aleta caudal de borde posterior recto o ligeramente cóncavo. Coloración: color de fondo dorado, con el dorso más oscuro. Cuerpo con manchas negras y anaranjadas distribuidas irregularmente. Vientre amarillento. Aleta dorsal y en algunos casos la aleta caudal manchas oscuras. Los ejemplares que habitan los lagos presentan una coloración coloración plateada y con manchas escasas o ausentes. Dimensiones: superan los 100 cm. y llegan a pesar 16 kg. (Espinoza, 2003).
Figura 3. Ejemplar de trucha arco iris ( Oncorhynchus mykis). Fuente Romero (2001) Su importancia reside fundamentalmente en sus cualidades naturales, que permiten su explotación industrial. Con respecto a otras especies de salmónidos, la trucha arco iris muestra una gran docilidad a la cautividad, tolerancia y adaptación social a la alta densidad poblacional, con comportamientos menos agresivos que la trucha común. Tiene un amplio margen de adaptación a la temperatura de las aguas y a las diversas condiciones ambientales de los recintos artificiales donde se encuentra confinada, acudiendo con gran avidez a la distribución de alimento 3.
Especie migratoria originaria de la vertiente del Pacífico de Norteamérica, que fue introducida a Europa. En el Ecuador, ingresa a la sierra a mediados de los 40 del siglo pasado, esta especie es importada por personas particulares con lagunas dentro de sus haciendas. La encontramos en las aguas frías que bañan las cordilleras ecuatorianas y tiene predilección por las aguas de los ríos y torrentes de montaña que no llegan a helarse completamente y de los lagos formados por torrentes de altitud inferior a los 2.500 metros sobre el nivel del mar, o 3
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sea, aguas frías y batidas cuya temperatura oscila entre los 6 y los 17 ° C, limpias y muy oxigenadas. Las encontramos en las 12 provincias de la Sierra y Amazonia de nuestro País, los cultivos significativos están en las provincias de Pichincha y Azuay, donde se encuentra la mayor superficie de producción. Nono, Mindo, Papallacta, en Pichincha y El Cajas en el Azuay; son los sectores más representativos en la producción (García, 2001).
2.2.2. NOMBRE COMÚN Blanco (1995) gráfica muy amenamente el origen y el nombre común en tres idiomas distintos de las especies de truchas; aquí un extracto del cuadro con las especies más representativas en el Ecuador.
Tabla 1. Extracto del cuadro "Denominación taxonómica y vernácula de las principales especies de salmónidos", con los últimos manifiestos de la American Fisheries Society's.
Especie
Origen
N. Francés
N. Ingles
N. Español
Salmo trutta
Linnaeus (1758)
Truite bruñe
Brown trout
Trucha común
Oncorhynchus
Kendall R. L.
mykis
(1988)
Trutie arcenciel
Rainbow trout
Trucha arco iris
Oncorhynchus
Kendall R. L.
Clarki
(1988)
Trutie fardée
Cuttthroat trout
T. garganta cortada
Fuente: Blanco (1995).
2.3. GENERALIDADES EN LA PRODUCCIÓN DE OVAS 2.3.1. DESCRIPCIÓN DEL PROCESO DE OVAS Blanco (1995) opina de la incubación “Los huevos permanecen en absoluto reposo en las incubadoras, sin ningún tipo de movilidad o manipulación, hasta que se observe en ellos, a simple vista, dos pequeños puntos móviles.” Más adelante prosigue “A nivel industrial, se utilizan incubadoras de tipo vertical, llamadas así por el sentido ascendente o descendente que xxv
en ellas sigue el flujo de la corriente de agua. El agua de incubación fluye de forma continua a través de los huevos, condición fundamental para ser oxigenados, pero sin provocar movimientos o desplazamientos de los mismos.” Se distinguen tres fases en el período que se extiende desde el principio de la incubación hasta que finaliza la reabsorción de la vesícula •
Fase 1: Desde la fecundación hasta la aparición de los ojos.
•
Fase 2: Desde la aparición de los ojos a la eclosión.
•
Fase 3: Desde la eclosión hasta que finaliza la reabsorción de la vesícula.
Huet (1983) profundiza profundiza al decir; Durante los primeros días “diez a quince días para la trucha común y cinco a ocho para la arco iris”, que siguen a la fecundación los huevos pueden manipularse sin temor. A continuación, se vuelven muy sensibles a los choques y es preciso dejarlos inmóviles, por lo menos hasta que aparecen los ojos claramente, en forma de dos grandes puntos negros. Se dice entonces que los huevos están «embrionarios». Este instante se localiza aproximadamente a mitad de la duración total de la incubación.
Figura 4. Huevo embrionario y alevín de trucha en su nacimiento.
Huet (1983) concluye su explicación acotando “Antes de ver los ojos ya puede saberse si los huevos están fecundados o no. Para esto, desde el segundo día, se pueden colocar en la mezcla siguiente: (tres partes de ácido crómico al 0,5 %, cuatro partes de ácido sulfúrico al 10 % y treinta partes de alcohol de 96 %. Después de algunos minutos, en los huevos fecundados xxvi
aparece una segmentación en dos o cuatro partes, se observa también un embrión si la experiencia se hace más tarde. Después de ocho días el embrión aparece si se le coloca en una solución de ácido acético o incluso de vinagre.” La rapidez del desarrollo de las distintas fases de la incubación depende de varios factores, que a su vez dependen sobre lodo de la temperatura. El desarrollo varía naturalmente según la especie. Es más corto para la trucha arco iris que para la común. Para una misma especie, es tanto más rápida cuanta más alta es la temperatura. La duración del desarrollo se expresa en grados día, dato que indica el número de días que exigiría la incubación de los huevos de una especie de pez a la temperatura de 1 grado centígrado (Blanco 1995).
Figura 5. Alevines de truchas en tres estados diferentes a) inmediatamente después de la eclosión b) con la vesícula vitelina reabsorbida a medias c) con la vesícula vitelina reabsorbida.
Blanco (1995) destaca la aparición de dos pequeños puntos móviles visibles a través de la membrana externa, que es el nivel de desarrollo embrionario equivalente a 210-220 grados Co /día, esta fase 1 denominada denominada de fecundación y en la fase 2 denominada denominada de “ojos visibles”. En este lapso de tiempo entre la post-inseminación y la fase embrionaria de ojos visibles, es el momento para la desinfección de las ovas. xxvii
2.3.2. PROFILAXIS, HIGIENE Y DESINFECCION Existen eficaces medios de lucha contra algunas enfermedades. Sin embargo, los mejores medios de acción de que dispone la piscicultura son las medidas profilácticas e higiénicas; en todos los casos los estanques naturales y artificiales de cultivo deben ser desinfectados. En la lucha contra las enfermedades de los peces, lo mejor es procurar prevenirlas, pues sólo se pueden curar unas pocas (Blanco 1995) Huet (1983) define “En primer lugar, es necesario que el agua de alimentación de los estanques sea suficientemente abundante y de buena calidad, con el fin de evitar los peligros debidos a carencias de oxígeno y a las poluciones. Los estanques se cuidarán de forma conveniente, luchando contra los hongos y la invasión de fauna circundante. El fondo y los canales estarán bien instalados, para permitir la evacuación completa del agua en el momento del vaciado. Los estanques se vaciarán regularmente y de vez en cuando se desinfectarán con cal viva. Se impedirá la entrada de los peces salvajes por medio de rejillas adecuadas. Los peces han de estar en el mejor estado físico, manejando una densidad adecuada y manipulaciones o traslados inútiles. En carpicultura es muy importante que los peces se sitúen en verano en estanques sanos y ricos en alimentos naturales. En salmonicultura, la alimentación artificial debe cuidarse especialmente, evitándose toda sobrealimentación. En un cultivo siempre es interesante no depender de otras piscifactorías para proveerse de huevos o peces de repoblación; si es necesario, se deberá recurrir a piscifactorías que estén sanas. También es importante no tomar el agua de un curso en que se encuentra ya uno o más establecimientos piscícolas. En caso de enfermedad, los peces muertos y enfermos de gravedad se extraerán de los estanques, enterrándose en cal viva. Los estanques infectados, así como el material utilizado, han de ser desinfectados.”
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2.3.3. DESCRIPCIÓN DE LA DESINFECCIÓN EN OVAS Gracia (2001) Durante la incubación y alevinaje hay que desinfectar a los huevos, a intervalos regulares, en principio cada dos días, se sacan los huevos y después los alevines muertos. La saprolegniosis es provocada por ciertos hongos de los géneros Saproíegma y Achlya que se desarrollan sobre los huevos muertos en los aparatos de incubación, pudiendo contaminar por contacto los huevos próximos sanos. Estos hongos están presentes en todas las aguas dulces, sobre todo en las ricas en materias orgánicas, donde encuentran un medio propicio para desarrollarse. Los gérmenes del hongo parásito viven siempre en forma saprofita sobre restos de alimentos y cadáveres de peces. En realidad, no se puede considerar a la saprolegniosis como una enfermedad, pues se trata más bien de un parásito de la debilidad, inofensivo para los peces que gozan de buena salud y viven en un medio sano. Los huevos atacados están completamente envueltos por los hongos, que cubren a los huevos muertos y a los sanos que están próximos, frecuentemente aglomerados (Blanco 1995) Ante todo, es necesario evitar o combatir las causas primarias: heridas, enfermedades, debilitamientos y medios de infección ocasionados por la mala calidad del agua o por una carga inicial demasiado grande. Los posibles tratamientos curativos de la saprolesniosis son los baños, que se dan a los huevos en incubación. Se distinguen fácilmente los huevos muertos de los sanos por el e l hecho de que se vuelven blancos bla ncos y opacos. Los huevos muertos, si no se extraen rápidamente, son atacados por las saprolegnias y contaminan a los huevos próximos todavía sanos. Se los extrae con una pinza (de madera o latón) o con una pipeta, que comprende una pera de goma y un tubo de vidrio de 5 a 7 mm. de diámetro interior, con extremos tratados al fuego para no dañar a los huevos sanos. Manifiesta García (2001). Huet (1983) define “Se vigila cuidadosamente la higiene general y, sobre todo, se busca descubrir los primeros signos de aparición de enfermedades, particularmente la costiasis. Si ésta aparece, se la combate con el baño de formol de Leger. Este baño contiene 40 centímetros cúbicos de formol comercial por 100 litros de agua; los alevines permanecen en él un cuarto de hora. Durante el tratamiento se corta toda renovación de agua. El tratamiento lo soportan bien los sujetos sanos y los enfermos curables, pero precipita la muerte de los sujetos muy atacados, que de todas formas estaban condenados.” (Newman, 2000) concluye “El desarrollo de la saprolegnia sobre los huevos de trucha en incubación puede impedirse dándoles diariamente un baño de formol durante 15 minutos. Al xxix
agua de incubación de las pilas se añade de 1 a 2 cm3 de formol al 30 por 100, por medio de un recipiente provisto de un grifo.” Para evitar estos crecimientos, es ampliamente utilizado un producto de acción fungicida, el llamado verde de malaquita, muy conocido por todos los piscicultores. Es una sal de cobre, que en piscicultura debe utilizarse en estado puro, pues la presentación comercial para tintorería tiene cloruro de zinc, tóxico para los peces. Se presenta en el mercado en forma de polvo muy fino, de gran capacidad tintórea y, al parecer, con potencial cancerígeno, que debe ser manejado con precaución, con guantes de goma y en lugar abrigado del viento, procurando no respirar cerca.
Figura 6. Ovas de trucha.
Sobre la desinfección, Blanco (1995) explica que “durante el proceso de incubación, un determinado porcentaje de huevos se deteriora, detiene su desarrollo embrionario y muere, adquiriendo color blanquecino, rompiéndose en muchos casos la membrana externa y saliendo su contenido al exterior, mezclándose con el agua de incubación. La concentración masiva de material viviente en estas incubadoras industriales hace que sea habitual el desarrollo de un hongo de rápido crecimiento y colonización que puede producir gran mortalidad de huevos e incluso su extinción si no se toman las medidas adecuadas. Estos hongos, de crecimiento habitual, son de la clase ficomicetos, Saprolegnia sp, que desarrolla hifas y ramificaciones visibles a simple vista, que se alimenta de materia orgánica en descomposición.” Iañez, (1998) indica “El verde de malaquita debe ser utilizado ajustándose a las dosis establecidas, pues diluciones muy concentradas o tiempos prolongados de exposición tienen xxx
efectos tóxicos para los huevos, alterando el crecimiento embrionario y ser motivo de abortos y malformaciones. Generalmente, se utiliza diluido en agua en concentraciones de 4-5 mg/litro durante un tiempo de exposición de 20-30 minutos. Los tratamientos con verde de malaquita pueden ser diarios o dos o tres veces por semana, durante el período embrionario, y también, si se necesita, en la fase larvaria e incluso en alevines jóvenes.” En otros apuntes Iañez, (1998) manifiesta que “el verde malaquita (generalmente un oxalato de cobre) se utiliza corrientemente para combatir la aparición y proliferación de los hongos sobre los huevos en incubación, la concentración que hay que conseguir en las garrafas o en los depósitos de incubación es de 5 mg/l., o sea, 1 gr. de verde malaquita en 200 litros de agua durante media o una hora. Previamente, se prepara una solución concentrada, por ejemplo, de 10 gr. de verde malaquita en un litro de agua. Se mide el volumen de agua en los depósitos de incubación y se corta el agua de alimentación. Se extrae previamente la cantidad necesaria de la solución concentrada para conseguir una concentración de 5 mg/1., o sea, 5 gr. por metro cúbico en las pilas. Esta solución, a la que eventualmente se añade agua, se reparte uniformemente en las pilas con ayuda de una regadera. Se deja correr un pequeño chorrito de agua para repartir bien el producto. Cuando la incubación se realiza en garrafas, la solución de verde malaquita se vierte en el depósito de alimentación. El tratamiento se aplica dos veces por semana por término medio, desde el día siguiente a la puesta hasta el momento en que se producen las primeras eclosiones.” Huet (1983) aconseja “Una concentración de 5 gr/m3 durante 45 minutos, repitiendo el tratamiento cada 5 ó 6 días, hasta suspenderse al menos 5 días antes de la eclosión. El tratamiento en las pilas de incubación se realiza de la forma siguiente. En la parte superior de la pila se sitúa un recipiente que va provisto en su base de un pequeño agujero, por el que cae la solución de verde malaquita al agua de alimentación. El recipiente que contiene una pequeña cantidad de solución se vacía en 45 minutos. La concentración de la solución se calcula de forma que en las pilas se obtenga una de 5 gr. de verde malaquita por metro cúbico de agua. Para tratar los huevos incubados en garrafas Zoug, se detiene temporalmente la alimentación de agua para extraer a continuación casi la mitad de su contenido líquido, que se reemplaza entonces por una solución que contenga 5 gr. de verde malaquita por metro cúbico de agua. Después de haber mezclado bien el agua con ayuda de una pluma, se abre de nuevo el grifo de alimentación.” xxxi
Stevenson (1986) aconseja “una concentración de 10 gr. de verde malaquita por litro durante 15 minutos cada dos días. Hay que cortar el agua de alimentación durante el tratamiento. También pueden tratarse los huevos manteniendo el caudal habitual. “Se ha preconizado el procedimiento siguiente para los depósitos de incubación. Se mide previamente el volumen de agua de los depósitos a tratar, así como el caudal de agua de alimentación. La solución concentrada empleada contiene 10 gr. de verde malaquita por litro de agua; se echa a las pilas 1/20 de su volumen. (Ejemplo: para una pila de 2 x 0,50 x 0.20 m., o sea de 400 litros, son necesarios 20 litros de solución de 10 gr. por litro, o sea, 200 gr.) Si el caudal de agua es de 20 litros por minuto, la solución se vierte a la entrada de las pilas de tal forma que caiga 1 litro por minuto (en el ejemplo anterior los 20 litros se verterán en 20 minutos); si el caudal es de 10 litros por minuto, se verterá 1 litro de solución cada dos minutos, y así sucesivamente.” (Deufuel, 1957)
Figura 7. Ovas de trucha infectadas con saprolegnia.
Newman (2000) describe un método para el tratamiento de los huevos en las garrafas que también puede aplicarse a las pilas de incubación. “Sobre la tubería de alimentación y más allá del grifo regulador del caudal, se instala un tubo vertical de pequeño diámetro provisto de una llave de paso. La solución de verde malaquita se introduce en este tubo por un sifón de caudal constante y conocido. Si el caudal en las garrafas o en las pilas está regulado a razón de 10 litros/min., el sifón deberá verter 10 cm³ por minuto de una solución que contenga 0,5
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gr. de verde malaquita por litro, y esto durante 45 minutos. Este tratamiento se aplica dos veces por semana.” Enrique (1990) llama la atención sobre el hecho de que tratando los huevos de trucha arco iris con verde malaquita se pueden provocar alteraciones cromosómicas. Por este motivo, miran con ciertas reservas todo aquello que se refiera al empleo de la verde malaquita en piscicultura. No hay que olvidar que bajo el nombre de verde malaquita se encuentran en el comercio varias sales básicas, cuya toxicidad para una misma concentración puede variar; “una sal básica, un clorosilicato, debe rechazarse en usos piscícolas. Antes de utilizar el verde malaquita en piscicultura se impone efectuar un ensayo previo” (Blanco, 1995).
2.4. PARTICULARIDADES DEL COMPUESTO 2.4.1. DESINFECTANTES 2.4.1.1 Definición Iañez (1998) los define “Agentes Desinfectantes (o Germicidas): Son antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos (infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre materiales inertes.” Deben su acción a los ingredientes activos que contienen. Entre los principales tenemos: El fenol, cresol, aceite de pino, alcohol isopropilico, etc., que son complementos emulsificantes y otros ingredientes inertes como el agua, colorantes, fijadores, etc. Sus características básicas son. •
Tener una buena concentración garantizará su efectividad y poder residual.
•
Al aplicarse el producto que este no contamine o que su fecha de vencimiento no esté expedida. 4
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http://www.princast.es.
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2.4.1.2. Tipos de Desinfectantes Según Blanco (1995) manifiesta que los desinfectantes se lo puede clasificar de acuerdo por su mecanismo de acción, es decir, como ataca a los agentes infectantes: •
•
•
Agentes que dañan la membrana Detergentes Cresoles Alcoholes Etanol Isopropanol Agentes desnaturalizantes de proteínas Ácidos orgánicos no disociables Agentes modificadores de grupos funcionales Metales pesados Compuestos de plata Compuestos de cobre Agentes oxidantes Halógenos Agua oxigenada Permanganato potásico Ácido peracético Colorantes Derivados de la anilina Derivados de la acridina (flavinas) Agentes alquilantes. Formaldehido Glutaraldehido Óxido de Etileno ß-propionil-lactona
2.4.2. COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL COMPUESTO Como se indica anteriormente, los desinfectantes más utilizados en la desinfección embrionaria de la trucha arco iris han sido él verde malaquita o disoluciones de cloruro de sodio (sal común) y formol. Sobre todo por su la fácil comercialización y costo. xxxiv
El compuesto en estudio tiene una composición química de Agua oxigenada, acetanilida, ácido acético y alcohol. Esta composición en medidas establecidas de 1 litro, 20 gramos, 2 litros y 100 mililitros, respectivamente; Aforados a 20 litros de agua tratada; da como resultado, un desinfectante con espectros mínimos de residuos en el agua y gran eficacia. A su vez, un litro del concentrado es diluido en 20 litros de agua a gua natural pura; de esta dilución, se obtendrá las tres concentraciones para su estudio: •
Agua Oxigenada
1 000 mililitros
•
Acido Acético
2 000 mililitros
•
Alcohol
100 mililitros
•
Acetanilida
20 gramos
Es también por su composición, un agente desnaturalizante de proteínas, degradante de membranas y un buen agente oxidante, lo que asegura su eficacia.
2.4.2.1. Peróxido de hidrogeno Compuesto químico de hidrógeno y oxígeno, de fórmula H 2O2. El peróxido de hidrógeno anhidro en estado puro es un líquido incoloro en forma de jarabe con una densidad relativa igual a 1,44. Tiene sabor metálico y puede causar ampollas en la piel. El líquido se solidifica a -0,41 °C. Es inestable en disoluciones concentradas y el líquido en estado puro puede explotar si se calienta por encima de 100 °C. Es soluble en agua en cualquier proporción y para usos comerciales se emplea en disoluciones acuosas del 3% y el 30%. Para ralentizar la descomposición del peróxido en agua y oxígeno, se le añaden sustancias orgánicas como la acetanilida y se almacena en botellas oscuras a baja temperatura. El peróxido de hidrógeno se fabrica en grandes cantidades por electrólisis de disoluciones acuosas de ácido sulfúrico, de bisulfato ácido de potasio o de sulfato ácido de amonio. También se prepara por la acción de los ácidos sobre otros peróxidos, como los de sodio y bario.
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Figura 8. Enlace químico del Peróxido de hidrógeno.
Actúa como agente reductor y oxidante. Sus propiedades oxidantes se aprovechan para blanquear sustancias, como el pelo, marfil, plumas y materiales delicados que podrían dañarse empleando otros agentes. En medicina se utiliza en disoluciones acuosas al 3% como antiséptico y colutorio. También se usa en la restauración de los colores originales de cuadros oscurecidos al transformarse el plomo blanco de las pinturas en sulfuro de plomo negro. El peróxido de hidrógeno oxida el sulfuro de plomo y lo transforma en sulfato de plomo blanco. También es una fuente de oxígeno en la mezcla combustible de cohetes y torpedos. Como agente reductor sólo reacciona con productos químicos fácilmente reducibles como el óxido de plata y el permanganato de potasio. 5
2.4.2.2. Acetanilida Acetanilida, amida derivada del ácido acético y de la anilina, de fórmula CH3-CO-NH-C6H5. es la N-fenilacetamida. Se prepara fácilmente, con buen rendimiento, hirviendo fenilamina o anilina a reflujo con una disolución de ácido acético durante cuatro horas. Es el producto de la acetilación de la anilina. También se obtiene calentando este compuesto con cloruro de acetilo o con anhídrido acético. La acetanilida es un sólido blanco cristalino, casi insoluble en agua fría, pero muy soluble en agua caliente. Es un compuesto neutro. Si se trata con ácidos o bases fuertes sufre una reacción de hidrólisis en la que se obtiene anilina. Se utiliza en medicina como antitérmico, con el nombre de antifebrina (Astudillo, 1990).
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http://www.fc.udg.es.
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Figura 9. Composición Química de la Acetanilida.
2.4.2.3. Ácido acético Ácido etanoico o Ácido acético, líquido incoloro, sabor amargo de fórmula CH3 COOH y de olor irritante. En una solución acuosa actúa como ácido débil. Este compuesto puro recibe el nombre de ácido etanoico glacial, debido a que se congela a temperaturas ligeramente más bajas que la ambiente. En mezclas con agua solidifica a temperaturas mucho más bajas. El ácido etanoico es miscible (mezclable) con agua y con numerosos disolventes orgánicos. Puede obtenerse por la acción del aire sobre soluciones de alcohol, en presencia de cierta clase de bacterias como la bacterium aceti. Las soluciones diluidas (de 4 a 8%) preparadas de este modo a partir del vino, sidra o malta constituyen lo que conocemos como vinagre. El ácido etanoico concentrado se prepara industrialmente mediante distintos procesos, como la reacción de metanol (alcohol metílico) y de monóxido de carbono (CO) en presencia de un catalizador, o por la oxidación del etanal (acetaldehído).
Figura 10. Acido Acético.
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El ácido acético se utiliza en la producción de acetato de rayón, plásticos, películas fotográficas, disolventes para pinturas y medicamentos como la aspirina. Tiene un punto de ebullición de 118 °C y un punto de fusión de 17 °C (Astudillo, 1990).
2.4.2.4. Alcohol Garcia (2001) Término aplicado a los miembros de un grupo de compuestos químicos del carbono que contienen el grupo OH. Dicha denominación se utiliza comúnmente para designar un compuesto específico: el alcohol etílico o etanol. Proviene de la palabra árabe alkuhl, o kohl, un polvo fino de antimonio que se utiliza para el maquillaje de ojos. En un principio, el término alcohol se empleaba para referirse a cualquier tipo de polvo fino, aunque más tarde los alquimistas de la Europa medieval lo utilizaron para las esencias obtenidas por destilación, estableciendo así su acepción actual. Los alcoholes tienen uno, dos o tres grupos hidróxilo (-OH) enlazados a sus moléculas, por lo que se clasifican en monohidroxilicos, dihidroxilicos y trihidroxilicos respectivamente. El metanol y el etanol son alcoholes monohidroxilicos. Los alcoholes también se pueden clasificar en primarios, secundarios y terciarios, dependiendo de que tengan uno, dos o tres átomos de carbono enlazados con el átomo de carbono al que se encuentra unido el grupo hidróxilo. Los alcoholes se caracterizan por la gran variedad de reacciones en las que intervienen; una de las más importantes es la reacción con los ácidos, en la que se forman sustancias llamadas ésteres, semejantes a las sales inorgánicas. Los alcoholes son subproductos normales de la digestión y de los procesos químicos en el interior de las células, y se encuentran en los tejidos y fluidos de animales y plantas (García, 2001). El alcohol de madera, alcohol metílico o metanol, de fórmula CH 3OH, es el más simple de los alcoholes. Antes se preparaba por destilación destructiva de la madera, pero hoy en día casi todo el metanol producido es de origen sintético, elaborado a partir de hidrógeno y monóxido de carbono. El metanol se utiliza para desnaturalizar alcohol etílico, como anticongelante, disolvente para gomas y lacas, así como en la síntesis de compuestos orgánicos como el formaldehido. Al ser ingerido en forma líquida o inhalada en vapor, puede resultar peligroso. Tiene un punto de fusión de -97,8 °C y un punto de ebullición de 64,7 °C. Su densidad relativa es de 0,7915 a 20 °C.
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Figura 11. Alcohol en su enlace Químico.
El alcohol de vino, alcohol etílico o etanol, de fórmula C 2H5OH, es un líquido transparente e incoloro, con sabor a quemado y un olor agradable característico. Es el alcohol que se encuentra en bebidas como la cerveza, el vino, el brandy. Debido a su bajo punto de congelación, ha sido empleado como fluido en termómetros para medir temperaturas inferiores al punto de congelación del mercurio, -40 °C, y como anticongelante en radiadores de automóviles. Normalmente el etanol se concentra por destilación de disoluciones diluidas. El de uso comercial contiene un 95% en volumen de etanol y un 5% de agua. Ciertos agentes deshidratantes extraen el agua a gua residual y producen etanol absoluto. El etanol tiene t iene un punto de fusión de -114,1 °C, un punto de ebullición de 78,5 °C y una densidad relativa de 0,789 a 20 °C. Desde la antigüedad, el etanol se ha obtenido por fermentación de azúcares. Todas las bebidas con etanol y casi la mitad del etanol industrial aún se fabrican mediante este proceso. El almidón de la patata (papa), del maíz y de otros cereales constituye una excelente materia prima. La enzima de la levadura, la cimasa, transforma el azúcar simple en dióxido de carbono. La reacción de la fermentación, representada por la ecuación
C6H12O6 → 2C2 H5OH + 2CO2.
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Es realmente compleja, ya que los cultivos impuros de levaduras producen una amplia gama de otras sustancias, como el aceite de fusel, la glicerina y diversos ácidos orgánicos. El líquido fermentado, que contiene de un 7 al 12% de etanol, se concentra hasta llegar a un 95% mediante una serie de destilaciones. En la elaboración de ciertas bebidas como el whisky y el brandy, algunas de sus impurezas son las encargadas de darle su característico sabor final. La mayoría del etanol no destinado al consumo humano se prepara sintéticamente, tanto a partir del etanal (acetaldehído) procedente del etino (acetileno), como del eteno del petróleo. También se elabora en pequeñas cantidades a partir de la pulpa de madera. La oxidación del etanol produce etanal que a su vez se oxida a ácido etanoico. Al deshidratarse, el etanol forma dietiléter. El butadieno, utilizado en la fabricación de caucho sintético, y el cloroetano, un anestésico local, son otros de los numerosos productos químicos que se obtienen del etanol. Este alcohol es miscible (mezclable) con agua y con la mayor parte de los disolventes orgánicos. Es un disolvente eficaz de un gran número de sustancias, y se utiliza en la elaboración de perfumes, lacas, celuloides y explosivos. Las disoluciones alcohólicas de sustancias no volátiles se denominan tinturas. Si la disolución es volátil recibe el nombre de espíritu. Los alcoholes superiores, de mayor masa molecular que el etanol, tienen diversas aplicaciones tanto específicas como generales: el propanol se usa como alcohol para frotar y el butanol como base para perfumes y fijadores. Otros constituyen importantes condimentos y perfumes. 6
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http://www.aquagen.com.
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xli
3. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. MATERIALES 3.1.1. LOCALIZACIÓN Y UBICACIÓN GEOGRÁFICA Esta investigación se realizó en la Estación Piscícola del Centro Nacional de Investigaciones Acuícola (CENIAC), propiedad del Ministerio de Agricultura, Ganadería y Pesca (MAGAP). Sitio Papallacta, ubicada en el Km. 65 vía Quito Baeza, Provincia del Napo, cantón Quijos; con una altitud 3300 metros sobre el nivel del mar y una temperatura promedio de 10 ºC en invierno y de 8 ºC en verano.
Figura 12. Estación piscícola del CENIAC.
3.1.2. EQUIPOS Y MATERIALES •
Termómetro.
•
Cintas de medición de pH.
•
Oxigenómetro.
•
Recipientes.
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Baldes. xlii
•
Cinta métrica o plexo metro.
•
Estacas o hitos.
•
Cuerdas.
•
Cámara de fotos.
•
Armarios de incubación.
•
Yodo.
•
Tubos de pvc.
•
Mangueras de plásticos.
•
Botellas de oxigeno.
•
Transporte.
•
Alevines de trucha arco iris.
•
Alimento balanceado.
•
Alcohol.
•
Ácido acético.
•
Peróxido de hidrógeno (45 volúmenes)
•
Acetanilida.
3.1.3. VARIABLES EN ESTUDIO •
Sobrevivencia de las ovas
3.1.4. MEDICIÓN DE LA VARIEBLE Sobrevivencia de las ovas. Variable cuantitativa expresada como el porcentaje de ovas que sobreviven en el proceso de eclosión o fase embrionaria.
3.2. MÉTODOS 3.2.1. ANÁLISIS BIBLIOGRÁFICO La investigación bibliográfica es una recopilación de información, organización y realización de un análisis crítico, para clasificar y ordenar las investigaciones, opiniones y sugerencias de diferentes autores. Para esto se necesitó la ayuda de libros, revistas, boletines informativos, periódicos, publicaciones, folletos e internet.
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3.2.2. MÉTODO DE ANÁLISIS ESTADÍSTICO Este método fue considerado para realizar comparaciones de las variables que se analizaron; se utilizan el análisis de sobrevivencia y ortogonal para valorar los resultados. Estos datos sirvieron para obtener debidas conclusiones y poder realizar evaluaciones del desempeño de las variables.
3.2.3. ANÁLISIS DE FORTALEZAS Y DESVENTAJAS El Análisis FODA es una herramienta que permitió conformar un cuadro de las características positivas y negativas del desinfectante, obteniendo de esta manera un diagnóstico para examinar su eficacia, particularidades y potenciar su uso. El término FODA es una sigla conformada por las primeras letras de las palabras Fortalezas, Oportunidades, Debilidades y Amenazas.
3.2.4. PROCEDIMIENTO 3.2.4.1. Desove y Siembra Para comenzar el proceso de reproducción de la trucha arco iris, preparamos los reproductores para el desove; En este caso, estos pertenecen al lote 6, de aproximadamente 4 años de edad; los mismos que son anestesiados por 5 minutos en aceite de clavo (concentrado de clavo de olor).
Figura 13. Reproductores de Trucha arco iris. xliv
Por otra parte se desinfectan los tanques de eclosión; para ello se utilizó el desinfectante en estudio, en una concentración alta (70 %), una vez limpiado rigurosamente el área, abrimos el paso de agua y desinfectamos. Tomamos parámetros (Temperatura, Oxigeno disuelto, pH y otros) Temperatura
6,5
grados centígrados
Oxígeno disuelto
8,25
miligramos por litro
pH
7
Neutro
Cuando los reproductores están listos para la fecundación extraemos en un recipiente los huevos y colocamos el esperma sobre ellos; mezclamos lenta y pausadamente hasta tener una mezcla homogénea. Para finalizar el desove y comenzar la fase embrionaria, depositamos 100 gr de huevos fecundados en las canastillas de eclosión y tomamos una pequeña muestra para conocer el peso promedio de cada ova. Peso promedio
0,080 gramos por ova
Peso de siembra
100
Promedio
1250 ovas por canastilla.
gramos por canastilla
Las canastillas estarán colocadas como se expresa en el cuadro 1. Cuadro 1. Distribución de las canastillas. Canastilla A1
Canastilla B1
Canastilla C1
Canastilla T
Solución al 0.90 %
Solución al 0.60 %
Solución al 0.30 %
Testigo Sol. Yodo
Al terminar este proceso las ovas se encuentran fecundadas y listas para empezar el proceso embrionario, el cual se dará en su totalidad en las canastillas de eclosión.
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Figura 14. Canastillas de eclosión.
Fase embrionaria: El proceso de post- inseminación (fase de fecundación), tardara entre 210 a 220 grados Co día, hasta el periodo embrionario de ojos visibles. En la estación epicentro de nuestra investigación, esta fase de 210 a 220 grados C o días se logra en un tiempo aproximado de 40 a 50 días; En este periodo de tiempo se procede a realizar las diferentes profilaxis profilaxis y/o higiene de las ovas. Con 3 diferentes diluciones del compuesto peróxido de hidrógeno (0.30 %, 0.60 % y 0.90 %) y un testigo; en todo el periodo de incubación.
Las ovas se colocan en armarios de incubación, con una capacidad de 10 000 huevos cada uno, donde se incuban por alrededor de 22 a 25 días (210-220 grados C o /día de fase embrionaria), luego se las llevó hacia las piletas de eclosión, donde permanecerán alrededor de 15 días, de ahí son considerados juveniles y su ciclo de vida se hace en las piscinas de engorde.
Desinfección: La desinfección se realiza retirando las ovas de las canastillas de eclosión y colocándolas en cernideros, los mismos que se introducen en un recipiente con agua y las diferentes diluciones; utilizando el yodo (yodofort) como testigo; Ahí se mantiene a las ovas
xlvi
por un periodo de diez (10) minutos; Después de este tiempo las ovas regresan a sus respectivas canastillas. Este proceso se repite cada ocho (8) días, durante toda la investigación. En cada realización se cuentan y retiran los organismos muertos de cada canastilla; Se toman parámetros (temperatura, oxigeno disuelto y pH) y se realiza una limpieza (sifoneo) de las canastillas, para retirar los residuos de materia orgánica y suciedad (lodo y otros) que ingresan con el agua.
Figura 15. Proceso de desinfección.
Transferencia: Una vez que las ovas han alcanzado los 210 a 220 grados C o día, los alevines de trucha revientan su saco vitelino y empiezan a digerirlo, en este momento las desinfecciones son paralizadas y se espera la absorción (alimentación del propio alevín de su saco vitelino) para dar por terminado el estado de ovas y pasan a tanques de mayor tamaño donde siguen su proceso normal, ya como alevines de trucha arco iris. El promedio normal de transferencia de alevines en la estación piscícola del CENIAC es de alrededor del 10 al 20 % dependiendo la estación del año; con la utilización de yodo como elemento de higiene.
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4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1. SOBREVIVENCIA DE OVAS Se inicio el experimento con una población inicial promedio de 1250 ovas de trucha por canastilla, el descenso en la población fue gradual en los tres tratamientos y testigo, aunque se observo en dos muestreos un mayor número de mortalidad, en comparación a las otras semanas; eso se debió a factores climáticos inapropiados (Anexo 4), ya que en esas semanas hubo una gran cantidad de materia orgánica y sedimentos en el agua, producto de climas lluviosos en el entorno. Cuadro 2. Sobrevivencia.
1400 1200 1000 800
A1
600
B1
400
C1
200
T1
0 1
2
3
4
5
6
7
8
SEMANAS
No se detecto diferencia estadística significativa entre los datos de sobrevivencia de los tratamientos (Anexo 1), teniendo un promedio porcentual de 16,55 % para el primer tratamiento (A); 13,03 % para el segundo (B); 12,72 % para el tercero (C) y 15,05 % para el testigo (T).
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4.2. ANÁLISIS DE TRATAMIENTOS Los tratamientos y el testigo tuvieron una sobrevivencia similar en las tres repeticiones; El tratamiento A tiene una sobrevivencia ligeramente mayor con el 17,29 %, pero no estadísticamente significativa con relación a los otros dos tratamientos y el testigo (Anexo 2).
Con el análisis de tratamiento establecimos que ningún tratamiento fue significativo al testigo; en cambio, gracias al análisis ortogonal observamos que el tratamiento A es el efectivo en relación a los tratamientos B y C; Con lo que concluimos que el tratamiento A es más eficaz que los tratamientos B y C (Anexo 3).
4.3 FORTALEZAS Y DESVENTAJAS Fortalezas •
Fácil manipulación
•
Concentraciones bajas
•
Costo de producción bajo
Oportunidades •
Mercado con pocas iniciativas comerciales
•
Introducción en otras especies en producción (nauplios – larvas - alevines)
Debilidades •
Fácil preparación
•
Riegos en manipulación no adecuada
•
Toxico en concentraciones altas
Amenazas •
Productos competidores de fácil acceso
•
Poca experiencia en su utilización
•
Falta de criterios técnicos en producción
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4.4. EXPERIENCIAS El uso del peróxido como desinfectante fue efectivo a simple vista, como agente de limpieza de agua y huevos fue eficaz; permitiendo obtener después de la exposición de los huevos al producto, una asepsia total en todos los aspectos. Factores externos (temperatura, turbidez, oxigeno disuelto, entre otros) afectan el proceso de desinfección más que el mismo hongo o paracito. Esto se puede comprobar en los muestreos de los días IV y V (Ver anexo 4), en el primer caso, lo antecedieron días de clima muy lluvioso y cargas altas de sedimentación en el agua, al contrario del siguiente muestreo, que tubo días anteriores favorables con un clima soleado. Factor que incidió en los conteos de sobrevivencia, siendo los muestreos de mayor y menor mortalidad respectivamente. El desinféctate utilizado en los tratamientos tuvo una característica especial al momento de ser colocado, ya que indirectamente ayudo al reconocimiento de los huevos huevos fecundados; Lo que que no se logra con el Yodo. Por lo que se establece un uso. La sobrevivencia fue baja en todos los tratamientos incluyendo el testigo, siendo el mayor porcentaje de 16,55 % y 12,72 % el menor, Diferencia que no es suficiente para comprobar eficacia. La eficiencia en la desinfección no fue mejorada con ninguno de los tratamientos.
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5. CONCLUSIONES 1. El tratamiento A (peróxido al 0, 90 %), fue el de mayor eficacia en la desinfección de ovas. Llegando a tener el 17, 29 % de sobrevivencia en una repetición y el 16,55 % en promedio. 2. Se consiguió una limpieza absoluta de las ovas y canastillas al aplicar el tratamiento. 3. Ayudo al reconocimiento de los huevos fecundados. 4. Se recomienda una investigación más detallada de la utilización del peróxido como desinfectante y en otras aplicaciones. A demás cambios relevantes como concentración, forma de distribución, protocolo de desinfección, entre otras actividades posibles de realizar en nuevas investigaciones.
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6. RESUMEN Con el presente trabajo de investigación se trato de establecer la eficacia en el control de la saprolegniosis y la desinfección de ovas de trucha arco iris (Oncorhynchus mykis) utilizando un compuesto químico a base de peróxido de hidrogeno (H O ). El estudio se hizo en las ₂
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instalaciones del departamento de producción de ovas y alevines del CENIAC, en el sector de Papallacta. Al compuesto se lo comparo con un desinfectante a base de Yodo que es el de mayor uso en el control de saprolegnia sp. La investigación tuvo tres repeticiones; con una cantidad promedio de ovas de 1250 unidades por canastilla; Se expuso a las ovas a baños sumergidos en el compuesto durante 10 minutos con tres diferentes soluciones 0, 30 %, 0, 60 %, 0, 90 % y un testigo a base de Yodo al 10 %. Realizando muestreos muestreos semanales para controlar parámetros: físicos, químicos químicos y retirar los huevos no eclosionados, infértiles y muertos. La sobrevivencia fue la variable en estudio y los resultados obtenidos muestran como sobrevivencia mayor el 17 % y la menor 12 % en los diferentes tratamientos y testigo. También se pudo observar que los factores externos tienen más injerencia en la mortalidad que el mismo hongo. hongo. Concluimos que el tratamiento A es el más eficaz en la desinfección de ovas.
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7. SUMMARY In this investigation we want to demonstrated the efficiency of a chemical compound based on peroxide of hydrogen (H O ), in the control of the saprolegniosis and the disinfection of ₂
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eggs of trout rainbow (Oncorhynchus mykis). The study was done in the installations of the department of production of eggs and fries of the CENIAC, in Papallacta's sector. The potion was compare with disinfect based on Iodine, usually use in the control of saprolegnia sp. The investigation had three repetitions; with 1250 eggs in each box; there was exposed to the eggs to baths immersed in the potion during 10 minutes with three different solutions at 0, 30 %, 0, 60 %, 0, 90 % and a witness based on Iodine at 10 %. Realizing weekly samplings to control parameters: physicists, chemists and to withdraw the eggs not found, unfertile and dead. The survival was the variable in study the obtained results are 17 % to the best survival and 12 % to the worse, in the different treatments and witness. Also it was possible to observe that the external factors have more interference in the mortality that the same mushroom. All that leads us to concluding, that the potion A was the best in the disinfection and control c ontrol of saprolegniosis.
lvi
lvii
8. BIBLIOGRAFÍA ASTUDILLO N. 1990. Respuestas de Alevines de Salmo Gairdneri Bajo Crianza en Piletas de Cemento con Dos Tipos de Alimento. Tesis de Ingeniero Acuacultor. Facultad de Agronomía, Veterinaria y Acuacultura. Universidad Técnica de Máchala. 45p. BLANCO M. C. 1995. La Trucha, cría industrial. Ediciones Mundi-Prensa. España. Primera. 503p. BALFOUR H. & JOEL P. 1985. Cultivo de Peses Comerciales, Basado en las experiencias de las granjas piscícolas de Israel. Editorial Limusa. México. Primera reimpresión. 509p. DAVID P. 1996. Tesis de Ingeniero Acuacultor. Programa de tecnología en Hidrocultura. Universidad de Nariño. 42p. ERIQUE L. & QUIZHPE P. 1990. Construcción de Estanques para el Cultivo de Tilapia Nilótica con Tres Tipos de Fertilizantes Orgánicos. Tesis de Ingeniero Acuacultor. Facultad de Agronomía, Veterinaria y Acuacultura. Universidad Técnica de Machala. 113p. ESPINOZA A. 2003. Nivel de Producción de Truchas en una Piscifactoría de Cuenca Provincia del Azuay Periodo 2000. Tesis de Ingeniero Acuacultor. Facultad de Ciencias Agropecuarias. Universidad de Máchala. 21 p. GARCÍA, M. 2001. Etiquetas en organismos organismos acuáticos. Panorama Acuícola. 6(6):28. 6(6):28. HUET M. 1983. Tratado de Piscicultura. Ediciones Mundi-España. España. Primera. IAÑEZ, E.1998. Curso General de Microbiología. Ediciones España. NEWMAN, S & 2000.Prevención de enfermedades de trucha arco iris. Panorama Acuícola 5:22-23. STEVENSON J. P. 1986. Manual de Cría de la Trucha. Editorial Acribia. España. Primera. 45p.
lviii
lix
ANEXOS
Anexo 1 Tabla 2. Análisis de varianza. F tabular Fuente de Análisis
G.L.
SC
CM
Tratamiento
3
7339,00
2446,33
Error
8
5206,67
650,83
Total
11
12545,67
Fc 3,76
n.s.
0.05
0.01
4,07
7,59
Anexo 2 Tabla 3. Análisis de Tratamiento.
TRATAMIENTO
REPETICIONES (%) I II III
PROMEDIO
A B C T
17,29 17,45 12,68 15,28
15,96 11,90 12,03 15,63
16,40 9,73 13,44 14,26
16,55 13,03 12,72 15,06
PROMEDIO
15,68
13,88
13,46
FC= 3837776,33
lx
Anexo 3 Tabla 4. Análisis ortogonal.
TRATAMIENTOS
1
A
B
C
Testigo
636,00
465,00
465,00
580,00
1
1
1
-3
12
abc vs test.
2
a vs bc
2
-1
-1
0
6
3
b vs c
0
1
-1
0
2
Anexo 4 Tabla 5. Diario de mortalidades
CONTEO DE MORTALIDAD Taq. Si em embra
I
II
III
IV
V
VI
V IIII
V II III
TO TOTAL
SO SOBREV .
SUMA
Si Si m. m.- Mo Morta. Di fe fe re re nc nci a
De Sobre v. v.
A1
1250
113
11 118
14 148
284
85
147
14 141
7
1043
218
1261
207
11
17,29
B1
1250
111
11 117
12 126
185
86
220
13 132
7
984
208
1192
266
- 58
17,45
C1
1250
96
196
13 138
360
61
15 158
70
2
1081
157
1238
169
- 12
12,68
T1
1250
118
20 204
12 126
189
51
134
19 192
89 89
1103
199
1302
147
52
15,28
A2
1250
104
15 154
13 136
278
102
164
16 161
7
1106
210
1316
144
66
15,96
B2
1250
118
16 165
13 130
302
77
108
17 172
9
1081
146
1227
169
- 23
11,90
C2
1250
111
22 227
11 111
314
67
171
87
2
1090
149
1239
160
- 11
12,03
T2
1250
112
21 215
11 117
207
57
176
18 189
12
1085
201
1286
165
36
15,63 16,40
A3
1250
111
25 256
13 131
155
89
18 188
12 127
3
1060
208
1268
190
18
B3
1250
114
22 227
13 1 30
168
80
138
16 160
13 13
1030
111
1141
220
- 109
9,73
C3
1250
105
26 260
12 125
158
75
174
12 125
2
1024
159
1183
226
- 67
13,44
T3
1250
116
34
125
308
116
141
23 236
6
1082
180
1262
168
12
14,26
lxi
Anexo 5
Figura 16. Piscinas de engorde y reproductores.
Anexo 6
Figura 17. Canastillas de eclosión. lxii
Anexo 7
Figura 18. Recolección de huevos muertos.
Anexo 8
Figura 19. Desinfección de ovas en diferentes soluciones. lxiii
Anexo 9
Figura 20. Ovas en canastillas.
Anexo 10
Figura 21. Ovas en canastas para desinfección.
lxiv
Anexo 11
Figura 22. Observación de ovas al microscopio.
Anexo 12
Figura 23. Muestra de ovas infectadas.
lxv
Anexo 13
Figura 24. Fotografía microscópica de Ovas.
Anexo 14
Figura 25. Alevines de trucha arco iris. lxvi
