MAKALAH ANALISIS KUALITATIF MIKROORGANISME
DISUSUN OLEH KELOMPOK 4
1. Fann Fanny y amel amelia ia samma samma 2. Irm Irman sei seia! a!an an
PROGRAM STUDI FARMASI FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS TADULAKO PALU 2014
"A" I PENDAHULUAN
a. Latar atar bela belak kang ang Popu Popula lasi si mikr mikroo oorg rgani anism smee di alam alam sekit sekitar ar kita kita sanga sangatt besar besar dan dan kompleks. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba berada disekitar kita. Mikroo Mikroorga rganism nismee ada yang yang mengun menguntun tungka gkan n dan ada yang yang merugi merugikan kan.. Mikr Mikror orga gani nism smee yang yang meru merugi gika kan n yaitu yaitu mikr mikroo oorg rgan anism ismee yang yang dapa dapatt menyebabkan infeksi, menghasilkan racun dan merusak bahan dengan cara menye menyebab babkan kan pembus pembusuka ukan, n, mengur menguraika aikan n
bahanbahan-bah bahan. an. Terdap erdapatn atnya ya
mikroo mikroorga rganis nisme me dalam dalam sediaa sediaan n farmasi, farmasi, makana makanan, n, minuma minuman n sebaga sebagaii kontaminan, kemungkinan disebabkan oleh cara pengolahan yang tidak bersih dan sehat, cara pengepakan yang kurang bagus, cara penyimpanan yang tidak baik dan lain-lain. Sedangkan sumbernya kemungkinan dari udara, udara, tanah, tanah, air, air, peralat peralatan an yang yang diguna digunakan kan dalam dalam pengol pengolaha ahan, n, atau pekerja yang melakukan proses pembuatan. Maka Makana nan, n, minu minuma man, n, obat obat trad tradisi ision onal, al, sediaa sediaan n non non steril steril,, serta serta kosmetik merupakan suatu sediaan yang berasal dari hean, tumbuhan, mineral mineral,, maupun maupun dari dari !at-!at !at-!at kimia kimia sinteti sintetik. k. Pada Pada umumny umumnyaa sediaan sediaan-sedi sediaan aan terse tersebu but, t, dipr diprod oduk uksi si oleh oleh indu indust stri ri secar secaraa besar besar-b -besa esaran ran dan dan biasanya memakan aktu yang cukup lama dalam produksi, penyimpanan, penyimpanan, distribusi dan akhirnya sampai ke tangan konsumen. "adi kemungkinan dapat terjadi pertumbuhan mikroba di dalamnya. "enis pengujian yang diperlukan untuk masing-masing produk tidak sama. sama. #ntuk #ntuk produk produk makana makanan n diuji diuji cemaran cemaran mikrob mikrobany anya. a. #ji angka angka lempen lempeng g total total merupa merupakan kan tolak tolak ukur ukur mikrob mikrobiolo iologis gis untuk untuk mengeta mengetahui hui kebersihan pengolahan dan penanganan produk makanan dan minuman maupun produk lainnya yang juga merupakan suatu indikasi layak atau tidak layaknya suatu produk untuk digunakan. Berd Berdasa asark rkan an hal hal terse tersebu butt maka maka perlu perlu dilak dilakuk ukan an prak prakti tiku kum m uji uji mikrobiologis terhadap produk sediaan farmasi yaitu makanan, minuman, kosmetik, dan obat tradisional
$i dalam bidang ilmu mikrobiologi ada suatu hal mendasar yang juga perlu diperhatikan yaitu analisia kualitatif terhadap suatu bahan. Suatu analisis ini Sangat penting untuk mengetahui jumlah mikroorganisme yang ada pada suatu sampel tertentu mengandung banyak mikroorganisme atau sebaliknya. %nalisis sis
kualitat tatif
atau
biasa
diseb sebut
dengan
enu enumerasi rasi
mikroorganisme dalam hal ini dapat dilakukan baik dengan perhitungan langsung terhadap suatu sampel yaitu salah satunya dengan alat bantu mikroskop, maupun dengan cara tidak langsung yaitu dengan beberapa metode perhitungan. b. Tujuan percobaan percobaan Mengetahui cara analisi kualitatif dengan mengunakan berbagai metode
"A" II PEM"AHASAN
Makanan Makanan minuman berasal dari dua sumber dari tumbuhan dan binatang. binatang. &leh &leh karen karenaa itu itu tida tidak k meng menghe hera rank nkan an apab apabila ila dalam dalam sediaa sediaan n maka makana nan n dan dan minuman sejak dari bahan baku sampai menjadi bahan makanan tidak akan bebas dari pengaruh adanya mikroba '%nonim, ()*)+. Mikroo Mikroorga rganism nismee ada yang yang mengun menguntun tungka gkan n dan ada yang yang merugi merugikan kan.. Mikrorrganisme yang merugikan yaitu mikroorganisme yang dapat menyebabkan infeks infeksi, i, mengha menghailk ilkan an racun racun dan merusa merusab b bahan bahan dengan dengan cara menyeb menyebabk abkan an pembusukan, menguraikan bahan-bahan. Terdapatnya Terdapatnya mikroorganisme dalam sediaa sediaan n
farma farmasi si,,
maka makana nan, n,
minu minuma man n
seba sebaga gaii
konta kontami mina nan, n,
kemu kemung ngki kina nan n
disebabkan oleh cara pengolahan yang tidak bersih dan sehat, cara pengepakan yang kurang bagus, cara penyimpanan yang tidak baik dan lain-lain. Sedangkan sumbernya sumbernya kemungkinan kemungkinan dari udara, tanah, air, peralatan yang digunakan digunakan dalam pengolahan, pekerja yang melakukan proses proses pembuatan ' $jide, ())+. Pemerik Pemeriksaan saan mikrob mikrobiol iologi ogiss terhad terhadap ap produk produk-pr -produ oduk k yang yang langsu langsung ng dimaka dimakan n dilaku dilakukan kan terhada terhadap p bakteri bakteri-ba -bakter kterii penyeba penyebab b infeks infeksii dan keracu keracunan nan makan seperti yang disebutkan diatas dan juga terhadap angka lempeg total seagai indikasi tentang kebersihan dan sanitasi pada proses pengolahan produk-produk tersebut ' $jide , ())+. ualitas mikrobiologis dari obat-obatan merupakan suatu masalah yang penting untuk diperhatikan. &bat-obatan steril sudah lama dikenal syarat kualitas mikrobiologisnya, tetapi preparat farmasi non steril baru beberapa tahun terakhir ini mendapatkan perhatian dan mulai diadakannya persyaratan. Pada umumnya obat-o obat-obat batan an dibuat dibuat oleh oleh indust industri ri secara secara besarbesar-besa besaran ran.. Sediaan Sediaan tadi tadi memaka memakan n akt aktu u yang ang cuku cukup p lama lama dala dalam m peny penyim impa pana nan, n, dan dan hal hal ini ini sela selama ma dala dalam m penyimpanan atau peredarannya kemungkinan dapat terjadi pertumbuhan mikroba di dalamnya ( $jide, $jide, ())+. %danya mikroba di dalam obat-obatan non steril tidak dikehendaki karena dapat menyebabkan perubahan-perubahan dalam karakter organoleptis, perubahan atau kemunduran, kemunduran, dan bahkan bahkan aktiitas aktiitas di dalam obat yang bersangkutan. bersangkutan. Selain
itu mikroba yang tumbuh tumbuh dapat berbahaya, berbahaya, baik yang patogen ataupun dari jenis yang tidak patogen, tetapi bila jumlahnya sangat banyak dapat menimbulkan halhal yang merugikan. Penyakit-penyakit yang dapat timbul karena adanya mikroba didalam didalam obat-o obat-obat batan an non non steril, steril, dapat dapat mengak mengakiba ibatka tkan n terjadi terjadinya nya infeks infeksii dari dari bakteri patogen atau keracunan oleh bakteri penghasil racun '$jide , ())+. ())+. alau alau makana makanan n dan minuma minuman n terkon terkontam tamina inasi si mikroo mikroorg rganis anisme me secara secara spontan dari udara, maka akan terdapat pertumbuhan campuran beberapa macam mikroorganisme. ontaminasi terebut dapat terjadi sejak pengolahan bahan baku, pemrosesan bahan, peralatan, pengemasan, karyaan, air yang digunakan da jenis adah atau kemasan yang digunakan '$jide, ())/+. $efinisi dari bakteri coliform didasarkan pada bentuk gram dan reaksi metabo metaboit. it. Berdas Berdasark arkan an defini definisi si tersebu tersebutt colifo coliform rm adalah adalah gram gram negati negatiee tidak tidak memili memiliki ki spora, spora, aerobic aerobic atau atau fakult fakultatif atif aerobicy aerobicyang ang memperm memperment entasi asi laktos laktosaa membentuk asam dan gas dalam aktu 0/ jam pada suhu 1 o2 ' Mc Lands borro ug, ())1+. #ji #ji MP3 MP3 ' Most Most Prob Probab able le 3umb 3umber er++ digu diguna naka kan n jika jika juml jumlah ah yang ang diharap rapkan
relati atie
rend endah
ant antara
lain
kuran rang
dari
*
sam sampai
*))
mikroorganisme4mL. Prosedur ini menggunakan tabung ganda dari kultur medium biasanya sampai 1 dengan perbedaan olume dari sampel, s ampel, misalnya misaln ya tabung asing-masing asing-masing diinkulasi diinkulasi dengan dengan ),* mL, dai tabung tabung berikutnya berikutnya ),)* mL dan deret tabung berikutnya ),))* mL. "ika konsentrasi dalam sampel adalah range yang ditujukan seperti diatas, seharusnya pada tabung yang menerima inokulasi bakteri tidak ada mikroorganisme yang hadir. 5ni akan menjadi steril setelah diinkubasi, perbandingan dari tabung positif yang dilaporkan untuk tiap olume sampel dan hasilnya dibandingkan dibandingkan dengan tabel standart MP3 dari organisme per mL 'atau per *)) mL dari sampel murni+. Prosedur ini biasanya digunakan dalam air , makanan, dan produk indusry dibandingkan pada industry farmasi '6ugo, ())0+. Tekni ekni MP3 adalah adalah metode metode statisti statisticc yang yang bergun bergunaa dalam dalam menent menentuka ukan n konsen konsentras trasii rendah rendah dari organi organisme sme 'kuran 'kurang g dari dari *)) gram atau mL+. $alam metode ini sampel secara seri dilarutkan sehingga inokula akan kadang-kadang
tapi tapi tidak tidak selalu selalu mengan mengandu dung ng organi organisme sme hidup hidup pada pada setiap setiap pelarut pelarutan an olume olume gand gandaa dipi dipind ndah ahka kan n ke tabu tabung ng ke ,1, ,1, atau atau ke *) dari dari medi medium um cair cair yan diujikan.Tabung diinkunbasi dan hasilnya diealuasi.Berdasarkan test ini, tabung yang yang posi positi tiff diide diident ntifi ifika kasi si deng dengan an keke kekeru ruha han n 'per 'pertu tumb mbuh uhan an++ tung tungga gall atau atau kombinasi dengan produk gas dan asam 'Mc lands borrugh, ())1+. %danya %danya mikroorg mikroorganisme anisme dalam makanan makanan dan minuman minuman dapat merusak makanan dan minuman atau mengubah komposisi bahan makanan 4 minuman diantaranya dapat menghidrolisa menghidrolisa pati dan dan selulosa atau menyebabkan fermentasi gula, sedangkan yang lainnya dapat mendegradasi protein dan menghasilkan bau busuk dan amonia. %da bberapa mikroorganisme dapat membentuk lendir, gas, busa, arna, asam, racun dan lain-lain sebagainya '$jide, ())/+. faktor-faktor sebagai berikut '$jide, ())/+ 7 a. Pertum Pertumbuh buhan an dan aktii aktiitas tas mikroorg mikroorgani anisme sme terutama terutama bakteri, bakteri, khamir khamir dan b. c. d. e. f. g.
kapang %ktiitas en!im di dalam makanan, serangga, parasit dan tikus. Suhu adar ai air #dara #dara terut terutam amaa oksi oksige gen n Sinar4ca r4cah haya aya 8aktu 8a ktu4lam 4lamaa dalam dalam peyimp peyimpana anan n
Berb Berbag agai ai macam macam uji mokr mokrob obio iolo logi giss dapa dapatt dila dilaku kukan kan terh terhad adap ap baha bahan n pangan, meliputi uji kuantitatif mikroba untuk menentukan daya tahan suatu makanan, uji kualitatif bakteri patogen untuk menenetukan tingkat keamanan dan uji indikator untuk menentukan tingkat sanitasi makanan tersebut. Pengujian yang dilakukan terhadap tiap bahan pangan tidak sama tergantung berbagai faktor, seperti jenis dan komposisi bahan pangan, cara pengepakan dan penyimpanan serta komsumsiny komsumsinya, a, kelompok kelompok konsumen konsumen dan berbagai berbagai faktor lainnya '$irjen '$irjen P&M., *9:9+. Metode Metode MP3 biasany biasanyaa biasany biasanyaa dilaku dilakukan kan untuk untuk menghi menghitun tung g jumlah jumlah mikroba di dalam contoh yang berbentuk cair, meskipun dapat pula digunakan untuk contoh berbentuk padat dengan terlebih dahulu membuat suspensi *7*) dari contoh tersebut ';ardia!, *99+.
Metode MP3 digunakan medium cair di dalam tabung reaksi, dimana perhitungannya dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif yaitu yang ditumb ditumbuhi uhi oleh oleh jasad jasad renik renik setelah setelah inkuba inkubasi si pada pada suhu suhu dan aktu aktu tertent tertentu. u. Pengam Pengamatan atan tabung tabung yang yang positi positiff dapat dapat diliha dilihatt dengan dengan mengam mengamati ati timbul timbulnya nya kekeruhan atau terbentuknya gas di dalam tabung kecil 'tabung $urham+ yang diletakkan pada posisi terbalik, yaitu untuk jasad renik pembentuk gas. $alam metode MP3, pengenceran harus dilakukan lebih tinggi daripada pengenceran dalam hitungan caan, sehingga beberapa tabung yang berisi medium medium cair yang yang diinok diinokula ulasik sikan an dengan dengan larutan larutan hasil hasil pengen pengencera ceran n tersebu tersebutt mengandung satu sel, beberapa tabung yang lainnya mengandung lebih dari satu sel atau tabung lainnya tidak mengandung sel. $engan demikian setelah inkubasi, diharapkan terjadi pertumbuhan pada beberapa tabung yang dinyatakan sebagai tabung positif, sedangkan tabung lainnya negatif. Standar plate 2ount '%ngka Lempeng Total+ adalah menentukan jumlah bakteri dalam suatu sampel. $alam test tersebut diketehui perkembangan banyaknya bakteri dengan mengatur sampel, di mana mana total bakteri tergantung atas formasi bakteri di dalam media tempat tumbuhnya dan masing-masing bakteri yang dihasilkan akan membentuk koloni yang tunggal '$jide M. 3atsir., ())1+ Metode MP3 merupakan uji deretan tabung yang menyuburkan pertumbuhan koliform sehingga diperoleh nilai untuk menduga jumlah koliform dalam sampel yang diuji. #ji positif akan menghasilkan angka indeks. %ngka ini disesuaikan deng dengan an tabe tabell MP3 MP3 untu untuk k mene menent ntuk ukan an juml jumlah ah koli kolifo form rm dala dalam m samp sampel el.. 'Sesilia,<.()**+ Tabel Tabel seleksi bakteri 'Sesilia,<.()** 'Sesilia ,<.()**++ Bakteri *. E. coli
(. Salmonella thypi
Media
Medi Mediaa Sele Selekt ktif if
6asi 6asill posi positi tif f
=nrichmen B>LBB,
=MB%,Mc
oloni hijau metalik dengan
LB, B65B
concey
bintik hitam di tegah
BS%, S2B,
SS%, BS%
oloni oloni keruh keruh atau atau bening bening,,
S=L=35T5;
tidak
berarna
bagian
tengah tengah mungk mungkin in berarn berarnaa
. Pseudomonas aeruginosa
hitam. B65B
M6%, 2=T%
olo oloni ni keci kecill dan dan seda sedang ng,, jernih, sedikit keruh. oloni
0. Staphylococcus aureus
hijau berfluoresen B65B
?"%
oloni berukuran kecil dan berarna hitam, dikelilingi oleh areal berarna kuning yang enunjukkan terjadinya
1. Vibrio cholera
fermentasi manitol. %P8
T2BS%
oloni oloni kuning kuning permuka permukaan an agak agak datar datar,, bagi bagian an teng tengah ah keru keruh h dan dan bagi bagian an ping pinggi gir r bening atau koloni kuning agak kering dilingkari !one kuning.
Mikr Mikrob obaa yang yang terk terkan andu dung ng dalam dalam maka makana nan n bisa bisa meny menyeb ebab abka kan n terjad terjadin inya ya kerusakan mikrobiologis pada makanan sehingga tidak layak untuk dikonsumsi. #ntuk mengetahui layak atau tidaknya suatu bahan makanan untuk dikonsumsi oleh oleh masyarak masyarakat, at, perlu perlu dilakuk dilakukan an penguj pengujian ian mikrob mikrobaa yang yang terkan terkandun dung g dalam dalam makana makanan n tersebu tersebut, t, salah salah satu cara tersebu tersebutt adalah adalah dengan dengan analisi analisiss kuanti kuantitati tatif f mikr mikrob obio iolo logi gi pada pada baha bahan n pang pangan an 'Buc 'Buckl klee *9/: *9/:+. +. 2ara 2ara ini ini sanga sangatt pent pentin ing g dilak dilakuk ukan an untu untuk k meng mengeta etahu huii mutu mutu baha bahan n pang pangan an.. Bany Banyak ak cara cara yang yang dapa dapatt dilakukan dilakukan untuk mengetahui mengetahui jumlah jumlah jasad renik di dalam suatu suspensi suspensi atau bahan. 2ara-cara tersebut dibedakan menjadi beberapa kelompok, yaitu Perhitungan jumlah sel 6itungan mikroskopis 6itungan caan Most Probable Number) Number) MP3 ' Most (. Perhit Perhitung ungan an massa massa sel secar secaraa langs langsung ung ?olumetric >raimetric ekeruhan 'turbidimeter+ *.
. Perhit Perhitung ungan an massa massa sel sel secara secara tak tak langsu langsung ng %nalisis komponen sel 'protein, $3%, %TP+ %nalisis produk katabolisme 'metabolit primer, metabolit sekunder, panas+ %nalisis konsumsi nutrien 'karbon, nitrogen, oksigen, asam amino, mineral+. '8aluyo ()):+. a. tekni teknik k enum enumer erasi asi adalah adalah caracara- cara untu untuk k meng menghi hitu tung ng mikr mikrob obaa yang yang tumbuh di dalam media. %da tiga teknik enumerasi yang sering digunakan dalam praktikum yaitu7 $erent Platting 'hitungan langsung+ • $erent Platting yaitu teknik perhitungan jumlah mkroorganisme secara langsung dengan bantuan coloni counter atau alat lain. 2ara ini ada dua macam yaitu secara langsung yaitu dengan alat bakteri counting
chamber
maupun
metode
breed
smean
atau
lepoloitch lepoloitcheber eber untuk untuk menghitun menghitung g jumlah jumlah mikroba mikroba dalam susu. %tau %tau bahk bahkan an bias bias pula pula mema memanf nfaa aatk tkan an sifa sifatt sel sel yang ang buka bukan n konduktor sehingga tidak dapat mengalirkan listrik yang kemudian akan akan mening meningkat katkan kan tegang tegangan an yang yang dicatat dicatat oleh oleh recorde recorderr serta serta dapat dapattt menu menunj njuk ukka kan n jumlah jumlah tota totall sel dan dan meto metode de ini ini diseb disebut ut •
metode elektro cell chamber 'Thihendrokosomo, *9/9+ Plate 2ount 'Perhitungan 2aan+ Metode Metode perhit perhitung ungan an caan caan didasar didasarkan kan pada pada anggap anggapan an baha baha setiap sel yang dapat hidup akan berkembang menjadi satu koloni. adi, adi, jumlah jumlah koloni koloni yang yang muncul muncul pada pada caan caan merupa merupakan kan satu indeks bagi jumlah organisme yang dapat hidup yang terkandung dalam sample. Teknik yang harus dikuasai dalam metode ini adalah meng mengen ence cerk rkan an sampl samplee dan dan menca mencaa ank nkan an hasil hasil peng pengen ence ceran ran terse tersebu but. t.
#ntu #ntuk k meme memenu nuhi hi persy persyara arata tan n stat statist istik ik,, caan caan yang yang
dipilih untuk menghitung koloni adalah yang mengandung antara •
) sampai dengan )) koloni '6adioetomo, *99+. Perhitungan Massa Sel 'Metode Turbidimetrik+ Bila kita harus memeriksa konsentrasi sel sejumlah besar biakan, maka metode hitungan caan bukanlah pilihan yang baik karena tidak hanya memakan aktu tetapi juga memerlukan media dan
pecah-belah dalam jumlah besar. #ntuk kasus deemikian tersedia metode yang lebih cepat dan prakytis, yaitu pengukuran kekeruhan biakan dengan fotokolorimeter. 3amun agar data yang diperoleh dari dari peng penguk ukur uran an ini ini
dapa dapatt
diny dinyat atak akan an seba sebaga gaii
kons konsen entr tras asii
organi organisme sme,, diperl diperluka ukan n suatu suatu kura kura standar standar yang yang menyatak menyatakan an kolerasi antara kekeruhan biakan dengan jumlah organisme per ml biakan. Sekali kura ini diperoleh, maka sejumlah besar biakan mikroorganisme sejenis dapat dengan cepat diukur kekeruhannya dan konsentrasinya segera diketahui dengan cara membaca kura standar tersebut '6adioetomo, *99+.
B%B 555 P=3#T#P Berd Berdasa asark rkan an hal hal terse tersebu butt maka maka perlu perlu dilak dilakuk ukan an prak prakti tiku kum m uji uji mikrobiologis terhadap produk sediaan farmasi yaitu makanan, minuman, kosmetik, dan obat tradisional %nalisis sis
kualitat tatif
atau
biasa
diseb sebut
dengan
enu enumerasi rasi
mikroorganisme dalam hal ini dapat dilakukan baik dengan perhitungan
langsung terhadap suatu sampel yaitu salah satunya dengan alat bantu mikroskop, maupun dengan cara tidak langsung yaitu dengan beberapa metode perhitungan
$%;T%< P#ST%% 6adioetomo, <. S. *99. Mikrobiologi Dasar Dasar dalam Praktek. >ramedia, Praktek. >ramedia, "akarta. Sandjaja, B. *99(. Isolasi *99(. Isolasi dan Identiikasi Mikrobiologi. Mikrobiologi. 8idya 8idya Medika, "akarta. Thihendrokesoo. *9/9. Petun!uk *9/9. Petun!uk "aboratorium Mikrobiologi Mikrobiologi Pangan. Pangan. Pusat %ntar #niersitas Pangan dan >i!i, @ogyakarta. @ogyakarta. ?olk. *99. Dasar#Dasar *99. Dasar#Dasar Mikrobiologi. Mikrobiologi. =rlangga. "akarta.
