Aeromonas Sss

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN FACULTAD DE BROMATOLOGÍA Y NUTRICIÓN

A E R OMON OM ONA A H Y D R OP H Y L A La taxonomía del género Aeromonas se encuentra en vías de transición; el género se ha situado en la nueva familia Aeromonadaceae derivada de la familia Vibrionaceae. Aeromonas hydrophilas hydrophilas es la especie más importante causa enfermedad en el hombre.

A eromonas ero monas hydr h ydrophi ophila la

Taxonomía Dominio Filo

Bateria Proteobacteria

Clase

Gammaproteobacteria

Orden

Aeromonadales Aeromonadales

Género

Aeromonas

Especie

A . Hy Hydr drophi ophila la

CARACTERISTICAS MORFOLÓGICAS.     

Aeromonas son bacilos Gram negativos. Miden de 1.0 − 4.4 4.4      por 0.4 0.4 − 1.0    ℎ ℎ.

La morfologia de sus colonias es semejante a la de los bacilos intestinales gram negativos y produce zonas grandes de hemolisis en agar sangre. Generalmente Generalment e son bacilos rectos con extremos redondeados que aparecen solos, en parejas o cadenas cortas. Presentan desplazamiento desplazamient o por flagelos polares unicos (monotricos). (monotrico s). De longitud 1.7 

 



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No forman capsula, ni esporas esporas y son aerobios o anaerobios anaerobios facultativos. Las especies de aeromonas se distinguen de las bacterias intestinales Gram negativas, por la reacción positiva a oxidasa en colonias obtenidas en placas de agar sangre. Desde el el punto de vista vista fisiológico fisiológico la oxidasa es positiva, positiva, así como la catalasa, y producen la fermentación de la glucosa y otros carbohidratos, dando lugar a la acidificación de los medios diferenciales y a la producción de gas, y reducen nitratos a nitritos.

BROMATOLOGÍA Y NUTRICIÓN – IV CICLO –MICROBIOLOGÍA GENERAL

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Las especies aeromonas se diferencian de los vibriones por la resistencia que muestran al compuesto 0/129 y por que no proliferan, tiene una incapacidad para crecer en caldo con 6%  , (Las Aeromonas son resistentes al factor vibriostático O/129).

MORFOLOGÍA bacilos cortos Gram negativos móviles flagelo polar único no forman capsula no forman esporas

A) Cultivo de A eromonas hydrophila en agar sangre de cordero 5% a las 48 horas de incubación. B) Intensa (hemolisis alrededor de las colonias. C) Crecimiento en agar MacConkey.

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FACTORES DE CRECIMIENTO PARÁMETROS

VALORES

Temperatura

T° optima: 35° − 37° límites de temperatura: 5° − 42°

PH

4,5−9

Concentraciones de sal

0−4%

o

o o

o

Aeromonas hydrophila también puede sobrevivir en medios aerobios y anaerobios. Es capaz de digerir materiales, como por ejemplo la gelatina o la hemoglobina. Vive principalmente en zonas con un clima cálido. Esta bacteria también puede vivir en aguas dulces, saladas, cloradas y no clorinadas, (Se encuentra viviendo libres en el agua, como su nombre de especie Hydrophila lo indica). Es muy resistente a medicamentos, cloro, y bajas temperaturas. Puede prosperar en aguas tan frías como 4 °C.

HÁBITAD o

o

Habitan en aguas, todas con baja concentración salina, Las Aeromonas se ha encontrado en: pescado, mariscos, carnes rojas, aves, leche cruda, huevo liquido y alimentos envasados al vacio. Las aeromonas moviles son, principalmente microorganismos acuaticos que se encuentran en aguas frescas, y oceanos, asi como heces de algunas personas sanas y en la de animales domesticos.

MODO DE TRASMISIÓN o

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Se transmiten por el agua de bebida, tambien se pueden propagar a travez de alimentos que hayan estado en contacto con agua contaminada por estos microorganismos al ser ingeridos.



MEDIOS SELECTIVOS PARA EL AISLAMIENTO DE AEROMONAS. Crece bien en medios comunes para enterobacterias y también en agar selectivos. 

AGAR SANGRE CON 20 G/ML DE AMPICILINA (ABA) es útil para el aislamiento de todas las especies de Aeromonas excepto A. Trota que es sensible a la ampicilina. Resultado: Las especies de relevancia clínica son beta- hemolíticas; a las colonias beta-hemolíticas en agar sangre se les realiza oxidasa e indol, cualquier colonia que da ambas pruebas positivas debe someterse a identificación definitiva.



CEFSULODINA- IRGASAN-NOVOBIOCINA (CIN). Resultado: Las colonias de Aeromonas tienen centro rosa y son indistinguibles de Yersinia enterocolítica. Incubando a 25 ºC se aumenta la recuperación de Yersinia pero también crece Aeromonas. Para tener un óptimo aislamiento hay que combinar agar sangre y CIN. BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) BD Aeromonas Yersinia Agar Uso: BD Yersinia Selective Agar (=CIN Agar, Cefsulodin-Irgasan-Novobiocin Agar) (agar selectivo para Yersinia BD: agar CIN [Cefsulodina-Irgasan-Novobiocina]) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento de Yersinia enterocolitica y BD Aeromonas Yersinia Agar (agar para Aeromonas y Yersinia BD) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento de Yersinia enterocolitica y Aeromonas Fundamento BD Aeromonas Yersinia Agar es una modificación de BD Yersinia Selective Agar que favorece el crecimiento de no sólo la especie Yersinia enterocolitica sino también de Aeromonas, dado que presenta un contenido reducido de cefsulodina. En ambos medios, las peptonas proporcionan nutrientes. La fermentación de manitol en presencia de rojo neutro crea el aspecto característico de “ojo de toro”

de las colonias de Y. enterocolitica: incoloras con centros de color rojo en ambos medios. La inhibición selectiva de organismos gram negativos y gram positivos se obtiene mediante cristal violeta, desoxicolato sódico y los agentes antimicrobianos: cefsulodina, Irgasan (Triclosan) y novobiocina. En BD Aeromonas Yersinia Agar, las especies A eromonas producen colonias pálidas con centro rojo carmesí , similar a Yersinia. Ambos organismos pueden diferenciarse mutuamente por medio de la reacción de oxidasa (positiva sólo para Aeromonas)

Composición: BD Yersinia Selective Agar

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Digerido pancreático de gelatina Digerido péptico de tejido animal Extracto de carne bovina Extracto de levadura Manitol Piruvato sódico Cloruro sódico Desoxicolato de sodio

10,0 g

Sulfato magnésico

0,001 g

5,0

Cristal violeta

0,001

5,0 2,0 20,0 2,0 1,0 0,5

Rojo neutro Cefsulodina Irgasan Novobiocina Agar

0,03 0,015 0,004 0,0025 12,0

pH 7,4 ± 0,2

En lugar de 0,015 g de cefsulodina en BD Yersinia Selective Agar, BD Aeromonas Yersinia Agar contiene sólo 0,004 g de cefsulodina por litro de medio.

Resultados: Incubar las placas en atmósfera aerobia a 25 ± 2 °C o 35 ± 2 °C y efectuar la lectura después de 20 – 24 y 42 – 48 h.

Cepas Aeromonas hydrophila Yersinia enterocolitica

Escherichia coli Enterococcus faecalis Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Sin inocular



5

BD Yersinia Selective Agar (CIN Agar) Inhibición de parcial a completa

BD Aeromonas Yersinia Agar

Crecimiento de bueno a excelente; colonia rosa pálido con un centro de color rojo oscuro (aspecto característico

Crecimiento de medio a bueno; colonia de incolora a rosa pálido con un centro de rosa a rojo Crecimiento de bueno a excelente; colonia rosa pálido con un centro de color rojo oscuro (aspecto característico de

de “ojo de toro”)

“ojo de toro”)

Inhibición completa. Inhibición completa. Inhibición de parcial a Inhibición de parcial a completa completa Inhibición de parcial a Inhibición de parcial a completa completa Inhibición de parcial a Inhibición de parcial a completa, completa crecimiento medio aceptable Inhibición de parcial a Inhibición de parcial a completa completa Rosa claro, ligeramente opalescente

EL MEDIO NOVOBIOCINA, SALES BILIARES, XILOSA Y DOS GALACTOPIRANÓSIDOS (XGM) ha sido evaluado para el aislamiento de Salmonella, Shigella, Aeromonas y Yersinia. Las especies de Aeromonas se aislan con una frecuencia del 36% del agar XGM y 43% del agar CIN. El XGM tiene menos falsos positivos (11%) que el CIN (60%).


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EL MEDIO TIOSULFATO- CITRATO- SALES BILIARES- SACAROSA (TCBS) es usualmente inhibitorio para Aeromonas. El enriquecimiento en agua peptonada alcalina aumenta la recuperación de Aeromonas en portadores convalecientes y en aquellos con infecciones subclínicas, en pacientes con diarrea aguda el enriquecimiento es innecesario.



AGAR SELECTIVO PARA AEROMONAS (SALES BILIARES IRGASAN VERDE BRILLANTE (BSIBG)) Agar selectivo para Aeromonas se recomienda para el aislamiento selectivo de especies de Aeromonas de los alimentos. Basando su selectividad en el verde brillante e irgasan, no inhibe las cepas de Aeromonas sensibles a la ampicilina que es empleada en otros medios.

Fundamento: Proteína peptona y el extracto de carne de vacuno proporciona compuestos nitrogenados esenciales. La D-xilosa es fuente de carbono y energía. Los organismos Gram positivos son inhibidos por sales biliares y organismos verdes brillantes y Gram negativos que poseen una nitratasa de tipo A son inhibidos por irgasan. Los organismos que sobreviven se diferencian por su capacidad para fermentar la xilosa. Las especies de Aeromonas no fermentan xilosa y Oxidasa se puede realizar en colonias que no producen ácido. La formulación actual de Agar selectivo para Aeromonas (BSIBG Agar) se recomienda para el aislamiento de Aeromonas. Composición: Extracto de carne de vaca Proteína peptona D-Xilosa Tiosulfato de sodio Verde brillante Rojo neutro Sal biliar Irgasan Agar El pH final (a 25 ° C) gramos por litro

5.000 5.000 10.000 5,440 0,005 0,025 8.500 0,005 11.500 7,0 \ pm 0,2 45.5

Preparación: Suspender 45,5 gramos en 1000 ml de agua destilada. Calentar a ebullición para disolver completamente el medio. NO AUTOCLAVE. Mezclar bien y verter en placas de Petri estériles. Apariencia: Polvo fluido homogéneo de color amarillo claro ha rozado . Color y claridad del medio preparado: Color naranja rojizo de color claro a ligeramente opalescente formas de gel en placas de Petri. PH: 6,80-7,20 Inoculación: sobre Agar selectivo para Aeromonas , extendiéndose la superficie para colonias individuales.

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Incubación: Incubar las placas aerobicamente a 37 ° C durante 18-24 horas. Examinar para las colonias típicas y confirmar como Aeromonas. Interpretación de los resultados: Organismo

crecimiento

tamaño de la colonia

exuberante

0,5-3,0 mm

exuberante

0,5-1,0 mm

Escherichia coli

Inhibido (sin crecimiento)

----

----

Proteus mirabilis

Inhibido (sin crecimiento)

----

----

Aeromonas hydrophila

Pseudomonas

spp.

características de la colonias Translúcido Colonias Convexo, entero, brillante verde, rosa translucido. Convexo, entero, brillante verde, rosa translucido.

Confirmación Las colonias típicas (colonias translúcidas, de color verde pálido de 0,5-3,0 mm de diámetro) deben ser confirmadas como presuntivo Aeromonas spp. Mediante la realización de una prueba de oxidasa del medio.

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Aeromonas, dará una reacción positiva de la oxidasa y demostrará la

reacción oxidativa y metabolismo fermentativo. 

Pseudomonas spp. También serán positivos a la oxidasa, pero no

poseen propiedades fermentativas metabolismo. Un método alternativo es inocular tubos de hierro de azúcar triple. 

Aeromonas producirá típicamente un extremo ácido (amarillo) y una

inclinación alcalina o inalterada (rojo).





Pseudomonas spp. Se mantendrá sin cambios.

GSP- GLUTAMATO AGAR. PSEUDOMONAS / AEROMONAS KIELWEIN (BASE) Aislamiento y enumeración de Psicotrofos, Formadores de limos, Pseudomonas y Aeromonas.

Aeromonas hydrophilas, amarilla, vira el medio a naranja

Composición: (Fórmula por litro) Glutamato sódico Almidón soluble Dihidrógenofosfato K Sulfato de Magnesio Rojo Fenol Agar-Agar pH final:

10,00 g 20,00 g 2,00 g 0,50 g 0,36 g 12,00 g 7,2 ± 0,2

Preparación: Disolver 45 gramos en un litro de agua destilada. Calentar agitando hasta ebullición, para su completa disolución. Autoclavar a 121 ºC durante 15 minutos. Enfriar a 50 ºC y añadir asépticamente 100.000 U.I. de Penicilina G sódica y, eventualmente, 0’01 g de pimaricina esterilizadas por filtración.

Apariencia: deshidratado, polvo grueso, Rojo Color y claridad del medio preparado: Estéril, Rojo intenso

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Resultados: Control de crecimiento 48-72 h a 37°c aproximadamente:

Organismo Bacillus subtillis: Staphylococcus aureus E.coli Pseudomonas aeruginosa Aeromonas hydrophila

crecimiento de la colonia Inhibido. Inhibido. Inhibido. Bueno, Medio tendiendo al violáceo. Bueno, medio amarillento

NOTA: Las Pseudomonas y Aeromonas son flora habitual de las aguas naturales y sirven de indicador de contaminación en todo tipo de aguas de la industria. Interpretación de resultados. El Agar Almidón GSP de Kielwein es selectivo y diferencial para ambos géneros. Tras incubar a 30-37 ºC aproximadamente, durante 24-72 horas. 



Las colonias de 2-3 mm, de color violáceo o azulado y rodeadas de un viraje violáceo del medio, son de Pseudomonas. Las colonias de igual tamaño, pero amarillas, rodeadas de un viraje amarillo del medio, son de Aeromonas.

Las colonias más pequeñas suelen ser Enterobacterias. Confirmar con tiras de oxidasa (Pseudomonas y Aeromonas dan prueba positiva)



MEDIO AEROMONAS (RYAN) Para el aislamiento selectivo de Aeromonas hydrophila de muestras clínicas y ambientales cuando Ampicilina se utiliza como un suplemento selectivo.

Preparación: Suspender 28,1 gramos del medio en 500 ml de agua destilada. Mezclar bien y disolver por calentamiento con agitación frecuente. Deje hervir durante un minuto hasta que se disuelva completamente. Evite el sobrecalentamiento. NO AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50ºC y añadir asépticamente un vial de Suplemento de Ampicilina previamente reconstituido en 5 ml de agua destilada estéril. Homogeneizar suavemente y dispensar en placas de Petri.

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Proteosa-peptona extracto de levadura clorhidrato de L-lisina inositol lactosa sorbosa xilosa sales biliares tiosulfato sódico cloruro sódico citrato amónico ferrico azul de bromitol ampicilina Ph 8±0,1

5 g/l 3 g/l 3,5 g/l 2,5 g/l 1.5 g/l 3 g/l 3.75 g/l 3 g/l 10.67 g/l 5 g/l 0.8 g/l 0.04 g/l 0.005 g/l

Resultados: las colonias de Aeromonas son de color verde oliva con el centro más oscuro y de 0.5 y de 1.5 mm de diámetro. 

AGAR GLUTAMATO PENICILINA (AGAP) L(+) Glutamato sódico almidón hidrosoluble dihidrogeno fosfato potásico sulfato de magnesio rojo de fenol agar pimaricina penicilina Ph 7,2 ± 0,2

10 g/l 20 g/l 20 g/l 0.5 g/l 0.36 g/l 12 g/l 0.01 g/l 100.000 UI/L

Resultado: Las Aeromonas aparecen colonias amarillas de 2-3 mm de diámetro rodeadas de una zona amarillenta. 

AGAR ALMIDON AMPICILINA (AAA) Almidón soluble agar con rojo de fenol proteasa peptona extracto de carne cloruro sódico rojo fenol agar ampicilina Ph 7,0 ± 0,1

10 g/l 31 g/l 10 g/l 1 g/l 5 g/l 0.25 g/l 15 g/l 0.01 g/l

Resultado: Aeromonas dan lugar a colonias amarillas, de 3-5 mm de diámetro, que se caracteriza por que después de añadir 5 ml de lugol (solución yodo yodur a de lugol: yodo 1 g; yoduro potásico 2 g: agua estilada 200 ml) en la superficie de la placa se tornan de color miel con un halo amarillo alrededor.

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PRUEBAS BIOQUIMICAS

IDENTIFICACIÓN Es necesario diferenciarla fundamentalmente de Vibrio y Plesiomonas, esta última se diferencia facilmente de Aeromonas por reacción positiva para lisina, ornitina, arginina y por la fermentación de m- inositol. Vibrio es más dificil de diferenciar de Aeromonas. La resistencia al agente vibriostático O/129 y la imposibilidad de crecer en concentraciones de sales mayores o iguales al 6% usualmente indican el género Aeromonas. Vibrio cholerae O139, toxigénico, que no requiere sal y resistente al agente vibriostático O/129 es la excepción. Sin embargo el patrón de decarboxilasa lisina y ornitina positivas y arginina negativa, la ausencia de producción de gas de la glucosa y la fermentación de la salicina separan este microorganismo de las Aeromonas.

PRUEBAS BIOQUIMICAS DIFERENCIALES ENRE GENEROS RELACCIONADOS CON LAS AEROMODALES. PRUEBAS GÉNEROS BIOQUIMICAS vibrio aeromonas plesiomonas pseudomonas enterobacterias Oxidasa + + + + − Fermentación + + + − + de la glucosa sensible a S/S R/R S/S N/A N/A 0/129 crecimiento en + − − − − TCBS Crecimiento N/A − + + + en NaCl: 0% 3% N/A − + +/− − 6% + − + N/A − ácido inositol N/A − − +  0/129= 2,4 diámetro o + = la mayoría de las cepas son positivas. o −= la mayoría de las cepas son negativas. o R= resistente. o S= Sensible. o NA= No aplicable o

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IDENTIFICACIÓN DE LA ESPECIE A E R OMO NA S HY DR OP HI LA

CARACTERISTICAS Oxidasa Catalasa Motilidad Indol   en TSIA Urea Gas de glucosa Arginina dihidrolasa Descarboxilación de Lisina Descarboxilación de ornitinina Descarboxilacion de arginina Voges-proskauer Acido de glucosa Acido de L-arabinosa Acido de lactosa Acido de sacarosa Ácido myo-inositol Acido D- manitol Acido salicina Acido de celobiosa Hidrolisis de esculina Beta hemolisis en sangre de Carnero Susceptibilidad a la cefalotina Susceptibilidad a la ampicilina Sensibilidad a 0/129 Hidrolisis de gelatina a 22°C

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A eromona Hydrophila + + + + − − + + + − + + + + − + − + +  + + − − − +



BIBLIOGRAFÍA

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Microbiologia de Jawetz, Melnich y Adelber. (18° edición )-Mexico Editorial- El manual moderno (capitulo 18)



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