Aeromonas hydrophila (Falta citas de brotes). Nombre del microorganismo. Aeromonas hydrophila. Bacteria anaerobia facultativa Gram-negativa, móvil. Crece fácilmente en agares de sangre y MacConkey. Es oxidasa positiva, indol positivo y ureasa negativa. Cerca del 90% de las cepas presenta β hemólisis (Silva, 2011). Pertenece al género Aeromonas. Se localiza en ambientes de agua fresca y agua salobre (agua más salada que la de río pero menos salada que la de mar). Algunas cepas de A. hydrophila son capaces de causar gastroenteritis y otras infecciones en humanos (inmunocomprometidos). Pueden causar enfermedades en peces, anfibios y animales domésticos. Se piensa que las cepas causantes de enfermedad son sólo una fracción de la diversidad de cepas presentes en el ambiente. Sin embargo, a la fecha, resulta difícil identificar a las cepas de Aeromonas causantes de enfermedad, esto debido a la escasez de información sobre los genes de virulencia y mecanismos relacionados a patógenos (Janda & Abbott, 2010). El genoma completo de A. hydrophila fue secuenciado y reportado en 2006. Varios laboratorios se encuentran explorando determinada ubicación genética por posibles factores de virulencia (FDA, 2012).
Enfermedad y diagnóstico en humanos (FDA, 2012).
Mortalidad. La tasa de mortalidad debida a gastritis es desconocida. La tasa de mortalidad por septicemia causada por Aeromonas puede ser del 33% o mayor. (Las infecciones no transmitidas por alimentos – infecciones de piel o tejido suave causadas por Aeromonas, particularmente en personas inmunocomprometidas con condiciones tales como enfermas del hígado o con cáncer- pueden resultar en tasas del 60% al 75%). Dosis infectiva. La dosis infectiva de este microorganismo es desconocida. Aunque éste microorganismo posee varios factores de virulencia que podrían causar enfermedad en el humano, estudios de alimentación realizados con adultos sanos y altas concentraciones del microorganismo (104 a 1010 células) no han provocado enfermedad. Sin embargo, se ha informado de un brote asociado con la ingesta de ensalada de camarones contaminados con A. hydrophila, con aproximadamente 107 UFC/g de alimento. Incubación. El periodo de incubación asociado con gastroenteritis es desconocido, aunque el comienzo de la diarrea parece ser mayor a 24 horas (Fig. 1).
Fig. 1 a) Cultivo de Aeromonas hydrophila en agar sangre de cordero 5% a las 48 horas de incubación, b) Intensa (3 hemolisis alrededor de las colonias, c) Crecimiento en agar McConkey.
Enfermedad/complicaciones. La relación entre A.hydrophila y la gastroenteritis en humano no ha sido aun firmemente establecida. La relación entre el patógeno y la enfermedad en humanos básicamente está sustentada en datos epidemiológicos. En personas con sistema inmunológico débil o dañado, la diarrea puede ser crónica y severa. En raras ocasiones el síndrome de disentería es severo. En personas con sistemas inmunes dañados, A. hydrophila puede extenderse a lo largo del cuerpo y causar infecciones sistémicas. Ejemplos de estos riesgos incluyen personas con cirrosis o varios tipos de cáncer y aquellos tratados con drogas inmunosupresoras o quienes se encuentran en tratamiento de quimioterapia. Además de las infecciones transmitidas por los alimentos, Aeromonas spp. están bien documentadas como agentes causantes de infecciones de heridas, por lo general relacionadas con el agua o actividades recreativas acuáticas. Síntomas. Incluyen desde diarrea leve hasta disentería, incluyendo heces con sangre y moco, a síntomas de septicemia. Duración. La gastroenteritis asociada con la forma más leve de la enfermedad suele ser auto limitada, con diarrea acuosa presente de unos pocos días a unas semanas. Sin embargo, las personas con síndrome de disentería grave pueden tener síntomas por varias semanas. Vía de entrada. Las infecciones en humanos son principalmente de adquisición oral o cutánea, por consumo de alimentos y agua contaminados o por contacto con aguas contaminadas o animales colonizados (Silva, 2011). Ingestión de suficiente número de microorganismos en los alimentos (de origen animal, mariscos o procesados) o agua. (Como se ha indicado, la infección no resultante de la ingestión, sino de heridas abiertas, puede conducir a infecciones de los tejidos y septicemia) (Fig.2).
Vía. Se cree que la enfermedad es causada por toxinas y otros factores de virulencia producidos por Aeromonas.
Fig. 2. Fuentes ambientales de las especies de Aeromonas que pueden dar lugar a una infección o colonización en seres humanos (Janda & Abbott, 2010).
Frecuencia de la enfermedad. La frecuencia relativa de enfermedad por A. hydrophila en los Estados Unidos es desconocida ya que el estudio de su incidencia es reciente. La mayoría de los casos se presentan como esporádicos. La identificación correcta de los agentes etiológicos asociados con la infección gastrointestinal es importante, ya que tan sólo en México se reportaron 460, 543 casos nuevos de enfermedad diarreica aguda hasta la semana siete del 20031. El estudio realizado dentro de un ciclo de evaluación de la calidad del Programa de Evaluación de la Calidad entre Laboratorios (PACAL, ENCB) reveló que en México hay dificultades para identificar Aeromonas. En esta evaluación participaron 228 laboratorios (IMSS, ISSSTE, SSA, PEMEX, estatales y particulares), a cada laboratorio participante se le envió una muestra de A. hyrophila para su identificación y sólo 98 (43%) de los laboratorios fueron evaluados positivamente con al menos la identificación del género; mientras que el resto de los laboratorios generaron resultados erróneos, ya que reportaron 45 géneros bacterianos diferentes entre los que destacaron: Vibrio, 1
Secretaría de Salud México. Sistema Nacional de Vigilancia Epidemiológica. 2003; 19: 13-15.
Pseudomonas, Pasteurella y hubo varios informes de la familia Enterobacteriaceae. Este fracaso analítico refleja la gran dificultad que se tiene, a nivel de laboratorio clínico para la identificación del género Aeromonas (Castro y cols., 2003).
Población blanco. Se cree que la población en general es susceptible de contraer gastroenteritis por Aeromonas, aunque se observa con más frecuencia en niños pequeños. Personas con sistemas inmunes débiles o principios de cáncer son más susceptibles a infecciones más graves o sistémicas (FDA, 2012).
Brotes. En el lapso de enero a mayo de 2011 se identificaron 3 casos de bacteriemia por Aeromonas spp. en mujeres embarazadas de Myanmar que fueron atendidas en clínicas de migrantes refugiados en la frontera de Tailandia y Myanmar. En los tres casos, las mujeres reportaron fiebre, dolor de cabeza, dolor abdominal y sangrado vaginal (CDC, 2012).. En el caso A, una mujer, de 35 años de edad, presentaba fiebre, dolor de cabeza, dolor abdominal y sangrado vaginal; además de taquicardia y taquipnea. Una ecografía confirmó que el feto no era viable y los productos de la concepción fueron evacuados quirúrgicamente. Se le administró amoxicilina y ciprofloxacina. La paciente se recuperó y fue dada de alta seis días después. El aislamiento a partir de prueba de sangre resultó positivo para A. hydrophila. En el caso B, una mujer de 25 años de edad con 12 semanas de embarazo se presentó en el campo de refugiados de Maela. Tenía un historial de 24 horas de fiebre, escalofríos, vómito, diarrea y sangrado vaginal. Una ecografía reveló sólo productos de la concepción. Recibió por vía intravenosa ampicilina, gentamicina y metronidazol. Después de la remoción quirúrgica de dichos productos la condición de la paciente continuó en deterioro y murió al día siguiente. El aislamiento a partir de prueba de sangre resultó positivo para A. veronii. En el caso C, una mujer de 50 años en la doceava semana de embarazo ingresó a la clínica Wang Pha con historial de sangrado vaginal, presentaba choque febril. Los productos de la concepción se removieron y recibió por vía intravenosa ampicilina, gentamicina, metronidazol y ceftriaxona. La condición de la paciente mejoró en los cinco días posteriores. El aislamiento a partir de prueba de sangre resultó positivo para A. veronii y Streptococcus pyogenes.
Alimentos asociados. Frecuentemente se encuentra A. hydrophila se ha encontrado en pescados y mariscos. El germen muestra una amplia prevalencia en casi todos los alimentos crudos, sean de origen animal o vegetal. Aunque se han encontrado muestras de Aeromonas en agua bebible, la relación de estas con casos de gastroenteritis es aún desconocida. Sin embargo, la exposición crónica a aguas contaminadas con Aeromonas por parte de personas inmunocomprometidas, podría resultar potencialmente en enfermedades invasivas, tales como septicemia2.
Análisis de alimentos. A. hydrophila se puede recuperar de la mayoría de los alimentos por inoculación directa sobre un medio sólido suplementado con antibióticos tales como ampicilina (para así reducir el crecimiento de organismos competitivos) y con almidón como única fuente de carbohidratos. Se han desarrollado ensayos basados en PCR para detectar A. hydrophila patógenas y diferenciar cepas no patógenas de aislados patógenos (FDA, 2012). A. hydrophila se puede cultivar a partir de las heces o de muestras de sangre mediante la siembra de organismos en un medio de agar con sangre de oveja y ampicilina. La identificación de las especies se confirma por una serie de exámenes bioquímicos. La capacidad del microorganismo para producir las enterotoxinas que se cree causan los síntomas de gastroenteritis se puede confirmar mediante ensayos de cultivo de tejidos (USDA, 1998). Aislamiento e identificación (USDA, 1998) El siguiente método describe los procedimientos para el aislamiento y posterior identificación de Aeromonas hydrophila. 1. Aislamiento/ Identificación. A. Equipo Incubadora, estática 28 +/- 1°C. Licuadora tipo Osterizer con cuchillas estériles y adaptadores para uso con frascos, o StomacherTM con bolsas estériles StomacherTM. Varillas de vidrio curvas estériles. B. Reactivos Diluyente del fostato de Butterfield (BPD). Aceite mineral estéril. N, N-dimetil-p-fenilendiamina monohidrocloruro (1% solución acuosa).
2
Leclerc, H., L. Schwartzbrod, and E. Dei-Cas. 2002. Microbial agents associated with waterborne diseases. Crit. Rev. Microbiol. 28:371–409.
C. Medios Caldo de Soya Tricapseína adicionado con 10µ/ml de ampicilina (TSBA). Agar Almidón Ampicilina (SA). Agar Triple Azúcar Hierro (TSI). Agar Nutriente. Caldo de fermentación de manitol con indicador de Andrade. Caldo Arginina Descarboxilasa (Moeller). Caldo Ornitina Descarboxilasa (Moeller). Caldo de base Descarboxilasa (Moeller). Caldo de fermentación de Glucosa con indicador de Andrade. Agar bilis esculina. D. Procedimiento (aislamiento). Se pueden realizar diluciones seriadas de muestras de carne y dispersarlas directamente en superficie sobre agar SA. Sin embargo la mejor recuperación de Aeromonas se logra utilizando procedimientos de enriquecimiento, en particular cuando las aeromonas presentan daño por congelación o son bajas en número. 1. Mezclar 25g de carne en 225ml de TSBA en una licuadora o StomacherTM durante 2 minutos. Incubar a 28°C durante 18 a 24 horas. 2. Después de la incubación preparar soluciones seriadas de los cultivos de enriquecimiento en BPD. Transferir 0.1ml de las diluciones 10-4 a 10-6 sobre la superficie de las placas de SA. Separar uniformemente el inóculo con barras de vidrio dobladas estériles. Las placas deben estar libres de humedad en la superficie. Incubar las placas a 28°C durante 18 a 24 horas. 3. Elegir 3 colonias típicas por muestra de las placas con agar SA y colocar en placas con agar TSI. Incubar toda una noche a 28°C. Las colonias de Aeromonas generalmente tienen de 3 a 5mm de diámetro, con un color amarillo a color miel sobre agar SA. E. Procedimiento (identificación). 1. Leer las reacciones de TSI. Las reacciones de Aeromonas en TSI son: extremo acido, gradiente ácido o alcalino, H2S negativo, producción de gas positiva o negativa. 2. Realizar la prueba de oxidasa. Añadir unas gotas de la solución de N,N-dimetil-pfenilendiamina monohidrocloruro (preparada fresca todos los días) al agar nutriente con el cultivo en crecimiento. Las colonias oxidasa positivas desarrollan un color rosado que adquiere sucesivamente un rojo granate, oscuro y negro en 10 a 30 minutos. Todas las Aeromonas son fermentadoras y oxidasa positivas. 3. Transferir todos los fermentadores oxidasa positivas del agar TSI al siguiente medio para la confirmación bioquímica: caldo de fermentación de manitol, caldo arginina descarboxilasa, caldo ornitina descarboxilasa, caldo de fermentación de
glucosa. Inocular en agar bilis esculina. Después de la inoculación, cubrir el medio descarboxilasa con aceite mineral estéril e incubar a 28°C por 48 horas. Incubar el remanente de los medios de confirmación a 28°C por 24 horas. 4. Registrar las características bioquímicas de cada aislado. Todas las Aermonas producen ácido a partir del manitol y son arginina positivas, ornitina negativas. A. hydrophila puede diferir de acuerdo a ciertas características bioquímicas (Tabla 1). 5. Los aislados sospechosos de ser Aeromonas deben ser analizados con la prueba de producción de hemolisina. Tabla 1. Características bioquímicas para identificación de Aeromonas
Test (Sustrato) Gas a partir de glucosa Hidrólisis de esculina
A. hydrophila
A. sobria
A. caviae
+
+
-
+
-
+
NOTA. La hidrólisis de esculina imparte un color café oscuro al medio.
Tabla 2. Identificación de las especies del género Aeromonas consideradas de importancia clínica.
Medidas preventivas. Los fundamentos de la prevención de las enteritis causadas por A. hydrophila se encuentran en el reconocimiento de las vías de contaminación (incluida la independiente de la materia fecal), su
potencial psicrótrofo, su termosensibilidad en los alimentos y la hipersusceptibilidad de algunos grupos de población. Ello implica una desinfección adecuada y una cocción completa de estos productos. El control de la contaminación primaria es poco productivo debido a la amplia ubicuidad del germen. Sin embargo, en los alimentos que ya no recibirán tratamiento térmico previo al consumo, es necesario evitar la recontaminación. Tales acciones tienen mayor significado en aquellos que serán sometidos a refrigeración. La medida de un recalentamiento completo de los sobrantes antes de su consumo debe también ser satisfecha con rigor. Este señalamiento es importante ante la eventual recontaminación y desarrollo de A. hydrophila a baja temperatura. La destrucción del microorganismo proporciona amplio margen de seguridad, ya que no se trata de una bacteria que produzca alguna toxina temoestable (Fernández, 2000). Teniendo presente que incluso las cepas de algunas aeronónadas (incluidas las enterotoxigénicas), son psicrótrofas, es evidente que la refrigeración no es una medida suficiente por sí misma para prevenir su desarrollo en los alimentos. El germen no constituye un problema en alimentos que contienen más de 3-3.5% de NaCl en la fase acuosa, o pH inferior a 6.0 conservados en refrigeración (Fernández, 2000). La rigidez de las medidas anotadas debe observarse en particular ante individuos especialmente sensibles (Fernández, 2000):
Reservorio natural: ambiente acuático. No habitante normal del conducto intestinal humano. No sobrevive la cocción ordinaria. Sobrevive en alimentos congelados. Halotolerante. Mayor incidencia de casos humanos en verano. Relevancia relativa de acciones preventivas: a) Evitar la contaminación de origen: + b) Evitar la contaminación cruzada: +++ c) Inactivación en el alimento: ++++ d) No consumo de alimentos crudos (individuos hipersensibles): +++
Aeromonas spp. es susceptible a nitrofuranos, azitromicina, cefalosporinas de 3ª y 4ª generación, cabapenémicos, quinolonas, tetraciclinas, y usualmente resistente a ampicilina (Silva, 2011).
Bibliografía.
Fernández , E. 2000. Microbiología e Inocuidad de los Alimentos. Ed. Universidad Autónoma de Querétaro. p. 133-141. Janda, J.; Abbott, S. 2010. The Genus Aeromonas: Taxonomy, Pathogenicity, and Infection. Clinical Microbiology Reviews. 23: 45-47. FDA. 2012. Bad Bug Book. Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins. 2nd Edition. p.53-55.
Castro, G. y cols. 2003. La identificación genética de Aeromonas, una realidad y una necesidad para la Microbiología Diagnósitca. J. Bioquimia. México D.F. 28: 13-16. Silva, O. F. 2011. Retrato Microbiológico Aeromonas spp. Rev Chil Infect 2011; 28 (2): 157-158. United States Department of Agriculture. 1998. Microbiology Laboratory Guidebook. Chapter 7. Isolation and identification of Aeromonas species from meat and poultry products. Suitable in: http://www.fsis.usda.gov/Science/Microbiological_Lab_Guidebook/index.asp Centers of Disease Control and Prevention. 2012. Emerging Infectious Diseases. Aeromonas spp. Bacteremia in Pregnant Women, Thailand-Myanmar. Suitable in: http://wwwnc.cdc.gov/eid/article/18/9/pdfs/11-1592.pdf
