Actividad Proteolitica de La Papaina 3 Informe

ACTIVIDAD PROTEOLITICA DE LA PAPAINA  Y EL EFECTO DE ALGUNOS INHIBIDORES

Neyder Jhuranny Doria Vidal Esneider Alexander Perilla Vergara

74165 73839

OBJETIVOS

Deterinar el Deterinar el grado de a!ti"idad #roteol$ti!a de la #a#a$na #a#a$na #or edio de an%lisis !ualitati"os en el &todo de !oagula!i'n( Esta)le!er el e*or &todo de !on!entra!i'n de la #a#a$na #ara un ayor desarrollo de a!ti"idad #roteol$ti!a( RESULTADOS RESULTADOS Y ANALISIS DE RESULTA R ESULTADOS DOS

PAPA+NA 1( NA-. NA-./A /A0E 0EA A DE0A DE0A A2-+V A2-+V+D +DAD AD P/-E0-+2A DE 0A PAPANA(

,igura 1(

  ,ora!i'n !o%gulos ora!i'n de ase( Esta iagen se trata de un inhi)idor no !o# !o#et etititi" i"o o #ues #ues se #re! #re!i# i#itita a so)r so)re e la enia uni&ndos dose a &l en un lugar  dierente al !entro a!ti"o y odii!ando su estru!tura lo ue dii!ulta ue el enia se #ueda unir !on el sustrato(

( NA-. NA-./A /A0E 0EA A DE0A DE0A A2-+V A2-+V+D +DAD AD P/-E0-+2A DE 0A PAPANA

,igura (

0a a!ti"idad de #a#a$na utiliada !on ED-A en !o)ina!i'n tiene un ee!to #rote!tor  so)re la a!ti"idad a!ti"idad #roteol$t #roteol$ti!a i!a el uso uso del EDED-A enos del 5:; #eso a #eso disinuye la a!ti"idad inal de la #a#a$na en este !aso !aso hu)o una realia!i'n de #o!o !o%gulos(

3( NA-./A0EA DE0A  A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE 0A PAPANA( ,ora!i'n de !o%gulos la ora!i'n del #re!i#itado #or !ausa eni%ti!a su!eden #or hidrolisis de los enla!es #e#t$di!os de la #a#a$na #or a!!i'n de las enias #roteol$ti!as( ,igura 3(

4( NA-./A0EA DE0A  A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE 0A PAPANA( 0a a!!i'n de la enia #a#a$na tiene #or  o)*eti"o la deoli!i'n de #rote$nas es#e!ii!as #resentes en el interedio del ensayo
 A>0ANDAD/ DE 2A/NE 1( NA-./A0EA DE0A A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE0  A>0ANDAD/ DE 2A/NE( -iende a odii!ar el grado de ionia!i'n de todos o algunos gru#os ionia)les de la ol&!ula de la a!ti"idad de la enia ? 0os #@ extreos !a)ian el grado de ionia!i'n de nuerosos gru#os de la enia alterando su estru!tura tridiensional( i estos est%n en el sitio

,+B./A 5(

a!ti"o la a!ti"idad !a)ia nota)leente( 2oo lo "eos en la siguiente otogra$a ora!i'n de !o%gulos( ( NA-./A0EA DE0A A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE0  A>0ANDAD/ DE 2A/NEC ,ora!i'n de #o!os !o%gulos la utilia!i'n de ED-A so)re este ensayo disinuye la a!ti"idad inal de)ido al !a)io de P@ esta solu!i'n #osee un ee!to anti!oagulante #or esta ra'n !ondu!e a una a!ti"idad #roteol$ti!a enor(

,igura 6(

3( NA-./A0EA DE0A A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE0  A>0ANDAD/ DE 2A/NE(

Figura 7.

En la ,igura 3 se re#resenta el #eril de a!ti"idad en un!i'n del #@( El #@ '#tio del extra!to es alrededor de 7 si se utilia sustrato y la rea!!i'n o!urre durante : inutos( El #re#arado eni%ti!o ue enos a!ti"o a "alores de #@ ligeraente %!idos no se o)ser"aron dieren!ias signii!ati"as al !ondu!ir la rea!!i'n a #@ se o)ser"a el !o#ortaiento de la esta)ilidad de la enia en un!i'n del #@( El extra!to eni%ti!o es %s esta)le en el rango de #@ de 3 a 9(

4( NA-./A0EA DE0A A2-+V+DAD P/-E0-+2A DE0 A>0ANDAD/ DE 2A/NE(

,igura 8(

0a a!ti"idad eni%ti!a so)re la #rote$na del a)landador de !arne resulta ser ayor  entre los P@ 8?9 al utiliar una !on!entra!i'n )a*a de la #rote$na #ero !uando este auenta la a!ti"idad eni%ti!a se re!u#era al!anando "alores siilares a lo o)tenido( P/.E>A EN+F-+2A DE0  A>0ANDAD/ DE 2A/NE( 0a a!ti"idad #roteol$ti!a de los dierentes ensayos de a)landadores #ara !arnes tiene un !o#ortaiento uy siilar !on res#e!to al tie#o se o)ser"a ue #osee un ee!to anti!oagulante #or esta ra'n !ondu!e a una a!ti"idad #roteol$ti!a enor(

,igura 9( 1( P/.E>A EN+F-+2A PAPANA 0as #roteasas se reieren a un gru#o de enias ue tienen !oo un!i'n !atal$ti!a hidroliar enla!es #e#t$di!os de #rote$nas( En este !aso la #a#a$na es una #rote$na ue #ertene!e al gru#o de las !iste$na ?#roteasas Para ue la enia sea a!ti"a es ne!esario hidroliar su #re!ursor en un sitio deterinado( ,igura 1:(

u a!ti"idad de#ende dela #resen!ia de uno o %s gru#os sulidrilo en una hidrolasas hidrolian los enla!es #e#t$di!os delas #rote$nas y #&#tidos en este !aso la le!he el gru#o sulidril del sitio a!ti"o de una #roteasa !isteini!a #arti!i#a !oo nu!le'ilo en el e!aniso !atal$ti!o( ,igura 11( CONCLUSIONES 

En los an%lisis de a!ti"idad eni%ti!a !on el &todo de !oagula!i'n de le!he se o)tu"o una gaa de tie#o de !oagula!i'n a las dierentes !on!entra!iones de enia de #a#a$na adi!ionada a la le!he o)ser"ando ue a edida ue auenta la !on!entra!i'n de #a#a$na diluida y agregada a la le!he el tie#o de !oagula!i'n disinuye(

COMPLEMENTOS

1( Es#e!ii!idad de enias #roteol$ti!asC <-ri#sina Guiotri#sina /enina y Pe#sina=( TRIPSINA

0a tri#sina es una enia #e#tidasa ue ro#e los enla!es de las #rote$nas ediante hidr'lisis #ara orar #&#tidos de enor taaHo y aino%!idos( 0a tri#sina es #rodu!ida en el #%n!reas y se!retada en el duodeno <#arte del intestino= donde es esen!ial #ara la digesti'n( El #@ '#tio es 8 y la te#eratura '#tia es 37 I2( Es una enia es#e!$i!a ya ue liga al #&#tido en las #osi!iones del !ar)oxilo de residuos Arginina
en el $leo( 0a tri#sina realia la hidr'lisis de los enla!es #e#t$di!os( El e!aniso eni%ti!o es igual al de las otras er$n #roteasasC una tr$ada !atal$ti!a !on"ierte a la serina del sitio a!ti"o en nu!leo$li!a( Esto se logra odii!ando el a)iente ele!trost%ti!o de la serina( 0a rea!!i'n eni%ti!a !ataliada #or las tri#sinas es terodin%i!aente a"ora)le #ero tiene una alta energ$a de a!ti"a!i'n
0a uiotri#sina se sintetia #or )ios$ntesis #rotei!a !oo un #re!ursor denoinado uiotri#sin'geno eni%ti!aente ina!ti"o( e ro#e #or a!!i'n de la tri#sina en dos #artes ue #erane!en unidas #or un enla!e ? y estas ol&!ulas de uiotri#sin'geno #ueden a!ti"ar a otras eliinando dos #eueHos #&#tidos en una trans?#roteolisis( 0a ol&!ula resultante es una uiotri#sina a!ti"a una ol&!ula tri#e#t$di!a inter!one!tada #or enla!es disuluro( 0a uiotri#sina es una enia #roteol$ti!a ue a!tan en los sisteas digesti"os de los a$eros y otros organisos( ,a!ilita la rotura de enla!es #e#t$di!os #or rea!!iones hidrol$ti!as un #ro!eso ue a #esar de ser terodin%i!aente a"ora)le o!urre de ora extraordinariaente lenta en ausen!ia de !ataliadores( El #rin!i#al sustrato de la uiotri#sina in!luye el tri#t'ano tirosina enilalanina y etionina ue son hidroliados en el !ar)oxilo terinal( Al igual ue u!has #roteasas la uiotri#sina ta)i&n hidrolia enla!es &ster in "itro !ara!ter$sti!a ue #erite la utilia!i'n de sustratos an%logos !oo el &ster N?a!etil?0?enilalanina?#?nitroenil #ara an%lisis eni%ti!os( 0a uiotri#sina ro#e los enla!es #e#t$di!os a!tuando so)re el gru#o !ar)onilo no rea!ti"' !on un #otente nu!le'ilo el residuo 195 de serina ue se u)i!a en el !entro a!ti"o de la enia ue se une !o"alenteente al sustrato orando un interediario enia?sustrato(

Estos des!u)riientos se )asan en ensayos de inhi)i!i'n y de !in&ti!as de los sustratos en!ionados a#ro"e!hando ue en interediario enia?sustrato #?nitroenolato tiene !olor aarillo lo ue #erite edir su !on!entra!i'n ediante t&!ni!as de a)sor)an!ia a 4:: n( e ha des!u)ierto ue la rea!!i'n de la uiotri#sina !on su sustrato o!urre en dos eta#as un #riera ase de Ligni!i'nL al #rin!i#io de la rea!!i'n y un estado esta!ionario #osterior siguiendo la !in&ti!a de i!haelis?enten( 0a ora de a!tuar de la uiotri#sina se ex#li!a !oo una hidr'lisis ue o!urre en dos #asosC #riero se a!ila el sustrato #ara orar un interediario enia a!ilada ue #osteriorente #ierde el gru#o a!il #ara de"ol"er la enia a su estado original( 2&lulas ala y glu!ag'n( 0os gr%nulos se!retores ue !ontienen glu!ag'n de las !&lulas ala #oseen un !ontenido ele!troni!odenso ue llena las "es$!ulas se!retoras aun des#u&s de i*ado( -ienen una gran ona !entral es&ri!a uy ele!troni!odensa rodeada #or un re)orde angosto enos ele!troni!odenso( u di%etro es de 5: a 3:: n( El glu!ag'n auenta el ni"el de glu!osa sangu$nea al estiular la ora!i'n de este !ar)ohidrato a #artir del glu!'geno ala!enado en he#ato!itos( -a)i&n e*er!e ee!to y el eta)oliso de #rote$nas y grasas( 0a li)era!i'n del glu!agon es inhi)ida #or la hi#erglu!eia( 2&lulas )eta e insulina( 0os gr%nulos insulin'genos se!retores de las !&lulas )eta #oseen un !entro !ristalino ele!troni!odenso de ora irregular( u !ontenido se se#ara de la e)rana liitante des#u&s de la i*a!i'n( u di%etro es siilar al de los granulo de !&lulas ala( 0a insulina es sintetiada en el ret$!ulo endo#l%si!o rugoso en ora de un #oli#&#tido llaado #re#roinsulina ue se transora en #roinsulina ue #osee la isa a!ti"idad horonal aunue no de la isa agnitud ue la insulina( 0a #roinsulina se odii!a en el a#arato de Bolgi y las "es$!ulas se!retoras ue salen del !o#le*o en!ionado !ontienen la horona insulina( 0a insulina es se!retada en rea!!i'n a la hi#erglu!eia y ta)i&n #or algunas horonas #&#tidas !oo glu!agon !ole!isto!inina? #an!reo!iina y se!retina( us a!!iones #rin!i#ales son estiular la !a#ta!i'n de glu!osa en "arios ti#os de !&lulas y disinuir el ni"el de glu!osa sangu$nea al estiular la !on"ersi'n de glu!osa en glu!'geno en los he#ato!itos y io!itos sie#re ue auente di!ho ni"el( 2&lulas delta soatostatina( 0as !&lulas delta #oseen gr%nu los se!retores %s grandes y enos ele!troni!odensos ue las !&lulas ala y )eta y sus organelos se!retores son enos nota)les( 0a soatostatina es una neurohorona #&#tida y neurotransisora ue inhi)e la li)era!i'n de la horona del !re!iiento de la insulina el glu!agon e in!luso de la #ro#ia soatostatina #an!re%ti!a( 0a regula!i'n utua de la a!ti"idad se!retora entre las !&lulas ala )eta y delta sugiere uerteente alguna dis#osi!i'n es#e!ial ue a!ilita la regula!i'n dire!ta de una !&lula !on otra e!aniso !ono!ido !oo regula!i'n #ara!rina( http://emec!m"#$%&'$ct#(%cm/t)*+,t'#p-#.$,,01#m#t'#p-#.$

RENINA

0a renina es la enia ue liita la s$ntesis de angiotensina ++ y la a!ti"a!i'n del sistea renina?angiotensina </A= #or lo ue desde ha!e %s de 5: aHos se ha intentado desarrollar %ra!os a!ti"os #or "$a oral !a#a!es de inhi)ir dire!taente la renina( /e!ienteente se ha deostrado ue #rorrenina y renina son ol&!ulas a!ti"as ue intera!tan !on un re!e#tor es#e!$i!o
0a #e#sina es segregada #or las !&lulas de la u!osa g%stri!a en ora de i'geno o #roenia denoinado #e#sin'geno( Esta se!re!i'n en ora de un #re!ursor ina!ti"o es )astante !on en el !aso de las enias #roteol$ti!as digesti"as y se asegura as$ ue solo desarrollen su a!ti"idad degradati"a una "e ue son a!ti"adas en la lu de los

'rganos digesti"os( 0a a!ti"a!i'n del #e#sin'geno se lle"a a !a)o #or el @2l #resente en la se!re!i'n g%stri!a o auto!atal$ti!aente #or la #ro#ia #e#sina(

El #@ '#tio de la #e#sina est% entre 15 y 5 lo !ual se !orres#onde !on el #@ %!ido t$#i!o del !ontenido g%stri!o de)ido a la se!re!i'n siult%nea de @2l( 0a #e#sina hidrolia !on #reeren!ia los enla!es #e#t$di!os !uyo gru#o aino #ertene!e a aino%!idos aro%ti!os #ero otros enla!es son ta)i&n ata!ados en ora %s lenta de odo ue en las #rote$nas !ounes de la dieta la #e#sina #ro"o!a la hidr'lisis de 1: a 15 ; de sus enla!es #e#t$di!os( htt#Cgsdl()"s(sld(!u!gi?)inli)raryOed?:::::?::???o?:#reli!in??::?:????:?1:?:???:??? :dire!t?1:???4???????:?1l??11?h?5:???:?#reeren!es???1:?:?1?::?:?:?11?1?:g)M? ::QadQ!l201Qd@A@1dd!478da37::1997)ea(13(3 ( 2ara!ter$sti!as de la uiotri#sina( 0a Guiotri#sina es una enia ue #uede realiar #rote'lisis( 0a uiotri#sina