Acc

EFEK EKSTRAK METANOL AKAR PUTRI MALU (M i m o s a p u d i c a )  TERHADAP KETEBALAN KETEBALAN LAPISA L APISAN N EPITEL MUKOSA ORAL PASCA KURETASE GINGIVA PADA MODEL TIKUS WISTAR DIABETES

TUGAS AKHIR Untuk Memenuhi Persyaratan Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh : Deddy Dwi Septian 105070400111033

FAKULTAS KEDOKTERAN KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2016

EFEK EKSTRAK METANOL AKAR PUTRI MALU (M i m o s a p u d i c a )  TERHADAP KETEBALAN KETEBALAN LAPISA L APISAN N EPITEL MUKOSA ORAL PASCA KURETASE GINGIVA PADA MODEL TIKUS WISTAR DIABETES

TUGAS AKHIR Untuk Memenuhi Persyaratan Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh : Deddy Dwi Septian 105070400111033

FAKULTAS KEDOKTERAN KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2016

i

EFEK EKSTRAK METANOL AKAR PUTRI MALU (M i m o s a p u d i c a )  TERHADAP KETEBALAN KETEBALAN LAPISA L APISAN N EPITEL MUKOSA ORAL PASCA KURETASE GINGIVA PADA MODEL TIKUS WISTAR DIABETES

TUGAS AKHIR Untuk Memenuhi Persyaratan Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi

Oleh : Deddy Dwi Septian 105070400111033

FAKULTAS KEDOKTERAN KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS UNIVERSITAS BRAWIJAYA MALANG 2016

i

HALAMAN PENGESAHAN TUGAS AKHIR

EFEK EKSTRAK METANOL AKAR PUTRI MALU (M i m o s a p u d i c a )  TERHADAP KETEBALAN KETEBALAN LAPISAN EPITEL MUKOSA ORAL PASCA KURET GINGIVA PADA MODEL TIKUS WISTAR DIABETES

Untuk Memenuhi Persyaratan Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran Gigi Oleh: Deddy Dwi Septian 105070400111033

Menyetujui:

Pembimbing

(DR, drg. drg. Nur Permatasari Permatasari MS.) NIP. 19601005 199103 2 001

ii

iii

KATA PENGANTAR Setelah 4 tahun akhirnya saya dapat menyelesaikan Tugas Akhir dengan judul “E fek Ekstrak Metanol Akar Putri Malu (Mimosa pudica)  terhadap Ketebalan Lapisan Epitel Mukosa Oral Pasca Kuretase Gingiva pada Model Tikus Wistar Diabetes” dengan segala halangan dan rintangan yang telah terlewati. Dalam Tugas Akhir ini, saya ingin berterimakasih kepada: 1. Keluarga saya yang telah tabah menanti selama 6 tahun untuk datang ke wisuda. 2. Setyohadi, drg. M.S., Selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya. 3. Dr. Nur Permatasari, drg., MS., sebagai pembimbing proposal dan laporan akhir yang masih sabar dengan keterlambatan penulis yang memakan waktu selama 4 tahun untuk menyelesaikan tugas akhir ini. 4. Dosen pembimbing proposal dan dosen yang telah sabar menguji blok 10 beberapa kali,. Miftakhul Cahyati, drg., Sp.PM. yang setiap bertemu selalu menanyakan kabar proposal sehingga penulis selalu ingat untuk menulisnya. 5. Kartika Andari Wulan, drg., Sp.Pros., dan Ester H. Lodra., Sp.BM., kedua dosen yang menyemangati penulis untuk segera mengerjakan laporan akhir ini agar dapat segera yudisium dan masuk koass, meskipun sering penulis repoti selama proses penulisan. 6. Rekan senasib kuretase tikus dari pagi hingga malam hari di farmako : Adhi Satriyo dan Gayuh Anggita, atas kesempatannya untuk belajar pada penelitian ini. 7. Teman-teman grup line “Lanang Lapuk” yang selalu pamer kalau sudah sarjana sehingga memacu semangat penulis untuk segera menyusul sarjana. 8. Teman-teman PDG2010 atas semua semangatnya dan juga softcopy tugas akhir untuk contoh penulis.

iv

9. Kakak-kakak, teman-teman, dan adek-adek AMSA Brawijaya dan BEM FKUB yang telah sarjana duluan dan selalu pamer gelar sarjananya, sehingga memberikan motivasi pada penulis untuk segera pamer juga. 10.

Grup line “aku udah tidur yank” yang selalu menemani malam -malam sepi penulis

selama mengerjakan tugas akhir ini. 11.

Teman-teman panitia dekan cup fkub 2012, yang pamer sudah sarjana, punya pacar,

dan selalu menghina penulis yang tidak kunjung wisuda. 12.

Teman yang selalu saya repoti tengah malam untuk pengerjaan tugas akhir ini azis,

mbeng, mpus, gori dan adit yang selalu penulis ajak ke KL atau McD untuk begadang. 13.

Segenap anggota rim pengelola Tugas Akhir Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

Brawijaya. 14.

Seluruh guruku di Fakultas kedokteran Gigi dan Fakultas Kedokteran Universitas

Brawijaya. 15.

Laboratorium Farmakologi, Histologi dan Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran

Universitas Brawijaya. 16.

Dia yang menjadi tujuan dan penyemangat agar penulis segera lulus.

17.

Semua pihak yang telah membantu dalam penyelesaian Tugas Akhir ini atau yang

berharap namanya tertulis disini namun tidak ada karena keterbatasan halaman.

Malang, 17 Mei 2016

Peneliti

v

DAFTAR ISI

JUDUL......................................................................................................................................... i HALAMAN PENGESAHAN ....................................................................................................... ii HALAMAN PERUNTUKAN....................................................................................................... iii KATA PENGANTAR ................................................................................................................. iv DAFTAR ISI .............................................................................................................................. vi DAFTAR GAMBAR....................................................................................................................x DAFTAR TABEL ....................................................................................................................... xi DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................................................... xii DAFTAR SINGKATAN.............................................................................................................xiii  ABSTRAK ............................................................................................................................... xiv BAB 1 PENDAHULUAN ............................................................................................................1 1.1

Latar Belakang ............................................................................................................1

1.2

Rumusan Masalah ...................................................................................................... 3

1.3

Tujuan Penelitian......................................................................................................... 3

1.3.1

Tujuan Umum.......................................................................................................3

1.3.2

Tujuan Khusus .....................................................................................................3

1.4

Manfaat Penelitian ...................................................................................................... 3

1.4.1

Manfaat Keilmuan................................................................................................4

1.4.2

Manfaat Aplikatif .................................................................................................. 4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ....................................................................................................5 2.1

Diabetes Melitus..........................................................................................................5

2.1.1

Definisi..................................................................................................................5

2.1.2

Klasifikasi ............................................................................................................. 5

2.1.3

Komplikasi Mikrovaskular dan Makrovaskular Diabetes .....................................6

2.2

Komplikasi Diabetes Melitus pada Rongga Mulut ...................................................... 7

2.2.1 Periodontitis pada Diabetes Melitus ......................................................................... 7

vi

2.2.2 Penatalaksanaan Periodontitis .................................................................................8 2.3

Penyembuhan Luka ....................................................................................................8

2.3.1

Fase Hemostasis dan Pembekuan ..................................................................... 9

2.3.2

Fase Inflamasi....................................................................................................10

2.3.3

Fase Proliferasi..................................................................................................10

2.3.4

Fase Remodeling ...............................................................................................11

2.4 Penyembuhan luka pada penderita diabetes ................................................................ 12 2.5 Putri Malu (Mimosa pudica) ........................................................................................... 12 2.5.1

Sistematika Tanaman Putri Malu....................................................................... 12

2.5.2

Karakteristik Umum............................................................................................12

2.5.3

Deskripsi Morfologi ............................................................................................ 13

2.5.4

Kegunaan dan Kandungan Putri Malu ..............................................................14

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN .............................................. 17 3.1

Kerangka Konsep Penelitian..................................................................................... 17

3.2

Hipotesis Penelitian...................................................................................................18

BAB 4 METODE PENELITIAN ................................................................................................19 4.1

Rancangan Penelitian ...............................................................................................19

4.2

Subjek Penelitian....................................................................................................... 19

4.3

Varibel Penelitian ...................................................................................................... 20

4.3.1

Variabel Bebas...................................................................................................21

4.3.2

Variabel Tergantung .......................................................................................... 21

4.3.3

Variabel Terkendali ............................................................................................21

4.4

Lokasi dan Waktu Penelitian.....................................................................................21

4.5

Bahan dan Alat Penelitian......................................................................................... 21

4.5.1

Ekstraksi Akar Putri Malu...................................................................................21

4.5.2

Perawatan Hewan Coba ....................................................................................21

4.5.3

Induksi Diabetes ................................................................................................ 22

4.5.4

Pemberian Luka .................................................................................................22

4.5.5

 Aplikasi Bahan Aktif ........................................................................................... 22

4.5.6

Pembuatan Dosis Sonde dan Topical ...............................................................22

4.6

Definisi Operasional..................................................................................................23

4.7

 Alur Penelitian ...........................................................................................................24

4.8

Ekstraksi Akar Putri Malu .......................................................................................... 24

4.9

Pembuatan Dosis Sonde (Per Oral) dan Topikal .....................................................25

4.9.1

Dosis Sonde (Per Oral)......................................................................................25

4.9.2

Dosis Topikal......................................................................................................26

4.10

Induksi Diabetes........................................................................................................26

4.11

Pengukuran Gula Darah Hewan Coba .....................................................................27

4.12

Pemberian Luka Pada Hewan Coba ........................................................................27

4.12.1

Langkah Kerja Pemberian Luka ........................................................................27

4.13  Aplikasi Bahan Aktif Pada Hewan Coba ................................................................... 28 4.14

Pengambilan Sampel ................................................................................................28

4.15

Pemeriksaan Histologi .............................................................................................. 28

4.16

Perawatan Hewan Coba ........................................................................................... 29

4.17  Analisis Data .............................................................................................................29 BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA ................................................................31 5.1

Hasil Penelitian..........................................................................................................31

5.2

 Analisis Data .............................................................................................................34

5.2.1

Uji Normalitas Data ............................................................................................35

5.2.2

Uji Homogenitas Varian .....................................................................................35

5.2.3

Uji One-way ANOVA .......................................................................................... 35

5.2.4

Uji Post Hoc Multiple Comparison ..................................................................... 36

BAB 6 PEMBAHASAN ............................................................................................................. 38 BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................................ 40 7.1

Kesimpulan ................................................................................................................ 40

7.2

Saran ......................................................................................................................... 40

DAFTAR PUSTAKA.................................................................................................................41

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Tanaman Putri Malu ............................................................................................13 Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian ...............................................................................17 Gambar 4.1 Alur Penelitian...................................................................................................... 24 Gambar 5.1 : Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Kontrol – .........................31 Gambar 5.2 : Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Kontrol + ......................... 32 Gambar 5.3 Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Perlakuan 1 ...................... 32 Gambar 5.4 Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Perlakuan 2 ...................... 33 Gambar 5.5 Diagram Rerata dan Standar Deviasi Ketebalan Lapisan Epitel Masing  – Masing Kelompok ....................................................................................................................33

x

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1. Kandungan Ekstrak Putri Malu ...............................................................................15 Tabel 5.1 Hasil Penghitungan Rerata Ketebalan Lapisan Epitel dan Standar Deviasi Ketebalan Epitel Masing-Masing Kelompok............................................................................ 34 Tabel 5.2 Hasil Uji Post Hoc Multiple Comparison .................................................................36

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 PERNYATAAN KEASLIAN TULISAN ..................................................................47 Lampiran 2 Data Hasil Penelitian ............................................................................................48 Lampiran 3 FOTO KEGIATAN ................................................................................................ 51

xii

DAFTAR SINGKATAN

PDGF

Platelet Derived Growth Factor 

FGF

Fibroblast Growth Factor 

TGF-β

Transforming Growth Factor Beta

IL-1/-4 /-6/-8

Interleukin-1 / -4/-6 / -8 

TNF

Tumor Necrosis Factor 

STZ

Streptozotocin

PMN

Polimorphonuclear

bFGF

basic Fibroblast Growth Factor 

aFGF

acidic Fibroblast Growth Factor 

eFGF

epidermal Fibroblast Growth Factor 

EGF

Epidermic Growth Factor 

mRNA

messenger Ribonucleid Acid 

ICAM

Intracellular Adhesion Molecule

FRAP

ferric reducing ability of plasma

VEGF

Vascular Endothelial Growth Factor 

VEGFR2

Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 

WHO

World Health Organization

xiii

ABSTRAK

Septian, D.D. 2016. EFEK EKSTRAK METANOL AKAR PUTRI MALU ( M i m o s a p u d i c a )  TERHADAP KETEBALAN LAPISAN EPITEL MUKOSA ORAL PASCA KURET GINGIVA PADA MODEL TIKUS WISTAR DIABETES. Tugas Akhir. Program Studi Pendidikan Dokter Gigi. Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya. Pembimbing: DR, drg.Nur Permatasari MS. Pada tahun 2000, Indonesia menempati peringkat empat di dunia untuk jumlah penderita diabetes sebanyak 8,4 juta jiwa dan diprediksi akan meningkat menjadi 21,3 juta  jiwa pada tahun 2030. Diabetes meningkatkan faktor resiko pada tindakan periodontal dan memperpanjang proses penyembuhan luka yang berakibat pada meningkatnya resiko komplikasi. Hingga saat ini pengobatan untuk penderita diabetes hanya terapi penunjang dengan pemberian insulin. Tujuan penelitian ini untuk membuktikan efek ekstrak putri malu (Mimosa pudica)  terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes. Penelitian ini merupakan penelitian murni dengan metode Randomized Posttest Only Controlled Group Design , menggunakan empat kelompok yang terdiri dari kontrol negatif, kontrol positif, perlakuan 1 dan perlakuan 2. Setelah kelompok Kontrol positif, perlakuan 1 dan 2 diinduksi diabetes menggunakan Streptozotocin, selanjutnya dilakukan pembuatan luka gusi pada seluruh kelompok. Kelompok perlakuan 1 diberikan ekstrak akar putri malu dengan dosis sonde 100mg Kg/BB ditambah topikal 2,5% (w/w), kelompok perlakuan dua diberikan dosis sonde 500 mg Kg/BB ditambah topikal 5% (w/w). Pengambilan data dilakukan di hari ke-10. Data dianalisa menggunakan One-way  ANOVA. Hasil menunjukan bahwa pemberian ekstrak akar putri malu mampu me ningkatkan ketebalan lapisan epitel pasca kuret pada model tikus wistar diabetes secara signifikan (p<0,05).

Kata Kunci: Akar Mimosa pudica, Diabetes, Epitel, Kuret

xiv

ABSTRACT

Septian, D.D. 2016. Effect of Mimosa Pudica Roots Methanolic Extract on Oral Mucosa Epithelial Thickness Post Gingiva Curetage on Diabetic Wistar Rat. Undergraduate Thesis. Dentistry Major. Brawijaya University School of Dental Medicine. Supervisor: Dr. drg. Nur Permatasari, MS.

In 2000, Indonesia placed 4 th in the world for high number of diabetic population with 8,4 million peoples and will increase to 21,3 million peoples in 2030. Diabetes increase risk factor on periodontal treatment and prolonged wound healing that will result in increasing complication risk. Untill this day, treatment for diabetes only used insulin. The purpose of this study is to proof the effect of Mimosa pudica root methanolic extract on oral mucosa epithelial thickness post gingiva curettage on diabetic wistar rat. This study is pure experimental laboratory using randomized posttest only controlled group design, using 4 groups which consist of negative control, positive control, treatment 1 and treatment 2. After positive control, treatment 1 and 2 groups is induced diabetic using streptozotocin, after the induction the gingival wound is made in all groups. Treatment 1 groups is given the extract with 100 mg Kg/BB oral dose and 2,5% (w/w) topical dosen, Treatment 2 is given 500 mg Kg/BB oral dosen and 5% (w/w) topical dos e. The data gathering is on day 10 th. One-Way  ANOVA is used for daya analysis. The result showed that mimosa pudica root extract capable to increase epithelial thickness post c urettage on diabetic wistar rat significantly (p<0.05).

Keywords: Mimosa pudica roots, Diabetes, Eptihelial, Curetage

xv

BAB 1 PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang Pada tahun 2000 penderita diabetes dunia diperkirakan berjumlah 171 juta jiwa,

sedangkan penderita diabetes di Indonesia berada di peringkat 4 dunia yaitu berjumlah 8,4  juta jiwa dan diperkirakan akan bertambah menjadi 21.3 juta jiwa pada tahun 2030 (Wild, 2004). Studi menunjukkan penderita diabetes rentan memiliki manifestasi oral seperti penyakit periodontal, kandidiasis oral, kehilangan gigi, ulser mukosa oral, halitosis, karies, Burning Mouth Syndrome, dan gangguan pengecapan (Bajaj et al. 2012). Keadaan hiperglikemi yang dialami oleh penderita diabetes mengakibatkan dua komplikasi yakni mikrovaskular dan makrovaskular. Komplikasi mikrovaskular pada keadaan hiperglikemia mengakibatkan peningkatan  Advance glycation End Products (   AGEs) yang menyebabkan penurunan angiogenesis atau pembentukan pembuluh darah baru (Abiko

&

Selimovic, 2010; Kolluru et al, 2012; Liu et al, 2012). Keadaan hiperglikemi juga mempunyai resiko komplikasi makrovaskular yakni terdapat penumpukan Low Density Lipoprotein (LDL) pada dinding endotel yang mengakibatkan penyempitan pembuluh darah atau yang disebut atherosclerosis. Ketika terjadi atherosclerosis, pembuluh darah menjadi kaya akan lipid dan ketika pecah akan mengakibatkan infarksi vaskular (Fowler, 2008; Papa et al, 2013). Kuret gingiva merupakan salah satu prosedur bedah yang dilakukan pada jaringan periodontal bertujuan untuk mengeliminasi poket pada penderita periodontitis dan meninggalkan luka pasca tindakan (Cohen, 2009). Setelah terjadi luka akan diikuti oleh proses penyembuhan luka yang terdiri dari fase hemostasis dan pembekuan, fase inflamasi, fase proliferasi, dan fase remodeling (Miloro et al, 2011; Araújo et al, 2015; Reinke & Sorg, 2012). Pada fase hemostasis dan pembekuan akan terjadi aktivasi faktor Hageman yang mengakibatkan trombosit berpindah sangat cepat menuju daerah luka dan membentuk  primary hemostasis yang diikuti oleh fase inflamasi. Ketika proses penyembuhan luka memasuki fase inflamasi maka akan terjadi proses fagositas bakteri dan sel debris oleh

1

2

makrofag dimana berperan penting untuk perlindungan tubuh selama proses penyembuhan luka. Kemudian akan terjadi fase proliferasi dimana terdapat proses angiogenesis, reepitelisasi dan pembentukan jaringan granulasi dan diakhiri oleh fase remodeling (Miloro et al, 2011; Reinke & Sorg 2012). Untuk penderita diabetes, proses angiogenesis pada penyembuhan luka mengalami gangguan akibat dari peningkatan AGEs sehingga pembentukan epitel baru pada proses re-epitelisasi juga terganggu (Abiko & Selimovic, 2010; Miloro et al, 2011).  Alam telah menjadi sumber pengobatan selama ribuan tahun. Berbagai macam tanaman obat telah digunakan setiap harinya diseluruh dunia untuk mengobati penyakit. Mimosa pudica atau yang dikenal dengan sebutan putri malu, menarik perhatian peneliti diseluruh dunia karena aktifitas farmakologinya sebagai anti diabetes, antitoksin, antihepatoksin, antioksidant, dan kemampuan untuk meningkatkan penyembuhan luka (Joseph et al, 2013). Putri malu (Mimosa (Mimosa pudica), pudica ), khususnya bagian akar, memiliki kandungan saponin yang telah teruji secara laboratorium pada hewan coba untuk mempercepat penyembuhan luka (Paul et al , 2010). Saponin memiliki efek sama dengan bFGF (basic Fibroblast (basic  Fibroblast Growth Factor),  Factor),  meningkatkan reseptor mRNA VEGF (Vascular ( Vascular Endotelial Growth Factor ) yang berperan pada pembentukan tube formation  formation  pembuluh darah baru sehingga proses penyembuhan luka mengalami peningkatan angiogenesis (Lie et al , 2008). Saponin adalah senyawa glikosida yang terdiri dari gabungan glukosa dengan sapogenin (Nadjib, 2009).). Saponin juga diketahui memiliki fungsi sebagai antiinflamasi (Andajani dan Mahardika, 2003). Flavonoid merupakan suatu kelompok senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam. Flavonoid memiliki kemampuan imunomodulator yang dapat mengaktivasi makrofag (Titisani, 2005). Makrofag berfungsi untuk melakukan fagositosis, memproduksi TNF, perbaikan jaringan (fibroblas ( fibroblas stimulating factor, fibronectin, kolagenase), sitokin, dan memproduksi hormon pertumbuhan (growth ( growth factor). Growth factor bertanggung jawab atas terjadinya inflamasi dan proses mitogen fibroblas yang penting dalam proses penyembuhan

3

luka serta berperan pada re-epitelisasi dan membentuk pembuluh kapiler baru atau angiogenesis angiogenesis (Simatupang, 2003). Dari uraian di atas, penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh akar putri malu terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes. diabetes. 1.2

Rumusan Masalah  Apakah ekstrak metanol akar putri malu ( Mimosa pudica) pudica ) dapat meningkatkan

ketebalan lapisan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes? 1.3

Tujuan Penelitian

1.3.1

Tujuan Umum Memperoleh bukti bahwa ekstrak akar putri malu ( Mimosa pudica) pudica ) dapat

meningkatkan ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva model tikus wistar diabetes. 1.3.2

Tujuan Khusus 1. Mengukur ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva mukosa oral tikus normal. 2. Mengukur ketebalan lapisan lapisan epitel mukosa mukosa oral pasca kuret kuret gingival mukosa mukosa oral tikus diabetes. 3. Mengukur ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva mukosa oral tikus diabetes setelah pemberiaan berbagai macam konsentrasi ekstrak metanol akar putri malu (Mimosa ( Mimosa pudica). pudica).

1.4

Manfaat Penelitian Manfaat yang diharapkan dari penelitian ini antara lain:

4

1.4.1

Manfaat Keilmuan Hasil penelitian dapat dijadikan sebagai dasar teori untuk menambah wawasan ilmu

pengetahuan sekaligus sebagai dasar untuk pengembangan penelitian selanjutnya dalam bidang kesehatan, khususnya penyembuhan luka kuret gingiva pada penderita diabetes. 1.4.2

Manfaat Aplikatif Hasil penelitian dapat dijadikan sebagai bahan pertimbangan suatu alternatif baru

untuk pengobatan alami diabetes dan komplikasinya, khususnya menggunakan ekstrak akar putri malu (Mimosa (Mimosa pudica). pudica ).

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Diabetes Melitus

2.1.1

Definisi Diabetes mellitus didefinisikan sebagai kelainan metabolic dengan banyak etiologi

yang dikarakterisasi dengan adanya hiperglikemia kronik dengan gangguan metabolism karbohidrat, protein, dan lemak karena tidak adekuatnya sekresi insulin, aktifitas insulin, atau keduanya (WHO, 2006). Setengah dari jumlah kasus Diabetes Melitus tidak terdiagnosa karena pada umumnya diabetes tidak disertai gejala sampai terjadinya komplikasi (Hiswani, 2008).

2.1.2

Klasifikasi Klasifikasi Diabetes Melitus yang dianjurkan adalah yang sesuai dengan klasifikasi

oleh  American Diabetes Association  (ADA) 1997 yang juga diadopsi oleh PERKENI. Klasifikasi etiologis yang dianjurkan adalah: 1. Diabetes tipe 1 Diabetes ini mengalami destruksi sel beta, umumnya menjurus pada defisiensi insulin absolute yang disebabkan oleh autoimun dan idiopatik. 2. Diabetes tipe 2 Diabetes ini bervariasi mulai dari resistensi insulin disertai defisiensi insulin relative hingga defek-defek sekresi insulin yang disertai resistensi insulin. 3. Diabetes tipe lain a. Defek genetik fungsi sel beta: (1) Kromosom 12, HNF-1 alfa (MODY3), (2) Kromosom 7, glukokinase (MODY) b. Defek genetik kerja insulin

5

6

c. Penyakit eksokrin pankreas: (1) Pankreatitis, (2) Tumor/Pankreatektomi, (3) Pankretopati fibrokalkulus. d. Endokrinopati: (1) akromegali, (2) Sindrom Chusing, (3) Freokomositoma, (4) Hipertiroidisme. e. Karena obat/zat kimia: (1) Vacon, (2) Glukokortikoid, hormon tiroid, tiazid, daintin, interferon alfa, dll. f.

Infeksi: (1) Rubella, (2) Cyto-megalo virus (CMV)

g. Sebab Imunologi yang jarang: antibody anti insulin h. Sindrom genetic yang berkaitan dengan DM: (1) Down Syndrome, (2) Klinefelter Syndrome, (3) Turner Syndrome. i. 2.1.3

Diabetes mellitus gestasional (DMG)

Komplikasi Mikrovaskular dan Makrovaskular Diabetes Efek komplikasi dari hiperglikemia pada penderita diabetes pada umumnya dibagi

menjadi dua yakni komplikasi makrovaskular dan komplikasi mikrovaskular. Komplikasi mikrovaskular yang terjadi pada penderita diabetes paling umum adalah diabetic retinopathy yang terjadi karena pendarahan pada lapisan tengah retina. Penelitian pada hewan coba tentang komplikasi mikrovaskular diabetes menunjukkan konsentrasi glukosa yang tinggi mampu menciptakan formasi nonenzym dari Advance Glycosylated End products (AGEs) yang mampu melukai sel dan juga oksidan bebas mungkin berperan penting pada rusaknya sel pada keadaan hiperglikemia (Fowler, 2008; Abiko & Selimovic, 2010). Pada komplikasi makrovaskular penderita diabetes yang menjadi bagian penting adalah proses atherosclerosis yang mengakibatkan menyempitnya pembuluh darah.  Atherosklerosis diperkirakan dihasilkan dari luka pada dinding arteri sehingga terjadi akumulasi LDL pada dinding endothel. Selanjutnya angiotensin II dapat mempromosikan LDL menjadi oxidized lipid lalu diikuti infiltrasi monosit pada dinding arteri dan berdifferensiasi menjadi makrofag yang mengakumulasi oxidized lipid menjadi sel foam. Sel foam menstimulasi proliferasi makrofag dan menarik Limfosit T yang menginduksi proliferasi

7

pada otot halus dan akumulasi kolagen. Hasil akhir dari proses ini adalah lesi atherosleris yang kaya akan lipid dan ketika pecah akan menyebabkan infarksi vascular (Fowler, 2008; Papa et al, 2013) .

2.2

Komplikasi Diabetes Melitus pada Rongga Mulut Studi menunjukan bahwa manifestasi oral secara signifikan lebih tinggi pada

penderita diabetes dibandingkan dengan orang normal. Penelitian yang dilakukan oleh Chandna et al, menunjukkan periodontitis merupakan komplikasi dari diabetes dan menjadi hal yang sangat umum pada keadaan hiperglikemia (Chandna et al, 2009). Tidak hanya periodontitis, diabetes melitus juga menyebabkan beberapa manifestasi oral lain, yakni hiposalivasi sebanyak 68%, halitosis sebanyak 52%, periodontitis sebanyak 32%, sensasi mulut terbakar sebanyak 32%, candidiasis dan perubahan indra pengecap sebanyak 28% kasus (Bajaj et al, 2012). 2.2.1 Periodontitis pada Diabetes Melitus Periodontitis didefinisikan sebagai penyakit inflamasi pada jaringan pendukung gigi yang disebabkan oleh mikoroorganisme spesifik atau grup dari mikroorganisme spesifik yang menghasilkan kerusakan pada ligamen periodontal dan tulang alveolar

dengan

penambahan kedalaman  probing, resesi gingiva, atau keduanya. Hingga saat ini klasifikasi dari periodontitis yang digunakan secara internasional adalah klasifikasi dari  American  Academy of Periodontology (AAP) tahun 1999, yang terdiri dari necrotizing periodontitis, chronic periodontitis, aggressive periodontitis, dan  periodontitis as a manifestation of systemic disease (Newman et al, 2015). Penebalan membrane endothel sebagai komplikasi makrovaskular dari keadaan diabetes melitus mengakibatkan gangguan pada proses homestasis normal sehingga mengganggu transportasi sel-sel yang berperan dalam proses penyembuhan luka. Peningkatan AGEs yang umum pada keadaan hiperglikemi juga meningkatkan kerentanan terhadap kerusakan jaringan melalui produksi TNF- α dan IL-1.

Selain

gangguan

8

makrovaskuler dan mikrovaskular, tingginya kada glukosa pada gingival crevicular fluid mengurangi kemampuan penyembuhan luka dari fibroblast pada jaringan periodontium karena menghalangi perlekatan dan penyebarannya (Bajaj et al, 2012). 2.2.2 Penatalaksanaan Periodontitis Kuret gingiva merupakan salah satu prosedur bedah yang dilakukan pada jaringan periodontal yang digunakan untuk membuka akses pada tulang atau jaringan dibawah gingival yang digunakan untuk membersihkan jaringan dan membuat perlekatan baru. Kuret gingiva pada kasus periodontitis digunakan untuk menghilangkan kalkulus sub gingiva (dibawah jaringan gingival) yang sudah membentuk poket yang dalam pada gingiva dan kuret gingiva juga digunakan untuk prosedur perbaikan tulang penyangga gigi, dengan tujuan untuk mengeliminasi poket atau keadaan zero pocket pada penderita periodontitis (Cohen, 2009). Indikasi dilakukannya kuret adalah pada poket yang dalam sampai mucogingival junction, daerah yang terkeratinisasi minimal, operasi yang melibatkan tulang dibawah gingival, pembersihan jaringan, fasilitasi prosedur restorative (Newman et al, 2015).

2.3

Penyembuhan Luka Penyembuhan luka secara makros dipengaruhi oleh gangguan terhadap jaringan

dan keadaan disekitar penutupan luka. Karena 2 faktor tersebut, penyembuhan luka dapat dibagi menjadi tiga macam, yakni first intention, second intention dan third intention. Penyembuhan first intention terjadi ketika luka goresan atau luka insisi dilakukan secara bersih dan luka ditutup dengan benang jahit sehingga mempercepat penyembuhan luka tanpa munculnya gangguan dan pembentukan jaringan parut yang minimal. Ketika keadaan luka kurang menguntungkan seperti terpisahnya kedua ujung luka karena proses granulasi, penyusutan luka dan epitelisasi akan terjadi penyembuhan second intention. Penyembuhan luka second intention akan menghasilkan jaringan parut yang non-fungsional, meningkatkan resiko infeksi dan memperlambat penyembuhan luka. Untuk penyembuhan luka third intention biasanya digunakan oleh ahli bedah untuk keadaan yang lebih kompleks dimana

9

menggabungkan prosedur first dan second intention.(Miloro et al. 2011; Bieniek et al. 2013; Walter et al. 2012; Neuhaus & Yu 2012) Penyembuhan luka pasca kuret gingiva termasuk dalam kategori penyembuhan luka second intention. Secara histologis penyembuhan luka pasca pencabutan sama seperti layaknya urutan penyembuhan luka pada umumnya, yakni melalui fase hemostasis dan pembekuan, inflamasi, proliferasi, dan remodeling (Miloro et al. 2011; Araújo et al. 2015; Reinke & Sorg 2012) 2.3.1

Fase Hemostasis dan Pembekuan Fase awal dari penyembuhan luka adalah hemostasis dan formasi matriks luka

sementara yang terjadi segera setelah terjadinya luka dan selesai dalam beberapa jam. Ketika terjadi luka maka trauma jaringan dan perdarahan lokal akan mengaktivasi faktor Hageman atau disebut juga faktor XII yang akan mengakibatkan trombosit berpindah sangat cepat pada daerah luka dan membentuk  primary hemostasis. Pada saat yang sama trombosit juga memicu vasokonstriksi selama 5 hingga 10 menit pada pembuluh darah yang terluka untuk mengurangi kehilangan darah dan mengisi kekosongan jaringan dengan bekuan darah yang terdiri dari sitokin dan faktor pertumbuhan. Bekuan darah yang mengandung molekul fibrin, fibronectin, vitronectin dan thrombosondins membentuk matriks sementara sebagai struktur rangka untuk migrasi leukosit, keratinosit, fibroblast dan sel endotel dan juga sebagai tempat penyimpanan faktor pertumbuhan. Vasokonstriksi lalu akan diikuti vasodilatasi dimana trombosit menginvasi matriks luka sementara. Sebagai tambahan trombosit mempengaruhi infiltrasi leukosit melalui pelepasan faktor kemotatik. Trombosit dan leukosit melepaskan IL-1α, IL-1β, IL-6 dan TNF-α untuk mengaktivasi proses inflamasi. Keduanya juga menstimulasi sintesis kolagen melalui pelepasan FGF-2, IGF-1 dan TGF- β. Untuk aktivasi perubahan fibroblast menjadi myofibroblast terjadi karena ada pelepasan TGF-β.

Pelepasan FGF-2, VEGF-A, HIF-1α dan TGF-β memulai proses terjadinya

angiogenesis dan proses reepitelisasi terjadi karena terdapat pelepasan EGF, FGF-2, IGF-1, TGF-α. (Miloro et al. 2011; Reinke & Sorg 2012)

10

2.3.2

Fase Inflamasi Fase inflamasi terbagi menjadi dua yakni bagian awal dimana terjadi perekrutan

neurofil dan pada bagian akhir terdapat penampakan dan transformasi dari monosit. Pada umumnya neutrofil menjadi sel yang dominan pada daerah luka beberapa menit setelah terjadinya luka. Neutrofil bermigrasi melalui rangka yang disediakan oleh bekuan fibrin, leukosit berumur pendek juga membanjiri daerah luka dengan protease dan sitokin yang membantu untuk membersihkan daerah luka dari kontaminasi bakteri, mendevitalisasi  jaringan , dan mendegradasi komponen matriks. Aktivitas dari neutrofil akan ditekan oleh antibodi opsonik yang keluar menuju daerah luka dari perubahan pada vaskuler. Sitokin yang dikeluarkan oleh neutrofil yang hampir menghilang seperti Tumor Necrosis Factor  – alpha (TNF-α) dan interleukins  (IL) 1a dan 1b menstimulasi respon inflamasi untuk memperpanjang durasinya. Menurunnya jumlah neutrofil akan diikuti oleh meningkatnya  jumlah makrofag. Makrofag berfungsi untuk mensekresi kolagenase dan elastase untuk memecah jaringan yang terluka dan memfagosit bakteri dan sel debris. Makrofag juga berperan untuk melepaskan faktor pertumbuhan seperti TGF- β, TGF-α, FGF dasar, PDGF, dan VEGF yang menstimulasi proliferasi dan sintesis molekul Extracellular matrix (ECM). (Miloro et al. 2011; Reinke & Sorg 2012). 2.3.3

Fase Proliferasi Proliferasi dimulai paling cepat 3 hari setelah terjadinya luka dan bertahan hingga 3

minggu. Terdapat beberapa tahap pada fase proliferasi seperti neoangiogenesis, formasi  jaringan granulasi, deposisi ECM, dan re-epitelisasi yang berjalan hampir bersamaan dan tidak ada urutan pasti.(Behm et al. 2012; Reinke & Sorg 2012) 2.3.3.1 Re-epitelisasi Ketika terjadi luka keratinosit dari ujung luka dan stem cells dari folikel rambut atau kelenjar keringat memulai proses re-epitelisasi dimana aktivasi dari proses ini melalui signaling pathway dari sel epitel dan non-epitel. Berbagai macam sitokin dan growth factor dihasilkan, seperti Epithelial Growth Factor (EGF), Keratinocyte Growth Factor (KGF),

11

Insulin-like Growth Factor-1 (IGF-1, serta Nerve Growth Factor (NGF).  Penggabungan kedua ujung epithel tampak pada degradasi dari actin fibers pada filopodia, dimana akan tampak seperti ritsleting karena keterikatan interselular. (Reinke & Sorg 2012) 2.3.3.2 Neovaskularisasi Neovaskularisasi atau disebut juga angiogenesis diinisiasi oleh Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), Platelet-Derived Growth Factor(PDGF), basic Fibroblast Growth Factor (bFGF), dan serine protease thrombin.  Pada saat masing-masing growth factor berikatan dengan reseptor pada sel endotel akan mengakibatkan sekresi enzim proteolitik yang akan larut di basal lamina. Sel endotel akan mampu berproliferasi dan menyebar ke daerah luka yang dikenal dengan istilah “Sprouting” , sel-sel endotel baru hasil dari proliferasi akan saling berikatan dan akhirnya akan membentuk jaringan vaskuler baru. (Reinke & Sorg 2012) 2.3.3.3 Formasi jaringan granulasi Tahapan formasi jaringan granulasi bersamaan dengan tahap remodelling dan angiogenesis, sehingga masih tampak kemerahan karena banyaknya jaringan vaskuler baru. Disebut jaringan granulasi karena terdapat banyak komponen, seperti fibroblast, granulosit, makrofag, kapiler dan bundel kolagen terstruktur. Tahapan ini bertindak sebagai pembentukan jaringan transisi dari fibrin menuju jaringan parut. (Reinke & Sorg 2012) 2.3.4

Fase Remodeling Fase ini berdurasi dari 21 hari hingga 1 tahun setelah terjadinya luka.

Fase ini

ditandai dengan terhentinya formasi jaringan granulasi melalui mekanisme apoptosis, pergantian kolagen III menjadi kolagen I, menurunnya proses angiogenesis, serta menurunnya metabolisme penyembuhan luka dan akhirnya berhenti. (Reinke & Sorg 2012; Miloro et al. 2011)

12

2.4 Penyembuhan luka pada penderita diabetes Pada penderita diabetes peningkatan AGEs pada keadaan hiperglikemia memiliki peranan penting pada gangguan proses penyembuhan luka utamanya pada fase angiogenesis atau neovaskularisasi. AGEs memiliki kemampuan untuk mendegradasi Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 (VEGFR2), dimana VEGFR2 bertindak sebagai reseptor utama untuk VEGF signaling   yang menuju pada vasodilatasi, migrasi sel endotel, dan proliferasi. Menurunnya VEGFR2 oleh AGEs, mengakibatkan proses angiogenesis mengalami gangguan dikarenakan kegagalan stimulasi oleh VEGF (Liu et al. 2012; Abiko & Selimovic 2010; Kolluru et al. 2012).

2.5 Putri Malu (Mimosa pudica) 2.5.1

Sistematika Tanaman Putri Malu Kingdom

: Plantae

Subkingdom

: Tracheobionta (berpembuluh)

Superdivisio

: Spermatophyta (menghasilkan biji)

Kelas

: Magnoliopsida

Ordo

: Fabales

Family

: Fabaceae

Genus

: Mimosa

Spesies

: Mimosa pudica L.

(Arisandi dan Andriani, 2008)

2.5.2

Karakteristik Umum Putri malu atau dalam bahasa latin disebut Mimosa pudica  Linn. adalah tumbuhan

dengan ciri daun yang dapat menutup dengan sendirinya saat disentuh dan membuka kembali setelah beberapa lama. Tanaman

berduri ini termasuk dalam tanaman berbiji

tertutup (angiospermae) dan terdapat pada kelompok tumbuhan berkeping dua atau dikotil (Ahmad, 2011).

13

Tumbuhan berdaun majemuk menyirip dan daun bertepi rata ini memiliki letak daun yang berhadapan serta termasuk dalam suku polong-polongan. Daun kecil-kecil tersusun majemuk, bentuk lonjong dengan ujung lancip, warna hijau (ada yang kemerah-merahan). Daun akan menutup bila disentuh ( sensitive plant ). Bunga bulat seperti bola, warna merah muda, dan bertangkai (Ahmad 2011). Gerak tanaman putri malu menutup daunnya disebut dengan seismonasti, walaupun dipengaruhi rangsang sentuhan (tigmonasti), gerak tigmonasti daun putri malu menutup tidak peduli darimana datangnya arah rangsangan. Tanaman ini juga menguncup saat matahari terbenam dan merekah kembali setelah matahari terbit. Tanaman putri malu menutup daunnya untuk melindungi diri dari hewan pemakan tumbuhan (herbivora) yang ingin memakannya. Warna daun putri malu berwarna lebih pucat, dengan menunjukkan warna yang pucat, hewan yang tadinya ingin memakan tumbuhan ini akan berpikir bahwa tumbuhan tersebut telah layu dan menjadi tidak berminat lagi untuk memakannya. Sebutan lokal antara lain Putri malu, si kejut, rebah bangun, akan kaget; Han xiu cao (China) (Ahmad, 2011).

Gambar 2.1 Tanaman Putri Malu

2.5.3

Deskripsi Morfologi

2.5.3.1 Daun Daun berupa majemuk menyirip berganda dua yang sempurna. Jumlah anak daun setiap sirip 5 - 26 pasang. Helaian anak daun berbentuk memanjang sampai lanset, ujung runcing, pangkal membundar, tepi rata, permukaan atas dan bawah licin, panjang 6  – 16

14

mm, lebar 1 - 3 mm, bewarna hijau, umumnya tepi daun berwarna ungu. Jika daun tersentuh akan melipatkan diri, menyirip rangkap. Sirip terkumpul rapat dengan panjang 4 - 5.5 cm (Ahmada 2011).

2.5.3.2 Batang Batang bulat, berambut dan berduri temple. Batang dengan rambut sikat yang mengarah miring ke bawah.(Ahmad, 2011) 2.5.3.3 Akar  Akar berupa akar pena yang kuat (Ahmad, 2011) 2.5.3.4 Bunga Bunga berbentuk bulat seperti bola, bertangkai, berwarna ungu/merah. Kelopak sangat kecil, bergigi empat, seperti selaput putih. Tabung mahkota kecil, bertaju empat, seperti selaput putih(Ahmad, 2011).

2.5.3.5 Buah Buah berbentuk polong, pipih seperti garis (Ahmad, 2011).

2.5.3.6 Biji Biji bulat dan pipih (Ahmad, 2011).

2.5.4

Kegunaan dan Kandungan Putri Malu Tanaman Putri Malu (Mimosa pudica)  mempunyai fungsi antara lain antikonvulsan,

antibakteri, ekstrak akarnya sebagai antifertilitas, antiashmatic, analgesik, antiinflamasi, antioksidan, dan antidepresan. Akar Putri Malu ( Mimosa pudica)  mempunyai kandungan seperti phytosterols, carbohydrates, saponins, flavonoids, glycosides, tannins, amino acids, proteins and alkaloid (Paul J et al,2010) Hasil phytochemical dengan estrak metanol diketahui bahwa Putri Malu ( Mimosa  pudica) mempunyai kandungan alkaloid, saponin, phytosterol, resin, phenols, tannin, flavanoid, dan deterpenes (Kaur et al ,2011).

15

Tabel 2.1. Kandungan Ekstrak Putri Malu (Kaur et al, 2011)

2.5.4.1 Saponin Saponin berasal dari bahasa latin sapo yang berarti sabun, karena sifatnya menyerupai sabun. saponin sebagai deterjen yang memiliki molekul ampifatik (mengandung bagian hidrofilik dan hidrofobik) yang dapat melarutkan protein membrane (Ganiswara GS, 2006 dalam Siregar 2011). Saponin adalah glikosida triterpenoid dan sterol Saponin merupakan senyawa yang berasa pahit, berbusa dalam air dan larut dalam air dan alkohol dan tidak larut dalam eter. Saponin paling cocok diekstraksi dengan menggunakan metanol dan etanol (Soebagio, 2007). Saponin merupakan glikosida alami yang memiliki berbagai efek farmakologis, termasuk aktifitas sitotoksik (Podolak et al , 2010). Saponin terdiri dari glukosa, galaktosa, asam glukoronik, xylose, rhamnosa, atau metal pentose. Komponen gula tersebut berikatan dengan glikon yang hidrofobik, ada 2 macam jenis saponin yaitu steroid dan titerpene (Podolak, 2002).

16

Saponin memiliki berbagai macam efek famakologis dalam berbagai macam penelitian yang disampaikan pada sebuah review (Francis et al ,2002) bahwa saponin memiliki pengaruh. 1. Penstabil membrane sel 2. Pertumbuhkembangan dan intake makanan 3. Percernaan protein 4. Metabolisme kolesterol 5. Aktifitas hipoglikemik 6. System immune dan sistotoksik pada sel malignan Saponin mempunyain peran dalam membantu proses penyembuhan luka selain sebagai antiinflamasi, saponin juga dapat membentuk pembuluh darah baru (angiogenesis) pada proses penyembuhan luka. Saponin dapat mempengaruhi tube formation, sekresi activator plasminogen dengan cara Saponin memiliki efek sama dengan bFGF ( basic Fibroblast Growth Factor  ) yang membentuk tube formation pembuluh darah baru (Morizaki, et al, 2004) dan efek pemberian saponin memberikan keseimbangan activator dan inhibitor plasminogen yang berperan pada pembentukan angiogensesis. Saponin juga meningkatkan ekspresi mRNA pada VEGF (Vascular Endotelial Growth Factor) pada sel endotel pembuluh darah (Lei et al, 2008) sebagai faktor penginduksi pembuluh darah. bFGF dan VEGF menyebabkan

proliferasi,

menginduksi

sel

endotel

menyekresi

protease

untuk

mendegradasi membran basalis, meningkatkan migrasi sel endotel, dan mengarahkan (bersama laminin) pembentukan pembuluh darah dari populasi endotel yang semakin meluas (Cotran, 2003). Saponin juga mampu memacu produksi kolagen I yang merupakan suatu protein yang berperan dalam penyembuhan luka (Gunawan, 2004).

BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

3.1

Kerangka Konsep Penelitian

Luka pasca kuret gingiva

Luka pasca kuret gingiva

pada diabetes

pada diabetes

AGEs

AGEs

VEGFR2

& VEGFR2

Saponin pada

bFGF & mRNA VEGF

Mimosa pudica

Stimulasi VEGF

Tube Formation & Stimulasi VEGF

Angiogenesis

An io enesis

Kolagen

Kolagen

Pembentukan epitel

Pembentukan epitel

Penyembuhan luka

Penyembuhan luka

Gambar 3.1 Kerangka Konsep Penelitian Kondisi

hiperglikemia

yang

terjadi

pada

penderita

diabetes

mengakibatkan

peningkatan AGEs. Ketika jumlah AGEs mengalami peningkatan akan mengakibatkan degradasi pada VEGFR2 sehingga stimulus yang diberikan oleh VEGF tidak akan maksimal dan berakibat pada terganggunya proses angiogenesis. Terganggunya proses angiogenesis akan menyebabkan penurunan produksi kolagen yang berdampak pada penurunan pembentukan epitel dan terlambatnya proses penyembuhan luka (Abiko * Selimovic, 2010; Liu et al, 2012; Kolluru et al, 2012; Reinke & Sorg, 2012)

17

18

Saponin pada ekstrak akar putri malu memiliki efek yang sama dengan bFGF yang mampu membentuk tube formation  dan meningkatkan ekspresi mRNA pada VEGF yang memiliki peranan penting pada proses induksi angiogenesis, sehinga pemberian ekstrak akar putri malu dapat mengatasi penurunan induksi VEGF pada keadaan diabetes. . Peningkatan proses angiogenesis mampu mempercepat proses epitelisasi dan remodelling sehingga mampu meningkatkan ketebalan epitel dan mempercepat proses penyembuhan luka pada keadaan diabetes (Lie et al , 2008; Gunawan, 2004). 3.2

Hipotesis Penelitian Hipotesis penelitian ini adalah pemberian ekstrak metanol akar putri malu dapat

meningkatkan ketebalan lapisan epitel mukosa pasca model tikus wistar diabetes.

kuret gingiva

mukosa oral pada

BAB 4 METODE PENELITIAN

4.1

Rancangan Penelitian Penelitian ini menggunakan desain eksperimen murni ( true experimental design) di

laboratorium secara in vivo menggunakan rancangan

Randomized Post Test Only

Controlled Group Design. Subjek dibagi menjadi 4 kelompok, yaitu kelompok kontrol (-) (tikus yang diberi luka dan tidak diinduksi diabetes), Kontrol (+) ( tikus yang diberi luka dan dinyatakan diabetes oleh induksi STZ), Perlakuan 1 (tikus yang diberi luka dan dinyatakan diabetes oleh induksi STZ + dosis topical 2,5% (w/w) dan dosis peroral 100 mg/KgBB), Perlakuan 2 ( tikus yang diberi luka dan dinyatakan diabetes oleh induksi STZ + dosis topical 5% (w/w) dan dosis peroral 500 mg/KgBB). Untuk tikus kontrol (+), perlakuan 1 dan perlakuan 2 setelah dinyatakan diabetes setelah induksi selama tiga hari maka tikus diberi luka dan dievaluasi setiap hari pada jam yang sama dan diberi dosis sesuai kelompoknya. 4.2

Subjek Penelitian Sampel penelitian adalah tikus galur wistar (Rattus Norvegicus) jantan, umur 6-8

minggu, dengan berat rata-rata 150-200 gram, tampak sehat, tingkah laku normal (Kannan, 2009). Pemeliharaan hewan coba dilakukan dalam kandang yang bersih dengan sekam yang diganti setiap hari. Sampel penelitian dipilih berdasarkan ketentuan-ketentuan sebagai berikut : Kriteria Inklusi a. Jenis kelamin jantan b. Usia 6-8 Minggu c. Berat badan 150-200 gram d. Sehat ditandai dengan gerakan yang aktif, mata jernih, tampak sehat, tingkah laku 24

normal

e. Untuk kelompok yang sudah diinduksi diabetes harus memiliki kadar gula darah puasa lebih dari 250 mg/dL

19

20

Kriteria Eksklusi a. Tikus yang pernah digunakan dalam penelitian sebelumnya b. Tikus yang kondisinya menurun atau mati selama penelitian berlangsung c. Tikus yang setelah diinduksi STZ (Streptozotocin) tidak mengalami kenaikan gula darah lebih dari 250 mg/dL Tikus galur Wistar (Rattus Novergicus) dipilih sebagai sampel karena tikus tersebut merupakan

hewan

coba

yang

tergolong

jinak,

mudah

perawatannya,

dan

fungsi

metabolismenya mirip dengan manusia, serta luas penampang gingivanya lebih luas jika dibanding dengan mencit (Mus musculus albinus). Jumlah sampel yang digunakan memakai rumus : (t -1) (r-1) ≥ 15 (Hanafiah, 2005) t : jumlah perlakuan, r : jumlah sampel Pada penelitian ini t = 4 sehingga jumlah sampel adalah adalah: (4-1) (r-1) ≥ 15 r-1 ≥ 15:3 r ≥ 5+1 r≥6 Keterangan: t : Jumlah perlakuan dalam penelitian. r : Jumlah perlakuan ulang (sampel) Untuk 4 macam perlakuan diperlukan minimal sampel masing-masing 6 ekor dengan cadangan sampel 1 ekor tiap perlakuan sehingga total sampel yang digunakan adalah 28 ekor sampel. Kelompok perlakukan 1 dengan pemberian sondasi 100 mg/Kg BB dan Topikal 2,5 %.(w/w). Kelompok perlakuan 2 dengan pemberian sondasi 500 mg/Kg BB dan Topikal 5 %.(w/w).

4.3

Varibel Penelitian Variabel dalam penelitian ini dibagi menjadi 3 variabel, yaitu :

21

4.3.1

Variabel Bebas Ekstrak akar putri malu dengan dosis 100 mg/Kg BB dengan Topikal 2,5 % dan 500

mg/Kg BB dengan Topikal 5 % 4.3.2

Variabel Tergantung Ketebalan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva tikus galur wistar ( Rattus

novergicus). 4.3.3

Variabel Terkendali

a. Galur tikus

: Tikus putih (rattus norvegicus)

b. Umur tikus

: 3 bulan

c. Jenis kelamin tikus

: Jantan

d. Berat badan tikus

: 180 – 200 gram

e. Jenis makanan tikus

: Pellet broiler-11 dan air

4.4

Lokasi dan Waktu Penelitian

Pelaksanaan penelitian dilakukan pada Waktu

: Februari -April 2012

Tempat : Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya Malang

4.5

Bahan dan Alat Penelitian

4.5.1

Ekstraksi Akar Putri Malu

Bahan

:Bubuk Akar Mimosa Pudica, Metanol 96%

 Alat

:Oven, Timbangan, Gelas Elemeyer 2 Buah, Corong Gelas, Kertas saring, Labu evaporator, Labu penampung metanol, Evaporator, Pendingin spiral/ rotary evaporator , Selang water pump, Water bath, Water pump, Vaccum pump, Botol hasil ekstrak

4.5.2

Perawatan Hewan Coba

Bahan

: Sekam, Air, Pars untuk makanan tikus

 Alat

: Kandang dan tutup, botol minum hewan coba

22

4.5.3

Induksi Diabetes

Bahan

: STZ merek Nakalai, Aquadest , Asam Sitrat 0,1 M

 Alat

: Timbangan, Cawan Petri, Spuit Tuberkulin, Alkohol, Kapas, Indikator pH Universal 0-14

4.5.4

Pemberian Luka

Bahan : Alkohol, Ketamin, Novalgin, Povidone Iodine  Alat

: CC+ Files, Endoblock, Petridisk, Dappen Glass, Tip Aplikator, Periodontal Probe, Gunting, Kaca Mulut, Baskom, Filling instrument, Lampu meja, Kotak plastik, Dental Explorer, Pinset Dental, Cotton roll, Cotton pellet, Petri disk, Box alat, Kapas, Spuit tuberculin, sarung tangan, Jangka, Papan lilin, Tali, Pengait tali

4.5.5

Aplikasi Bahan Aktif

Bahan

: Topikal Basis Vaselin 2,5 % dan 5 % Mimosa pudicca

 Alat

: Kapas, Cutton bud, Tabel Evaluasi, Bolpoint

4.5.6 Bahan  Alat

Pembuatan Dosis Sonde dan Topical : Vaselin, Ekstrak Metanol Akar Putri Malu (Mimosa pudica), Normal

Saline

: Neraca timbangan, Spatula, Cawan porselen, Tabung Penyimpan ekstrak

23

4.6

Definisi Operasional 1. Ekstrak Akar Putri Malu (Mimosa pudica) adalah ekstrak

menggunakan metode

maserasi dengan pelarut metanol 96% sehingga diperoleh ekstrak kasar ( crude extract ). Akar Putri Malu (Mimosa pudica) adalah akar yang tertanam di bawah tanah dan berbentuk pena dan tunggal pada satu tanaman yang tumbuh di Dusun Ngepeh Desa Rejoagung Kecamatan Ngoro Kabupaten Jombang Jawa Timur yang sudah dideterminasi di Laboratorium Botani MIPA Universitas Brawijaya untuk memastikan spesies tanaman putri malu yang diambil merupakan spesies Mimosa pudica. 2. Hewan Coba yang dipakai adalah tikus wistar yang diperoleh dari STIH, Institut Teknologi Bandung. 3. Ketebalan epitel yang dimaksud adalah epitel yang terbentuk pada lapisan gingiva setelah dilakukannya tindakan kuret hingga batas tulang alveolar. Jika diberi pewarnaan HE dan diamati di bawah mikroskop, epitel akan berwarna merah keunguan. Perhitungan rata-rata epitel diambil dari sisi terluar hingga tulang alveolar dengan diambil diameter sebanyak 10 buah lalu dibagi 10 persampel. 4. Tikus dikategorikan diabetes dengan kadar gula darah puasa diatas 250 mg/dL

24

4.7

Alur Penelitian  Alur penelitian dijelaskan dalam bagan berikut. Aklimatisasi Selama 1 minggu

Pembagian Hewan Coba dalam 4 Kelompok

Induksi STZ untuk 3 Kelompok

K

K+

P1

P2

Tikus normal +

Tikus Diabetes +

Tikus Diabetes +

Tikus Diabetes +

Luka

Luka

Luka + dosis 2,5 %

Luka + dosis 5 %

(w/w) dan 100

(w/w) dan 500

mg/KgBB

mg/KgBB

Pengumpulan data pada hari ke 10  Analisis Data Gambar 4.1 Alur Penelitian 4.8

Ekstraksi Akar Putri Malu  Akar putri malu yang dipakai adalah akar yang diambil langsung dari tanaman putri

malu di dusun Ngepeh Desa Rejoagung Kecamatan Ngoro Kabupaten Jombang pada pagi hari. Akar yang diambil merupakan bagian dari tanaman Putri Malu ( Mimosa pudica) yang tertanam di bawah tanah dan berbentuk pena dan tunggal pada satu tanaman. Bahan baku berupa akar putri malu sebanyak 500 gram dibersihkan dari kotoran dengan cara direndam selama dua jam untuk meluruhkan sisa tanah, dicuci bersih dengan air mengalir, dan diulang sampai dua kali pembersihan. Akar putri malu di keringkan secara shadow drying   selama sepuluh hari, pada hari ke-11 akar dipotong kecil dan didapat berat kering 300 gram.

25

Sampel yang telah kering dan terpotong dihaluskan menggunakan penggiling sampai menjadi serbuk simplisia sebanyak 150 gram. Kemudian dilakukan penimbang 100gram serbuk akar Putri Malu dan dimasukkan dalam tabung elenmeyer ukuran 1 liter  lalu direndam metanol sebanyak 900mL. Setelah itu dikocok sampai benar-benar tercampur kurang lebih selama 30 menit dan didiamkan satu malam hingga mengendap. Lapisan atas campuran metanol dengan zat aktif yang sudah tercampur disaring menggunakan kertas saring, proses ini dilakukan sebanyak 3 kali, kemudian dimasukkan dalam labu evaporasi 1 liter yang terpasang pada evaporator. Water bath diisi dengan air hingga penuh dan dilakukan pemasangan semua rangkaian alat termasuk rotary evaporator . Suhu pemanas water bath diatur hingga mencapai 90 derajat celcius atau sama dengan titik didih pelarut. Kemudian water bath disambungkan dengan aliran listrik, ditunggu hingga aliran metanol berhenti menetes pada labu penampung sekitar 1,5 sampai 2 jam untuk satu labu, dengan ukuran 900mL. Hasil yang sudah diperoleh disimpan dalam lemari beku.

4.9

Pembuatan Dosis Sonde (Per Oral) dan Topikal

4.9.1

Dosis Sonde (Per Oral)

1. Melakukan penimbangan semua berat badan masing-masing tikus P1 (Perlakuan 1) dan P2 (Perlakuan 2), dan mencatat kebutuhan dosis masing-masing tikus sesuai dengan berat badannya. 2. Berat badan masing-masing tikus dibuat satuan Kilogram dan dikalikan dengan dosis 100mg/KgBB untuk kelompok perlakuan 1 dan 500mg/KgBB untuk kelompok perlakuan 2. 3. melarutkan dalam normal saline sebanyak 1 cc/hari/tikus dan pelarutan dosis dibuat untuk masing-masing tikus untuk keakuratan dosis

26

4.9.2

Dosis Topikal

1. Mengukur berat ekstrak metanol Akar Putri Malu (Mimosa pudica)  dan peroleum vaselin berbanding 5 : 95 (untuk dosis 5%) dan 5 : 190 (dosis 2,5%) dengan satuan berat (gram atau kilogram) 2. Mencampurkan masing-masing perbandingan sampai homogen dalam cawan petri 3. Memasukkan dalam tabung penyimpanan dan memberi tanda dan nama agar tidak tertukar. 4.10

Induksi Diabetes Proses induksi diabetes menggunakan Streptozotocin (STZ) dengan dosis 55

mg/KgBB. Dosis untuk semua sampel dihitung dan dipersiapkan dalam Spuit insulin. Pembuatan larutan STZ dilakukan sesaat sebelum dilakukan injeksi dengan cara menimbang STZ sesuai dengan hasil rumus perhitungan dosis total yang dibutuhkan, kemudian dilarutkan dengan aquadest . Selanjutnya dilakukan pengasaman dan pemberiaan asam sitrat per tetes sehingga didapatkan pH yang diinginkan antara 4-4,5 dengan alat ukur pH universal. Kandang dan Tikus dipersiapkan untuk mendapatkan induksi STZ. Hal pertama yang dilakukan adalah membersihkan 28 buah kandang dimana satu kandang akan ditempati satu kandang satu ekor tikus serta memberi label nama tikus pada kandang. Kemudian menyiapkan 21 ekor tikus yang telah dipuasakan sekurang-kurangnya 8 jam untuk dilakukan induk, dan diurutkan sesuai dengan label dosis. Tikus dipegang pada bagian leher

menggunakan kain hingga daerah peritoneal

terlihat, kemudian diaplikasikan alkohol dengan kapas pada daerah injeksi. STZ diinjeksikan secara intraperitoneal, dilakukan aspirasi dengan hati-hati untuk menghindari pembuluh darah dan kemudian didiponer. Setelah proses induksi diabetes selesai dilakukan, tikus diletakkan kembali pada kandangnya. Hal yang sama dilakukan pada semua sampel tikus diabetes.

27

4.11

Pengukuran Gula Darah Hewan Coba Pengukuran gula darah dilakukan 3 hari setelah induksi dan merupakan waktu

tercepat untuk mengukur kondisi hiperglikemi hewan coba. Pengukuran pada hewan coba yang belum diberi makan, kemudian diambil sampel darahnya dari bagian ekor dengan cara ditusuk mengunakan jarum steril untuk mengeluarkan darah. Darah diaplikasikan pada glucose strip dan dilihat hasilnya pada monitor. Evaluasi dilakukan pada setiap sampel tikus untuk melihat tingkat gula darahnya. Pada sampel tikus diabetes, hewan coba yang tidak berhasil mengalami peningkatan gula darah yang diinginkan, hewan coba di drop out. 4.12

Pemberian Luka Pada Hewan Coba Pemberian luka pada hewan coba dilakukan serentak dalam waktu yang berdekatan

selama dua hari berturut-turut pada 28 ekor tikus, dan dibedakan waktu sesuai hari pemberian luka. Pemberian luka dilakukan oleh dua orang yang sama pada setiap sampel untuk menjaga homogenitas kondisi luka dan ukuran luka. Sebelum dilakukan pemberiaan luka, tikus disiapkan dan dipastikan dalam kondisi sehat. Kemudian tikus dipindahkan pada tempat tanpa sekam sebagai terminal anastesi. Tikus diberi ketamin dan novalgin lalu ditunggu beberapa menit sampai tikus tidak bergerak dan tidak sadarkan diri. Setelah tikus kehilangan kesadaran segera dipindahkan dari terminal anastesi ke meja lilin sebagai meja operasi. Kedua tangan dan kaki tikus diikat untuk fiksasi posisi terlentang. Lampu meja difokuskan pada rongga mulut tikus, dan dilakukan pemberian luka dengan alat-alat dental yang sebelumnya telah diukur dengan endoblock  dan periodontal probe. 4.12.1 Langkah Kerja Pemberian Luka 1. Mengaplikasikan antiseptik ( povidone iodine) pada daerah operasi 2. Membuka akses luka menggunakan CC+ file pada bagian servikal gingiva dari sisi distal ke mesial hingga antara jaringan gigi dan gingiva. 3. Melakukan pembukaan kuret menggunakan dental eksplorer  dari sisi distal ke mesial di kedua sisi,serta memastikan jaringan interdental masih dalam keadaan utuh.

28

Dilakukan pembuatan kuret sedalam 7 mm, kemudian mencatat hasil pemberian luka dan mengukur menggunakan periodontal probe dan jangka. 4. Mengaplikasikan ekstrak berbentuk topikal dalam berbagai dosis (2,5% dan 5 %) menggunakan tip aplikator, kemudian memindahkan tikus pada tempat pasca operasi dan ditunggu hingga tikus sampai s adar kembali. 4.13

Aplikasi Bahan Aktif Pada Hewan Coba Pemberian bahan aktif kepada tikus perlakuan dilakukan setiap hari pada jam yang

sama dengan cara oral dan topikal, secara oral dilakukan pemberian dosis untuk P1 sebesar 100mg/KgBB dan P2 sebesar 500mg/KgBB dengan menggunakan sonde gastric. Untuk P1 dilakukan aplikasi topikal dengan dosis 2,5% (w/w) sedangkan untuk P2 sebanyak 5% dengan menggunakan tip applicator . 4.14

Pengambilan Sampel  Alat yang digunakan dalam pengambilan sampel yaitu scalpel no. 11, pinset, dan

tabung fiksasi yang sudah diberi label. Pengambilan sampel dimulai dengan euthanasia hewan coba dengan larutan eter dosis lethal . Sterilisasi scalpel menggunakan alcohol 70% dan penggunaan larutan formalin 10% untuk fiksasi setelah rahang bawah tikus diambil. Setelah difiksasi, rahang bawah tikus di d ekalsifikasi menggunakan larutan EDTA 14%. 4.15

Pemeriksaan Histologi Bahan-bahan yang digunakan untuk pemeriksaan histologi adalah HCL 5%; formalin

10%; amonium oksalat 1%; alkohol dengan konsentrasi 70%, 80%, 95%, dan 96% dengan prusi; larutan xylol; parafin; hematoksilin; air; aquadest ; dan eosin. Alat-alat yang digunakan dalam pemeriksaan histologi adalah gelas ukur, wadah plastik untuk membuang zat-zat pewarnaan, rotari mikrotom, object glass, cover glass, mikroskop cahaya, mikroskop Olympus photo slide BX51 dengan kamera DP71 12 megapixel.

29

4.16

Perawatan Hewan Coba Hewan coba selalu diawasi setiap hari dan diawasi secara ketat, karena hewan coba

berdiabetes mempunyai kerentanan kematian yang tinggi. Penggantian sekam, penggantian makan dan minum dilakukan setiap hari untuk menghindari infeksi dan kontaminasi,. 4.17

Analisis Data Data yang diperoleh sesuai dengan pembagian kelompok dianalisa menggunakan

program IBM SPSS Statistic 19.0 pada Microsoft Windows 7 dengan tingkat signifikansi 0.05 (p = 0,05) dan taraf kepercayaan 95% (α = 0,05) langkah uji hipotesis komparatif dan korelatif adalah sebagai berikut : 1. Uji normalitas Shapiro-Wilk Uji ini bertujuan untuk memperoleh sebaran data normal atau tidak. Karena pemilihan penyajian data dan uji hipotesis tergantung dari normal tidaknya distribusi data. Untuk penyeajian data yang terdistribusi normal, maka digunakan mean dan standart deviasi sebagai pasangan ukuran pemusatan dan penyebaran. Sedangkan untuk penyajian data yang tidak terdistribusi normal digunakan median dan minimum maksimum sebagai pasangan ukuran pemusatan dan penyebaran. Untuk uji hipotesis, jika sebaran data normal, maka digunakan uji parametric. Sedangkan jika sebaran data tidak normal digunakan uji non parametrik. 2. Uji Homogenitas varian dan Distribusi normal Uji ini bertujuan untuk mengetahui apakah data yang telah diperoleh memenuhi syarat untuk uji ANOVA, yaitu apakah data yang diperoleh dari setiap perlakuan memiliki varian yang homogeny. Jika didapatkan vaian yang homogeny, maka analisa dapat dilanjutkan dengan uji ANOVA. 3. Uji statistik dengan metode one-way ANOVA (analisa varian satu arah) Bertujuan untuk menilai apakah terdapat perbedaan yang bermakna dalam hasil antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan.

30

4. Uji Post Hoc Multiple Comparison Uji ini dilakukan untuk mengatahui kelompok mana saja yang berbeda secara bermakna. Apabila didapatkan p < 0,05, maka terdapat perbedaan yang bermakna. Sebaliknya, bila p > 0,05, maka tidak didapatkan perbedaan yang bermakna.

BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA

5.1

Hasil Penelitian Hewan coba pada penelitian ini dibagi menjadi 4 kelompok yang diberikan perlakuan

berupa induksi diabetes dengan streptozotocin kecuali kelompok pertama yang merupakan kelompok K negatif. Pemberian ekstrak metanol akar putri malu ( Mimosa pudica) pada kelompok P1 dengan dosis 2,5% (w/w) dan untuk kelompok P2 dengan dosis 5% (w/w) dan 500mg/KgBB. Kelompok K+ tidak dilakukan pemberiaan ekstrak metanol. Penentuan ratarata ketebalan epitel dilakukan secara manual dengan menghitung ketebalan epitel melalui preparat histologis di bawah pemeriksaan mikroskop dengan perbesaran 400x kemudian dirata-rata.

Gambar 5.1 : Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Kontrol negative Keterangan : Potongan melintang mandibula tikus kelompok kontrol negative yaitu tikus normal yang hanya dilakukan pemberian luka tanpa pemberian ekstrak akar putri malu dengan pengecatan HE dan pembesaran 200x. Gambaran mikroskopik pada tikus kelompok kontrol negative menunjukkan ketebalan epitel dalam jumlah yang normal.

31

32

Gambar 5.2 : Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Kontrol (+) Keterangan : Potongan melintang mandibula tikus kelompok kontrol positif yaitu tikus diabetes yang dilakukan pemberian luka tanpa pemberian ekstrak akar putri malu dengan pengecatan HE dan pembesaran 200x. Gambaran mikroskopik pada tikus kelompok kontrol positif menunjukkan ketebalan epitel yang lebih tipis secara signifikan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif.

Gambar 5.3 Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Perlakuan 1 Keterangan : Potongan melintang mandibula tikus kelompok perlakuan 1 yaitu tikus diabetes yang dilakukan pemberian luka dan pemberian ekstrak akar putri malu dosis oral 100mg/Kgbb/hari dan dosis topical 2,5% (w/w) dengan pengecatan HE dan pembesaran 200x. Gambaran mikroskopik pada tikus kelompok perlakuan 1 menunjukkan ketebalan epitel yang lebih tebal secara signifikan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol positif.

33

Gambar 5.4 Epitel Mukosa Oral Pasca Kuret Gingiva Kelompok Perlakuan 2 Keterangan : Potongan melintang mandibula tikus kelompok perlakuan 2 yaitu tikus diabetes yang dilakukan pemberian luka dan pemberian ekstrak akar putri malu dosis oral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topical 5% (w/w) dengan pengecatan HE dan pembesaran 200x. Gambaran mikroskopik pada tikus kelompok perlakuan 2 menunjukkan ketebalan epitel yang lebih tebal secara signifikan jika dibandingkan dengan kelompok kontrol positif, namun tidak memiliki perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan ketebalan kelompok kontrol negative.

Keterangan : Kontrol - : Tikus normal + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Kontrol+ : Tikus diabetes + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Perlakuan 1: Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 100mg/Kgbb/ hari dan dosis topikal 2,5% (w/w) Perlakuan 2 : Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topikal 5% (w/w) Gambar 5.5 Diagram Rerata dan Standar Deviasi Ketebalan Lapisan Epitel M asing  – Masing Kelompok

34

Tabel 5.1 Hasil Penghitungan Rerata Ketebalan Lapisan Epitel dan Standar Deviasi Ketebalan Epitel Masing-Masing Kelompok

Kelompok

Rerata

Standar Deviasi

Ketebalan Epitel Kontrol -

621,4840

167,81181

Kontrol +

198,0518

87,7485

Perlakuan 1

409,8590

96,61297

Perlakuan 2

429,3301

213,90345

Keterangan : Kontrol - : Tikus normal + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Kontrol+ : Tikus diabetes + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Perlakuan 1: Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 100mg/Kgbb/ hari dan dosis topikal 2,5% (w/w) Perlakuan 2 : Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topikal 5% (w/w) 5.2

Analisis Data Data mengenai pengaruh ekstrak akar putri malu terhadap peningkatan ketebalan

lapisan epitel mukosa oral tikus Rattus novergicus

model diabetes pasca kuret gingiva

dianalisis menggunakan analisis statistik SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 22.0 dengan metode uji statistika  Analysis of Variance (ANOVA) one-way. Hipotesis ditentukan melalui H0 diterima bila nilai signifikansi yang diperoleh >0.05, sedang H0 ditolak bila nilai signifikansi <0.05. H0 dari penelitian ini adalah tidak ada pengaruh dari perlakuan yang diberikan terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret pada tikus model diabetes. Sedangkan H1 adalah sekurang-kurangnya ada satu perlakuan yang memberikan pengaruh terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada tikus model diabetes. Sebelum melakukan analisa data dengan uji ANOVA, maka harus dipenuhi syarat-syarat dalam melakukan uji one-way ANOVA untuk lebih dari 2 kelompok data tidak berpasangan.

Syarat uji one-way ANOVA adalah populasi yang akan diuji terdistribusi

normal, varian dari populasi tersebut adalah sama (homogen) dan sampel tidak berhubngan dengan yang lain.

35

5.2.1

Uji Normalitas Data Uji statistik pertama bertujuan untuk menentukan normalitas data dengan

menggunakan uji Saphiro-Wilk (Lihat Lampiran) ,dimana suatu data dikatakan memiliki sebaran yang normal adalah ketika nilai signifikansi p>0.05 ( Dahlan, 2004). Berdasarkan pengujian normalitas yang telah dilakukan mendapatkan kesimpulan data memiliki sebaran normal (Kontrol –  p = 0,088; Kontrol+ p = 0,426; Perlakuan 1 p = 0,753; Perlakuan 2 p = 0,711) sehingga nilai p dapat diterima dan dapat ditarik kesimpulan bahwa data menyebar mengikuti sebaran normal. Dengan demikian syarat distribusi normal untuk uji One-way  ANOVA telah terpenuhi. 5.2.2

Uji Homogenitas Varian Setelah mengetahui bahwa data terdistribusi normal, selanjutnya menentukan

apakah data ketebalan lapisan epitel memiliki varian yang berbeda atau tidak dengan menggunakan uji homogenitas Levene (lihat lampiran ). Pada uji homogenitas Levene suatu data dikatakan memiliki varians yang normal bila nilai signifikansi p > 0,05 (Dahlan, 2004). Pada tabel uji homogenitas didapatkan bahwa data memiliki varian yang sama (p > 0,05) dengan nilai signifikansi p = 0,137. Dengan demikian maka analisa data dapat dilakukan dengan menggunakan uji One-way Anova. 5.2.3

Uji One-way ANOVA  Analisis menggunakan uji One-way ANOVA bertujuan untuk mengevaluasi

perbedaan ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva antar kelompok. Dengan dilakukannya uji ini maka akan dapat diketahui apakah terdapat perbedaan ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva antar kelompok. Perbedaan ratarata ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva dianggap bermakna apabila nilai

p < 0.05 atau dengan kata lain hipotesis null ditolak. Hipotesis null pada penelitian ini

adalah adalah tidak ada pengaruh dari perlakuan yang diberikan terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret pada tikus model diabetes.Dari hasil pengujian didapatkan p = 0,001 dan berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan sekurang-kurangnya ada satu

36

perlakuan yang memberikan pengaruh terhadap ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada tikus model diabetes. 5.2.4

Uji Post Hoc Multiple Comparison  Analisis mengenai perbedaan jumlah dari keempat kelompok dapat diketahui dalam

Post Hoc Multiple Comparison test. Metode Post Hoc   yang digunakan adalah uji LSD. Pada uji Post Hoc   LSD, suatu data dikatakan berbeda secara bermakna apabila nilai signifikansi p<0,05 serta pada interval kepercayaan

95% (IK 95%). Berdasarkan output uji tersebut

didapatkan hasil sebagai berikut :

Tabel 5.2 Hasil Uji Post Hoc Multiple Comparison Kontrol -

Kontrol +

Perlakuan 1

Perlakuan 2

Kontrol -

-

0,000*

0,029*

0,154

Kontrol +

0,000*

-

0,029*

0,004*

Perlakuan 1

0,029*

0,029*

-

0,396

Perlakuan 2

0,154

0,004*

0,396

-

Keterangan : *Nilai p < 0,05 = terdapat perbedaan yang signifikan antara 2 kelompok Kontrol - : Tikus normal + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Kontrol+ : Tikus diabetes + pemberian luka + tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Perlakuan 1: Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 100mg/Kgbb/ hari dan dosis topikal 2,5% (w/w) Perlakuan 2 : Tikus diabetes + pemberian luka + pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topikal 5% (w/w)

Berdasarkan table 5.2 tentang hasil Uji Post Hoc Multiple Comparison dapat diamati : 1. Kelompok tikus

diabetes yang tidak diberi ekstrak akar putri malu (Kontrol + =

198,051 + 87,748)

memiliki perbedaan ketebalan epitel yang signifikan

dibandingkan dengan kebetalan epitel pada kelompok tikus lain (Kontrol - = 621,48 + 167,81 ; Perlakuan 1 = 409,859 + 96,61; Perlakuan 2 = 487,92 + 228,48).

37

2. Kelompok tikus diabetes yang diberikan ekstrak akar putri malu dosis peroral 100mg/Kgbb/hari dan dosis topical 2,5% (w/w) (Perlakuan 1 = 409,859 + 96,61) memiliki perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan kelompok tikus normal tanpa pemberian ekstrak dan kelompok tikus diabetes tanpa pemberian ekstrak ( Kontrol - = 621,48 + 167,81 ; Kontrol + = 198,051 + 87,748), namun tidak memiliki perbedaan yang signifikan jika dibandingkan dengan kelompok tikus diabetes yang diberi ekstrak akar putri malu dengan dosis peroral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topical 5% (w/w) (Perlakuan 2 = 487,92 + 228,48). 3. Kelompok tikus diabetes yang diberikan ekstrak akar putri malu dosis peroral 500mg/Kgbb/hari dan dosis topical 5% (w/w) (Perlakuan 2 = 487,92 + 228,48) memiliki perbedaan yang signifikan apabila dibandingkan dengan kelompok tikus diabetes yang tidak diberi ekstrak akar putri malu (Kontrol + = 198,051 + 87,748), namun tidak memiliki perbedaan yang signifikan apabila dibandingkan dengan kelompok tikus normal tanpa pemberian ekstrak akar putri malu dan kelompok tikus diabetes dengan pemberian ekstrak akar putri malu dosis peroral 100mg/Kgbb/hari dan dosis topical 2,5% (w/w) (Kontrol - = 621,48 + 167,81; Perlakuan 1 = 409,859 + 96,61). Sehingga dapat disimpulkan bahwa terdapat perbedaan signifikan pada ketebalan epitel mukosa oral tikus apabila kelompok tikus diabetes tidak diberi ekstrak akar putri malu  jika dibandingkan dengan kelompok tikus yang lain.

BAB 6 PEMBAHASAN Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui efektivitas dari ekstrak metanol akar putri malu (Mimosa pudica) pada ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada tikus Rattus novergicus  model diabetes. Hasil penelitian pada tikus normal yang hanya dilakukan kuret gingiva tanpa pemberiaan ekstrak akar putri malu menunjukkan ketebalan epitel yang lebih tebal secara signifikan jika dibandingkan dengan kelompok tikus diabetes yang dilakukan kuret gingiva tanpa pemberian ekstrak akar putri malu Hasil tersebut sesuai dengan teori dimana keadaan hiperglikemia pada penderita diabetes mengakibatkan peningkatan AGEs. Ketika jumlah AGEs mengalami peningkatan akan mengakibatkan degradasi pada VEGFR2 sehingga stimulus yang diberikan oleh VEGF tidak akan maksimal dan berakibat pada terganggunya proses angiogenesis. Terganggunya proses angiogenesis akan menyebabkan penurunan produksi kolagen yang berdampak pada penurunan pembentukan epitel dan terlambatnya proses penyembuhan luka (Abiko & Selimovic 2010; Liu et al. 2012; Kolluru et al. 2012; Reinke & Sorg 2012) Hasil penelitian

pada kelompok yang dilakukan pemberian ekstrak metanol akar

putri malu (Mimosa pudica) dengan pemberian dosis

topikal 2,5 % (w/w) dan per oral

100mg/Kg BB pada serta dosis topikal 5% (w/w) dan peroral 500mg/KgBB terhadap peningkatan ketebalan lapisan epitel mukosa oral dibanding dengan kelompok tikus yang mengalami diabetes, dilakukan kuret gingiva dan tidak diberi dosis ekstrak. Hasil ini sesuai dengan teori bahwa kandungan saponin pada ekstrak akar putri malu (Mimosa pudica) memiliki efek yang sama dengan bFGF yang mampu membentuk tube formation dan meningkatkan ekspresi mRNA pada VEGF yang memiliki peranan penting pada proses induksi angiogenesis, sehingga pemberian ekstrak metanol akar putri malu yang memiliki kandungan saponin dapat mengatasi penurunan induksi VEGF pada keadaan diabetes. Peningkatan proses angiogenesis mampu mempercepat proses epitelisasi dan remodelling sehingga mampu meningkatkan ketebalan epitel (Lie et al , 2008; Gunawan, 2004). Dengan demikian pada penelitian ini hipotesis terbukti bahwa pemberian ekstrak

38

39

metanol akar putri malu dapat meningkatkan ketebalan lapisan epitel mukosa pasca kuret gingiva mukosa oral pada model tikus wistar diabetes.

BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN

7.1

Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan mengenai efektivitas ekstrak akar

putri malu pada ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes, maka dapat disimpulkan bahwa pemberiaan ekstrak akar putri malu dapat meningkatkan ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes. Selain itu dapat disimpulkan pula : 1. Ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada model tikus wistar diabetes tanpa pemberian ekstrak akar putri malu lebih tipis secara signifikan jika dibandingkan dengan lapisan epitel mukosa oral pasca kuret gingiva pada tikus normal tanpa pemberian ekstrak akar putri malu. 2. Ekstrak akar putri malu secara signifikan dapat meningkatkan ketebalan lapisan epitel mukosa oral pasca kure gingiva pada model tikus wistar diabetes. 7.2

Saran 1. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai jumlah dosis yang paling efektif terhadap peningkatan ketebalan lapisan epitel mukosa oral. 2. Perlu dilakukan penelitian terhadap zat yang terkandung dalam akar putri malu terkait dengan kadar ekstrak sehingga dapat diketahui dengan pasti mana saja zatzat yang bekerja lebih efektif. 3. Perlu dilakukan penelitian dengan penelitian jalur peroral tanpa pemberian topikal.

40

DAFTAR PUSTAKA

 Abiko Y & Selimovic d. The Mechanism of Protracted Wound Healing on Oral Mucosa in Diabetes. Bosnian Journal of Basic Medical Sciences , 2010; 10(3): 186-191.  Amirshahrokhi AR. (et al.).

Methadone ameliorates multiple-low-dose streptozotocin-

induced type1 diabetes in mice. Toxicology and Applied Pharmacology.   2008; 232: 119 –124.  Araujo M, Silva C, Misawa M. Alveolar Socket Healing : what can we learn ?. Periodontology 2000. 2015.  Avery, J.K. dan Chiego,D.J. 2006. Essentials of Oral Histology And Embryology: A Clinical  Aproach. 3 ed. By Mosby, Inc. Hal 177-183. Balogh, M.B. Fehrenbach, M.J. 2006.Dental Embryology, Histology, and Anatomy.Second Edition.Certified Medical Illustrator, AMI. Oak Park, Illinois. Hal 105-114. Bajaj S, Prasad S, Gupta A. Oral Manifestation in type-2 Diabetes and Related Complication. Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 2012. Bigagli E. (et al). Lipid and protein oxidation products,antioxidant status and vascular complications in poorly controlled type 2 diabetes . Br J Diabetes Vasc Dis. 2011;12:33-39. Brem H, Marjana T-C. Cellular and molecular basis of wound healing in diabetes . The Journal

of

Clinical

Investigation

Department  of  Surgery  Columbia University

2007.pg.1219-1222. Çimen K. Diabetic cardiovascular complications appear to be multifac-torial in origin, but in  particular, glycoxidative stress (GOS) has been

suggested to be the unifying link

between the various molecular dis-orders in DM . Cardiovasc Med J2010;4:240-56. Coskun O. (et al). Flavonoid Antioksidant, Prevents and Protects Streptozotocin-induced Oxidatives and β-Cell Damage in Rat Pancreas. phrs. 2004;06:002. Cotran RS, Kumar V, Collins T. Pathology basic of disease. 6 th  ed. Philadelphia: W B Saunders Co;1999 : 21-201

41

42

Chandna S, Bathla M, Madaan V, Kalra S. Diabetes mellitus- a risk factor for periodontal disease. Internet J Fam Practice : 2010 Christie J M, Chen G W. Secondary hyperalgesia is not affected by wound infiltration with bupivacaine. CJA.1993 ; 40 : 1034-37 Constantinnides P. General pathobiology. 1 st  ed. Appleton and Lange. Norwalk connecticut. 1994 : 173-186 Desta et al. Altered Fibroblast Proliferation and Apoptosis in Diabetic Gingival Wound. J Dent Res89(6):609-614, 2010 Drummond GR, Selemidis S, Griendling KK et al. Combating oxidative stress in vascular disease: NADPH oxidases as therapeutic targets . Nat Rev Drug Discov2011;10:45371. Eileen

T

.Collagen

and

the

phases

ofwound

healing .

Available

from:URL:

http://www.woundcare.org/news4/ar 2.htm 27. The scientific basis of wound healing.  Available from:URL:http:// www.woundscience.com Fragiskos FD. 2007. Oral Surgery . Berlin: Springer. George W et al. Wound healing.Textbook of surgery ; vol IA, New York Tokyo,

Oxford

University Press ;1994 ; 3 – 23 Guillausseau PJ, Meas T, Virally M et al.  Abnormalities in insulin secre-tion in type 2 diabetes mellitus. Diabetes Metab2008;34:S43-48.. Hammad et al. Effects of topikally applied agents on intra-oral wound healing in a rat model: a clinicaland histomorphometric study*. Journal compilation. I Blackwell Munksgaard. Int J Dent Hygiene9, 2011; 9 –16 Hollmann , Markus W, Durieux E, Local anesthetics and the inflammatory response : A new therapeutic indication ?. Anesthesiology. 2000; 93 : 858-75 Kannan S. (et al). Wound Healing Activity of Mimosa Pudica  Linn Formulation. Int.J. PharmTech Res. 2009; 1(4): 1554-1558. Kasper, Dennis (et al.). Harrison’s: Principles of Internal Medicine 16 th  Edition. New York: McGraw-Hill

43

Kruger DF. Exploring the pharmacotherapeutic options for treating type 2 diabetes. Diabetes Educ2008;34(suppl 3):60S-65S. Ladion HG. 1988. Tanaman Obat Penyembuh Ajaib.Bandung: Indonesia Publishing House. Lapolla A, Piarulli F, Sartore G et al.  Advanced glycation end products and antioxidant status in type 2 diabetic patients with and without peripheral artery disease. Diabetes Care2007;30:670-76. Lodovici M, Giovannelli L, Pitozzi V et al. Oxidative DNA damage and plasma antioxidant capacity in type 2 diabetic patients with good and

poor glycaemic control . Mutat

Res2008;638:98-102 Mannucci E, Monami M, Lamanna C et al. Prevention of cardiovascular disease through glycemic control in type 2 diabetes: a meta-analysis of randomized clinical trials. Nutr Metab Cardiovasc Dis2009;19:604-12. Mathew R et al; Connective tissue growth factor mediates transforming growth factor  βinduced collagen synthesis : down regulation by c AMP. FASEB J. 1999;13:177486 Mercandetti M, Cohen A. Wound healing, healing and repair . EMedicine ( cited 2002 Oct 7 ).  Available from: URL: http://www.eMedicine .com.Inc Miloro M, Ghali G, Larsen P. Peterson’s Principle of Oral and Maxillofacial Surgery. People’s Medical Publishing House. 2011. Nanci, A. 2008. Ten Cates Oral Histology: Development, Structure, and Function. By Mosby, Inc.,an affiliate of Elsevier Inc. Newman, M. G., Takei, H. H., & Carranza, F. A. Carranza’s Clinical Periodontology 12 th Ed . Elsevier. 2015 Patel A, MacMahon S, Chalmers J et al. Intensive blood glucose con-trol an vascular outcomes in patients with type 2 diabetes. N Engl J Med2008;358:2560-72. Paul J. (et al.). Wound Healing Evaluation of Chloroform and Methenolic Extracts of Mimosa Pudica Roots in Rats. Int J Biol Med Res. 2010; 1(4): 223-227.

44

Pradhan L (et al.) Wound-healing Abnormalities in Diabetes and New Therapeutic Interventions. Us Endocrine Disease 2007. Pg.68-72 Pu LJ, Lu L, Xu XW et al. Value of serum glycated albumin and high-sensitivity C reactive  protein levels in the prediction of presence of coronary artery disease in patients with type 2 diabetes, Cardiovasc Diabetol2006;5:27. Reinke J dan Sorg H. Wound Repair and Regeneration. European Surgical Reseaerch. 2012. Robertson RP, Harmon JS. Diabetes, glucose toxicity, and oxidative

stress: A case of

double jeopardy for the pancreatic islet beta cell . Free Radic Biol Med2006;41:177-84 Rosen JM. 2008. SOP: Hematoxylin and Eosin (H&E) Staining . Tersedia pada: [Diakses 9 Oktober 2011]. Sabiston CD. Wound healing : Biologic and Clinical Features . Textbook of Surgery The Biological Basis of Modern Surgical Practice,15thed .Philadelpia: WB Saunders Comp;1997; 207 – 219. Sharp A, Clark J(2011) Diabetes and its effects on wound healing . Nursing Standard. 25, 45, 41-47. Stephen E Abram. Pain pathways and mechanism. The pain clinic manom 2nd;2000: 19 -20 Sutar N. G. (et al.).  Antidiabetic of The Leaves of Mimosa pudica Linn In Albino Rats. Journal of Herbal Medicine and Toxicology 3. 2009;1:123-126. Tamilarasi T. (et al.). Phytochemical Analysis and Anti Microbial Activity of Mimosa pudica Linn. Research journal of Chemical Sciences . 2012; 2(2): 72-74. UK Prospective Diabetes Study (UKPDS) Group. Intensive blood-glucose control with sulphonylureas or insulin compared with con-ventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). Lancet1998;352:837-53. Varnika S. (et al.). A Review On Ethnomedical and Traditional Uses of Mimosa pudica. IRJP . 2012; 3(2).

45

Wild S. (et al.). Global Prevalence of Diabetes: Estimates for Year 2000 and Projections for 2030. Diabetes Care. 2004; 27:1047 –1053. Zhou T, Zhou KK, Lee K et al. The role of lipid peroxidation products and oxidative stress in activation of the canonical wingless-type MMTV integration site (WNT) pathway in a rat model of diabetic retinopathy . Diabetologia2011;54:459-68.

Lampiran 1

PERNYATAAN KEASLIAN TULISAN Saya yang bertandatangan di bawah ini: Nama

: Deddy Dwi Septian

NIM

: 105070400111033

Program Studi

: Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Brawijaya

menyatakan dengan sebenarnya bahwa Tugas Akhir yang saya tulisini benar-benar hasil karya saya sendiri, bukan merupakan pengambilan tulisan atau pikiran orang lain yang saya akui sebagai tulisan atau pikiran saya sendiri. Apabila di kemudian hari dapat dibuktikan bahwa Tugas Akhir ini adalah hasil jiplakan, maka saya bersedia menerima sanksi atas perbuatan tersebut. Malang, 7 Januari 2016 Yang membuat pernyataan

Deddy Dwi Septian NIM. 105070400111033

46

47

Lampiran 2

Data Hasil Penelitian

Tabel 1.Hasil Uji Normalitas Saphiro-Wilk Tests of Normality

Kolmogorov-Smirnova  Grup Epitel

Statistic

df

Shapiro-Wilk

Sig.

Statistic

df

Sig.

Kontrol -

,343

6

,026

,820

6

,088

Kontrol +

,242

6

,200*

,908

6

,426

Perlakuan 1

,216

6

,200*

,952

6

,753

Perlakuan 2

,226

6

,200*

,946

6

,711

*. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction

Tabel 2.Hasil Uji Homogenitas Levene

Test of Homogeneity of Variances

Epitel Levene Statistic 2,063

df1

df2 3

Sig. 20

,137

Tabel 3.Hasil Uji One-way ANOVA

ANOVA

Epitel Sum of Squares

df

Mean Square

Between Groups

565352,040

3

188450,680

Within Groups

487005,785

20

24350,289

1052357,825

23

Total

F 7,739

Sig. ,001

48

Tabel 4.Hasil Uji Post Hoc Multiple Comparison

Multiple Comparisons

Dependent Variable: Epitel LSD 95% Confidence Interval

Mean Difference (I) Grup

(J) Grup

Kontrol -

Kontrol +

423,43219*

90,09308

,000

235,5013

611,3631

Perlakuan 1

211,62494*

90,09308

,029

23,6941

399,5558

Perlakuan 2

133,55826

90,09308

,154

-54,3726

321,4891

Kontrol -

-423,43219*

90,09308

,000

-611,3631

-235,5013

Perlakuan 1

-211,80725*

90,09308

,029

-399,7381

-23,8764

Perlakuan 2

-289,87393*

90,09308

,004

-477,8048

-101,9431

Kontrol -

-211,62494*

90,09308

,029

-399,5558

-23,6941

Kontrol +

211,80725*

90,09308

,029

23,8764

399,7381

-78,06668

90,09308

,396

-265,9976

109,8642

Kontrol -

-133,55826

90,09308

,154

-321,4891

54,3726

Kontrol +

289,87393*

90,09308

,004

101,9431

477,8048

78,06668

90,09308

,396

-109,8642

265,9976

Kontrol +

Perlakuan 1

Perlakuan 2 Perlakuan 2

Perlakuan 1

(I-J)

Std. Error

Sig.

Lower Bound

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

Tabel 5 . Hasil Uji Korelasi Pearson Correlations

Dosis Dosis

Pearson Correlation

Epitel 1

Sig. (2-tailed) N Epitel

,237 ,459

12

12

Pearson Correlation

,237

1

Sig. (2-tailed)

,459

N

12

12

Tabel 6. Hasil Penghitungan Ketebalan Epitel Kelompok Kontrol – Sampel 1 2 3 4 5 6

Rerata Ketebalan 774,21991 726,38294 698,09145 708,77052 365,21678 456,22224

Upper Bound

49

Tabel 7. Hasil Penghitungan Ketebalan Epitel Kelompok Kontrol + Sampel 1 2 3 4 5 6

Rerata Ketebalan 137,96979 109,24098 345,28722 140,94793 214,46646 240,39831

Tabel 8. Hasil Penghitungan Ketebalan Epitel Kelompok Perlakuan 1 Sampel 1 2 3 4 5 6

Rerata Ketebalan 465,09392 356,22663 522,47734 472,87768 256,50191 385,9767

Tabel 9. Hasil Penghitungan Ketebalan Epitel Kelompok Perlakuan 2 Sampel 1 2 3 4 5 6

Rerata Ketebalan 873,2074 206,37471 605,75155 453,64018 375,2397 413,34072

50

Lampiran 3

FOTO KEGIATAN

Gambar 1. Aklimatisasi Hewan Coba

Gambar 2. Akar M i m o s a Pu d i c a

51

Gambar 3. S h a d o w D r y i n g Akar Putri Malu

Gambar 4. Bubuk Akar Putri Malu

Gambar 5. Perendaman Bubuk Akar Putri Malu Dengan Metanol

52

Gambar 6. Proses Ekstraksi Maserasi Metanol

Gambar 7. Pengurusan Ethical Clearance

Gambar 8. Proses Pemberian Luka (Pembukaan Akses)

53

Gambar 9. Proses Pemberian Ekstrak Berbentuk Topical dalam Berbagai Dosis (2,5 % dan 5 %)

Gambar 10. Proses Pemberian Luka (Pembukaan Kuret) Menggunakan Dental Explorer 

Gambar 11. Pemeriksaan Glukosa Darah Tikus Setelah Pemberian STZ