SENYAWA TANIN
Kelompok 4 Anggota Kelompok :
1.
Agnes Arnita M
NIM. 051211133090
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.
Binar Sufroun Nikmah Faza Fauziah Alvitariani Ika Putri Jami’atusholihah Jami’atusholihah Hegar Mohammad Rizky Moch. Hendra Firdaus Iftitahatur Rosyidah Kevin Rachmalia Nandia Nurrahmah Nurrahmah Fathori Fathori
NIM. 051411133011 NIM.
11. 12. 13. 14. 15.
Rebhika Lusiana Rosiana Noptah Palupi Shofi Ameliah Safitri Saras Damayanti Vinta Arnike
NIM. 051411131012 NIM. 051411133052 05141113 3052 NIM. 051411133056 05141113 3056 NIM. 051411133043 05141113 3043 NIM.
NIM. 051411133012 NIM. 051411133008 05141113 3008 NIM. 051411131072 05141113 1072 NIM. 051411131102 05141113 1102 NIM.
I.
Struktur Umum Tanin
Tanin berasal dari bahasa Celtic Celtic yang berarti kayu yang merupakan sumber tanin dalam pembuatan barang-barang barang-barang yang berbahan kulit. Tanin merupakan senyawa fenol yang memiliki berat molekul 500-3000 daltons (Da). Tanin diklasifikasi atas dua kelompok atas dasar tipe struktur dan aktivitasnya terhadap senyawa hidrolitik,yaitu tanin terkondensasi (condensed tannin) dan tanin yang dapat dap at dihidrolisis (hyrolyzable tannin) (Hagerman, 2002).
A = polyketide biosynthesis
B = phenylalanine
Inti utama pada tanin terkondensasi adalah flavan, tapi pada umumnya adalah flavan-3-ol. Flavan merupakan grup metabolit yang terdiri dari sistem cincin heterosiklik yang merupakan turunan pheyilalanine (ring B) dan polyketida (ring A). Penomorannya dimulai dari atom oksigen yang berada di cincin C dan seterusnya searah jarum jam menuju cincin A. Sedangkan untuk cincin B penomoran dimulai dari atom karbon yang berikatan dengan cincin C ( atom karbon no 2) penghitungannya searah se arah jarum jam.penulisannya diberi tanda aksen ( ‘ ).
II.
Penggolongan Tanin Secara Umum
Secara umum tanin dibagi menjadi tiga kelompok berdasarkan kandungan senyawa di dalamnya, yaitu: fenolik di 1. Tanin terkondensasi ( condensed tannin) Tanin terkondensasi terdistribusi lebih luas daripada tanin terhidrolisis. Tannin terkondensasi merupakan oligomer atau polimer dari flavonoid , misalnya flavan-3-ol, yang berikatan melalui ikatan C-C yang tidak mudah terhidrolisis. Golongan ini lebih tahan terhadap hidrolisa dibanding tanin terhidrolisa. Tanin terkondensasi tersebar luas di paku-pakuan, gymnospermae, dan angiospermae. Tanin terkondensasi merupakan kondensasi dari flavanol (flavan -3-ol). Yang mana terbagi menjadi dua : - Dalam bentuk cis disebut (-)-epicatechin - Dalam bentuk trans disebut (+)-catechin.
2. Tanin terhidrolisis (hydrolysable tannin) Berdasarkan strukturnya, tanin ini dibedakan menjadi dua kelas yaitu, gallotanin dan ellagitanin . Perbedaan struktur keduanya adalah adanya ester asam galat pada gallotanin dan ester asam heksahidroksidifenat (HHDP) pada ellagitanin. Kedua ester asam tersebut berikatan dengan glukosa. Ellagitanin yang dihidrolisis akan menghasilkan asam elagat. Oksidasi perangkaian (oxidative (oxidative coupling ) pada gugus galoil dari gallotanin akan menghasilkan ellagitanin. Ellagitanin tersebar secara tidak merata pada dunia tumbuhan. Ellagitanin hanya terdapat pada angiospermae, khususnya pada tumbuhan dikotil, terutama Hammamelidae, Dilleniidae, Rosidae, serta beberapa lainnya. Tanin jenis ini mudah terhidrolisis oleh asam atau basa atau enzimatis membentuk gallic atau asam ellagic.
3. Prototanin (Pseudotanin) Pseudotanin merupakan senyawa yang memiliki sifat mirip tanin (mampu mengikat protein, punya sifat sebagai antioksidan, astringensia dll) namun memiliki berat molekul yang lebih rendah daripada tanin umumnya dan struktur sedikit berbeda. Pseudotannin termasuk golongan senyawa fenolik sederhana. Pseudotanin banyak ditemukan dalam tanaman terutama pada jaringan dan sel-sel mati. Misalnya pada Mangrove cutches ( Rhizophora Rhizophora sp.), Butea gum ( Butea Butea frondosa), frondosa), Coffee (Coffee (Coffee arabica), arabica), Mate ( Ilex paraguansis), paraguansis), Rhubarb ( Rheum officinalis), officinalis), Catechu ( Acacia Acacia catechu), catechu), Cocoa (Theobroma (Theobroma cacao), cacao), dan Guarana ( Paullinia Paullinia cupana). cupana).
III.
Penomoran Golongan Tanin
A. TANIN TERKONDENSASI
Tanin terkondensasi (protoantosianidin) adalah Merupakan kondensasi dari flavanol (flavan-3-ol).
polimer
dari
flavonoid.
Tanin terkondensasi (Condensed tannin) dapat dibagi berdasarkankonformasi bentuknya menjadi dua macam: 1. Dalam bentuk cis disebut epicatechin 2. Dalam bentuk trans disebut catechin
Tannin terkondensasi disebut juga sebagai proanthocyanidin. Polimerisasi yang terdiri dari 1 – 5 unit disebut Oligomeric Proanthocyanidin Complexes (OPC) sedangkan unit > 5 disebut tannin. Tannin terkondensasi merupakan polimer dari flavan 3 ol dan ikatan ik atan antara flavan 3 ol bisa (C4-C6) atau (C4-C8) atau campuran diantara keduanya. Tanin terkondensasi dapat melalui ikatan karbon-karbon C8 dari terminal unit dengan C4 dari ekstender. Empat model pemasangan paling banyak muncul diilustrasikan dalam isolated dimers oleh Ann Hagermann dan dinamai (B1,B2, B3 dan B4)
Ekstender berada di posisi atas dan yang mengalami perpanjangan. Terminal berada di posisi bawah, sebagai penutup, dan berjumlah 1 buah.
Tabel 1. Rangkuman Pasangan oleh Ann Hagermann
Beberapa nama yang senyawa trivial dan Nomenclature
B. TANIN TERHIDROLISIS
Adalah senyawa ester dari asam dan alkohol, sebagai alkohol biasanya adalah gula (umumnya glukosa). Dapat dibagi menjadi 2 yaitu : 1. Gallotanin 2. Ellagitanin.
1. Gallotanin Merupakan jenis tanin terhidrolisis yang paling sederhana. Karena disusun oleh komponen sederhana dari polygalloiyl esters dari glukosa sederhana. Contohnya adalah pentagalloiyl esters glukosa (ß-1,2,3,4,6-O-D-glukopiranosa).
2. Ellagitanin. Kelompok elagitanin komponennya terdiri atas dua asam galat yang memiliki hubungan atom C dengan atom C, sedangkan glukosa dihubungkan dengan ester.
C. PSEUDOTANNIN / KOPLEKS TANIN
Pseudotannin merupakan tannin dengan berat molekul rendah yang berikatan dengan komponen lain. Merupakan modifikasi dari asam gallat, intinya terdiri dari asam shikimat dan asam kuinat. Sedangkan asamnya dapat berupa : asam fumarat, kafeat, pelulat
Tannins: Classification and Karamali K and Van Ree Teunis, Department of Chemistry, University of Venda, Thohoyandou, Republic of South Africa 4th June 2001 Tannins: Classification and Definition. Karamali K and Van Ree Teunis, Department of Chemistry, University of Venda, Thohoyandou, Republic of South Africa 4th June 2001
IV.
A.
Penamaan pada Masing-masing Golongan (Pengaruh Gugus Hidroksi)
Tanin terkondensasi (Proantocyanidin)
Karena dalam biosintesanya dijumpai senyawa katekin dan flavan-3,4-diol sebagai bentuk antara, maka tanin terkondensasi ada hubungan dengan pigmen flavonoid. Senyawa ini oleh asam atau enzim akan terurai menjadi komponen merah yang tidak larut, sedangkan jika tanin terkondensasi dihidrolisis akan menjadi phlobaphenes. Sehingga golongan ini juga
disebut sebagai plobatanin. Selain itu, karena pada destilasi kering menghasilkan katekol maka senyawa tanin ini dikenal sebagai katekoltanin Penambahan gugus fenol ketiga pada cincin B menghasilkan epigalokatekin dan galokatekin.
(1) 2R, 3S-Flavan-3-ol
(2) 2R, 3R-Flavan-3-ol
(+)-Afzelechin
R1,R2=H
(-)-Epiafzelechin
R1,R2=H
(+)-Catechin R2=H
R1=OH,
(-)-Epicatechin
R1=OH, R2=H
(-)-Epigallocatechin R1,R2=OH
(3) 2S, 3R-Flavan-3-ol
(4) 2S, 3S-Flavan-3-ol
(-)-Afzelechin
R1,R2=H
(+)-Epiafzelechin
R1,R2=H
(-)-Catechin
R1=OH, R2=H
(+)-Epicatechin
R1=OH, R2=H
(-)-Gallocatechin R1,R2=OH
(+)-Epigallocatechin R1,R2=OH
Tanin terkondensasi ditandai dengan adanya ikatan karbon-karbon yang dihubungkan melalui ikatan karbon C8 terminal unit dan C4 dari ekstender. Ekstender berada di posisi atas dan yang mengalami perpanjangan. Sedangkan terminal berada di posisi bawah, sebagai penutup, dan berjumlah 1 buah.
Empat mode umum dari pasangan itu diilustrasikan sebagai dimer terisolasi oleh Haslam, dan awalnya bernama B-1, B-2, B-3 dan B-4. Selain itu terkait dimer yang dihubungkan oleh C6 unit terminal dan C4 dari perpanjangantelah diisolasi. Terdapat empat pola polimerisasi menurut Ann Hagermann yaitu: Ekstender
Terminal
Gambar
Cis
Trans
B1
Cis
Cis
B2
Trans
Trans
B3
Trans
Cis
B4
Procyanidin memiliki beberapa tipe polimerisasi, yaitu:
Tanin terkondensasi dapat terbentuk dari hasil polimerisasi yang terjadi pada ikatan 4,8 seperti pada Sorghum procyanidin. Polimer yang memiliki ikatan 4,6 atau ikatan 4,6 dan 4,8 sekaligus jarang ada.
Sorghum procyanidin epicatechin-[(4β ->8)-epicatechin]15-(4β ->8)-catechin
Walaupun istilah tannin terkondensasi luas digunakan untuk menunjukkan polifenol dari flavonoid, secara struktur istilah proanto sianidin lebih banyak diterima. Proanto sianidin adalah komponen yang menghasilkan pigmen anthocyanidin melalui proses oksidasi (bukan hidrolisis), misalnya melalui reaksi kimia asam butanol. Proantosianidin sering disebut tannin terkondensasi karena struktur kimianya terkondensasi. Proantosianidin dapat terdiri dari 2 – 50 unit flavonoid dan Proanthocyanidin mempunyai struktur kompleks karena unit flavonoid yang menyusunnya dapat berbeda pada beberapa substituen dan letak dari ikatan antarfalavannya. Proantosianidin dapat larut atau tidak larut dalam pelarut organik yang mengandung air tergantung pada struktur kimia dan polimerisasinya. Polimer dari katekin dan epikatekin menghasilkan sianidin sehingga dinamakan dengan prosianidin. Polimer dari galokatekin dan epigalokatekin menghasilkan delfinidin. Polimer dari flavan-3-ol yang mempunyai monosubtitusi yang biasanya jarang menghasilkan pelargonidin.
Terkadang flavan-3,4-diols atau leukoantosianidin dibingungkan dengan proantosianidin. Flavan-3,4-diols atau leukoantosianidin (perlu dibedakan dengan proantosianidin) adalah monomer flavonoid yang menghasilkan antosianidin ketika dipanaskan dalam asam. Secara kimia sama dengan tanin terkondensasi tetapi senyawa ini tidak berinteraksi dengan protein membentuk komplek yang mengendap.
Kelompok yang penting pada tanin terkondensasi adalah polimer dari 5-deoksi-flavan-3-ols, percabangan biasanya umum pada tanin ini disebabkan oleh reaktivitas dari cincin 5-deoksi. Flavan-4-ols juga merupakan leucoanthocyanidins, tetapi labilitasnya unik. Flavan-4-ols menghasilkan anthocyanidins dengan penambahan asam alkohol pada suhu kamar.
B.
TANIN TERHIDROLISIS
Tanin terhidrolisis adalah turunan dari asam galat (3,4,5-trohidroksi asam benzoat). Asam galat diesterifikasi menjadi inti polyol dan gugus galoyl dapat diesterifikasi atau dioksidasi lebih lanjut secara silang menjadi tanin terhidrolisis yang lebih kompleks sedangkan sebagai alkohol adalah gula (umumnya glukosa) atau asam yang lebih lemah dari asam satunya. Tanin terhidrolisis dapat juga disebut pyrogallol tanin karena pada destilasi kering, asam galat dan turunan-turunannya dirubah menjadi pyrogallol. Pemerian senyawa tannin terhidrolisis adalah berbentuk amorf kuning-coklat, larut dalam air panas membentuk dispersi koloidal dan akan terbentuk warna biru jika direksikan dengan ferrichlorit. Kadar tanin terhidrolisis cukup rendah dalam tanaman. Selain itu tanin golongan ini juga terhidrolisis oleh adanya enzim misalnya oleh enzim tannase.Tanin terhidrolisa dibedakan menjadi dua yaitu: Gallotanin dan Elagitanin. a. Gallotanin
Gallotanin merupakan bentuk paling sederhana dari tanin terhidrolisis yang merupakan ester polygalloyl sederhana dari glukosa. Bentuk awal dari gallotanin adalah glukosa pentagalloyl (β-1,2,3,4,6-pentagalloyl-o-D-glucose). Gallotanin terbentuk dari ikatan antara asam galat (G) dengan O dari alkohol (gula) (ikatan G-O) yang dihubungkan oleh ester
dari asam galatnya.Pentagalloyl glukosa
(PGG) memiliki 5 cincin ester yang identik dan melibatkan kelompok hidroksil
alifatis dari inti gula. PGG rentan mengalami hidrolisis dan memiliki kemampuan untuk mengendapkan protein.
PGG dapat dibuat dari beberapa asam tannin komersial melalui metanolisis dalam dapar asetat. Supaya preparasi berhasil, asam tannin harus mempunyai PGG sebagai inti ester, seperti pada preparasi Chinese atau Sumac gallotannin.
Kebanyakan gallotanin polyol
glukosa berupa
lainnya
alkohol, termasuk
glucitol, hammamelose, asam shikimat, asam quinat dan quercitol. Contoh lain dari gallotanin adalah 3,5-Di-O-
galloyl-4-O-digalloylquinic (Anacardiaceae),
dan
acid
yang
diperoleh
dari Rhus
1,2,3,4-Tetragalloyl-α-D-glukosa
variegatum (Nymphaceae).
yang
semialata
terdapat
dari
b. Elagitanin
Kopling oksidatif dari gugus galoll dapat mengubah tanin galat menjadi tanin elagat. Tanin elagat sederhana adalah ester dari asam hexahydroxydiphenat (HHDP).
HHDP
secara
spontan
mengalami laktonisasi menjadi asam ellagat dalam larutan encer.
Pasangan karbon-karbon intramolekular dari HHDP kebanyakan terletak antara C-4/C-6 (contohnya pada euginin), dan C-2/C-3 (contoh : casuarictin, juga pada C-4/C-6), seperti pada polygalloyl glukosa yang diinginkan pada konformasi 4C1 agar lebih stabil. Namun, pada
beberapa tanaman
pasangan karbon
intramolekularnya terletak pada C-3/C-6 (contoh : corilagin), lalu pada C-2/C-4 (contoh : geranin, juga pada C-3/C-6), dan juga pada C-1/C-6 (contoh : davidin), menunjukan bahwa pada konformasi 1C4 polygalloyl glukosa mulai berada dalam keadaan tidak stabil. Untuk selanjutnya pada geranin terjadi oksidasi parsial pada C-2/C-4 HHDP menjadi dehydro-HHDP, dan pada larutan encer beberapa bentuk dari dehydro-HHDP dapat dideteksi dalam geranin oleh NMR.
Ellagitanin
juga
dapat
terbentuk
melalui
cincin
pembukaan. Contohnya terjadi pada family asuarin, casuarinin, castalgin, castlin, stachyurin, vescalagin dan bentuk vescalin.
Selain itu, ellagitannin dapat mengalami oksidasi berpasangan intermolecular dengan tannin terhidrolisa yang lain dan membentuk dimer. Misalnya, pada beberapa
tanaman
euforbs
(contohnya Euphorbia
watanabei)
geraniin
terkondensasi oksidasi dengan PGG membentuk euphrobins yang bervariasi, terkarakterisasi oleh gugus valoneoyl. Oenothein B, Woodfordin C, Cuphiin D1 dan Eugeniflorin D1 adalah makrosiklik dimer yang dihubungkan oleh dua kelompok valoneoyl. Sedangkan nobotanin termasuk makrosiklik trimer.
C. PROTOTANIN (Pseudotanin)
Pseudotanin merupakan modifikasi dari asam gallat, intinya terdiri dari asam shikimat dan asam kuinat. HO O HO OH HO
shikimic acid
Asamkuinat
V.
Kandungan Tanin pada Beberapa Organ Tanaman
Lokasi Tannin di Jaringan Tumbuhan :
1. Bud tissues – paling banyak terletak di bagian luar dari jaringan tunas. Tannin di sini berfungsi sebagai proteksi terhadap dingin. 2. Leaf tissues – paling banyak terletak di bagian atas epidermis, namun pada tamanan evergreen (tanaman yang sepanjang tahun daunnya berwarna hijau), tannin terdistribusi merata pada seluruh jaringan daun. Tannin ini berfungsi untuk mereduksi palatabilitas dan sebagai proteksi dari predator. 3. Root tissues – paling banyak terletak di bagian hypodermis (bawahnya epidermis). Tannin pada root tissues ini berfungsi sebagai chemical barrier terhadap penetrasi dan kolonisasi akar oleh tumbuhan pathogen. 4. Seed tissues – berlokasi di lapisan antara outer integument dan lapisan aleuronic. Tannin dalam seed tissues ini dapat membunuh bakteri karena memiliki allophatic dan bactericidal properties. 5. Stem tissues – sering ditemukan di area pertumuhan aktif dari pohon, seperti floem sekunder dan xylem, dan lapisan antara epidermis dan cortex. Tannin dapat memiliki peran dalam regilasi pertumbuhan jaringan-jaringan. Mereka juga dapat berkontribusi dalam sistem pertahanan (daya tahan) dari kayu dengan cara menghambat aktivitas mikroba.
Sumber Tanin
Tanin dalam Makanan dan Minuman
1. Teh : pohon teh (Camelilla sinensis) merupakan contoh tumbuhan yang memiliki kandungan tanin dengan kadar alami yang tinggi. Ketika daun teh dimasukkan ke dalam air panas maka akan memberikan efek rasa astringen yang karakteristik pada senyawa tanin. Hal ini disebabkan karena adanya katekin dan flavonoid lainnya. Tanin dari teh secara kimia berbeda dari tanaman lain seperti tannin acid, dan menurut penelitian ekstrak teh tidak memiliki kandungan tannic acid. 2. Wine : tanin (terutama tanin terkondensasi) juga ditemukan dalam wine, lebih tepatnya red wine. Tanin dalam wine berasal dari berbagai sumber dan rasanya berbeda tergantung sumbernya. Wine pada tanin dapat berasal dari kulit anggur, batang, dan biji. Ekstraksinya sangat tergantung dengan proses pembuatan wine yang dilakukan. Faktor yang rumit adalah susunan kimia tanin dapat berubah pada proses pembuatan wine. Bukan hanya panjang rantainya, tapi entitas kimia yang menempel pada subunit fenolat juga berubah. Studi baru pada produksi dan konsumsi winemenunjukkan bahwa tanin dalam bentuk proanthocyanidins memiliki manfaat pada kesehatan vaskular.Dikatakan bahwa tanin mensupresi produksi dari peptide yang mengeraskan arteri. Untuk menguatkan penemuan tersebut, dikatakan bahwa wine yang berasal dari southwest france dan sardinia kaya akan proanthocyanidins dan populasi orang yang hidup di daerah tersebut memiliki harapan hidup yang lebih panjang. 3. Beer: jumlah kandungan tannin di dalam beer tergantung pada kualitas ragi yang digunakan dan factor lain. Semakin pahit beer, maka semakin banyak kandungan tannin yang terkandung. Semakin tidak pahit, semakin dikit tannin yang terkandung.1
1
Ashok, Praveen Kumar. 2012. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry. Faculty of Pharmacy Kuman University India. p 45.
1. Tannin Terkondensasi Contoh : A. Camellia sinensis ( Theaceae) Bagian daun teh mengandung EGCG Kegunaan : Penghasil warna coklat
B. Rubus idaeus (Rosaceae) Bagian daun raspberry mengandung Procyanidin B4 Kegunaan : Astrigensia
C. Vitisvinifera PadakulitdanbijimengandungProcyanidin
2. Tannin Terhidrolisis
Gallotannin
A. Acer ginnala (Lauraceae) Bagian daun tumbuhan acer maple mengandung acertannin Kegunaan : B. H amamelis virgi niana (Hamamelidaceae) Bagian bark dari tumbuhan american witch hazel mengandung hamamellitannin Kegunaan : Antiviral
C. Poupartia fordii (Anacardiaceae) Pada bagian daun tumbuhan ini mengandung corilagin Kegunaan : Antihepatotoksik
D. Phyllanthus emblica (Phyllanthaceae) Bagian buah dari tumbuhan malaka ini mengandung asam chebulinat Kegunaan : Antioksidan
E . Nuphar japonicum (Nymphaeaceae) Bagian daun dari tumbuhan ini mengandung pentagalloyl-β-D-glucose Kegunaan : Anti HIV
Ellagitannin
A. Liquidambar formosana(Hamamelidaceae) Pada bagian daun tumbuhan ini mengandung cassuarinin Kegunaan : Antioksidan
B. Punica granatum (Punicaceae) Pada buah tumbuhan delima mengandung punicalagin Kegunaan : Antioksidan
C. Mallotus japonicus (Euphorbiaceae) Pada daun tumbuhan ini mengandung asam mallotusinat Kegunaan : Obat tukak lambung
3. Prototanin (Pseudotanin) A. Phyllostachys edulis(Poaceae) Pada bagian tunas tanaman mengandung Asam Kloregenic
Chlorogenic Acid (1S,3R,4R,5R)-3-{[(2Z)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)prop-2enoyl]oxy}-1,4,5-trihydroxycyclohexanecarboxylic acid
B. Areca catechu (Araucariaceae) Pada bagian biji tanaman mengandung catechin
VI.
Sifat fisika kimia masing-masing golongan tanin (polaritas, kelarutan, pengaruh asam, pengaruh basa)
1) Sifat tanin secara umum
Sifat Kimia Tannin 1) Tannin memiliki sifat umum, yaitu memiliki gugus phenol dan bersifat koloid, sehingga jika terlarut dalam 2) air panas. Begitu juga tannin akan larut dalam pelarut organic seperti metanol, etanol, aseton air bersifat koloid dan asam lemah. 3) Umumnya tannin dapat larut dalam air. Kelarutannya besar dan akan meningkat apabila dilarutkan dalam dan pelarut organic lainnya. 4) Tannin akan terurai menjadi pyrogallol, pyrocatechol dan phloroglucinol bila dipanaskan sampai suhu 210oF - 215oF (98,89oC-101,67oC) 5) Tannin dapat dihidrolisa oleh asam, basa, danenzim. 6) Ikatan kimia yang terjadi antara tannin-protein atau polimer-polimerlainnya terdiri dari ikatan hidrogen, ikatan ionik, dan ikatan kovalen.
Sifat Fisik Tannin 1) Umumnya tannin mempunyai berat molekul tinggi dan cenderung mudah dioksidasi menjadi suatu polimer, sebagian besar tannin bentuknya amorf dan tidak mempunyai titik leleh. 2) Tannin berwarna putih kekuning-kuningan sampai coklat terang, tergantung dari sumber tannin tersebut. 3) 5) 3) Tannin berbentuk serbuk atau berlapis-lapis seperti kulit kerang, berbau khas dan mempunyai rasa sepat (astrigent). 4) Warna tannin akan menjadi gelap apabila terkena cahaya langsung atau dibiarkan di udara. 5) terbuka Tannin mempunyai sifat atau daya bakterostatik, fungistatik dan merupakan racun.
2) Sifat Tanin Berdasarkan Golongan
Tanin diklasifikasikan dalam dua kelas, yaitu: 1. Condensed Tannin Tanin jenis ini biasanya tidak dapat dihidrolisis, tetapi dapat terkondensasi menghasilkan asam klorida. Tanin jenis ini kebanyakan terdiri dari polimer flavonoid yang merupakan senyawa fenol. Berbentuk Kristal amorf hidroskopik bewarna coklat kekuningan. Tanin jenis ini, larut dalam air basa encer, alkaloid dan aseton, larutan akan mengendap dengan penambahan logam berat, alkaloid, glikosida dan gelatin. Contoh: katekin, proantocyanidin Salah
satu
contoh
dari
condensed
tannin
adalah
proantocyanidin.
Proantocyanidin dengan penambahan pelarut asam kuat dan suhu tinggi, beberapa karbon yang berikatan menjadi patah lalu terbentuk antosianidin (monomer). 2. Hidrolisable Tannin , Tanin jenis ini adalah tanin yang terhidrolisis dalam air. Tanin terhidrolisis biasanya berikatan dengan karbohidrat dengan membentuk jembatan oksigen, maka dari itu tanin ini dapat dihidrolisis dengan menggunakan asam sulfat atau asam klorida. Senyawa golongan ini dapat terpecah menjadi asam galic jika dilarutkan dalam air. Tanin terhidrolisis biasanya berupa senyawa amorf, higroskopis, berwarna cokelat kuning yang larut dalam air (terutama air panas) membentuk larutan koloid bukan larutan sebenarnya. Makin murni tanin, makin kurang kelarutannya dalam air dan makin mudah diperoleh dalam bentuk kristal. Tanin jenis ini memiliki kemampuan untuk menjadi pengkhelat logam. Contoh: galotanin, caffetanin, ellagutanins
Salah satu contoh Hidrolisable Tannin yaitu Ellagitanin sederhanayang disebut
juga ester asam hexahydroxydiphenic (HHDP). Senyawa ini dapat terpecah menjadi asam galic jika Potensidanpeluangtanamanobat. Jakarta.
VII.
Bioaktivitas masing-masing golongan tanin
Tanin merupakan senyawa aktif metabolit sekunder yang diketahui mempunyai beberapa khasiat yaitu sebagai astringen, anti diare, anti bakteri, antidotum, antitumor dan antioksidan. Tanin merupakan komponen zat organik yang sangat kompleks, terdiri dari senyawa fenolik yang sukar dipisahkan dan sukar mengkristal, mengendapkan protein dari larutannya dan bersenyawa dengan protein tersebut (Desmiaty et al., 2008). Tanin dibagi menjadi dua kelompok yaitu tanin terhidrolisis dan tanin terkondensasi. Tanin memiliki peranan biologis yang kompleks mulai dari pengendap protein hingga pengkhelat logam. Tanin juga dapat berfungsi sebagai antioksidan biologis (Hagerman, 2002). Bebeaapa Tanin tertentu dapat menghambat selektivitas replikasi HIV dan juga digunakan sebagai diuretic (Heslem, 1989). Tanin yang terkandung dalam minuman seperti teh, kopi, anggur, dan bir memberikan aroma dan rasa sedap yang khas. Di dalam tumbuhan letak tanin terpisah dari protein dan enzim sitoplasma, tetapi bila jaringan rusak, misalnya bila hewan memakannya, maka reaksi penyamakan dapat terjadi. Reaksi ini menyebabkan protein lebih sukar dicapai oleh cairan pencernaan hewan. Pada kenyataanya, sebagian besar tumbuhan yang banyak bertanin dihindari oleh hewan pemakan tumbuhan karena rasanya yang sepat, sehingga salah satu fungsi utama tanin dalam tumbuhan ialah sebagai penolak hewan pemakan tumbuhan. Berikut ini adalah aktivitas biologi tannin dalam tubuh manusia : Astrigensia
Bahan kunyahan seperti gambir (salah satu campuran makan sirih) memanfaatkan tanin yang terkandung di dalamnya untuk memberikan rasa kelat ketika makan sirih. Sifat pengelat atau pengerut(astringensia) itu sendiri menjadikan banyak tumbuhan yang mengandung tanin dijadikan sebagai bahan obat-obatan. Senyawa tanin sebagai astringent, yaitu melapisi mukosa usus, khususnya usus besar dan menciutkan selaput lendir usus, misalnya asam samak. Antidiare
Antiinflamasi pada saluran pencernaan bagian atas, Tanin digunakan untuk obat diare (antidiare) karena inflamasi saluran gastro intestinal. Anti Bakteri dan Anti Virus
Tanin yang terkandung dalam teh memiliki korelasi yang positif antara kadartanin pada teh dengan aktivitas antibakterinya terhadap penyakit diare yang disebabkan oleh Enteropathogenic Esclierichia coli (EPEC) pada bayi. Hasil penelitian Yulia (2006) menunjukkan bahwa daun teh segar yang belum mengalami pengolahan lebih berpotensi
sebagai senyawa antibakteri, karena seiring dengan pengolahan menjadi teh hitam,aktivitas senyawa-senyawa yang berpotensi sebagai antibakteri pada daun teh menjadi berkurang. Pengujian aktifitas anti-mikrobia terhadap Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, Tricophyton mentagrophytes, T. rubrum, T. tonsurans, T. terreste, Penicillium italicum, Aspergillus fumigatus, Mucor racemosus, Rhizopus nigricans, Candida albicans, C. glabrata, Candidata krussei, dan Cryptococcus neofarmans, menunjukkan bahwa senyawa-senyawa tannin terhidrolisiskan dan flavonoid memiliki variasi aktifitas yang berbeda-beda tergantung jenis senyawa d an jenis mikrobia sasaran. Aktifitas anti-virus dari ekstrak tannin pada tumbuhan diketahui penghambatan pertumbuhan virus HIV-1. Salah satu senyawa tannin yaitu Ellagitanin yang telah lebih dulu diketahui mempunyai aktifitas anti-HIV adalah nobotanin B dan C, oenothein B, agrimonii, coriariin A dan trapanin B (Okuda et al dalam Hernawan., 1992). Ekstrak kemloko (Phyllantus emblica; Euphorbiaceae) juga berpotensi sebagai anti-HIV (Ogata et al. dalam Hernawan, 1992) Buah kemloko merupakan salah satu bahan ramuan obat tradisional “triphala” dari India, mengandung beberapa ellagitanin yang berpotensi sebagai anti-HIV/AIDS. Putranjivain A memberikan efek penghambatan HIV yang paling tinggi. Putranjivain A mampu menghambat kerja enzim riverse-transcriptase yang berperan penting dalam proses replikasi HIV (Wohlmuth dalam Hernawan, 2003). Ellagitanin yang terkandung dalam tumbuhan kemloko diperkirakan mampu menghambat pertumbuhan virus hepatitis B (Taylor dalam Hernawan, 2003). Aktifitas anti-virus juga didapatkan pada tumbuhan Geranium sanguineum L. (Geraniaceae). Ekstrak daun Geranium yang mengandung kompleks polifenol, meliputi ellagitanin, gallotanin, flavonoid, dan asam fenolat dapat menghambat aktifitas reproduksi virus influenza dan herpes (Serkedjieva dan Manolova dalam Hernawan, 1992). Antidotum
Aktivitas biologi Tanin pada keracunan alkaloid sebagai penyerap racun (membentuk tannat yang mengendap) Antitumor/Antikanker
Kanker adalah sekumpulan sel yang mengalami pertumbuhan tak terkendali dan tak terorganisir. Di dalam tubuh sel kanker membentuk suatu badan yang disebut tumor. Kanker dapat timbul karena terjadinya kerusakan (lebih tepatnya mutasi) gen dalam sel (Snustad dan Simmon dalam Hernawan, 2000). Aktifitas anti-kanker suatu tanin terjadi melalui mekanisme penghambatan kerja enzim sel, pencegahan proses mutagenesis yang dapat menimbulkan kanker, dan pengaktifan makrofag sel kanker
Antioksidan Biologis
Anti-oksidan merupakan senyawa yang jika berada pada konsentrasi yang relatif lebih rendah dibandingkan konsentrasi suatu subtrat, maka akan teroksidasi lebih dulu, sehingga dapat mencegah terjadinya oksidasi subtrat tersebut. Tanin dapat menghambat pembentukan oksigen aktif yang dapat menyebabkan oksidasi. Baik gallotanin mau pun ellagitanin, merupakan senyawa anti-oksidan yang cukup berpotensi (Rauha, 2001; Okuda et al dalam Hernawan., 1992). Aktifitas anti-oksidatif ellagitanin tersebut berkaitan dengan strukutur kimianya. Naiknya jumlah gugus galloil, berat molekul, dan struktur ortohidroksil meningkatkan aktifitas anti- oksidatif tanin (Yokozawa et al dalam Hernawan., 1998). Tanin terutama dimanfaatkan orang untuk menyamak kulit agar awet dan mudah digunakan. Khelat Logam
Senyawa phenol yang secara biologis dapat berperan sebagai khelat logam. Proses pengkhelatan akan terjadi sesuai pola subtitusi dan pH senyawa phenolik itu sendiri. Karena itulah tann terhidrolisis memiliki potensial untuk menjadi pengkhelatan logam. Hasil khelat dari tannin ini memiliki keuntungan yaitu kuatnya daya khelat dari senyawa tannin ini membuat khelat logam menjadi stabil dan aman dalam tubuh. Tetapi jika tubuh mengkonsumsi tannin berlebih maka akan mengalami anemia karena zat besi dalam darah akan dikhelat oleh senyawa tannin tersebut (Hangerman,2002)
VIII.
Biosintesa tanin
Kloroplas pada tumbuhan memfiksasi karbondioksida melalui siklus Calvin menjadi gliseraldehid-3-fosfatyang selanjutnya bisa ditransformasikan dan diakumulasikan menjadi cadangan makanan berupa glukosa dan amilum. Kemudian cadangan makanan itu akan terdegradasi ketika dibutuhkan, melalui jalur glikolisis (produk utamanya : gliseraldehid-3fosfat, fosfoenolpiruvat, dan piruvat) atau jalur oksidasi fosfat pentose (produk utamanya : eritrosa-4-fosfat dan gliseraldehid-3-fosfat) untuk membentuk molekul yang lebih kecil.
Biosintesis fenolat diawali dengan adanya jalur asetat-malonat dan shikimat.Kedua jalur tersebut penting untuk biosintesis asam fenolat, sedangkan Ellagitanin hanya bergantung pada jalur shikimat.Jika glikolitik fosfoenolpiruvat dengan jumlah yang cukup besar masuk ke jalur shikimat, maka produksi piruvat untuk kebutuhan jalur asetat-malonat bekurang secara signifikan.Hal ini merupakan efek negatif secara langsung pada biosintesis asam fenolat karena biosintesis ini membutuhkan malonil – CoA sebagai buildingblock .Hampir seluruh tannin di biosintesis melalui jalur shikimat.Kecuali produksi Phlorotanin yang dihasilkan oleh alga coklat, hanya membutuhkan jalur asetat-malonat.
Tahap kedua dimulai dengan adanya asam 3-dehidroshikimat.Senyawa ini merupakan prekursor untuk sintesis asam galat, yang merupakan komponen utama pembentukan tannin terhidrolisis. Produksi asam galat yang efisien dapat memberikan efek negatif terhadap sintesis asam shikimate dan produknya : asam fenolat, flavonoid, kafein, dan turunan asam kumarat. Tahap selanjutnya pada jalur tanin terhidrolisis terdapat pentagalloyl glucose, yang merupakan prekursor untuk Gallotanin dan Ellagitanin.2
2
Ossipov, V.; Salminen, J.-P.; Ossipova, S.; Haukioja, E.; Pihlaja, K. 2003. Gallic acid and hydrolysable tannins are formed in birch leaves from an intermediate compound of the shikimate pathway. Biochemical Systematics and Ecology 31.p.3-16.
Biosintesis Elligitanin
Tannin secara umum didefinisikan sebagai senyawa polifenol yang memiliki berat molekul
cukup
tinggi
(lebih
dari
1000)
dan
dapat
membentuk
kompleks
dengan
protein.Berdasarkan strukturnya, tannin dibedakan menjadi dua kelas yaitu tannin terkondensasi (condensed tannins) dan tannin terhidrolisiskan (hydrolyzedable tannins).
Tannin
terhidrolisiskan
merupakan
derivate
dari
Asam
Galat
yang
teresterkan.Berdasarkan strukturnya, tannin ini dibedakan menjadi dua kelas yaitu, Gallotanin dan Ellagitanin.Perbedaan struktur keduanya adalah adanya ester Asam Gallat pada Gallotanin dan
ester
Asam
Heksahidroksidifenat
(HHDP)
pada
ellagitanin.Kedua
ester
asam
tersebutberikatan dengan glukosa. Ellagitanin yang dihidrolisis akan menghasilkan asam elagat. Oksidasi perangkaian pada gugus galoil dari gallotanin akan menghasilkan ellagitanin.
Ellagitanin hanya terdapat pada angiospermae, khususnya pada umbuhan dikotil, terutama Hammamelidae, Dilleniidae, Rosidae, serta beberapa lainnyaPenelitian biosintesis ellagitanin dilakukan pada tumbuhan Oak (Quercul rubra), Rhus sp., dan beberapa tumbuhan lainnya.Reaksi spesifik untuk menjadi senyawa ellagitanin berbeda-beda tergantung jenis
senyawa dan tumbuhannya.Reaksi spesifik ang menuju ke senyawa ellagitanin tertentu berbeda beda tergantung jenis senyawa dan tumbuhannya.
Jalur biosintesis ellagitanin dibagi menjadi tiga tahapan reaksi.Tahapan pertama adalah pembentukan asam galat sebagai penyusun struktur primer ellagitanin.Tahap ini diawali dari jalur shikimate yang membentuk dua arah reaksi sintesis asam galat.Arah pertama melalui pembentukan L-fenilalanin dengan perantara arogenate.Pembentukan asam sinamat dari Lfenilalanin dihalangi oleh enzim L-AOPP(L-2-aminooxy-3phenylpropionic acid), dan reaksi diarahkan pada senyawa kafeat. Arah reaksi kedua melalui pembentukan 3-dehidroshikimar yang mengalami hidrogenasi pada atom C ke-3 sehingga terbentuk asam galat.
Tahap kedua adalah pembentukan penta-galloilglukosa yang diawali oleh reaksi asam galat dengan uridin 5-difosfat glukosa untuk membentuk b-glukogallin. Dengan penambahan 4 molekul galloil,b-glukogallin dibuah menjadi 1,2,3,4,6-Pentagalloilglukosa. Empat molekul galloil menggantikan atom H pada empat gugus hidroksi. Proses penggantian atom H tersebut dinamakan reaksi galloilasi. Reaksi ini berurutan mulai dari gugus hidroksi ke-1, lalu ke-6, ke-2, ke-3, dan yang terakhir ke-4.Reaksi ini membutuhkan enzim galloil transferase.
Tahap terakhir merupakan tahap yang secara langsung menuju ke pembentukan senyawasenyawa golongan ellagitanin.3
3
Hernawan,Eko Udhi. Setyawan, Ahmad Dwi.2003. Review: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biol ogi. Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta 57126.Hal.26-27.
IX.
Structure Activity Relationship Tannin (Pengaruh Gugus Tanin terhadap Aktivitas Biologi)
1. Menurunkan hiperglikemik pada pasien diabetes Tannic acid mengandung inti glukosa, yang berikatan kovalen dengan 3 — 5 residu asam galat melalui ikatan ester.Setiap residu asam galat bisa berikatan kovalen dengan molekul asam galat lainnya.Efek dari Tannic acid ini berpengaruh pada aktivitas transport glukosa untuk disimpan ke dalam jaringan. 4 Ekstrak Air Daun Bungur (EADB) pada terapi antidiabetik secara oral memiliki aktivitas hipoglikemik karena terdapat kandungan ellagitanin yaitu lagerstoemin dan flosin B, dan reginin A yang memiliki sifat mirip dengan hormon insulin. Senyawa ellagitanin tersebut dapat berikatan dengan reseptor protein insulin yang merupakan reseptor spesifik untuk hormon insulin.5 2. Sebagai Antitumor Penelitian yang melakukan ekstraksi methanol dari akar Agrimonia pilosa LEDEB menunjukan aktivitasnya sebagai host-mediated antitumor.Antitumor utama pada tanaman tersebut adalah agrimoniin yang merupakan tannin. Dari penelitian lanjutan yang dilakukan untuk menguji antitumor dari berbagai jenis tannin dapat disimpulkan beberapa poin - Jika inti glukosa jenuh dengan gugus galloyl maka aktivitas antitumornya dapat lebih aktif daripada galloglukosa yang lain. Jadi penambahan gugug galloyl dapat meningkatkan anktivitas antitumor. - Ellagitanin yang monomeric memiliko aktivitas antitumor lebih tinggi dari pada yang tidak monomeric, namun ellagitanin yang oligomeric memiliki aktivitas antitumor yang lebih tinggi daripada ellagitanin yang monomeric. - Dengan percobaan in vitro yang dilakukan dengan cara menginjeksikan tannin pada mencit, Keberadaan phenolic hydroxyl bebas sangat esensial untuk aktivitas antitumor. Namun aktivitasnya turun secara signifikan setelah ditambahkan calf
4
Xueqing Liu,dkk. 2005. Tannic Acid Stimulates Glucose Transport and Inhibits Adipocyte Differentiation in 3T3 L1 Cells1.Department of Biochemistry,†Edison Biotechnology Institute, and Department of Biomedical Sciences, College of Osteopathic Medicine, Ohio University, Athens, OH 45701. 5
Hernawan, Udhi Eko, dkk. 2004. Aktifitas Hipoglikemik dan Hipolipidemik Ekstrak Air Daun Bungur (Lagerstroemia speciosa [L.]Pers.)terhadap Tikus Diabetik. Jurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta 57126. Hal 18.
serum kepada kultur. Penambahan ini meningkatkan jumlah sel seperti makrofag yang memiliki fungsi sitostatic. 6 3. Untuk pencernaan dan nilai gizi Studi yang mempelajari tentang interaksi tannin dengan protein sangat berhubungan dengan struktur pembentukan kompleks condensed tannin-protein. Karakteristik mulai dari BM, fleksibilitas konformasi dan kelarutan dalam air dapat mempengaruhi kemampuan untuk berinteraksi dengan protein. Ikatan antara condensed tannin dan protein beresifat spesifik. Perbedaan struktur molecular dari condensed tannrin termasuk berat molekul, stereokimia (cis-trans) dan struktur yang monomeric berpengaruh dalam fungsinya dalam penutrisi. Terdapat bukti stereokimia dan bentuk monomeric memiliki peran besar dalam menentukan nutrional impact dari condensed tannin.7 4. Sebagai Inflammatory Gugus galloyl dan gugus fenolic hydroxyl yang terdapat di posisi ketiga pada tannin EGCG (Epigallocatechin Gallate) yang ditemukan pada teh hijau, berperan sebagai anti inflamasi dengan cara menghambat enzyme Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS), yang menstimulasi produksi radikal nitric oxide, yang mengakibatkan proses inflamasi. Mekanisme penghambatan inflamasi oleh tanin ditandai dengan adanya oksidasi tannin dan reduksi ROS (Reactive Oxygen Species),yang dapat merusak protein, lemak, asam nukleat, dan merupakan komponen dalam proses inflamasi.8
6
Miyamoto, Kenichi, dkk. 1986. Relationship between the Structures and the Antitumor Activities of Tannins. Department of Pharmacology, Hokuriku University School of Pharmacy,a Kanagawa-machi, Kanazawa 920-11, Japan and Faculty of Pharmaceutical Sciences, Okayama University,b Tsushima, Okayama 700, Japan. 7
M.K. Theodoror, dkk. 2001. New Perspectives on the Degradation of Plant Biomass in the Rumen in the Absence and Presence of Condensed Tannins. Department for International Development. p.44-45 8
Jeffers, Melanie Diane. 2006. Tannins as Anti-Inflammatory Agents. Faculty of Miami University, Department of Chemistry and Biochemistry, Miami University ,Oxford, Ohio. p.6-7
X.
Isolasi Tanin Secara Umum, Pemilihan Metode Ekstraksi, Pemilihan Eluen Berdasar Sifat Fisika Tanin, Pemilihan Metode Pemisahan Ekstraksi adalah pemisahan zat/seyawa berdasarkan kelarutannya dalam pelarut tertentu
sesuai sifat fisika dan kimia. Pelarut meupakan hal yang paling umum dalam prosedur ekstraksi. Dalam hal ini, senyawa yang ingin dipisahkan adalah tannin. Tannin bersifat polar. Umumnya pelarut yang dapat digunakan dalam proses ekstraksi adalah senyawa polar sampai semi polar (Hernawan, 2003). Pelarut seperti etanol, metanol, aseton, etil asetat, dan kombinasinya telah digunakan untuk ektraksi senyawa fenolik, terkadang dengan sekian proporsi air. Memilih pelarut yang sesuai dapat mempengaruhi kadar perolehan ekstraksi. Secara umum, metanol digunakan untuk ektraksi senyawa polifenol dengan berat molekul kecil sedangkan senyawa polifenol dengan berat molekul besar lebih efisien untuk diekstraksi dengan pelarut aseton : air. Metanol dan etanol telah dibuktikan sebagai pelarut yang efektif untuk proses ekstraksi senyawa fenolik termasuk tannin (Siddhuraju and Becker, 2003). Ekstrak metanol lebih polar daripada etanol. Ekstrak etanol adalah pelarut yang baik dalam ekstraksi senyawa polifenol dan aman untuk dikonsumsi manusia (Shi et al., 2005). Perolehan kembali senyawa fenolik dari tanaman bergantung pada waktu dan suhu ekstraksi, yang mengakibatkan pengaruh kelarutan dan degradasi analit oleh oksidasi. Meningkatkan suhu ekstraksi dapat menambah kelarutan analit dan transfer masa. Viskositas dan tegangan pemukaan turun akibat kenaikan temperatur, yang memudahkan solven mencapai sampel matiks sehingga meningkatkan nilai ekstraksi. Tetapi banyak senyawa fenolik yang mudah terhidrolisis dan teroksidasi. Ekstraksi dengan waktu yang lama dan temperatur tinggi dapat memperbesar kemungkinan terjadinya oksidasi sehingga kadar senyawa fenolik menjadi turun (Dai and Mumper 2010). Diketahui bahwa proses ektraksi bergantung pada pelarut dengan berbagai polaritas, waktu ekstraksi dan suhu. perbandingan senyawa dan solven, dan karakteristik fisika senyawa. Berdasarkan hal tersebut, tidak ada prosedur ektraksi senyawa fenolik secara universal. Metode ekstraksi tanin berdasakan beberapa pustaka : 1. Berdasakan Karamac, 2007 Sejumlah 20g bahan tanamn ditimbang kemudian dimasukan ke sealable flasks kemudian dicampur 160 mL aseton 80% (v/v)[Amarowicz et al ., 1995]. Flasks ditempatkan di
water bath pada 70°C dan dikocok selama 15 menit. Setelah dingin, supernatan didekantasi secara hati-hati. Ekstraksi diulang 2X atau lebih. Supernatan dicampur, aseton diuapkan dengan evaporator 40°C, dan sisa air dipisahkan berdasarkan lipofilitas. 2. Berdasarkan Murugan, 2007 Berdasarkan hasil penelitian Muugan, 2007 ada tiga metode ektraksi yang berbeda dalam memperoleh crude ekstrak dari tanaman O. parvifolia yang dari ketiga metode tersebut didapatkan hasil ekstraksi tanin paling banyak diperoleh dengan cara fraksinasi. (Murugan, et al., 2014). Tiga metode tersebut yaitu : a. Maserasi Serbuk tanaman (10 g) dimasukan kedalam conical flask dan di ekstraksi dengan pelarut organic (100 mL) seperti hexan, etil asetat, methanol, dan etanol dalam pengocok mekanik pada temperature ruang dengan pengocokan konstan 200 rpm. Dibiarkan selama 24 jam dan disaring dengan Whatman No. 1 filter (Raaman, 2006). Ekstraksi diulang sebanyak 3X sampai didapat hasil yang sempurna. b. Ekstraksi dengan Soxlet Serbuk tanaman (60 g) diekstraksi dengan pelarut organic (300mL) seperti n-hexan, etil asetat, methanol, dan etanol di Soxlet. c. Fraksinasi 50 g serbuk tanaman diekstraksi dengan etanol 300 mL pada Soxlet. Kemudian pelarut (etanol) diuapkan dengan rotavapor. Ekstrak etanol (10.2 g) kemudian diekstraksi lagi dengan pelarut organic (300 mL) seperti n-hexan,
etil asetat,
methanol, dan etanol di Soxlet. (metode modifikasi dari Raaman, 2006). 3. Berdasarkan Havey, 2003 Tanin diekstraksi dengan pelarut aseton;air (7:3), dapat mengekstraksi sampai 75% tanin atau dengan metanol : air (1:1). Lebih baik tidak menggunakan panas untuk mengekstraksi tannin. Jaga pH antara 5 – 7 karena pada pH > 7 tanin akan mudah teroksidasi. 4. Berdasarkan Hernawan, 2003 Ekstraksi tanin dari jaringan tumbuhan dilakukan dengan menggunakan pelarut aseton 70% atau metanol 50% dalam air. Lin et al. (2001) melakukan ekstraksi ellagitanin dari daun kering Euphorbia tirucalli dengan pelarut aseton 60%. Sedangkan Machado et al.
(2002) berhasil melakukan ekstraksi ellagitanin dari kulit buah delima segar ( Punica granatum; Punicaceae) dengan etanol. Prosedur ekstraksi biasa tidak cukup untuk mengisolasi ellagitanin. Proses ekstraksi perlu dilakukan berulang dan bertahap. Ekstraksi dengan aseton 70% biasanya dilakukan 3x setelah itu dilanjutkan ke tahap isolasi. Banyak isolasi elligitanin menggunakan kromatografi kolom sebagai tahap isolasi. Elligitanin dapat dipisahkan secara baik menggunakan kolom pemisah Sephadex LH-20, MCI-gel CHP 20P,
atau ODS-AQ.
Metanol dengan konsentrasi bertingkat merupakan eluen yang baik untuk memperoleh ellagitanin. Metode Isolasi tanin berdasarkan beberapa pustaka : 1. Berdasakan Karamac, 2007 Extrak mentah fenol (2g) dilarutkan dalam 20 mL kemudian dimasukkan kedalam packed kolom (5 x 40 cm) Sephadex LH-20 gel. Etanol (1L) digunakan sebagai eluen pertama diikuti dengan senyawa fenol dengan nilai berat molekul lebih rendah. Setelah itu, 600 ml dari 50% aseton (v/v) digunakan untuk mengeluasi tanin. Pelarut dari fraksi tanin diuapkan dengan rotavapor dan air dihilangkan berdasarkan lyophilisation. 2. Berdasarkan Dai, 2010 Kromatografi kolom telah sering digunakan untuk memurnikan/memisahkan ekstrak fenolik. Walaupun membutuhkan pelarut yang banyak, namun metode ini menghasilkan hasil yang banyak. Berdasarkan hasil penelitian, untuk mengekstraksi tanin terkondensasi seperti proantocyanidin digunakan kolom kromatografi Sephadex LH-20. Etanol, metanol digunakan untuk mengeluasi senyawa non-tanin kemudian diikuti dengan air, aseton atau alkohol, air untuk memperoleh senyawa tanin. 3. Berdasarkan Sari, 2003 Pemisahan dengan KLT dilakukan menggunakan fase gerak n-butanol : asam asetat : (BAA) (4:1:5). Noda yang terbentuk pada KLT Preparatif dikeruk dan dilarutkan dengan aseton yang selanjutnya diuji fitokimia dan diuji kemurnian dengan KLT. 4. Berdasarkan Hernawan, 2003 Isolasi lagerstroemin, flosin B, dan reginin A dari bungur ( L. speciosa) pertama kali menggunakan aseton 70% berulang 3x. Ekstrak yang diperoleh kemudian disuspensikan dalam air dan dipartisikan dengan etil asetat, eter, dan butanol. Fraksi air yang terbentuk
dipisahkan dengan kolom pemisah Diaion HP-20 dengan eluen metanol. Proses isolasi berakhir dengan penggunaan HPLC-preparatif. Kolom ODS-A, 2 x 15 cm, dengan eluen metanol 25%, CH3CN 10 mM dan dapar fosfat pH 2 dapat memisahkan ellagitanin dengan baik (Hayashi et al., 2002) Pemisahan ellagitanin dari P. granatum menggunakan kolom berurutan yaitu XAD-16 dan Sephadex LH-20 (eluen yang dipakai adalah metanol dengan konsentrasi bertingkat), setelah sebelumnya ektsrak etanol dipartisikan dengan hexana, butanol, etil asetat dan kloroform. Fraksi yang diperoleh dielusikan ke HPLC-preparatif fase balik, kolom RP18, 2x25 cm menghasilkan α- punicalagin 20, β- punicalagin, α- punicalagin 22 dan β punicalagin (23) dan asam elagat (3) (Machado et al., 2001).
XI.
Karakterisasi Dan Identifikasi Isolate ISOLAT TANIN
Untuk menentukan isolat yang kita teliti adalah tanin, kita harus mengetahui karakteristik tanin pada suatu isolat dalam berbagai cara dan metode identifikasi senyawa. Dalam buku Metode Fitokimia: Penuntun cara modern menganalisis tumbuhan oleh Harborne, J (1987) terdapat cara menganalisis tanin pada suatu isolat pada halaman 102, yaitu: 1. Tanin Terkondensasi (proantosianidin) a. Deteksi langsung Tahap: Menyiapkan jaringan tumbuhan hijau (yaitu tanpa adanya pigmentasi sian)
dengan mencelupkannya ke dalam HCl 2M mendidih selama setengah jam. Setelah itu jaringan tumbuhan segar diekstraksi dengan metanol 50-80%. Hasil: Terbentuk warna merah.
b. KLT (Kromatografi Lapis Tipis) Tahap: Bahan berwarna merah dari tahap deteksi langsung di pindahkan ke dalam
tabung reaksi dengan pipet dan ektraksi dengan 1 ml etil asetat. Lalu kocok, ambil dengan pipet, dan buanglah lapisan etil asetat. Kemudian tambahkan 5 tetes amil alkohol dan kocok. Ambil sedikit lapisan amil alkohol dengan pipet kapiler dan
totolkan (kira-kira enam totolan) pada sebuah pelat selulosa kecil. Ditotolkan pula larutan pembanding pelargonidin dan sianidin/delfinidin. Perbandingan fase pengambang butanol – asam asetat – air (14 : 1 : 5). Hasil: Rf 0,62
c. Spektrofotometri UV Tahap: “Tanin yang dapat dideteksi berupa bercak lembayung yang bereaksi positif
dengan setiap pereaksi fenol baku.” Menambahkan hasil deteksi langsung dengan beberapa tetes amil alkohol. Kocok, dan ambil lapisan alkoholnya. Encerkan dengan 1% HCl dalam etanol dan ukurlah di daerah sinar tampak ( 400-700 nm) dengan menggunakan metanol-HCl sebagai blanko(Haslam, 1966). Hasil: Panjang gelombang maksimum 500 nm
d. KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi) Tahap: Dengan memakai kolom Li Chrosorb RP-8 yang dielusi dengan campuran air-
metanol. e. Chromatography dengan Sephadex G-50 Tahap: Kolom dielusi dengan aseton-air (1 : 1) yang mengandung asam askorbat
0,1% untuk melindungi tanin terhadap oksidasi udara. Kemudian eluatnya dimasukkan kedalam kolom Sephadex LH20 dalam metanol-air (1:1), proantosianidin diperoleh kembali dengan mengelusi memakai air-aseton (7:3). Selanjutnya dilakukan fraksinasi bobot molekul memakai G-50 atau G-100; bobot molekulnya dapat ditentukan sekaligus bila ada senyawa baku (Jones dkk., 1979).
2. Tanin Terhidrolisis a. Deteksi Pendahuluan
Mengidentifikasi asam galat dan/atau asam elagat dalam ek strak eter atau etil asetat yang dipekatkan. 1. Tahap: Estrak dicuci, dikeringkan, dan diuapkan sampai kering.Kemudian di
KLT menggunakan selulosa kristal renik/selulosa mikrokristal. Hasil: Berupa bercak gelap dengan sinar UV dan berwarna biru dengan pereaksi
Folin setelah diuapi amonia. No (2) pada gambar
2. Tahap: Sedikit jaringan tumbukan direndam dalam HCl 2M da lam tabung reaksi
dan dipanaskan selama 30-40 menit pada 100C. Ekstrak didinginkan dan disaring kemudian di ekstraksi dengan etil asetat. Bila larutan berwarna, maka ekstrak air dipanaskan lebih lanjut untuk menghilangkan sesepora etil asetat yang tertinggal, dan kemudian diekstraksi ulang dengan sedikit amil alkohol. Etil asetat diuapkan sampai kering, tambahkan etanol 1-2 tetes, dan dikromatografi satu arah berdampingan dengan autentik, memakai pengembang: a. Forestal (asam asetat-HCl pekat-air; 30:3:1), b. HOAc 50% (asam asetat 50% dalam air), c. BAA (n-butanol-asam asetat-air; 4:1:5; lapisan atas), dan d. PhOH (fenol yang dijenuhkan dengan air).
Ekstrak amil alkohol, yang harus berwarna, dipekatkan sampai kering, tambahkan beberapa tetes HCl 1% dalam metanol, dan dikromatografi memakai pengembang Forestal dan asam format (asam format-HCl pekat-air; 5:2:3). Hasil: Asam elagat tampak antara mirisetin dan kuersetin berupa bercak ungu
yang menjadi gelap bila diuapi NH3.
b. KLT
Tahap : Ekstraksi skala besar paling baik dengan Aseton-air untuk mencegah
hidrolisis ikatan ester dalam tanin. Komponen ester dari ekstrak dapat d ipantau dengan perbandingan fase pengambang butanol – asam asetat – air (14 : 1 : 5). Hasil : Tanin terhidrolisiskan dapat dibedakan dari tanin terkondensasi karena
gerakannya berbeda. (Rf prosianidin 25/50 . Rf pentagaloilglukosa 50/06) c. KCKT (HPLC)
Tahap : Elusi menggunakan kolom RP-18 Li Chrosorb 10 Ҧm dan Pengembang air
yang mengandung 0,05% H3PO4 serta asetonitril yang konsentrasinya makin meningkat.
Hasil : dapat memisahkan ester galoil yang satu dari ester galoil yang lainnya
berdasarkan jumlah sisa galoil dan letak ikatannya. 3. Tanin Total Perkiraan kuantitatif tanin dalam jaringan tumbuhan tidak ak an teliti apabila adanya fenol lain yang dapat mengganggu, dan dalam praktknya sulit sekali mengekstraksi keseluruhan tanin, terutama tanin terkondensasi. Pengukuran ekstrak tanin total harus diulangi pada ampas tumbuhan setelah ekstraksi. Untuk analisis, jaringan yang telah dikeringkan harus diserbuk halus dahulu, lalu di ekstraksi tiga kali dengan metanol:air (1:1) memakai 0,1 ml pelarut/mg. Cara : 1. Setara Asam Tanat (SAT) a. Sejumlah Volume ekstrak diencerkan sampai 1 ml dan dicampur dengan 1 ml darah manusia yang telah diencerkan (1:50 dengan air). b. Dikocok homogen untuk menghilangkan endapan tanin-protein c. Sisa hemoglobin ditentukan kadarnya dengan mengukur serapan pada 578 nm. d. SAT dapat dihitung dari pengukuran baku yang dilakukan pada asam tanat yang diketahui. Cara ini yang memberikan kesepatan-nisbi ekstrak tumbuhan yang merupakan ukuran langsung tanin larut total. 2. Kadar Proantosianidin a. Ekstrak dengan volume tertentu dipekatkan sampai volume 1/3 nya b. Dipanaskan dengan n-butanol yang mengandung HCl pekat 5% (0,5 ml ekstrak dengan 4 ml pereaksi) selama dua jam pada 95C. c. Serapan diukur dengan spektrofotometer pada 545 nm (untuk sianidin) dan pada 560 nm (untuk delfinidin) 3. Kadar elagitanin a. Ekstrak 0,5 ml ditambah 2,0 ml HNO2 0,1 M (dibuat dari NaNO2 dan Asam asetat) pada suhu kamar dalam lingkungan N2 b. 15 menit kemudian warna biru yang terbentuk diukur pada 600 nm. 4. Kadar galotanin
a. Cuplikan ekstrak 0,5 ml direaksikan dengan 1,5 ml KIO3 12% dalam metanol 33% pada 15 C. b. Warna tengguli yang terbentuk segera diukur pada 550 nm. Cara ini menentukan gugus galoil yang terdapat dalam tanin yang berkerangka dasar galoil.
Contoh hasil penelitian Tanin:
#PENELITIAN TANIN 1 FRAKSINASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN PADA DAUN BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi L.)
Elok Kamilah Hayati, A. Ghanaim Fasyah, dan Lailis Sa’adah.
Uji KLT
Nilai rendemen ekstrak tannin pekatsebesar 10,78% (b/b) dari sekitar 50 gram serbuk daun belimbing wuluh dengan metode KLT. Noda yangdihasilkan selanjutnya diamati di bawah sinarlampu UV pada panjang gelombang 254 dan 366 nm. Data noda yang terbentuk dari hasilpemisahan dengan kromatografi lapis tipisdengan beberapa eluen dapat dilihat dalam Tabel1.Tabel1. Data penampakan noda fasa air hasil KLT analitik dengan beberapa eluen dengan lampuUV 254 nm dan 366 nm.
Tabel .1
Tabel 1 menunjukkan bahwa eluencampuran n-butanol : asam asetat : air (BAA) (4:1:5) mampu memberikan pemisahan terbaik,hal ini dapat dilihat dengan adanya noda yangterpisah
dengan baik dan jumlah noda palingbanyak yaitu 3 noda. Adapun gambar plat hasil KLTanalitik eluen terbaik n-butanol : asam asetat : air (BAA) (4:1:5) disajikan pada Gambar 1.
Kepolaran fasa diam dan fasa gerakhampir sama, tetapi masih lebih polar fasa geraksehingga senyawa tanin yang dipisahkanterangkat mengikuti aliran eluen, karenasenyawa tanin bersifat polar. Dari ketiga nodayang ada maka noda yang kedua adalah nodayang diduga senyawa tanin , yang memilikiharga Rf sebesar 0,61 dan warna noda saatdisinari dengan lampu
UV 366 berwarnalembayung. Hal ini diperkuat oleh Harborne(1987) bahwa tanin dapat dideteksi
dengan sinarUV pendek berupa noda yang berwarna lembayung, selain itu didukung dengan Rf dariekstrak tanaman mimosa (memiliki kadar taninyang tinggi) yang dielusi dengan eluen yangsama dengan harga Rf sebesar 0,62.Pemisahan dengan KLT analitik menghasilkanharga Rf dari noda pertama sebesar 0,53yang diduga senyawa antosianidin (Olivina,2005). Noda kedua dan ketiga dengan harga Rf0,61 dan 0,68 diduga senyawa tanin terkondensasi.Senyawa tanin
diduga mempunyai nilaiRf 0,61, hal ini didukung dari pengukuranstandar tanin dari tanaman mimosa yangmemiliki kadar tanin yang besar dengan harga Rfsebesar 0,62. Noda-noda hasil KLT preparatifyang mendekati harga Rf tanin da ri tanamanmimosa dan warna yang menunjukkan tanin dikerok dan dilarutkan dalam pelarut aseton:air(7:3), kemudian diidentifikasi menggunakan spektrofotometri UV-Vis dan FTIR.
Uji Spektrofotometri UV-Vis dan FTIR
Berdasarkan hasil identifikasi senyawatanin dengan spektrofotometer UVVismenunjukkan panjang gelombang maksimumdari 2 puncak yang diperoleh yang didugaterdapat senyawa tanin sebesar 331 nm. Hal inididukung dengan hasil identifikasi senyawa tanindari tanaman mimosa yang sebagai standar daritanin karena memiliki kadar tanin yang besar sama-sama memiliki panjang gelombangmaksimum sebesar 318 nm.
Dari data spektrum pada Tabel 3didapatkan senyawa tanin yang mungkin darihasil KLT preparatif di bawah sinar UV 254 dan366 nm adalah isolat 2. Hal ini dikarenakanisolat 2 memiliki panjang gelombang maksimumyang hampir sama dengan tanin standar.Identifikasi dengan spektrofotometriinframerah (FTIR) hasil pemisahan KLTPmenunjukkan bahwa isolat 2 mengandung gugusfungsi seperti : a. rentangan asimetri O-H padabilangan gelombang 3372,4 cm-1, sebagai akibatdari vibrasi ikatan hidrogen intramolekul. b. Bilangan gelombang 2071,8 cm-1 menunjukkanpuncak serapan C-H deformasi keluar bidang.
c. Pada spektrum ini tidak terlihat adanya pitaserapan karbonil di daerah 1700 cm-1, tetapiterdapat pita serapan agak melebar di bilangangelombang 1625,8 cm-1 dimungkinkanmerupakan pita gabungan dari uluran C=O danserapan ikatan rangkap C=C aromatik. Hal inimungkin dikarenakan kuatnya efek resonansigugus karbonil dengan cincin aromatik. d. Dugaansenyawa tanin diperkuat dengan adanya cincinaromatik yang tersubstitusi pada posisi orto yangditunjukkan dengan puncak serapan padabilangan gelombang 782,5.
Jenis senyawa tanin yang diperoleh dari hasilpemisahan ekstrak (isolat 2) daun belimbingwuluh dengan kromatografi lapis tipis didugaadalah flavan-3,6,7,4',5'-pentaol atau flavan-3,7,8,4',5'-pentaol.
#PENELITIAN TANIN 2 IDENTIFIKASI DAN UJI AKTIVITAS SENYAWA TANIN DARI EKSTRAK DAUN TREMBESI( Samanea saman (Jacq.) Merr SEBAGAI ANTIBAKTERI E scherichia coli (E . coli )
Putu Puspita Sari, Wiwik Susanah Rita, dan Ni Made Puspawati.
Uji Fitokimia Senyawa Tanin dalam Daun Trembesi
1. Hasil uji fitokimia ekstrak kloroform, airdan aseton dari daun trembesi menunjukkan positifterhadap uji FeCl3 dengan menghasilkanperubahan warna coklat menjadi hijau kehitaman. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak kloroform, air dan aseton daun trembesi mengandung senyawa fenol. 2. Hasil uji fitokimia ekstrak air dan asetondaun trembesi dengan larutan g elatin menunjukkanadanya endapan putih, sehingga diperoleh hasilbahwa ekstrak air dan aseton daun trembesi positifmengandung senyawa tanin. 3. Namun uji fitokimiadengan larutan formaldehid 3 % + HCl 1 N (2:1)tidak menunjukkan adanya endapan merah muda,hal ini menunjukkan bahwa ekstrak air dan asetondaun trembesi tidak mengandung taninterkondensasi. 4. Hasil uji fitokimia dari filtrat ujitanin terkondensasi menunjukkan warna hitam,dimungkinkan ekstrak air dan aseton dauntrembesi positif mengandung tanin terhidrolisis.Jika dilihat dari intensitas warnanya, ekstrakaseton menunjukkan intensitas warna lebih kuatdibandingkan ekstrak air.
Pemisahan dan Pemurnian senyawa Tanin
Pemisahan senyawa tanin pada penelitianini didahului dengan pemilihan eluen terbaik untukmenentukan fase gerak yang digunakan.Berdasarkan hasil pemisahan diperoleh bahwa eluen n butanol:asam asetat:air (4:1:5)(BAA) memberikan pemisahan terbaik, hal ini dapat dilihat dengan adanya noda yang terpisahdengan baik dan jumlah noda terbanyak yaitu 6noda. Sehingga eluen ini digunakan dalampemisahan senyawa tanin dengan kromatografilapis tipis preparatif (KLTP). Hasil pemisahandengan KLT preparatif diperoleh noda berupa pitasebanyak 6 pita dilihat dengan lampu UV 366 nm.
Hasil uji fitokimia isolate hasil KLTPmenunjukkan bahwa isolat 1 (kuning) positifmengandung senyawa fenol, namun negatifterhadap uji dengan larutan gelatin sehingga isolat1 dapat dinyatakan tidak mengandung senyawatanin . Isolat 2 dan 3 menunjukkan positif mengandung tanin terhidrolisis dengan intensitaswarna yang sama. Selanjutn ya isolat 2
dan isolat 3diuji kemurnian dengan KLT analitik,diidentifikasi dengan spektrofotometer UVVisdan FTIR serta diuji aktivitas antibakteri E. Coliuntuk memastikan bahwa senyawa tanin memilikipotensi antibakteri E. coli. Berdasarkan hasil diatas isolat 2 dan isolat 3 positif mengandung taninmemiliki nilai Rf 0,61 dan 0,65. Isolat 2 dan 3hasil KLTP dilakukan uji kemurnian dengan KLTmenggunakan beberapa eluen dan menunjukkanbahwa isolat 2 dan 3 hasil KLTP relatif murnisecara KLT.
Identifikasi Senyawa Tanin denganSpektrofotometer UV-vis dan FTIR
Spektrum UV-Vis dari isolat 2 dan isolat 3menunjukkan panjang gelombang maksimummasing-masing 346,50 nm dan 347,00 nm. Panjang gelombang maksimum yang ditunjukkankedua isolat tidak berbeda jauh dan berada antara300-550 nm yang diperkirakan adanya transisiπ
π* yang mengindikasikan adanya ikatan C=Cterkonjugasi dan transisi n
π*
berupa kromoforC=O (Sastrohamidjojo, 2001). Identifikasisenyawa tanin menggunakan spektrofotometerFTIR dilakukan analisis pada bilangan gelombangdi daerah IR 4000-400 cm-1. Spektrum serapaninframerah dari isolat 2 dan 3 hasil KLTPdipaparkan pada Gambar 2. 1. Spektrum inframerah dari isolat 2 hasilpemisahan KLTP tampak adan ya serapan padadaerah 3556,74 cm-1 dan 3251,98 cm-1 deng anintensitas kuat dan bentuk pita lebar menunjukkanadanya gugus fungsi seperti rentangan O-H.
2. Pada bilangan gelombang 3620,39 cm-1 dan 3234,62 cm-1 untuk isolat 3 terjadi serapanyang lebar dengan intensitas kuat menunjukkanbahwa pada isolat 3 juga terdapat gugus O-H.Serapan tersebut menunjukkan bahwapada isolat 2 dan 3 terdapat gugus – O-H yangterikat pada gugus alifatik dan aromatik akibat darivibrasi ikatan hidrogen intramolekul(Sastrohamidjojo, 2001). 3. Hal ini diperkuat denganadanya serapan yang lemah dan lebar pada daerahbilangan gelombang 1363,67 cm-1 pada isolat 2dan 1340,53 cm-1 pada isolat 3 yang menunjukkanadanya gugus C-O-H. 4. Gugus O-H juga diperkuatdengan adanya O-H bending dengan serapanlemah dan lebar pada bilangan gelombang 966,34cm-1 (isolat 2) dan 967,20 cm-1 (isolat 3). 5. Bilangan gelombang pada isolat 2 dan 3yaitu 2889,37 cm-1 dan 2895,15 cm-1 denganserapan yang tajam dan intensitas lemahmenunjukkan adanya gugus C-H alifatik.
C-Halifatik diperkuat dengan adanya C-H bending dengan intensitas lemah dan bentuk pita tajampada bilangan gelombang 574,79 cm-1 dan 507,28cm-1 (isolat 2), serta bilangan gelombang 671,23cm-1 ;576,72 cm-1 dan 509,21 cm-1 (isolat 3). 6. Pita serapan yang tajam dan intensitassedang pada bilangan gelombang 1743,65 cm-1 dan1635,64 cm-1 untuk isolat 2 dan 3 menunjukkanadanya gugus C=O ester. Hal ini diperkuat denganterjadinya serapan yang lebar dan intensitas lemahpada bilangan gelombang 1215,15 cm-1 pada isolat2 dan 1186,22 cm-1 pad a isolat 3 yangmenunjukkan adanya gugus C-O-C eter. 7. Terdapatnya gugus ester memperkuat dugaanadanya sen yawa tanin terhidrolisis, karena taninterhidrolisis terbentuk akibat ikatan ester antaragugus hidroksi pada glukosa den gan guguskarboksil dari asam fenolat (Manitto, 1981). 8. Dugaan senyawa tanin diperkuat denganadanya serapan pada bilangan gelombang 1516,05cm-1 dengan intensitas lemah dan bentuk pita tajampada kedua isolat tersebut yang menunjukkanadanya C=C aromatik.
Spektrum inframerah diatas menunjukkan bahwa isolat 2 dan isolat 3mempunyai gugus fungsi karakteristik yang samayaitu gugus -O-H, C-H alifatik, C=O ester, C=Caromatik, C-O-H, dan C-O-C eter. Puncak-puncaktersebut merupakan puncak spesifik dari senyawatanin khususnya tanin terhidrolisis, sehinggamemperkuat dugaan bahwa isolat 2 dan 3 hasil KLTP dari ekstrak aseton daun trembesimengandung senyawa tanin terhidrolisis. Jenis senyawa tanin yang terdapat dalamekstrak d aun trembesi (Samanea saman (Jacq.)Merr) yang berpotensi sebagai antibakteri E.coli adalah tanin terhidrolisis dengan gugusgugus fungsi karakteristik yaitu gugus -O-H, CHalifatik, C=O ester, C=C aromatik, C-O-H,dan CO-C eter.
XII.
Pustaka
Tannins: Classification and Karamali K and Van Ree Teunis, Department of Chemistry, University of Venda, Thohoyandou, Republic of South Africa 4th June 2001 Tannins: Classification and Definition. Karamali K and Van Ree Teunis, Department of Chemistry, University of Venda, Thohoyandou, Republic of South Africa 4th June 2001 Ashok, P. and Upadhyaya, K. 2012. Tannins are Astringent. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 1(3), pp.45-50. Hagerman, A. 2002. Tannin Chemistry. Departemen of Chemistry and Biochemistry Miami University Ricardo
da
Silva,
J.,
et
al .
1991.
Procyanidin
dimers
and
trimers
from
grap
seeds. Phytochemistry, 30(4), pp.1259-1264. Malangingia, Liberty.; Meiske S. Sangia.; dkk. Penentuan Kandungan Tanin dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Biji Buah Alpukat (Persea americana Mill.). (1) 5-10. Manado : Program Studi Kimia FMIPA UNSRAT. http://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmuo. Desmiaty, Y.; Ratih H.; Dewi M.A.; Agustin R. Penentuan Jumlah Tanin Total pada Daun Jati Belanda (Guazuma ulmifolia Lamk) dan Daun Sambang Darah (Excoecaria bicolor Hassk.) Secara Kolorimetri dengan Pereaksi Biru Prusia. Ortocarpus. 2008. 8, 106-109 Hagerman, A. E. Tannin Handbook. Department of Chemistry and Biochemistry, Miami University. 2002 Hernawan, Udhi Eko; Ahmad Dwi S. 2003. REVIEW: Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi. Surakarta: Program Studi Biologi FMIPA UNS. Dai, Jin. and Mumper, J. R. 2010. Plant Phenolic: Extraction, Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties. Molecules vol 15 pp. 7313-7352. Harvey, I. M. et al. 2013. Extracting and Analysing Anthelmintic Tannins from Bioactive Plants. NA07 – Toulose. University of Reading. Hernawan, U. E., dan Setyawan, A. D. 2003. REVIEW : Ellagitanin; Biosintesis, Isolasi, dan Aktivitas Biologi. ISSN: 1693 – 2242.
