Analisis Zat Anti Gizi ( Tanin ) Pada umumnya tanin merupakan senyawa polifenol yang memiliki berat molekul (BM) yang cukup tinggi (lebih dari 1000) dan dapat membentuk kompleks dengan protein. Berdasarkan strukturnya, tanin diklasifikasikan menjadi dua kelas yaitu tanin terhidrolisis dan tanin terkondensasi. 1. Tanin Terhidrolisis Tanin terhidrolisis biasanya berikatan dengan karbohidrat yang dapat membentuk jembatan oksigen, sehingga dapat dihidrolisis dengan menggunakan asam sulfat atau asam klorida. Gallotanin merupakan salah satu contoh tanin terhidrolisis, di mana gallotanin ini merupakan senyawa berupa gabungan dari karbohidrat dan asam galat. Selain itu, contoh lainnya adalah ellagitanin (tersusun dari asam heksahidroksidifenil). Secara singkat, apabila tanin mengalami hidrolisis, akan terbentuk fenol polihidroksi yang sederhana, misalnya piragalol, yang merupakan hasil dari terurainya asam gallat dan katekol yang merupakan hasil dari hidrolisis asam protokatekuat. Tanin terhidrolisiskan biasanya berupa senyawa amorf, higroskopis, berwarna cokelat kuning yang larut dalam air (terutama air panas) membentuk larutan koloid bukan larutan sebenarnya. Makin murni tanin, makin kurang kelarutannya dalam air dan makin mudah diperoleh dalam bentuk Kristal. 2.
Tanin Terkondensasi Tanin terkondensasi biasanya tidak dapat dihidrolisis, melainkan terkondensasi di mana menghasilkan asam klorida. Tanin terkondensasi kebanyakan terdiri dari polimer flavonoid. Tanin jenis ini dikenal dengan nama Proanthocyanidin yang merupakan polimer dari flavonoid yang yang dihubungan dengan dengan melalui C8 dengan dengan C4, contohnya contohnya Sorghum procyanidin yang tersusun dari catechin dan epiccatechin.
Klasifikasi Tanin berdasarkan warna dari garam ferri (FeCl 3), dapat digolongkan menjadi dua, yaitu : a. Katekol Berwarna hijau dengan 2 gugus fenol. Misalnya : Flobatanin dan Pirokatekol. Memiliki sifat-sifat sebagai berikut : Apabila dipanaskan akan menghasilkan katekol Apabila didihkan dengan dengan HCl akan menghasilkan menghasilkan flobapin yang berwarna berwarna merah. Apabila ditambahkan FeCl3 akan berwarna hijau. Apabila ditambahkan larutan Br akan terbentuk endapan. Contoh Katekol : Asam kirotamat (pada kina) dan asam katekotanat (pada gambir).
b.
Pirogalatanin (pirogalol)
1) 2) 3) 4)
Berwarna biru dengan FeCl 3 dengan 3 gugus fenol. Memiliki sifat-sifat sebagai berikut: Apabila dipanaskan akan terurai menjadi pirogalol. pir ogalol. Apabila dididihkan dengan HCl akan dihasilkan Asam gallat dan Asam ellag. Apabila ditambahkan dengan FeCl 3 akan berwarna biru. Apabila ditambahkan brom tidak akan terbentuk endapan. Contoh Pirogalatanin : Gallotanin (pada gallae) dan Ellagitanin (pada Granati cortex )
Sifat fisik dari tanin adalah sebagai berikut : Jika dilarutkan kedalam air akan membentuk koloid dan memiliki rasa asam dan sepat Jika dicampur dengan alkaloid dan dan glatin akan terjadi endapan Tidak dapat mengkristal Mengendapkan protein dari larutannya dan bersenyawa dengan protein tersebutsehingga tidak dipengaruhi oleh enzim protiolitik
Sifat kimia : 1) Merupakan senyawa kompleks dalam bentuk campuran polifenol yang sukar dipisahkan sehingga sukar mengkristal 2) Tanin dapat diidentifikasikan dengan kromotografi 3 ) Sifat tannin sebagai pengkhelat logam . Senyawa fenol yang secara biologis dapat berperan sebagai khelat logam. Proses pengkhlatan akanterjadisesuai pola subtitusi dan pH senyawa phenolik itu sendiri. Karena itulah tannin terhidrolisis memiliki potensial untuk menjadi pengkhelat logam. Hasil khelat dari tannin ini memiliki keuntungan yaitu kuatnya daya khelat dari senyawa tannin ini membuat khelat logam menjadi stabil dan aman dalam tubuh.Tetapi jika tubuh mengkonsumsi tannin berlebih maka akan mengalami anemia karena karena zat besi dalam darah akan dilhelat oleh senyawa tannin tersebut.
Cara Menguji Tanin Cara 1 : Persiapan sampel 1. Pembuatan Larutan Pereaksi a. Larutan indigocarmin Sebanyak 6 gram indigocarmin di larutkan ke dalam 500 ml aquades dan dipanaskan. Setelah dingin ditambahkan aquades sampai satu liter lalu disaring
b. Larutan KMnO4 0,1 N
Di timbang KMNO4 3,2 gram kemudian dilarutkan 1 liter aquades. Dididihkan selama 10-15 menit, kemudian disimpan selama satu malam. Setelah itu disaring dan diencerkan 1 liter aquades. Larutan KMNO4 standar peru p eru distandarrisasi sebelum dipakai
1. 2. 3. 4.
2. Standarisasi Larutan KMnO4 Ditimbang 0,63 gram kristal asam oksalat dan dilarutkan dalam 100 ml aquades. Diambil 25 ml larutan asam oksalat, ditambahkan 5 ml H2SO4 lalu l alu dipanaskan sampai 700C. Selanjutnya dalam keadaan panas dititrasi dengan larutan KMNO4 standar sampai warna ungu dan tetesan larutan permanganate tidak hilang, lalu dicatat volume titrasi. Mengulangi cara kerja (2 dan 3) sebanyak 3 kali dan masing – masing volume titrasi dicatat.
Reaksi : 2KMnO4 + 5H2C2O4 + 3H2SO4 2 MnSO4 + 10CO2 + K2SO4 + 8 H2O Normalitas larutan standar KMnO4 dihitung dengan menggunakan rumus : →
KmnO4 = W(mg) / BMx2x25/ 100 V (ml) Keterangan : W = Berat kristal asarn oklasat yang ditimbang (mg), BM = Berat molekul kristal asam oksalat (126), V = volume titrasi), 25/100 = Faktor pengeceran, 2 = electron valensi asam oksalat
3. Proses Ekstraksi Sampel dibersihkan dan dipotong-potong. Dikeringkan atau dimasukkan ke dalam oven (untuk menghilangkan kadar air). Sampel dihaluskan dan diayak, kemudian ditimbang 50 gram,lalu dimasukkan ke dalam gelas piala 1000 ml. Ke dalam gelas piala ditambahkan air 250 ml, kemudian dipanaskan dengan penangas air yang suhunya dapat dikontrol (waterbath) (waterbath) sambil diaduk dengan pengaduk. pengaduk. Suhu ekstraksi 50 – 60C dan lama ekstraksi 5 jam. Hal yang sama juga dilakukan dengan menggunakan pelarut etanol 96 %. Hasil ekstraksi yang diperoleh didinginkan didinginkan lalu disaring dan dimasukkan dimasukkan ke dalam alat evaporator dengan dengan suhu 50 – 60C untuk memisahkan tanin dan bahan b ahan pelarut. Setelah pelarut tersuling, tanin yang terbentuk dicuci dengan petroleum eter, lalu diupkan dikeringkan untuk uji kualitatif dan pententuan p ententuan kadar tanin.
Uji Kualitatif Tanin
Filtrat ditambahkan dengan gelatin terbentuk endapan Filtrate ditambahkan larutan FeCl3 0,5 M shingga larutan menjadi biru kehitaman kemudian ditambahkan larutan H2SO4 pekat, terbentuk endapan coklat.
Penentuan Kadar Tanin Prosedur Kerja :
Ditimbang 1,5 gr tanin, kemudian dimasukkan kedalam gelas piala 100 m l lalu ditambahkan air 50 ml. dipanaskan pada suhu 40 – 60C selama 30 menit. Setelah S etelah dingin larutan disaring ke dalam labu ukur 250 ml, lalu ditambahkan dengan air sampai tanda garis. Dari larutan di atas diambil 25 ml dimasukan kedalam Erlenmeyer ditambahkan 20 ml larutan indigocarmin kemudian dititrasi dengan larutan KMnO4 0,1 N, tiap kali penambahan sebanyak 1 ml KMnO4 hingga warna berubah dari biru menjadi hijau selanjutnya titrasi dilakukan tetes demi tetes hingga warna hijau menjadi warna kuning emas. Misalnya diperlukan volume titran A ml. Penetapan blanko dilakukan dengan memipet 20 ml larutan indigocarmin kedalam erlemneyer dan ditambahkan air lalu dititrasi seperti contoh di atas. Misalnya diperlukan volume titran B ml. Kadar tanin dapat di hitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut: % Tanin = 10 (A-B) x N x 0,00416 x 100% Sampel (g) Keterangan : A = Volume titrasi tanin (ml) B = Volume titrasi blanko (ml) N = normalitas KmnO4 standar (N) 10 = factor pengenceran 1 ml KmnO4 0,1 N : setara 0,00416 gram tanin
Cara 2 : Metode Penetapan Kadar Tanin Kadar tanin dapat ditetapkan dengan menggunakan m enggunakan berbagai macam metode. Metode yang biasanya digunakan untuk menentukan kadar tanin total adalah sebagai berikut : 1. Metode Gravimetri Analisis dengan menggunakan metode gravimetri adalah cara analisis kuantitatif berdasarkan berat tetap (berat konstan)-nya. Reagen atau pereaksi yang ditambahkan adalah berlebih untuk menekan kelarutan endapan. 2. Metode volumetri/permangan volumetri/permanganometri ometri Berdasarkan reaksi kimianya, metode volumetri dikelompokkan menjadi 4 jenis reaksi, yaitu reaksi asam-basa, reaksi redoks, reaksi pengendapan, dan reaksi pembentukan kompleks. 3. Metode Kolorimetri Contoh metode penetapan kadar tanin dari sebuah paper , misalnya dengan menggunakan metode kolorimetri dalam menentukan jumlah tanin total pada daun Jati Belanda, menggunakan pereaksi biru prusia. Prinsipnya yaitu reaksi reduksi senyawa besi (III) menjadi senyawa besi (II) oleh tanin membentuk warna biru-hitam selanjutnya dengan
penambahan pereaksi biru prusia, akan membentuk suatu kompleks berwarna biru tinta yang dapat diukur menggunakan menggunakan spektrofotometer pada daerah daerah sinar tampak. Reaksi yang teradi adalah sebagai berikut : Fe 3+ + tanin Fe 2+ Fe 2+ + K3Fe(CN)6 3KFe[Fe(CN) 6] Kompleks yang terbentuk berwarna biru tinta. →
→
Identifikasi Senyawa Tanin Dalam melakukan identifikasi senyawa tanin dari suatu tanaman, dapat dilakukan dengan beberapa cara. Untuk menganalisam secara kulitatif senyawa tanin, dapat dilakukan dengan metode sebagai berikut: Memberikan larutan FeCl 3 yang berwarna biru tua / hitam kehijauan. kehijauan. Menambahkan Kalium Ferrisianida yang ditambahkan dengan amoniak berwarna cokelat. Mengendapkan dengan garam Pb, Sn, Cu, dan larutan Kalium Bikromat berwarna cokelat Untuk menganalisis senyawa tanin secara kuantitatif dapat diguanakan metode sebagai berikut : Metode analisis berdasarkan gugus fungsinya. Dengan menggunakan kromatografi, seperti HPLC dan UV-Vis. Metode analisis fenol secara umum, menggunakan pereaksi blue prussian dan pereaksi Folin. Metode presipitasi dengan menggunakan protein.
Cara 3 : Uji Kualitatif Ke dalam gelas kimia dimasukkan sebanyak 0,5 gram serbuk sampel, kemudian ditambahkan 20 mL aquades lalu dididihkan dan disaring. Setelah itu 0,5 mL filtrat ditambahkan ferriklorida 0,1% dan diamati terjadinya perubahan warna. Uji Kuantitatif Sebanyak 500 mg sampel dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, lalu ditambahkan 50 mL aquades, diaduk dengan menggunakan pengocok mekanik selama 1 jam. Setelah itu larutan disaring dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL dan ditambahkan air hingga tepat tanda batas. Kemudian dipipet 5 mL filtrat ditambah 0,8 mL kalium heksasianoferrat(III) 0,008 M dalam 0,1 N asam klorida dan 0,8 mL ferriklorida 0,1 M dalam 0,1 N asam klorida. Kemudian didiamkan, setelah itu diukur serapannya dengan menggunakan spektrofotometer ultraungu-tampak pada panjang gelombang 420 nm.
