3.
Alat dan Bahan
Alat : -
Stopwatch
-
Water bath 38oC
-
Tabung reaksi
-
Pipet ukur 1 ml, 5 ml, 10 ml
-
Pipet tetes
-
Pengaduk
-
Penangas air 38oC
Bahan : -
Larutan Saliva
-
Aquadest
-
Larutan Toluen
-
Kloroform
-
Larutan Merkuri klorat 1%
-
Larutan phenol 2 %
- Natrium florida -
Larutan amilum 2%
-
Larutan iodine
-
Pereaksi benedict
- NaCl
4.
Prosedur Percobaan
4.1. Pengaruh pH Terhadap Akitivitas Enzim - 10 ml larutan buffer pH 8, 7.4, 6.8, 6, dan 5.2 disiapkan dalam tabung reaksi yang terpisah - Ditambahkan 5 ml larutan amylum 1%, 2 ml larutan Natrium Klorida 0,1 M dan 2 ml larutan saliva (1:9) pada tiap tabung reaksi - Tabung reaksi tersebut ditempatkan dalam water bath 38oC selama 10 menit - Ditambahkan larutan iodine secukupnya pada tiap tabung reaksi sedikit demi sedikit - Diamati dan catat perubahan yang terjadi ! - Tentukan tabung mana yang pertama kali mencapai titik akromik (tidak memerikan warna dengan iodine) ! - Tabung dengan pH 8 dan 7.4 sebaiknya diasamkan dengan ditambahkan asam asetat sedikit demi sedikit sebelum ditambahkan iodine
4.2. Pengaruh Inhibitor Terhadap Akitivitas Enzim -
2 ml saliva dilarutkan dengan 8 ml aquadest, campurkan dengan baik
-
Ditambahkan 1 ml larutan saliva yang telah diencerkan pada tiap tabung reaksi yang berbeda sejumlah 6 buah tabung
-
Pada tabung yang terpisah ditambahkan 5 tetes larutan toluen, 5 tetes kloroform, 5 tetes larutan mercuri klorida 1%, 5 tetes larutan phenol 2%, 0.5 gram Natrium florida, dan 5 tetes aquadest
-
Tabung tersebut ditaruh pada rak tabung selama 10 menit dengan sesekali digojog perlahan-lahan
-
Ditambahkan 5 ml larutan amylum 1% pada tiap tabung reaksi
-
Ditempatkan tiap-tiap tabung tersebut dalam water bath 38 oC selama 15 menit
-
Bagi masing-masing tabung menjadi dua bagian untuk dilakukan iodine dan Benedict test
-
Dicatat dan diamati perubahan yang terjadi !
4.3. Uji Kuantitatif Enzym Ptyalin -
2 ml NaCl 0,1 ml dicampurkan dengan 10 ml larutan amylum 1%. Ditempatkan pada penangas 38oC. Kemudian ditambahkan larutan saliva (1:9). Didiamkan selama 30 detik. (Larutan A)
-
Disiapkan 8 tabung yang berisi 3 ml aquadest dan 3 tetes 0,01 M iodine
-
Pada tabung pertama ditambahkan 2 tetes larutan A. Catat waktu mulai dari saat penetesan sampai terjadi perubahan warna larutan (titik akromatik)
-
Pada tabung kedua, ditambahkan 1 tetes aquadest dan 2 tetes larutan A. Catat waktu hingga terjadi perubahan warna.
-
Tabung ketiga ditambahkan dengan 2 tetes aquadest dan 2 tetes larutan A. Catat waktunya.
-
Lakukan pengenceran bertahap pada tabung reaksi 4 sampai 8, hingga tercapai perubahan waktu yang dibutuhkan untuk tercapainya perubahan warna sama dengan 4 menit.
-
Jika 1 unit amylase dianggap setara dengan 10 ml larutan amylum 1% yang mampu terdigesi pada titik akromik (4 menit). Tentukan unit amyalse yang terkandung dalam larutan saliva sampel.
5.
Data Pengamatan 5.1 Pengaruh pH terhadap Aktivitas Enzim
pH
Perubahan
5.2
Warna biru tua
6
Warna biru
6.8
Warna biru
7.4
Warna biru
8
Warna biru muda
5.2 Pengaruh Inhibitor terhadap Aktivitas Enzim
Uji Iodine Sampel
Perubahan Awal
+ 3 tetes iodine pertama
+ 2 tetes iodine teratur
Saliva + toluen
Bening
Bening ada endapan
Bening ada endapan putih
Saliva + kloroform
Bening
Bening
Bening kekuningan
Saliva + HgCl
Bening
Orange
Biru
Saliva + Phenol
Bening
Bening
Bening
Saliva + NaF
Bening
Bening
Bening
Saliva + aquadest
Bening
kuning
Kuning
Uji Benedict Sampel
Perubahan Awal
+ Benedict
+ Pemanasan
Saliva + toluen
Bening
Biru
Hijau kebiruan
Saliva + kloroform
Bening
Biru
Hijau
Saliva + HgCl
Bening
Biru
Biru
Saliva + Phenol
Bening
Biru
Hijau kebiruan
Saliva + NaF
Bening
Biru
Hijau ada endapan
Saliva + aquadest
Bening
Biru
Hijau kebiruan
5.3 Uji Kuantitatif Enzim Ptyalin
Sampel
Perubahan
Tabung 1
Kuning bening
Tabung 2
Kuning bening
Tabung 3
Kuning bening
Tabung 4
Kuning bening
Tabung 5
Kuning bening
Tabung 6
Kuning bening
Tabung 7
Kuning bening
Tabung 8
Kuning bening
6.
Pembahasan
Penyiapan larutan buffer dengan pH yang bermacam-macam dimaksudkan untuk mengamati pada pH berapa enzim yang ada dalam larutan saliva tersebut paling baik beraktivitas. Baik tidaknya enzim itu beraktivitas diindikasikan dengan cepat lambatnya proses hidrolisis amilum oleh enzim tersebut.
Dengan penambahan larutan iodine, amilum akan memberikan warna biru tua. Apabila enzim menghidrolisis amilum menjadi gula yang lebih sederhana, maka warna biru tua yang terbentuk akibat reaksi dengan iodine tersebut lama kelamaan akan berubah menjadi kekuningan dan hilang menjadi bening tak berwarna seiring dengan berkurang dan habisnya amilum dalam larutan (amilumnya habis terhidrolisis menjadi gula sederhana). Lama proses perubahan warna inilah yang kemudian menjadi parameter pH optimum untuk aktivitas enzim yang ada pada laruan saliva.
Enzim yang berada dalam larutan pada kondisi pH 8 dan pH 7,4 tidak menunjukkan adanya aktivitas enzimatik ketika dilakukan percobaan, terlihat dari warna larutan biru tua yang terus bertahan. Penambahan sedikit asam asetat pada kedua larutan dengan pH tersebut dimaksudkan untuk mengamati apakah aktivitas enzimnya akan meningkat seiring dengan diturunkannya pH (penambahan asam akan menurunkan pH), apabila pHnya sudah turun dan mendekati angka pH optimum untuk aktivitas enzim tersebut, maka enzim akan semakin mudah beraktivitas dan menghidrolisis amilum. Namun pada percobaan ini, penambahan asam asetat tidak merubah tingkat aktivitas enzim secara signifikan. Larutan yang menunjukan perubahan warna paling cepat adalah larutan yang dikondisikan dengan pH 6,8 - 7. Artinya pada tingkat keasaman ini, aktivitas enzim paling baik bekerja. pH yang baik bagi aktivitas enzimatik ini kemudian disebut sebagai pH optimum enzim. Dalam hal ini, pH optimum bagi enzim yang terkandung pada larutan saliva berarti berada pada pH 6,8 - 7.
Uji iodine digunakan untuk mendeteksi ada tidaknya kandungan amilum dalam sampel. Apabila melalui uji ini larutan berubah warna menjadi biru / keunguan, maka dikatakan dalam sampel tersebut terkandung amilum. Pada percobaan ini, amilum yang
ditambahkan ke dalam tabung berisi enzim akan terhidrolisis menjadi gula yang lebih sederhana. Namun dengan adanya suatu zat inhibitor tertentu, proses hidrolisis ini menjadi terhambat. Berdasarkan data pengamatan, tabung dengan zat inhibitor HgCl menunjukkan hasil positif dengan pengujian ini berdasarkan perubahan warna yang terjadi menjadi keunguan. Artinya tidak terjadi reaksi hidrolisis pada tabung yang berisi larutan saliva sebagai enzim dan amilum sebagai substrat. Warna biru yang bertahan setelah pemanasan menunjukkan seberapa besar kemampuan HgCl menginhibisi enzim ketika hendak menghidrolisis substratnya. Dengan demikian, HgCl dikatakan merupakan inhibitor yang paling efektif dalam menghambat aktivitas enzim yang terkandung dalam larutan saliva tersebut. Uji Benedict digunakan untuk mendeteksi ada tidaknya kandungan gula pereduksi dalam sampel. Kuntitas endapan yang terbentuk setelah proses pemanasan merupakan indikasi banyaknya jumlah gula pereduksi yang terbentuk akibat hidrolisis amilum oleh enzim yang terkandung dalam larutan saliva. Semakin sedikit endapan yang terbentuk melalui uji ini menunjukkan bahwa inhibitor yang ditambahkan semakin baik dan bekerja secara efektif. Apabila endapan yang terbentuk sedikit, artinya karbohidrat yang ada dalam tabung masih berada dalam bentuk polisakarida (amilum), itu berarti bahwa amilum tersebut belum terhidrolisis enzim karena terinhibisi oleh senyawa inhibitor. Pada pengujian ini, didapat bahwa HgCl merupakan inhibitor yang paling efektif dalam menghambat aktivitas enzim karena negatif terhadap pengujian benedict. Berdasarkan data pengaatan dan percobaan yang dilakukan. senyawa yang bekerja paling baik sebagai inhibitor adalah HgCl. Senyawa yang paling buruk dalam menghambat aktivitas enzimatik yaitu phenol karena menunjukkan hasil yang negatif pada pengujian iodine dan menghasilkan jumlah endapan paling banyak melalui pengujian Benedict. Aktivitas enzim dipengaruhi oleh kadar enzim. Aktivitas enzim dan kadar enzim memiliki hubungan perbandingan yang lurus. Hal ini berarti semakin besar kadar enzim, semakin besar aktivitas enzim dan semakin cepat reaksi yang dikatalisis enzim. Semakin banyak enzim yang berikatan dengan substrat, kecepatan reaksi semakin meningkat dan semakin banyak kompleks enzim-substrat yang terbentuk. Maka produk yang terbentuk pun semakin banyak. Pada percobaan kali ini, pada saat pengenceran tidak terjadi perubahan warna yang mungkin terjadi penyimpangan pada saat percobaan seperti : kurang teliti dalam melakukan
pengenceran, kesalahan waktu atau suhu saat pengeraman, saliva sebagai sumber enzim telah dipengaruhi oleh zat warna atau sebagainya.
7.
Kesimpulan
-
Kecepatan reaksi enzimatik akan meningkat seiring dengan peningkatan suhu sampai batas optimum. Setelah melewati suhu optimum, maka kecepatan reaksi enzimatik akan kembali menurun. Suhu optimum enzim amilase saliva adalah 37oC, sama dengan suhu normal tubuh.
- pH optimum untuk aktivitas enzim melalui percobaan uji pengaruh pH terhadap aktivitas enzim didapat pada pH 6,8 – 7. -
Inhibitor logam berat dapat menyebabkan denaturasi enzim sehingga aktivitas enzim kecil.
-
Berdasarkan percobaan pengaruh inhibitor terhadap aktivitas enzim, ditemukan bahwa HgCl merupakan inhibitor yang paling baik.
-
Enzim memiliki aktivitas maksimal pada pH optimumnya (pH optimum enzim amilase saliva adalah 9). Penurunan atau kenaikan pH akan mempengaruhi aktivitas enzim.
8.
Daftar Pustaka
-
Pujiadi, Anna. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. Jakarta : UI Press
-
Page, D.S. 1997. Prinsip-prinsip Biokimia. Erlangga: Jakarta.
-
http://chem-is-ty.org/artikel_kimia diakses pada tanggal 30 Desember 2010
-
http://scribd.com/pengaruh_ph_dan_inhibitor diakses pada tanggal 2 Januari 2011
