1. Definición de eritropoyesis. Eritropoyesis es el término usado para designar la actividad proliferativa eritroide de la médula ósea. La eritropoyesis normal solo tiene lugar en la médula ósea, con formación de un número total adecuado de eritrocitos. La eritropoyesis eficaz tiene como resultado la producción de un 90% o más de eritrocitos diferenciados maduros en circulación. La insuficiente se asocia con una reducción cuantitativa de precursores eritroides en la médula ósea. 2. Concepto de micronúcleo y proceso de formación. Los micronúcleos (MNs) son cromosomas completos o fragmentos cromosómicos que se condensan y permanecen rezagados durante la anafase del ciclo celular. Se han propuesto cuatro mecanismos (fragmentos acéntricos, cromosomas multicentricos, daño al cinetócoro y daño al huso) para la formación de MNs que involucran clastogenicidad o aneuploidia. Los micronúcleos son formados durante la telofase de la mitosis o de la meiosis, cuando la cubierta nuclear es reconstituida alrededor de los cromosomas de las células hijas. Son resultado de fragmentos cromosómicos acéntricos o de cromosomas enteros que no fueron incluidos en el núcleo principal. El micronúcleo representa la perdida de cromatina en consecuencia del cromosómico estructural o daño del aparato mitótico. 3. Diferencia entre daño clastogénico y aneuploidógeno, y cómo se pueden diferenciar con la técnica de micronúcleos. Los micronúcleos son fragmentos de cromosomas o cromosomas completos que espontáneamente o por causa de agentes que rompen cromosomas, como las radiaciones (agentes que se denominan clastógenos) o que dañan el huso mitótico, m itótico, como la vincristina (aneuploidógenos), quedan fuera del núcleo durante la mitosis. En la técnica de micronúcleos se diferencian si el compuesto estudiado es un clastógeno, se formarán micronúcleos pequeños, pero si es un aneuploidógeno, lo que observaremos será la formación de micronúcleos grandes. 4. Fundamento de la tinción de Giemsa. Para teñir los extendidos de sangre periférica periférica o médula ósea se usa la tinción se puede usar la tinción de GIemsa. Se considera policromática porque contiene eosina y azul de metileno. El metanol fijará y el buffer ayudará a que se tiñan las células. El azul de metileno oxidado y la eosina forman un complejo tiozina-eosinato, que tiñe os componentes celulares, Las reacciones de tinción depende del pH. El azul de metileno libre es básico y tiñe los componentes celulares ácidos (o basófilos), como el RNA. La eosina libre es ácida y tiñe los componentes básicos (o eosinófilos), como la hemoglobina o los gránulos eosinófilos. Los neutrófilos (pH neutro) toman algunas características de tinción de ambas coloraciones. 5. Coloración que adquieren los eritrocitos maduros, inmaduros y micronucleados con el colorante de Giemsa. La presencia de ácido ribonucleico (RNA) en el citoplasma de los eritrocitos recién formados hace que estos adopten una coloración azul a ser teñidos con colorante Giemsa,
siendo denominados eritrocitos policromáticos (EPC). La desaparición gradual del RNA hace que los eritrocitos más maduros adopten una coloración rosa-anaranjada, siendo denominados eritrocitos normocromáticos (ENC). Los micronúcleos se tiñeran de azul. 6. Mecanismo de acción genotóxica de la ciclofosfamida. Su mecanismo de acción consiste en adicionar grupos alquilo a moléculas electronegativas que se hallan en las células. Así detiene el crecimiento tumoral al inducir la formación de dímeros de guanina en el ADN de doble cadena, los cuales interfieren con los mecanismos de traducción y transcripción del material genético. La ciclofosfamida actúa a través de un profármaco no específico, la fosforamida, ya que requiere de la activación enzimática por oxidasas celulares. Para alcanzar el efecto genotóxico se requiere la activación de medicamento en dos pasos; en el primero se induce la formación de puentes anormales entre las cadenas del ADN, y en el segundo se efectúa la alquilación nucleofílica de dicho ácido. El alto grado de mutagenicidad de estos agentes conlleva el riesgo de que se formen neoplasias secundarias. 7. Usos clínicos de la ciclofosfamida. Es un agente usado como antineoplásico, se usa en el tratamiento de tumores cerebrales se utilizan agentes con fines quimioterapéuticos. 8. Propósito de adicionar EtOH y solución amortiguadora de fosfatos pH=6.8. El etanol presente en las coloraciones fija las células al portaobjetos. El teñido real de las células o de los componentes celulares no tiene lugar hasta que se agrega el buffer. Bibliografía
Rodak F.B. Hematología: Fundamentos y A plicaciones Clínicas. Segunda edición. Médica Panaméricana. España, 2002. Págs. 178 y 206. Botello A.V., Gold B.G. Golfo de México: Contaminación e impacto ambiental. Segunda edición. UNAM, UAC. México. Pág, 139 Sotelo M.S., Aguirre M.L,Tumores cerebrales. Primera edición. Médica Panaméricana. México, 200o. Pág. 245. Zuñiga G.G., Gómez M.B. La prueba de micronúcleos. Revista de divulgación cinetifica tecnológica de la Universidad Veracruzana. Vol. XIX. Número I. Enero-Abril 2006. Disponible en: http://www.uv.mx/cienciahombre/revistae/vol19num1/articulos/micronucleos/index.htm
