Total Plate Count (Tpc)

LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI PEMERIKSAAN PEMERIKSAAN TOTAL PLATE COUNT (TPC)

Disusun oleh : A.A. Ayu Tirtamara NIM P07134012027 Semester III

Disampaikan kepada : Dosen Pembimbing Praktikum Bakteriologi

KEMENTERIAN KESEHATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESEHATAN DENPASAR DIII JURUSAN ANALIS KESEHATAN 2013

Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Bahan makanan, selain merupakan sumber gizi bagi manusia, juga merupakan sumber makanan bagi mikroorganisme.Pertumbuhan mikroorganisme dalam bahan pangan dapat menyebabkan perubahan yang menguntungkan seperti perbaikan bahan pangan secara gizi, daya cerna ataupun daya simpannya.Selain itu pertumbuham mikroorganisme dalam bahan pangan juga dapat mengakibatkan perubahan fisik atau kimia

yang

tidak

diinginkan,

sehingga

bahan

pangan

tersebut

tidak

layak

dikomsumsi.Kejadian ini biasanya terjadi pada pembusukan bahan pangan. Bahan pangan dapat bertindak sebagai perantara atau substrat untuk pertumbuhan mikroorganisme patogenik dan organisme lain penyebab penyakit. Penyakit menular yang cukup berbahaya seperti tifus, kolera, disentri, atau tbc, mudah tersebar melalui bahan makanan. Gangguan-gangguan kesehatan, khususnya gagguan perut akibat makanan disebabkan, antara lain oleh kebanyakan makan, alergi, kekurangan zat gizi, keracunan langsung oleh bahan-bahan kimia, tanaman atau hewan beracun; toksintoksin yang dihasilkan bakteri; mengkomsumsi pangan yan mengandung parasit-parasit hewan dan mikroorganisme. Gangguan-gangguan ini sering dikelompokkan menjadi satu karena memiliki gejala yang hampir sama atau sering ser ing tertukar dalam penentuan penyebabnya. Apabila terjadi kontaminasi makanan yang berlebihan di tengah – tengah masyarakat secara otomatis gangguan kesehatan masarakat akan pula menigkat karena adanya peningkatan kontaminasi makanan yang tinggi. Untuk mencegah terjadinya peningkatan kontaminasi makanan

yang tinggi sebaiknya yang sangat utama adalah

kebersihan higiens dan sanitasi yang perlu di tingkatkan, karena dengan program tersebut angka kontaminasi makanan yang ada dapat menurun. Banyaknya penjual makanan yang instan serta pedagang makanan yang memerlukan bahan makanan yang tidak berstandar taraf kesehatan, ini memicu juga angka kontaminasi makanan akan tinggi. Hal tersebut yang melatar belakangi penulis untuk mengangkat permasalahan tersebut sebagai bahan yang akan dibahas dalam laporan praktikum dengan judul “Penentuan Angk a Kuman pada Tahu”. Tahu”.

Menghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan (makanan, minuman, dan lain-lain) dilakukan untuk mengetahui sampai seberapa jauh bahan itu tercemar oleh mikroba.Dengan mengetahui jumlah mikroba, maka dapat diketahui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut.Bahan yang dapat dikatakan baik jika jumlah Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

2

mikroba yang terkandung dalam bahan tersebut masih di bawah jumlah standar yang ditentukan oleh suatu lambaga.Kandungan mikroba pada suatu bahan juga sangat menentukan tingkat kerusakannya, serta dapat ditentukan oleh tingkat kelayakan untuk dikonsumsi.

1.2 Rumusan Masalah

Dari latar belakang yang dipaparkan di atas, rumusan masalah dalam praktikum dan penulisan laporanpraktikum ini adalah sebagai berikut : 1. Bagaimana prosedur pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada tahu ? 2. Apa saja yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel tahu untuk pemeriksaan angka kuman ? 3. Bagaimana teknik isolasi bakteri menggunakan media PCA untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu ? 4. Apa saja yang perlu diperhatikan dalam penanaman bakteri menggunakan media PCA untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu ? 5. Apakah ada koloni yang tumbuh pada media PCA yang digunakan sebagai kontrol dan penanaman sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu ? 6. Jika ada, bagaimana ciri-ciri koloni bakteri yang tumbuh pada media PCA dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu ? 7. Berapa jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada media PCA dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu ? 8. Apa saja yang perlu diperhatikan dalam perhitungan angka kuman sampel bahan makanan? 9. Berdasarkan hasil pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu, apakah sampel tahu yang diperoleh memenuhi kualitas higienitas bahan makanan secara bakteriologis ?

1.3 Tujuan

Dari rumusan masalah di atas, tujuan dalam praktikumdan penulisan laporan praktikum ini adalah sebagai berikut : 1. Untuk mengetahui prosedur pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada tahu. 2. Untuk mengetahui hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel tahu untuk pemeriksaan angka kuman. Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

3

3. Untuk mengetahui teknik isolasi bakteri menggunakan media PCA untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 4. Untuk mengetahui hal-hal yang perlu diperhatikan dalam penanaman bakteri menggunakan media PCA untuk pemeriksaan angka kuman pada s ampel tahu. 5. Untuk mengetahui ada/tidaknya koloni yang tumbuh pada media PCA yang digunakan sebagai kontrol dan penanaman sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 6. Untuk mengetahui ciri-ciri koloni bakteri yang tumbuh pada media PCA dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 7. Untuk mengetahui jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada media PCA dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 8. Untuk mengetahui hal-hal yang perlu diperhatikan dalam perhitungan angka kuman sampel bahan makanan. 9. Untuk mengetahui kualitas bahan makanan (tahu) secara bakteriologis.

1.3 Manfaat

Manfaat dari praktikum yang telah dilakukan dan penulisan laporan praktikum ini adalah sebagai berikut. 1. Bagi Mahasiswa : Laporan praktikum ini dapat menambah wawasan mahasiswa tentang Pemeriksaan Angka Kuman, sehingga dapat mengatahui prosedur pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman, dan dapat mengoalh sampel, serta dapat menghitung angka kuman pada makanan dan minuman. 2. Bagi Dosen Pembimbing : Laporan praktikum ini dapat dijadikan sebagai bahan evaluasi dalam proses perkulihan dan dapat d apat dijadikan acuan dalam memberikan penilaian serta laporan ini dapat digunakan sebagai bahan ajar.

Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Faktor-faktor yang mempengaruhi higienitas bahan makanan

Setiap bahan pangan selalu mengandung mikroba yang jumlah dan jenisnya berbeda.Pencemaran mikroba pada bahan pangan merupakan hasil has il kontaminasi langsung atau tidak langsung dengan sumber-sumber pencemar mikroba, seperti tanah, air, debu, saluran pencernaan dan pernafasan manusia atau hewan.Dalam batas-batas tertentu kandungan mikroba pada bahan pangan tidak banyak berpengaruh terhadap ketahanan bahan pangan tersebut. Akan tetapi, apabila kondisi lingkungan memungkinkan mikroba untuk tumbuh dan berkembang lebih cepat, maka bahan pangan akan rusak karenanya (Dwidjoseputro 2005). Menurut Fardiaz (1992), faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan bakteri adalah zat makanan, pH, air, oksigen, dan senyawa penghambat pertumbuhan. Adapun menurut Buckle (1987), selain zat makanan, suhu, pH, dan aktifitas air, pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh waktu, potensial reduksi oksidiasi (redoks), struktur biologi, dan faktor pengolahan. 1. Zat Makanan Komponen kimiawi dan bahan makanan dapat ikut menentukan jenis mikroorganisme yang dominan di dalam bahan makanan tersebut.Komponen kimiawi tersebut sangat menentukan jumlah zat-zat gizi yang paling penting untuk perkembangan mikroorganisme (Buckle 1987). 1987). 2. Suhu Pertumbuhan Menurut

Buckle

(1987),

suhu

dapat

mempengaruhi

pertumbuhan

mikroorganisme dengan dua cara yang berlawanan yaitu (1) apabila suhu mengalami kenaikan sekitar suhu optimalnya, kecepatan metabolisme naik dan pertumbuhan dipercepat sedangkan bila suhu turun sekitar suhu optimalnya, kecepatan metabolisme akan menurun dan pertumbuhan juga diperlambat. Selanjutnya, Winarno (2002) menyebutkan bahwa setiap penurunan suhu 8°C akan membuat kecepatan reaksi berkurang menjadi setengahnya. (2) bila suhu naik hingga diatas suhu maksimal atau turun dibawah suhu minimal, maka pertumbuhan mungkin akan terhenti, komponen sel menjadi tidak aktif dan sel-sel mengalami kematian. 3. Nilai pH Setiap organisme memiliki kisaran pH tertentu yang masih memungkinkan bagi pertumbuhannya dan juga mempunyai pH optimum. Pada umumnya, mikroorganisme dapat tumbuh pada kisaran suhu 6,6-8,0 dan nilai pH luar pada Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

5

kisaran 2,0-1,0 sydah bersifat merusak (Buckle 1987). Mikroorganisme juga memerlukan pH tertentu untuk pertumbuhannya, namun pada umumnya bakteri memiliki kisaran pH yang sempit, yaitu sekitar pH 6,5-7,5 atau pada pH netral. 4. Aktifitas Air Jumlah air yang terkandung didalam bahan makanan atau larutan disebut sebagai aktivitas air (water activity). Jenis mikroorganisme yang berbeda membutuhnkan jumlah air yang berbeda pula untuk pertumbuhannya. Bakteri umumnya memerlukan media yang memiliki nilai aw tinggi (0,91), khamir membutuhkan nilai aw 0,87-0,91 sedangkan kapang membutuhkan nilai aw yang lebih rendah lagi, yaitu 0,80-0,87 (Buckle 1987). 5. Ketersediaan Oksigen Masing-masing organisme membutuhkan jumlah oksigen yang berbeda untuk metabolismenya. Ada organisme yang tidak membutuhkan oksigen sama sekali untuk pertumbuhannya (anaerob), ada yang membutuhkan sedikit oksigen (mikroaerofil) dan ada yang dapat tumbuh dan berkembang biak pada kondisi lingkungan yang cukup oksigen maupun tidak ada oksigen sama sekali (anaerob fakultatif). 6. Senyawa penghambat Pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh senyawa-senyawa dalam bahan makanan yang bersifat antimikroba yang secara ilmiah ada didalam bahan makanan tersebut maupun yang sengaja ditambahkan seperti asam benzoat dan asam sorbat. 7. Waktu Menurut Fardiaz (1992), perbedaan dalam sifat-sifat sel suatu organism dan mekanisme

pertumbuhannya

menyebabkan

perbedaan

dalam

kecepatan

pertumbuhan. Umumnya, semakin komplek dalam sifat-sifat sel suatu organisme, maka waktu yang dibutuhkan oleh sel untuk membelah semakin lama.Bakteri membelah lebih cepat dari pada khamir, sedangkan khamir lebih cepat dari pada kapang. Bakteri membelah secara cepat dan tumbuh maksiimal dalam waktu 45 menit, khamir baru membelah dengan cepat dalam waktu 90 menit, kemudian kapang membelah dalam waktu 180 menit. 8. Potensial Reduksi Oksidiasi ( Redoks ) Potensial

reduksi

oksidasi

menunjukkan

kemampuan

substrat

untuk

melepaskan elektron (oksidasi) atau menerima elektron (reduksi).Potensial redoks sangat berpengaruh terhadap kehidupan mikroba.Mikroba memerlukan potensial Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

6

redoks positif (teroksidasi), sedangkan pada mikroba anaerob memerlukan potensial redoks negatif (tereduksi). 9. Struktur Biologi Struktur biologi seperti kulit pada telur, kulit kacang-kacangan dan kulit buah berperan mencegah masuknya mikroba mikroba ke dalam bahan pangan tersebut. 10. Faktor Pengolahan Mikroba spesifik yang terdapat di dalam bahan pangan dapat dikurangi jumlahnya oleh berbagai jenis metode pengolahan atau pengawetan pangan. Jenis jenis pengolahan atau pengawetan pangan yang berpengaruh terhadap kehidupan mikroba, antara lain suhu tinggi, suhu rendah, penambahan bahan pengawet dan irradiasi.

2.2 Pemilihan media pembiakan untuk pemeriksaan angka kuman bahan makanan

Mikroorganisme dibiakan di laboratorium yang terdiri dari bahan nutrient. Biasanya pemilihan medium yang dipakai bargantung pada banyak faktor seperti apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan. Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan harus mengandung sema zat makanan yang diperlukan oleh mikroorganisme tersebut. Faktor lain seperti pH, suhu, dan pendimginan harus dikendalikan dengan baik. (Buckle, 2007) Selain untuk tujuan diatas medium juga memiliki fungsi lain seperti tempat untuk mengisolasi, seleksi, evaluasi dan differensiasi biakan yang didapatkan. Agar tiap-tiap medium memiliki karakteristik yang sesuai dengan tujuan sehingga seringkali digunakan beberapa jenis zat tertentu yang mempunyai pengaruh terhadap pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroba(Suriawiria, 2005) 2005)

2.3 Persiapan ruangan untuk pemeriksaan angka kuman bahan makanan

Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataan serum vaksin dan sebagainya.Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast) udara yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan melalui suatu jalanagar tekena sinar ultraviolet (Pelczar, 1986).

2.4 Teknik isolasi bakteri untuk perhitungan angka kuman sampel padat (bahan makanan) 1. Teknik preparasi sampel padat dengan cara pengenceran ( Dilution ) Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

7

Salah satu jenis preparasi sampel adalah dengan caramaseration caramaseration (pengancuran), sampel yang berbentuk padat dapat ditumbuk dengan mortar dan pestle sehingga mikroba yang ada dipermukaan atau di dalam dapat terlepas kemudian dilarutkan ke dalam air.Tujuan dari teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. Contoh sampelnya antar lain bakso, tahu, biji, dll. Perbandingan antar berat sampel dengan pengenceran pertama adalah 1 : 9 (w/v). Teknik dilusi sangat penting dalam analisa mikrobiologi karena hampir semua metode penelitian dan perhitungan jumlah sel mikroba menggunakan teknik ini, seperti TPC (Total Plate Count). Pada proses dilusi dapat dilakukan teknik pengenceran bertingkat. Tujuan dari pengenceran bertingkat yaitu memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan.Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat pengenceran tergantung

kepada

perkiraan

jumlah

mikroba

dalam

sampel.

Digunakan

perbandingan 1 : 9 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga pengenceran berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisma dari pengenceran sebelumnya. Gambar teknik pengenceran bertingkat

Pour Plate 2. Teknik Pour (agar tuang)

Teknik

penanaman

ini

merupakan

lajutan

dari

pengenceran

bertingkat.Pengambilan suspensi dapat diambil dari pengenceran mana saja tapi Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

8

biasanya untuk tujuan isolasi (mendapatkan koloni tunggal) diambil beberapa tabung pengenceran terakhir, sedangkan pada perhitungan angka kuman suatu bahan makanan, suspensi diambil dari setiap sampel pada tabung pengenceran. Teknik ini memerlukan agar yang belum padat (>45 oC) untuk dituang bersama suspensi bakteri ke dalam cawan petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat. Hal ini akan menyebarkan sel-sel bakteri tidak hanya pada permukaan agar saja melainkan sel terendam agar (di dalam agar) sehingga terdapat sel yang tumbuh dipermukaan agar yang kaya O 2 dan ada yang tumbuh di dalam agar yang tidak banyak begitu banyak mengandung mengandung oksigen. Gambar teknik isolasi bakteri dengan metode pour plate

Dalam pour plate, cawan petri yang telah berisi campuran media dan sampel tersebut kemudian diputar dengan lembut untuk memastikan bahwa media dan sampel bercampur secara merata.

Gambar perbedaan teknik spread plate dengan teknik pour plate

Spread plate plate adalah teknik menanam dengan menyebarkan suspensi bakteri di permukaan agar yang telah memadat, sedangkan pada metode pour plate plate suspensi bakteri dicampurkan terlebih dahulu pada media yang belum memadat sebelum dituangkan ke cawan petri. Alasan diteteskannya bakteri sebanyak 0,1 mL untuk spread plate plate dan 1 mL untuk pour plate plate karena spread plate ditujukan untuk menumbuhkan bakteri hanya pada permukaan media saja, sedangkan pour platedigunakan platedigunakan untuk menumbuhkan bakteri pada permukaan dan bagian tengah media sehingga s ehingga membutuhkan ruang yang lebih luas untuk penyebarannya maka diberikan lebih banyak suspensi sampel daripada spread daripada spread plate. plate. Pemeriksaan angka kuman pada tahu |

9

2.2 Cara Menghitung Jumlah Mikroba dan Pengaruh Faktor Pengenceran

Pada teknik isolasi dengan pour plate memungkinkan mikroorganisme untuk tumbuh baik di permukaan dan di dalam media. Sebagian besar dari koloni tumbuh dalam media dan dalam ukuran kecil dan mungkin konfluen. Beberapa daerah koloni yang tumbuh di permukaan dapat berupa ukuran yang sama. Suspensi bakteri yang telah ditanam pada media agar (PCA= Plate Count Agar ), ), setelah inkubasi pada suhu 37°C selama 24-48 jam dihitung jumlah koloni yang tumbuh. Satuan perhitungan jumlah mikroba dikenal dengan istilah Colony Forming Units (CFUs) Units (CFUs) untuk perhitungan bakteri dan kapang. Analisis

mikroorganisme

mikroorganisme

yang

terdapat

digunakan dalam

untuk

bahan

mengetahui

pangan.

jenis

Analisis

dan

tersebut

jumlah dapat

menggunakan standar yang disebut Standar Plate Count (SPC), menjelaskan mengenai cara menghitung koloni pada cawan serta cara memilih data yang ada untuk menghitung jumlah koloni di dalam suatu bahan pangan yang dianalisis. Cara menghitung koloni adalah sebagai berikut: 1. Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30 sampai 300. 2. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satumerupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan dapat dihitung sebagai 1 koloni. 3. Suatu deretan (rantai) koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai 1 koloni. Adapun rumus untuk menghitung jumlah koloni per ml adalah sebagai berikut: Jumlah koloni per ml = jumlah koloni per cawan x (1/Fp) Keterangan: Fp = Faktor pengenceran

Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 10

BAB III METODE

3.1 Waktu dan Tempat

Praktikum pemeriksaan TPC/angka kuman makanan dan minuman ini dilakukan pada : a) Hari, tanggal

: Kamis, 13 Juni 2013

b) Tempat

: Laboratorium Bakteriologi Jurusan Analis Kesehatan Politeknik Kesehatan Denpasar

3.2 Alat dan Bahan A. ALAT

1. Mortir steril

10. Api spiritus/Bunsen

2. Tabung reaksi

11. Pinset

3. Rak tabung reaksi

12. Inkubator

4. Gelas ukur 250 ml

13. Kertas label

5. Pipet ukur 1 ml, 10 ml

14. Spatel

6. Bola hisap

15. Batang pengaduk

7. Petridish steril

16. Kompor listrik

8. Neraca analitik

17. Benang pulung/ tali

9. Erlenmeyer 100, 250, 500 ml

18. Botol semprot

B. BAHAN

C. MEDIA/REAGENSIA MEDIA/REAGENSIA

1. Kristal NaCl

1. Larutan garam fisiologis/Pz

2. Serbuk media PCA

2. Media PCA

3. Aquades steril 4. Kapas berlemak 5. Aluminium foil 6. Tahu


3.3 Cara Kerja 3.3.1 Preparasi sampel padat (tahu)

1. Sampel tahu dihancurkan dengan blender, apabila tidak ada blender bisa dengan mortir steril. 2. Memasukkan 10 g sampel tersebut ke dalam labu erlenmeyer/botol steril . 3. Menuangkan 90 ml aquades steril ke dalamnya. 4. Bahan dengan pengencer tersebut siap digunakan untuk pemeriksaan angka kuman, MPN dan pemeriksaan biakan. 3.3.2 Pemeriksaan angka kuman

1. Menyiapkan 6 buah tabung reaksi steril, disusun dalam rak tabung. Masingmasing tabung secara berurutan diberi tanda 10-1,10-2,10-3,10-4,

10-5, 10 -6 dan

seterusnya sebagai kode pengenceran. 2. Menyiapkan 7 buah petridish steril, pada 6 buah petridish diberi tanda pada bagian belakangnya sesuai s esuai dengan kode pengenceran dan tanggal pemeriksaan seperti butir a, satu petridish diberi tanda control. 3. Pada tabung kedua sampai enam diisi 9 ml larutan garam fisiologis atau aquades steril atau larutan buffer phosfat. Untuk pemeriksaan Bacillus cereus harus menggunakan buffer phosfat. 4. Mengocok bahan di atas sampai homogen (+25 kali) kemudian ambil 10 ml dimasukkan pada tabung ke satu. 5. Memindahkan 1 ml bahan dari tabung kesatu ke tabung kedua dengan pipet kemudian dikocok hingga homogen. 6. Memindahkan 1 ml bahan dari tabung kedua ke tabung ketiga dengan pipet kemudian mengocok hingga homogen. 7. Demikian selanjutnya dilakukan hal yang sama sampai tabung keenam sehingga diperoleh pengenceran tabung 10 -1,10-2,10-3,10-4, 10-5, 10 -6 atau sesuai dengan kode pengenceran yang telah dibuat sebelumnya. Dari masing-masing tabung di atas, dimulai dari tabung keenam diambil 1 ml. Dengan pipet steril dimasukkan ke dalam masing-masing petridish steril sesuai dengan kode pengenceran yang sama. 8. Kemudian ke dalam masing-masing petridish ini dituangi media plat count agar (PCA) yang telah dipanaskan dalam waterbath ±45 0C sebanyak 15-20 ml. Dan masing-masing petridish digoyang perlahan-lahan sehingga tercampur merata kemudian dibiarkan dingin dan membeku. Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 12

9. Memasukkan ke dalam inkubator suhu 37 0C selama 24-48 jam dalam posisi terbalik. 10. Kontrol media dibuat dengan media PCA tanpa diberi sampel. Kontrol ruangan dibuat dengan memakai PCA dengan cara membuka tutup petridish selama ± 5 menit. 11. Pembacaan dilakukan setelah 18-24 jam dengan cara menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada setiap petridish. 3.3.3 Pemeriksaan hasil dan pelaporan A. Pembacaan Hasil

1. Menghitung koloni yang tumbuh pada masing-masing petridish. 2. Koloni-koloni yang bergabung menjadi satu atau membentuk satu deretan/koloni yang terlekat sebagai garis tebal atau jumlah koloni yang meragukan, dihitung sebagai satu koloni kuman. 3. Menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada petridish control. Apabila jumlah koloni pada petridish control lebih besar dari 10, maka pemeriksaan harus menggunakan PCA dari dari pembuatan yang lain. B. Pelaporan

Pelaporan hanya dilakukan pada petridish yang menghasilkan jumlah koloni antara 30-300 koloni serta apabila jumlah pada petridish kontrol kurang dari 10 koloni, jumlah koloni pada masing-masing petridish ini harus dikurangi terlebih dahulu dengan jumlah koloni pada petridish kontrol.


BAB IV PEMBAHASAN

4.1 Hasil pengamatan preparasi sampel tahu Gambar

Keterangan

Sebelumnya tahu ditimbang terlebih dahulu dengan neraca analitik sebanyak 10 gram lalu di hancurkan sampai halus dengan pestle dalam mortir steril dalam keadaan steril dengan cara bekerja didekat api bunsen.

Larutan Pz yang telah disterilisasi di takar dengan labu ukur sebanyak 90 ml. Pengerjaan selalu dalam keadaan steril yaitu di daerah api bunsen yang menyala.

Setelah bahan halus dituangkan sedikit demi sedikit larutan pz steril yang telah ditakar ke dalam mortir.


Gambar

Keterangan

Erlenmeyer yang telah steril tutupnya dibuka di daerah steril yaitu di daerah api bunsen agar kesterilannya terjaga.

Larutan pz yang telah bercampur dengan bahan dituangkan ke dalam Erlenmeyer tadi. Lalu dibilas sisa-sisa tahu dalam mortir dengan larutan pz sampai larutan pz yang telah ditakar tadi habis.

Bahan telah siap digunakan untuk pemeriksaan angka kuman. Lalu diberi label 10 -1 sebagai tanda sampel awal.


4.2 Preparasi sampel tahu dengan pengenceran bertingkat Gambar

Keterangan

Sampel awal dengan label 10 -1 dipipet dengan pipet ukur sebanyak 1 ml. Pengerjaan dari awal sampai akhir tetap didaerah api bunsen agar tetap steril.

Lalu 1 ml larutan tadi dimasukkan dalam tabung dengan label 10 -2 yang sebelumnya telah berisi larutan pz steril sebanyak 9 ml. Kemudian dikocok hingga homogen.

Lalu dipipet larutan dalam tabung 10 -2 sebanyak 1 ml dan dimasukkan dalam tabung 10 -3, dikocok hingga homogen. Begitu seterusnya sampai tabung dengan label 10 -6. Hal ini disebut dengan pengenceran bertingkat.

Setelah dilakukan pengenceran bertingkat terlihat bahwa dari tabung dengan label 10 -1 ke tabung 10-6 larutannya semakin jernih. Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 16

Setelah itu dipipet larutan dari tabung 10-6 sebanyak 1 ml.

Kemudian larutan sebanyak 1 ml tadi dimasukkan dalam petridish steril dengan label 10-6 dengan tutup petridish dibuka sedikit untuk menjaga kesterilan. Lalu dipipet 1 ml larutan dari tabung 10-5 kedalam petridish dengan label 10 -5 begitu seterusnya sampai semua petridish dari 10-1 sampai 10-6 terisi larutan. Kemudian petridish yang telah terisi larutan tadi ditambahkan dengan larutan media PCA sampai merata sebanyak 15-20 ml. Lalu ditunggu hingga membeku. Gambar disamping menunjukkan keenam petridish yang berisi label 10-1 sampai 10-6 berisi media yang telah membeku. Lalu dimasukkan dalam incubator suhu 370C selama 24-48 jam dalam keadaan terbalik.

Gambar disamping Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 17

menunjukkan kontrol media yang dibuat dengan media PCA namun tanpa diberi sampel lalu dimasukkan dalam incubator dengan perlakuan yang sama. Setelah 24 jam media dikeluarkan dari inkubator. Untuk pemeriksaannya yang pertama kali harus kita amati dan dihitung jumlah koloninya adalah kontrol media. Terapat 1 koloni bakteri dalam kontrol media. Pemeriksaan dapat dilanjutkan.

4.3 Gambar hasil pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu Gambar

Keterangan

Pada petridish 10-2 terdapat 13 koloni bakteri.




Pada petridsh 10 -5 terdapat 7 koloni bakteri.

Koloni bakteri Pada petridish 10- terdapat 5 koloni bakteri. Hasilnya dicatat dan dilakukan pelaporan jika jumlah koloni antara 30-300 koloni bakteri. Namun dari hasil praktikum ini tidak terdapat jumlah koloni antara 30-300 koloni bakteri.

4.4 Pembahasanmengenai Pembahasanmengenai preparasi sampel tahu

Sampel tahu termasuk ke dalam sampel padat, sehingga digunakan teknik preparasi sampel dengan caramaseration caramaseration (pengancuran), saat sampel tahu yang berbentuk padat ditumbuk hingga halus dengan menggunakan mortar dan pestle, kemudian dilakukan proses dilution dengan menggunakan larutan PZ (garam fisiologis) steril. Pada proses dilution dilution mikroba yang ada di permukaan atau di dalam sampel tahu dapat terlepas kemudian akan tersuspensi pada larutan PZ steril. Tujuan dilakukannya dilution terhadap sampel tahu adalah untuk melarutkan atau melepaskan mikroba dari sampel tahu ke dalam PZ steril sehingga lebih mudah penanganannya. Proses dilusi (dilution (dilution)) yang dilakukan pada pemeriksaan ini adalah teknik pengenceran bertingkat yang bertujuan untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam larutan PZ steril. Hal-hal yang perlu diperhatikan selama proses maseration dan dilution adalah : Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 19

a. Selalu mengunakan alat dan bahan yang steril, sebab alat yang tidak steril dapat menyebabkan sampel yang diuji terkontaminasi oleh bakteri yang berasal dari alat dan bahan yang tidak steril. Hal tersebut dapat menyebabkan hasil pemeriksaan yang tidak sesuai dengan kondisi angka kuman pada sampel yang sebenarnya. Maka dari itu, sebelum dilakukan preparasi sampel telah dilakukan proses sterilisasi alat dan bahan yang digunakan, seperti : sterilisasi cawan petri, mortar dan pestle, tabung reaksi yang berisi larutan PZ, sterilisasi pipet ukur, sterilisasi larutan media PCA ( Plate ). Plate Count Agar ). b. Praktikan tidak boleh menyentuh sampel (tahu) dengan tangan. Tujuannya dalah untuk menghindari kontaminasi oleh bakteri yang berasal dari tangan praktikan. c. Proses maseration selalu dilakukan pada zona steril, misalnya : di dekat api spiritus yang menyala. Hal ini untuk meminimalisir kontaminasi oleh bakteri yang berasal dari udara. d. Diusahakan agar sampel yang dihancurkan harus sehalus mungkin, agar nantinya ampas sampel tahu tidak mengganggu pengamatan saat mengitung jumlah koloni yang tumbuh pada media. e. Saat membuka tabung reaksi (tempat pengenceran sampel) untuk melakukan pengenceran bertingkat harus dilakukan pada zona steril, kemudian tabung segera difiksasi saat ingin menutup tabung.

4.5 Pembahasanmengenai pemeriksaan angka kuman pada tahu dengan metode pour plate

Pada pemeriksaan angka kuman pada tahu digunakan media PCA sebab media ini baik untuk pertumbuhan semua jenis mikroba karena di dalamnya mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast mensuplai vitamin B kompleks yang dibutuhkan oleh bakteri. Pada pemeriksaan angka kuman sampel tahu digunakan metode pour plate plate sebab tidak semua bakteri dapat tumbuh pada permukaan media, ada pula bakteri yang tumbuh pada bagian tengah media, sehingga media pour plate adalah yang paling cocok digunakan, sebab sampel yang terdiri dari suspensi bakteri pada tahu dapat menyebar pada seluruh bagian media. Hal-hal yang perlu diperhatikan saat pemeriksaan angka kuman dengan metode pour plate adalah : Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 20

a. Media PCA yang digunakan harus masih dalam keadaan cair (belum membeku) agar dapat dilakukan homogenisasi campuran media dan sampel. b. Media PCA yang belum membeku dituang pada cawan petri pada suhu 45-50°C setelah penuangan sampel pada cawan petri. Hal tersebut bertujuan untuk memperkecil kontaminasi oleh air kondensasi yang dapat timbul apabila media dituang pada suhu yang sangat tinggi. c. Homogenisasi campuran media dan sampel pada cawan petri harus dilakukan secara perlahan dan jangan ja ngan terlalu lama, sebab jika media telah setengah padat, hal tersebut dapat merusak penampilan/bentuk permukaan media.

4.6 Pembahasan Pembahasan hasil perhitungan perhitungan jumlah koloni bakteri per cawan petri

Pada perhitungan angka kuman pada media kontrol ditemukan 1 buah koloni kuman dengan bentuk bulat dan berwarna putih yang tumbuh pada permukaan media.Media kontrol yang terdiri dari campuran media PCA dan PZ (garam fisiologis) steril tanpa diberi suspensi sampel (tahu), seharusnya tidak ditumbuhi koloni bakteri, karena alat dan bahan yang digunakan sudah disterilisasi. Hal-hal yang menyebabkan tumbuhnya koloni kuman pada media kontrol adalah : a. Kurangnya proses sterilisasi alat (cawan petri dan pipet ukur) b. Kurang optimalnya proses sterilisasi pada media PCA dan larutan PZ yang dibuat, sehingga bahan-bahan tersebut tidak dalam keadaan steril c. Kontaminasi oleh bakteri di udara akibat proses isolasi bakteri yang tidak dilakukan pada zona steril.

Pada media PCA yang ditanami sampel tahu (hasil pengenceran bertingkat), koloni yang tumbuh pada masing-masing cawan petri berjumlah kurang dari 30 koloni, maka tidak perlu dilakukan perhitungan angka kuman per mL, sampel tahu yang diuji dapat dinyatakan layak untuk dikonsumsi karena memenuhi persyaratan kualitas bahan makanan secara bakteriologis.Semakin tinggi faktor pengenceran sampel, jumlah koloni yang tumbuh pada media PCA adalah semakin sedikit.Itu berarti hasil yang didapat tidak menyimpang, dalam arti tidak terdapat kesalahan dalam teknik isolasi, karena telah sesuai dengan dasar teori yaitu pengenceran berikutnya mengandung sel mikroorganisme yang lebih sedikit dibandingkan dengan pengenceran sebelumnya. Hal-hal yang perlu diperhatikan saat melakukan perhitungan jumlah koloni yang tumbuh pada media, yaitu harus dibedakan antara bentuk yang termasuk koloni bakteri Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 21

dan bentuk yang termasuk ampas tahu, terutama pada pengenceran 10 -1 dimana ampas tahu masih sangat banyak terlihat.


BAB V PENUTUP

5.1. Kesimpulan

Dari praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa : 1. Pengolahan sampel pada pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman dilakukan dengan menggerus sampel tahu dengan mortar dan pastel kemudian dilarutkan dengan Pz steril. 2. Tujuan dari pengenceran sampel pada pemeriksaan angka kuman untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam larutan PZ steril. 3. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman Selalu mengunakan alat dan bahan yang steril, sebab alat yang tidak steril dapat menyebabkan sampel yang diuji terkontaminasi oleh bakteri yang berasal dari alat dan bahan yang tidak steril, praktikan tidak boleh menyentuh sampel dengan tangan, proses maseration selalu dilakukan pada zona steril, misalnya : di dekat api spiritus yang menyala, diusahakan agar sampel yang dihancurkan harus sehalus mungkin, agar nantinya ampas sampel tahu tidak mengganggu pengamatan saat mengitung jumlah koloni yang tumbuh pada media, saat membuka tabung reaksi (tempat pengenceran sampel) untuk melakukan pengenceran bertingkat harus dilakukan pada zona steril, kemudian tabung segera difiksasi saat ingin menutup tabung. 4. Teknik penanaman sampel pada media PCA untuk pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman dilakukan dengan menanam sampel berdasarkan teknik pengenceran bertingkat. 5. Yang perlu diperhatikan dalam penanaman sampel pada media Media PCA yang digunakan harus masih dalam keadaan cair (belum membeku) agar dapat dilakukan homogenisasi campuran media dan sampel. Media Medi a PCA yang belum membeku dituang pada cawan petri pada suhu 45-50°C setelah penuangan sampel pada cawan petri. Hal tersebut bertujuan untuk memperkecil kontaminasi oleh air kondensasi yang dapat timbul apabila media dituang pada suhu yang sangat tinggi. Homogenisasi campuran media dan sampel pada cawan petri harus dilakukan secara perlahan dan jangan terlalu lama, sebab jika media telah setengah padat, hal tersebut dapat merusak penampilan/bentuk permukaan media. Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 23

6. Teknik perhitungan koloni kuman pada media dilakukan secara visual dengan menghitung jumlah koloni yang terlihat. 7. Cara menentukan angka kuman pada makanan dan minuman melalui jumlah koloni yang ada dilakukan dengan mengamati kumpulan koloni dimana kumpulan koloni tersebut berbentuk bulat sempurna dan muncul kepermukaan. ke permukaan. 8. Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam menghitung koloni kuman serta penentuan angka kuman dalam makanan dan minuman yaitu harus dibedakan antara bentuk yang termasuk koloni bakteri dan bentuk yang termasuk ampas tahu, terutama pada pengenceran 10-1 dimana ampas tahu masih sangat banyak terlihat. 5.2. Saran

Mungkin inilah yang dapat diwacanakan pada laporan kelompok ini meskipun penulisan laporan ini jauh dari kata sempurna minimal kita mengimplementasikan tulisan ini. Masih banyak kesalahan dari penulisan kelompok kami, karena kami manusia yang tidak luput dari kesalahn dan kami juga butuh saran/ kritikan agar bisa menjadi motivasi untuk masa depan yang lebih baik daripada masa sebelumnya. Kami juga mengucapkan terima kasih atas dosen pembimbing mata kuliah Bakteriologiyang telah memberi kami tugas kelompok demi kebaikan diri kita sendiri dan untuk negara dan bangsa.


DAFTAR PUSTAKA

1. Afrianti LH. 2004. Cara mengawetkan makanan. http://www.pikiranrakyat.com/cetak/0304/25/cakrawala/lainnya02.htm. Diakses http://www.pikiranrakyat.com/cetak/0304/25/cakrawala/lainnya02.htm. Diakses tanggal 15 Juni 2013 2. Akhiarif. 2011. Definisi mikroorganisme. http://i mikroorganisme. http://id.shvoong d.shvoong.com/writing-and.com/writing-andspeaking/2121956-definisi-mikroorganisme/#ixzz1MfMFrqJk. Diakses speaking/2121956-definisi-mikroorganisme/#ixzz1MfMFrqJk. Diakses tanggal 15 Juni 2013 3. Buckle et al . 1987. Ilmu 1987. Ilmu Pangan terjemahan Pangan terjemahan Purnomo H, Adiono. Jakarta: UI Press. 4. Buckle KA, RA Edwards, GH Fleet, M Wootton. 1987. Ilmu 1987. Ilmu Pangan. Penerjemah: Hari Purnomo dan Adiono. Jakarta: Universitas Indonesia Press. 5. Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan. 6. Fardiaz S. 1989. Mikrobiologi 1989. Mikrobiologi Pangan. Pangan. Bogor: Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi IPB. 7. Fardiaz S. 1992. Mikrobiologi 1992. Mikrobiologi Pangan. Pangan. Bogor: Dirjen Pendidikan Tinggi, Dekdikbud, PAU IPB. 8. Fatmarina S. 2000. Pengaruh konsentrasi sukrosa dan starter terhadap beberapa karakteristik kombucha [skripsi]. Bandung: Fakultas Teknologi Industri Pertanian, UNPAD. 9. Frank. 1991. Kombucha: 1991. Kombucha: Healthy beverage and natural remedy from the far east . Dalam Gandjar Dalam Gandjar dan Sjamsuridzal. 2006. 2006 . Mikologi Dasar dan Terapan. Jakarta: Yayasan Obor Indonesia. 10. Hafizah S. 2010. Gambaran Pengetahuan Penyaji Makanan ( Food ( Food Handler ) Pada Rumah-Rumah Makan Di Jalan Dr Mansur Tentang Amebiasis [skripsi]. Medan: Fakultas kedokteran, Universitas Sumatera Utara. 11. Widodo Y. 2004. Hubungan Tingkat Pengetahuan Penjamah Makanan Mengenai Hygiene Dan Sanitasi Makanan Dengan Kualitas Bakteriologis Makanan Pada Rumah Makan Di Kota Magelang [skripsi]: Fakultas Kedokteran, Universitas Diponegoro. 12. Wijayanti R. 2011. Kerusakan bahan pangan. http://foodsciencetech46.wordpress.com/2011/01/24/kerusakan-bahan-pangan/. Diakses tanggal 15 Juni 2013 13. Winarno, 2002. Kimia 2002. Kimia Pangan Dan Dan Gizi. Jakarta: PT. Gramedia Pustaka Utama. 14. Yudhabuntara D. 2010. Pengendalian mikroorganisme dalam bahan pangan. http://milkordie.blogspot.com/2008/05/pengendalian-mikroorganisme-dalam bahan.html. Diakses bahan.html. Diakses tanggal 15 Juni 2013 Pemeriksaan angka kuman pada tahu | 25

Total Plate Count (Tpc)

Recommend Documents