Agar Plate Count ( APC ) Medio de cultivo solido, de identificación de organismo heterotróficos (aerobios mezo filos ,) HETEROTROFICOS Son organismos que sobreviven a cambios continuos del ambiente , como cambios leves de temperatura , intensidad luminosa y de nutrientes .que se pueden transportar por muchos medios come el aéreo , acuático y solidos( sobre los seres vivos, dentro de ellos ,etc)
Aerobios Se caracteriza por estar principal en presencia en el ambiente. Organismos caracterizados por la necesidad de oxigeno ,para realizar su desarrollo y metabolismo. Su nutrición se basa en la oxidación de la glucosa y otras sustancias libera mucha más energía que su utilización anaerobia por ejemplo, la fermentación. La capacidad de realizar el metabolismo aerobio integrando a una bacteria aerobia como orgánulo permanente, la mitocondria (teoría de la endosimbiosis). Aerobiosis, es un proceso conocido como respiración celular, usa el oxígeno para oxidación del sustrato (por ejemplo azúcares y grasas para obtener energía). Un buen ejemplo podría ser la oxidación de la glucosa (un monosacárido) en la respiración aeróbica. C6H12O6 + 6 O2 -> 6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP Aerobios estrictos : aquellos que no sobreviven sin oxigeno Anaerobios : que no requieren oxigeno para subsistir Micro aerobios: que necesitan una mínima cantidad de oxigeno para subsistir
MEZOFILOS Usado sobre todo en el campo de la microbiología, se refiere a un organismo cuya temperatura de crecimiento óptima está entre los 15 y los 35 °C (un rango considerado moderado). Por el contrario, los organismos que prefieren temperaturas frías se
denominan psicrófilos, y los que crecen de forma óptima a altas temperaturas son llamados termófilos. El hábitat de los organismos mesófilos incluye el suelo, el cuerpo de un animal, etc. Su temperatura óptima de crecimiento se encuentra en los 37 °C, la temperatura normal de un cuerpo humano.
COMPOCICION DE NUTRIENTES DE MEDIO
NUTRIENTE Concentración Triptona 5.0g/l Dextrosa 1.0g/l Extracto de levadura 2.5 g/l Agar 12.0g/l Ph final: 7.0 +- 0.2
PREPARACION DEL MEDIO PARA TRABAJO 1. Esterilizar el contenedor donde se agregara el agar APC. 2. Agregar 20.5 g de crudo de APC en el contenedor. 3. Agregar 1L de agua destilada en el contenedor y agitar hasta disolver y homogenizar el medio por apox. 3 minutos. 4. Poner el medio a esterilizar en el autoclave a 7 atm y a 160 C° por alrededor treinta minutos corridos . 5. Retirarlo del auto clave y dejar enfriar hasta que se solidifique(no se debe trabajar con el medio directamente después de ser auto clavado posible de solidificación. 6. Licuar el medio en agua hirviendo ,asta homogenizar . 7. Esperar que el medio este en una temperatura adecuada y no olvidar homogenizar el medio durante su enfriamiento. 8. Colocar 1ml de la muestra en una placa petry estéril . 9. Agregar 3ml aprox. de medio con un mechero a lado y homogenizar formando una cruz para evitar que los microrganismos no se aíslen en las paredes de la placa.
10. Dejar reposar la placa boca abajo por 24 horas para la lectura de los organismos aerobios meso filos totales y 24 -48 horas adicionales para el recuento de mohos y levaduras.
RECONOCIMIENTO Y RECUENTO EN PLACAS Placa de 24 horas de incubación , los mohos y levaduras no tienen una forma tradicional y definida.
Bacilos : se caracterizan por su color amarillento lechoso y en algunas veces de gran extensión Otros A.M. : se caracterizan por ser puntos solitarios y bien de finidos de color mas blancuzco y lechoso de baja extensión. Existe 94 organismos heterotróficos totales. Que según los LMP como máximo son 500 UFC /ml.
Placa con mas de 48- 62 horas de incubación , los hongos y mohos se distinguen claramente y se extienden inhibiendo a los otros organismos muchas veces .
Hongos y levaduras: se distinguen por tener un color mas claro , forma esponjosa cono algodón y de mayor extensión en su mayoría . Mohos: se distinguen por un color mas oscuro y verdoso, con forma de formación de su medio a sus lados extendidos homogéneamente , mas pequeño que el hongo en su mayoría . La técnica usada en todo los casos es la del NMP(numero mas probable)
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