REACCIONES QUIMICAS DE LOS L OS AMINOACIDOS CHEMICAL REACTIONS OF AMINO ACIDS Wilson Wilson Javier Martínez (Facultad de ciencias agropecuarias, Ing. Agronómica, UPTC, estudiante, cód.: 20120!!", #ilson.martine$02%uptc.edu.co & Cailo Ro!as C"ta (Facultad de ciencias 'sicas, )ic. *iolog+a, UPTC, estudiante, cód.: 201222", camiloro-as02%uptc.edu.co & RESUMEN
En esta #r$%ti%a se realiz& "na 'e las t(%ni%as $s sen%illas #ara i'enti)i%a%i&n 'e aino$%i'os *"e )"e la %o+ina%i&n 'e la %roato,ra)ía en %a#a )ina %on la rea%%i&n 'e la nin-i'rina. %on la %"al se #"e'en i'enti)i%ar los aino$%i'os #or la tin%i&n %olor ora'o o a,enta *"e se #resenta en ellos. e/%e#to %on la #rolina. la %"al. 'a "n tono aarillo al rea%%ionar %on la nin-i'rina 'e+i'o a *"e no #ro'"%e aonio al rea%%ionar %on ella. lo *"e in'i%a *"e los 'e$s aino$%i'os si #resentaron esta rea%%i&n0 En la se,"n'a #arte. en el 'esarrollo 'e la #r$%ti%a se realizaron 'i)erentes ensa1os 2nin-i'rina. A'a3ie4is. 5anto#rote 5anto#rotei%o. i%o. rea%%i&n 'e los Tio,r"# Tio,r"#os6 os6 %on el o+!etivo o+!etivo 'e i'enti)i i'enti)i%ar %ar aino$%i aino$%i'os 'os #resentes #resentes en "estras "estras %ono%i'as %oo la *"e #re#araos 'e Tecoma tan al 789. ta+i(n 'e Al+"ina 'e -"evo. ,elatina. tri#t&)ano 1 )oral'e-i'o: 'e+i'o a la es#e%i)i%i'a' 'e %a'a "na 'e estas #r"e+as 1 a las %ara%terísti%as estr"%t"rales 'e %a'a aino$%i'o se %onsi,"i& re%ono%er la #resen%ia o a"sen%ia 'e ellos en las "estras analiza'as0 PALABRAS CLAVE CLAVE ; Nin-i'rina. A'a3ie4is. A'a3ie4is. 5anto#rotei%o. rea%%i&n 'e los Tio,r"#os. A%etona.
%alori(tri%a. %alori(tri%a. %roato,ra)ía0 %roato,ra)ía0 ABSTRACT
In #ra%ti%e one o) t-e si#lest te%-ni*"es )or i'enti)i%ation o) aino a%i's 4as t-e %o+ination o) t-in la1er %-roato,ra#-1 4it- nin-1'rin rea%tion. 4it- 4-i%- one %an i'enti)1 t-e aino a%i's +1 t-e %olore' stain #"r#le or a,enta #resente' #er)ore' in t-e. e/%e#t #roline. 4-i%- ,ives a 1ello4 tone to rea%t 4it- nin-1'rin +e%a"se not #ro'"%e aoni" rea%t 4it- it. it. in'i%atin, t-at t-e ot-er aino a%i's i) t-is rea%tion #resente'0 In t-e se%on' #art. in 'evelo#in, #ra%ti%al 'i))erent tests 2nin-1'rin A'a3ie4is. /ant-o#rotei%. rea%tion Tio,r"#os6 Tio,r"#os6 4ere #er)ore' in or'er to i'enti)1 aino a%i's in sa#les 3no4n as t-e one 4e #re#are' Te%oa Stan 789. also e,, al+"en. ,elatin. tr1#to#-an an' )oral'e-1'e: '"e to t-e s#e%i)i%it1 o) ea%- o) t-ese tests an' str"%t"ral %-ara%teristi%s %-ara%teristi%s o) ea%- aino a%i' 4as a%-ieve' re%o,nize t-e #resen%e or a+sen%e o) t-e in t-e sa#les anal1ze'0 KEYWORDS; KEYWORDS; Nin-1'rin A'a3ie4is. /ant-o#rotei%. rea%tion Tio,r"#os. Tio,r"#os. A%etone. %alorieter testin,.
%-roato,ra#-10 1. INTR INTROD ODUC UCC CION ION
Los Los ain aino$ o$%i %i'o 'oss *" *"ee %ons %onsti tit" t"11en alas alas #roteínas. son s"+stan%ias *"e tienen %oo %ara%terísti%a ,eneral el -e%-o 'e #oseer "n %ar+o/ilo li+re 1 "n ,r"#o aino. sit"a'o en el %ar+ono al)a %on res#e%to al %ar+o/ilo0 En to'os los aino$%i'os al)a *"e )oran a las #roteínas. el ,r"#o aino al)a es "n ,r"# ,r"#o# o#ri ri ario ario.. es 'e% 'e%ir *" *"ee no tien iene s"stit"1entes0 La =ni%a e/%e#%i&n o%"rre %on la #rolina. *"e es "n aino$%i'o. 1a *"e s" ,r"# ,r"#oo es se%" se%"n' n'ar ario io00 Los Los ain aino$ o$%i %i'o 'oss 'i) 'i)iere ierenn entr entree sí =n =ni% i%a aen ente te #o #orr las las %ara%terísti%as 'el resto 'e s" ol(%"la o %a'ena lateral 2R6. 'e anera *"e s" )&r"la ,eneral es;
Ia,en 7; Co#osi%i&n 'e "n aino$%i'o0 Ia,e 7; Co#osition o) an aino a%i'0 Las #ro#ie'a'es 'e %a'a aino$%i'o 'e#en'en tanto 'e s" ,r"#o %ar+o/íli%o %oo 'e s" ,r"#o aino al)a. 1 'e s" %a'ena lateral 2R60 En "n #olíero lineal 'e aino$%i'os o #oli #(#ti'o.
'e to'os los ,r"#os %ar+o/ilo al)a 1 aino 'e los aino$%i'os *"e intervienen. solo *"e'an li+res "n ,r"#o aino al)a. el ,r"#o terinal 1 "n ,r"#o %ar+o/ilo al)a. el ,r"#o %ar+o/ilo terinal0 Así #"es. en "na #roteína las %a'enas laterales 'e los aino$%i'os *"e la %onstit"1en. son las *"e in)l"1en 'e anera 'ire%ta en las #ro#ie'a'es 'e %a'a zona a lo lar,o 'e la %a'ena #oli#e#tí'i%a 1. en %onse%"en%ia. 'eterinan ta+i(n en ,ran e'i'a s" %o#ortaiento0 Una 'e las #ro#ie'a'es $s i#ortantes 'e las %a'enas laterales 'e los aino$%i'os. es s" %a#a%i'a' 'e intera%%i&n %on los solventes a%"osos o %on los rea%tivos *"e #eriten s" i'enti)i%a%i&n. es 'e%ir s" ,ra'o 'e #olari'a' o no #olari'a'0 2. OBJETIVOS
Realizar #r"e+as %alori(tri%as *"e #eriten el re%ono%iiento 'e aino$%i'os0 Failiarizarse %on las t(%ni%as 'e %roato,ra)ía en #a#el )iltro0 Se#arar varios aino$%i'os #or %roato,ra)ía0 3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Ia,en ?; Estr"%t"ra *"íi%a 'e la Ni-i'rina Ia,e ?; C-ei%al str"%t"re o) nin-1'rin
To'as la ainas #riarias 21 #or lo tanto ta+i(n los al)a@aino$%i'os6 rea%%ionan %on la ni-i'rina en #resen%ia 'e %alor 'an'o 'i&/i'o 'e %ar+ono. aonia%o 1 "n al'e-í'o *"e %ontiene "n $too 'e %ar+ono enos *"e el %o#"esto ori,inal0 En %"atro t"+os 'e ensa1o. a>a'ios "n vol 'e .8 'e 2Al+"ina 'e -"evo. "na sol"%i&n 'e aino$%i'os. sa%arosa 1 el e/tra%to 'e las -o!as 'e Tecoma tans al 7896 res#e%tivaente: a %a'a t"+o 'e ensa1o le a,re,aos .8l 'e Hi-i'rina. a,itaos %alentaos a +a>o 'e aría 1 es#eraos la %olora%i&n en %a'a t"vo0 Reacc!" &e A&a'(e)c*
Parte I
Toaos "n #a#el )iltro. lo 'o+laos en %"atro #artes. se>alaos el #"nto e'io 1 "n #"nto 'e re)eren%ia en %a'a %"a'rante *"e se )or& en el #a#el. en %a'a "no 'e esos #"ntos. %on a1"'a 'e "n %a#ilar. %olo%aos "na #e*"e>a "estra 'e 2
En %"atro t"+os 'e ensa1o. a>a'ios "n vol 'e ?l 'e 2Al+"ina 'e -"evo. ,elatina. tri#t&)ano 1 la sol"%i&n al 789 'e Te%oa Stans6 res#e%tivaente: l"e,o a>a'ios 7l 'e B%i'o s"l)=ri%o: a,itaos %on %"i'a'o. %alentaos a +a>o 'e +aria 1 es#eraos la rea%%i&n0 Reacc!" Xa"t#+r#teca
Parte II Reacc!" c#" $a N%&r"a
Ia,en ; Estr"%t"ra *"íi%a 'e la Fenilalanina Ia,e ; C-ei%al str"%t"re o) <-en1lalanine
En t"+os 'e ensa1o a,re,aos 7l 'e 2Al+"ina 'e -"evo. )enilalanina. sa%arosa 1 el e/tra%to 'e la #lanta al 7896 res#e%tivaente. 'es#"(s a'i%ionaos .8l 'e B%i'o nítri%o %on%entra'o a %a'a t"+o: a,itaos. %alentaos en +a>o 'e aría 1 es#eraos la rea%%i&n0 Reacc!" &e $#* T#,r-+#*
Ia,en ; Estr"%t"ra *"íi%a 'e la Cisteina Ia,e ; C-ei%al str"%t"re o) C1steine
En %"atro t"+os 'e ensa1o a,re,aos "n vol"en 'e 7l 'e 2Al+"ina 'e -"evo. Cisteina. Hi'ro/i'o 'e #otasio 1 el e/tra%to 'e la #lanta al 7896 res#e%tivaente. a %a'a t"+o 'e ensa1o le a,re,aos ,otas 'e a%etato 'e #loo. a,itaos. %alentaos en +a>o 'e aría 1 es#eraos la rea%%i&n0 . RESULTADOS Y ANALISIS Parte I
Ia,en 8; Monta!e i'enti)i%a%i&n 'e aino$%i'os #or %roato,ra)ía0 Ia,e 8; Mo"ntin, aino a%i' i'enti)i%ation +1 %-roato,ra#-10
La nin-i'rina rea%%iona es#e%í)i%aente %on el ,r"#o 'e a@aino 'e los aino$%i'os. 1a sean li+res o +ien "ni'os e'iante enla%es #e#tí'i%os0 NI/IDRINA0
La nin-i'rina a <- entre 1 es "n o/i'ante "1 )"erte 1 sie#re rea%%iona %on los ,r"#os 'e a@aino li+rean'o aonio. el %"al se %on'ensa %on la nin-i'rina re'"%i'a 1 %on otra ol(%"la 'e nin-i'rina )oran'o "n %o#"esto %olorea'o *"e varía 'e az"l a violeta #=r#"ra0 7G La #riera rea%%i&n *"e se -izo evi'ente )"e en la Fenilalanina 1 #osteriorente en la al+"ina 'e -"evo. 'an'o "na tonali'a' )"%sia in'i%an'o la #resen%ia 'e aino$%i'os. %oo se ve en las i$,enes anteriores0 En el %aso 'e la #rolina. no se ani)est& %on "n %olor #"r#"ra. 1a *"e s" ,r"#o es se%"n'ario 1 rea%%iono 'an'o "n %olor aarillo0 En la sol"%i&n 'e Tecoma tans al 789 n o t"vios nin,=n ti#o 'e rea%%i&n. eso #"'o 'e+erse a *"e la sol"%i&n la -a+íaos #re#ara'o varios 'ías atr$s 1 a #esar 'e *"e esta+a en re)ri,era%i&n #"'o -a+erse 'a>an'o o #asa'o: en este %aso #or s",eren%ia 'e la 'o%ente. ten'reos *"e -a%er 'e n"evo la sol"%i&n 1 realizar el iso #ro%eso. solo #ara esta s"stan%ia0
CALCULO DEL R CALCULOS DE R. C-a"ttat#4
El R) *"e es la 'istan%ia re%orri'a #or el sol"to. 'es'e "n #"nto 'e #arti'a. 'ivi'i'o #or la 'istan%ia re%orri'a #or el )rente 'el solvente: se %al%"la 'e la si,"iente anera; Se 'e+en toar 'os e'i'a. la #riera es 'e el #"nto 'e re)eren%ia ini%ial 2en n"estro %aso el #a#el es %ir%"lar #"nto %entro6 al #"nto 'on'e %olo%aos la "estra %on el %a#ilar 2)ase a%"osa o esta%ionaria: la se,"n'a e'i'a se toa 'es'e 'on'e se %olo%& la "estra esta%ionaria %on el %a#ilar. -asta 'on'e se 'es#laz& o se i'enti)i%a la an%-a )"%sia0
Distancia Distancia del solvente
0
enor a 70 E%"a%i&n 7; C"anti)i%a%i&n 'el R) E*"ation 7; *"anti)i%ation o) R)
R +r#$"a45 6782
R)2)enilalanina6 27.%6K2.%6 Re"$a$a""a45 67398
R)2E/tra%to6 27.%6K28%6 RE:tract#45 673;
R)2A0 -"evo6 27.%6K2.%6 RA. %-e#45 67<
RF
R) 2#rolina6 2?%6K2.%6
Sie#re
PARTE II Reacc!" c#" $a ""%&r"a
Los ,r"#os aino li+res 'e los aino$%i'os. 'e los #(#ti'os 1 las #roteínas rea%%ionan %on la nin-i'rina a "n #H entre 1 . #ara 'ar "n %o#"esto 'e intenso %olor az"l #=r#"ra0 La #r"e+a ta+i(n es #ositiva %on ainas #riarias 1 aonía%o #ero sin 'es#ren'iiento 'e CO?0 Los aino$%i'os #rolina e -i'ro/i#rolina 'an "n %olor aarillo en l",ar 'el %olor #=r#"ra %on la nin-i'rina0 ?G E$ a'#"ac# reacc#"a c#" #tra '#$=c-$a &e "%&r"a #r'a" -" c#'+-e*t# a>-$ ca* #$eta &e"#'"a PURPURA DE RUT/EMMANS
Ia,en ; E!e#lo 'e %&o %al%"lar el R) Fi,"re ; E/a#le o) -o4 to %al%"late t-e R)
Ia,en ; Ensa1o %on Ni-i'rina0 Fi,"re ; Test 4it- nin-1'rin0
Coo se o+serva en la )i,"ra. los res"lta'os o+teni'os en este ensa1o. %on%"er'an %on los te&ri%os 1 arro!aron los si,"ientes res"lta'os; Ia,en ; R) en el la+oratorio Fi,"re ; R) la+orator1
E/tra%to; 2@@6 Ne,ativo #ara ni-i'rina. #ro+a+leente #or lo en%iona'o res#e%to a la sol"%i&n0
Sisteina; 26
ientras *"e la ,elatina. a"n*"e ta+i(n -irvi&. no t"vo ,ran %a+io a si#le vista0 En to'as las sol"%iones. -"+o "na rea%%i&n e/ot(ri%a0
Al+"ina 'e -"evo; 26
Al"ina 'e -"evo; 26 nos arro!& #ositivo #ara Tri#t&)ano. %olor aarillo
Sa%arosa; 2@@6 Ne,ativo #ara ni-i'rina. no #resento nin,=n %a+io en s" %olora%i&n0
E/tra%to 'e T0 Stans; 26 #ositivo #ara Tri#t&)ano. %olor naran!a %laro0
Reacc!" &e A&a'(e)c*
Es "na rea%%i&n %olori(tri%a %"antitativa #ara 'ete%tar #roteínas +asa'a en *"e el tri#t&)ano 'e las isas )ora "n %o#le!o %olorea'o %oo el $%i'o ,li&/i%o. 'an'o "n %olor naran!aKaarillo0 El ,r"#o in'olo 'el aino$%i'o Tri#t&)ano se %on'ensa %on el $%i'o ,lio/ili%o 'el rea%tivo. )oran'o %o#"estos %olorea'os0 El a,re,a'o 'e "na #e*"e>a %anti'a' 'e $%i'o s"l)=ri%o. a"enta la sensi+ili'a' 'e la rea%%i&n0
Ia,en ; Ensa1o Rea%%ion 'e A'a3ie4i%s Fi,"re ; Rea%tion test A'a3ie4i%s
En este ensa1o #"'ios o+servar rea%%iones "1 interesantes: al a'i%ionar el B%i'o s"l)=ri%o en %a'a "no 'e los t"+os 'e ensa1o. la Al+"ina 'e -"evo. %asi 'e ine'iato %oenz& a -a%er e)erves%en%ia 1 lleno %o#letaente el t"+o 'e ensa1o %on es#"a -asta re+osarlo0
Tri#t&)ano; 26
Los aino$%i'os. *"e %ontienen "n n=%leo aro$ti%o )oran nitro 'eriva'os 'e %olor aarillo %"an'o se %alientan %on $%i'o nítri%o %on%entra'o0 Las sales 'e estos 'eriva'os son 'e %olor naran!a intenso en e'io al%alino0 La )enilalanina. la tirosina 1 en %ierto ,ra'o el Tri#t&)ano. así %oo to'as las #roteínas *"e los %ontienen. 'an #ositiva la #r"e+a0 Se evi'en%i& *"e ini%ialente la %olora%i&n )"e la es#era'a #ara 'i%-a #r"e+a 1 'e i,"al )ora #ara la %on)ira%i&n %on el NaOH0 G Los res"lta'os 'e a>a'ir $%i'o nítri%o a las "estras 'e al+=ina 'e -"evo. )enol 1 tri#t&)ano solo 'io #ositiva en la al+=ina 'e -"evo.
"estra a "na -i'rolisis al%alina %on -i'r&/i'o 'e so'io se,=n la si,"iente e%"a%i&n;
De esta anera el s"l)"ro 'e so'io se en%"entra li+re #ara rea%%ionar %on el a%etato 'e #loo 'el rea%tivo 'e Co"rtone0
8G
Il"stra%i&n 7 rea%%i&n /anto#rotei%a Il"stra%i&n 7 /ant-o#rotei% rea%tion
Reacc!" &e $#* T#,r-+#*
8. CONCLUSIONES
Realizaos la se#ara%i&n 'e aino$%i'os e'iante la %roato,ra)ía: es 'e las t(%ni%as $s si#les. nos #eriti& o+servar la rea%%i&n #ro'"%i'a #or e'io 'e la nin-i'rina. *"e #erite i'enti)i%ar aino$%i'os. 1a *"e la rea%%i&n 'e los aino$%i'os %on nin-i'rina se 'e+e a la #resen%ia 'el ,r"#o PNH? en los isos o+serv$n'ose así "na %olora%i&n ora'a o a,enta0 Cal%"laos el R) 'e %a'a "estra %on a1"'a 'e la t(%ni%a 'e la %roato,ra)ía en aino$%i'os0 In'i%aos la #resen%ia 'e #roteínas en 'i)erentes "estras. 'el iso o'o i'enti)i%aos al,"nos 'e los aino$%i'os #resentes en ellas #or e'io 'e las rea%%iones *"e o%"rrieron en %a'a %aso 'e a%"er'o al ra'i%al o al ,r"#o *"e %ara%teriza al aino$%i'o0 <. RE?ERENCIAS
Ia,en 7;
El S 'e "n ,r"#o tiol 'e "n aino$%i'o $s a%etato 'e #loo. #ro'"%e #re%i#ita'o ne,ro 2<+S?60 Esta rea%%i&n 'ar$ #ositiva %on a*"ellos aino$%i'os *"e #resentan az")re en s" estr"%t"ra. %oo son la %istina. la %isteína. 1 la etionina0 La rea%%i&n %onsiste en soeter la
7G-tt#;KK+io*"ii%at?0+lo,s#ot0%o0%oK?78K ?Kainoa%i'os@1@#roteinas0-tl ?G-tt#;KKan,ela+io*"i%a0+lo,s#ot0%o0%oK?77 KKo+!etivos@70-tl G-tt#s;KKes0s%ri+'0%oK'o%K?7?8?KINFORM E@LAORATORIO@RECONOCIMIENTO@DE@ AMINOACIDOS@EN@ALIMENTOS 8G-tt#s;KKes0s%ri+'0%oK'o%K??8KAinoa%i 'os@
G Ca#+ell Mar1 Farrell S-a4nO0 2?60 io*"íi%a C"arta E'i%i&n0M(/i%o; e'itorial THOMSON0
G "ías s"inistra'as #or la 'o%ente