Prinsip Dasar Dan Prinsip Kerja HPLC

Prinsip Dasar dan Prinsip Kerja HPLC Prinsip   dasar   dari   HPLC   adalah pemisahan   analit­analit   berdasarkan   kepolarannya. Adapun prinsip kerja dari alat HPLC adalah ketika suatu sampel yang akan diuji diinjeksikan ke dalam   kolom   maka   sampel   tersebut   kemudian   akan   terurai   dan   terpisah   menjadi   senyawa­ senyawa   kimia   (   analit   )   sesuai   dengan   perbedaan   afinitasnya.   Hasil   pemisahan   tersebut kemudian akan dideteksi oleh detector (spektrofotometer UV, fluorometer atau indeks bias) pada panjang gelombang tertentu, hasil yang muncul dari detektor tersebut selanjutnya dicatat oleh recorder yang biasanya dapat ditampilkan menggunakan integrator atau menggunakan personal computer (PC) yang terhubung online dengan alat HPLC tersebut.  Pada   prinsipnya   kerja HPLC adalah   sama   yaitu   pemisahan   analit­analit   berdasarkan kepolarannya, alatnya terdiri dari kolom (sebagai fasa diam) dan larutan tertentu sebagai fasa geraknya. Yang paling membedakan HPLC dengan kromatografi lainnya adalah pada HPLC digunakan   tekanan   tinggi   untuk   mendorong   fasa   gerak.   Campuran   analit   akan   terpisah berdasarkan kepolarannya dan kecepatannya untuk sampai kedektetor (waktu retensinya) akan berbeda, hal ini akan teramati pada spectrum yang puncak­puncaknya terpisah. Ukuran skala polaritas : golongan fluorocarbon < golongan hidrokarbon < senyawa terhalogenasi < golongan eter < golongan ester < golongan keton < golongan alcohol < golongan asam