DESARROLLO DE LA ESCHERICHIA COLI EN MEDIO LIQUIDO
OBJETIVO : Construir una curva de relación para la medida indirecta del crecimiento diversas bacterias bacterias E. coli Inocular unos medios de cultivo liquido de la bacteria Escherichia coli para observar su crecimiento en el tiempo
MARCO TEORICO Medios líquidos: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamad llamado o caldo caldo nutri nutritiv tivo, o, comp compue uesto sto prin princip cipalm almen ente te etra etracto cto de levadura, tripteina de so!a caldo , cloruro de sodio ! a"ua destilada. Se utiliza #undamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión bacteriana de una determinada concentración. Cuando se a$ade una peque$a cantidad de c%lulas vivas a una disolución líquida que contiene nutrientes esenciales a p& ! temperatura adecuados, el cultivo crece. El crecimiento tiene dos mani#estaciones di#erentes se"'n la naturaleza de las c%lulas implicadas. (ara or"anismos unicelulares, que se dividen cuando crecen, el aumento de biomasa va acompa$ado del aumento del n'me n'merro de c%lu c%lula las. s. (or tant tanto, o, el prob proble lema ma se plan plante tea a como como el de crec crecim imie ient nto o de la pobl poblac ació ión n )ura )urant nte e el crec crecim imie ient nto o de una una c%lu c%lula la ocurren otros dos procesos asociados: captación de ciertos materiales del medi edio ! lib liberació ación n de pro producto ctos metab tabólico licos s *nales ales a los los alrededores. +a velocidad de estos procesos varía mucho a lo lar"o del crecimiento celular, ! la compleidad de los modelos que proporcionen la descripción cin%tica adecuada depende de la compleidad del cultivo ! del obetivo con el que se plantee la cin%tica -ase de latencia, en la que no se produce un aumento sustancial del n'mero de c%lulas ! en la que tiene lu"ar la adaptación al medio ! condiciones de cultivo. continuación se inicia la #ase de crecimiento epo ponenc nencia ial, l, en la que que el crec crecim imie ient nto o se e#ec e#ect' t'a a a la velo veloci cida dad d espec specí* í*c ca con consta stante. te. En esta sta #ase #ase se puede con consid sidera erar que el cre crecim cimien iento está stá balan alanc ceado, do, en el sen sentid tido de que no eist iste en limitaciones ! el comportamiento metabólico ! *sioló"ico de las c%lulas es básicamente constante /a veces se de*ne como un comportamiento
pseudoestacionario0 -inalmente se lle"a a una #ase de muerte celular, en la que decrece el n'mero de c%lulas: una vez que se a"otan las reservas de nutrientes, los microor"anismos metabolizan su propio material celular, sin que ha!a reposición, de #orma que tiene lu"ar la destrucción de las c%lulas /respiración endó"ena0. 1urbidimetría: +a turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una suspensión ! cuanti*ca la luz residual transmitida. Estudios teóricos ! eperimentales han mostrado que soluciones diluidas de di#erentes tipos de bacterias, independientemente del tama$o celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tama$o celular del microor"anismo. Sin embar"o, se encuentran absorbancias mu! di#erentes por partícula o por 2-C /2nidad -ormadora de Colonia0 cuando los tama$os de las c%lulas bacterianas son di#erentes. (or esta razón, para estimar el n'mero de microor"anismos tota3les o el n'mero de microor"anismos viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una 4curva de calibración4 con cada tipo de microor"anismo, sólo de esta #orma es posible relacionar bsorbancia /)ensidad 5ptica0 con el n'mero de microor"anismos totales o con 2-C.
FLUJOGRAMA DE PROCEDIMIENTO Medio liquido 78 ml
Sembrar una colonia Incubar a
"itar periódicamente Medir la absorbancia a =98 nm
2tilizar el blanco para
6lanco
Medio líquido 78 ml "uardar a 9 C despu%s
Calibrar el instrumento
epetir el proceso ;
>uardar el cultivo bacteriano a 9C +a muestra se utiliza en la si"uiente práctica
CALCULO DE LA PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO
Etracto de levadura 7" @
?888ml 78ml
@A 8,B7"
@ @A 8,7"
;7" @ @A ?,<7"
Cloruro de sodio ?8"
1ripteina so!a caldo
?888ml 78ml
?888ml 78ml
REGISTRE EN LA TABLA DE MEDICIÓN ESPECTROFOTÓMETRO VERSUS ABSORBANCIA Determinacine!
Tiem" #ra!
a$!r%ancia
? B ; 9
? ; ?7 ?
8,?=D ?,9=; ?,998 ?,=?<
EN
EL
?.D ?.= ?.9 ?.B ?
a$!r%ancia 8.D 8.= 8.9 8.B 8 ? B ; 9 7 = < D ?8 ?? ?B ?; ?9 ?7 ?= ?<
OBSERVACIONES ealizar la practica con cuidados ! mediciones correctas para la preparación de cultivo. 1ener en cuenta el remover la medio de cultivo cada 8 min para que si"a el crecimiento bacteriano. ealizar de manera cuidadosa las lectura de en el espectro#otómetro ! evitar la contaminación del medio.
CONCLUSIONES
Se inocularon correctamente unos medios de cultivo líquido con la bacteria Escherichia Coli para un posterior análisis de absorbancia en el espectro#otómetro, proceso que se repitió cada 8 minutos.
BIBLIOGRAFIA http:FFGGG.u"r.esFHclFmediosB8deB8cultivo.pd# https:FFlibroslaboratorio.*les.Gordpress.comFB8?BF8Fmedios3de3cultivo3 en3un3laboratorio3de3microbiolo"c;ada.pd# https:FFprezi.comFssnzrtvat
U&A&G&R& M& Materia:
BIOTECNOLOGIA
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1rabao (ráctico )e
1ema
+aboratorio Jombre:
)ocente:
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-echa:
@imena Sanabria 1orrez )r. )ante -lores ? ? de octubre del B8?7
