practica N° 1

UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURIMAC ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL PRACTICAS DE BIOTECNOLOGIA

PRACTICA N° 1 CONSERVACIÓN DE CEPAS Y PREPARACIÓN DE INOCULO RESUMEN: Esta práctica se realizó con la finalidad de obtener copias de Aspergillus niger para la generación de cepas jóvenes, las cepas de aspergillus niger adultos fueron facilitados por el laboratorio de biotecnología agroindustrial , para cual usamos una preparación de extracto de almidón de papa que se preparó en el laboratorio con 200 ml de agua destilada  !0 g de papa en trozos peque"os , se llevo a #$de ebullición por % min, lueg luego o el liqu liquid ido o obten obtenid ido o se le agreg agrega a & gr gluc glucos osa, a, ' gr agar agar en un matra matrazz mezclamos, llevamos a #$ de ebullición por 2min, inoculamos (0 ml a los (0 tubos  autoclava autoclavamos mos transcurr transcurrido ido el tiempo tiempo dejamos dejamos inclinad inclinado o para que se solidifi solidifique que  replicamos con una aza de siembra todo en inocuidad llevamos a la incubadora a 2) *+ por !)  trascurrido el tiempo obtuvimos cepas jóvenes que usamos los que aan desarrollado en maor maor cantidad en dos tubos incorporamos incorporamos agua destilada  agitamos para que se desprenda los A- niger  trasladamos a un tubo est.ril para sacar ( ml de la mezcl mezcla a  colo coloca cara ra a la cámar cámara a de ne/ba ne/ba/e /err para para obtene obtenerr un inocu inoculo lo a concentraciones conocidas, los resultados en el crecimiento de los A- niger jóvenes desarrollaron en la maoría de los tubos  pudimos obtener un promedio de (%2 esporasmlOBJETIVOS • • •

1btener copias fenotípicas id.nticas enerar c.lulas jóvenes 1btener un inoculo a concentraciones conocidas

INTRODUCCIÓN El ongo Aspergillus niger 3A- niger4 produce diversos compuestos de gran inter.s para las industrias farmac.utica  de alimentos 3enzimas, ácidos organicos4,  es el princi principal pal produ producto ctorr de ácido ácido cítric cítrico o a nivel nivel indust industria riall por por cultiv cultivo o líqui líquido do-- 5e a observado que se obtiene un alto rendimiento de ácido cítrico cuando existe una alta acum acumul ulac ació ión n de este este en el mice micelilio, o, que que pued puede e esta estarr asoc asocia iada da con con una una alta alta concentración de glucosa  de ox6geno disuelto en el medio líquido 37apagianni, 20089 :olsce;  col-, (<<<4- A- niger miembro del grupo de los Aspergilli negros, es una especie utilizada en las industrias alimentarias, farmac.utica, textil  química 3(, 2, &45e a repo report rtad ado o la prod produc ucci ción ón de dife difere rent ntes es enzi enzima mass como como gluc glucos osid idas asa, a, galactosidasa, amilasa, lacasa, fitasa  xilanasa 3!, %4 3Anderser, 200)9 Andersen  col-,200)4 Aspergillus muestra algunas ventajas para la producción industrial de enzimas= tiene un alto nivel de producción, presenta buenas propiedades para el cultivo, lo que posibilita la producción a gran escala, sus productos son generalmente considerados como >A5 3generall regarded as safe4, lo que permite su aplicación en la industria de alimentos tanto para el ombre  animales 3de ?ries @ ?isser, 200(4-

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ucos ongos filamentosos están naturalmente adaptados al crecimiento sobre superficies- Bos ongos requieren un contacto cercano con el sustrato debido a su nutrición eterótrofa, secreción de enzimas extracelulares, absorción de nutrientes a trav.s de la pared celular  el crecimiento apical de sus ifas 3Cones, (<

industriales, como bioblanqueo, panificación, extracción  clarificación de jugos, elaboración de alimento animal, industria textil, entre un alto nivel de producción, presenta buenas propiedades para el cultivo, lo que posibilita la producción de a gran escala, sus productos son generalmente considerados como >A5 3generall regarded as safe4, lo que permite su aplicación para alimentos tanto para el ombre  animal 3?ries  visser, 200(4-

OBJETIVOS • • •

1btención de copias fenotípicas del aspergillus niger>egenerar c.lulas jóvenes1btener un inoculo a concentraciones conocidas-

MATERIALES, EQUIPOS Y MÉTODOS

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Materiae! (! tubos con tapa ( matraz Erlenmeer ( probeta 2%0 ml ( Embudo de vidrio 2 ?aso precipitado 2 botellas de !8% ml +epa de aspergillus niger !0g de papa eceros ( espátula ( cucillo Equipos icroscopio Kalanza analítica +ocina el.ctrica

Met"#""$%a • • •

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7reparamos agar papa dextrosa 5e pelo la papa para poder trozar en cubitos peque"os, pesamos !0 gr +olocamos en un vaso precipitado 200 ml de agua destilada  !0 gr de papa trozadaLurante % min agitamos  ocurre la lixiviación del almidón5eparamos en un matraz el líquido de extracto de papa En un matraz Erlenmeer colocamos almidón 200 ml, & gr de glucosa, ' gr agar agar

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Blevamos a ebullición por dos minutos En (0 tubos con tapa inoculamos (0 ml del agar  en dos botellas de !8% ml agua más ! tubos vacíos Autoclavamos por (% min dejamos que se enfri. el autoclave Bugo sacamos los (0 tubos  lo colocamos inclinados para que forme una diagonal, dejamos que se solidifique7rendemos los meceros  calentamos al rojo vivo la aza de siembra dejamos que se enfri. Msamos las cepa de Aspergillus niger que el laboratorio de Kiotecnología nos proporciono  sacamos con una aza de siembra las muestras para sembrarlas 5embramos en los tubos todo con esterilidad luego calentamos el aza de siembra  dejamos que se enfri.-

5acamos otra muestra de aspergillus niger con el aza  a otro tubo colocamos se repite para los tubos restantesMna vez terminado la siembra colocamos en la incubadora a 2) *+ por !) -

1btenemos cepas jóvenes +ogemos el que tiene maor crecimiento de cepas jóvenes A"adimos agua destilada en dos tubos que tengan maor crecimiento de Aniger jóvenes  agitamos SEMESTRE 2016 -I


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#apamos la cámara de Feuba/er con un cubre objeto

colocamos en un tubo los dos que agitamos sacamos con una pipeta (ml para colocar un par de gotas a la cámara de ne/ba/er+ontamos en ambos lados de la cámara de ne/ba/er sacamos un promedio Buego +(?(N+2?2, sacamos el volumen ?( que usaremos para acer las diluciones necesarias asta llegar a contar un promedio de

•

6

10

esporas ml-

1bteniendo el inoculo-

RESULTADOS 1btuvimos una generación de cepas jóvenes de Aspergillus- niger en la siembra que se realizo en los tubos de ensao , escogimos para el conteo los tubos que estaban con mas proliferación de Aspergillus niger , llevamos a la cámara de ne/ba/er para acer el conteo de ambos lados  sacamos el promedio teniendo un resultado de (%2

+on el repicado del aspergillus Níger. 5e logró rejuvenecer o regenerar c.lulas jóvenes, con las siguientes características9 buena población  color negro intenso-

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+onteo respectivo de colonias en la cámara de FE: KMA:E>

1 2 3 4 5

CUANDRANT E1 11 16 8 6 22

CUADRANT E 2 10 20 40 4 7 SEMESTRE 2016 -I


6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 TOTA

15 9 6 18 5 7 35 13 10 10 14 11 8 6 4 15 3 17 7 22 293

11 4 5 8 5 25 8 13 11 8 31 14 6 14 7 8 2 33 5 22 282

!RO"ED#O$ 287.5

1bteniendo un promedio de 2'2- % entonces reemplazando en la formula par a obtener el inoculoC 1∗V 1=C 2∗V 2

Londe

287.5∗V 1=100∗10 ml

V 1 =3.47 ml

Liluimos con '-%& ml de agua para completar el inoculo a (0 ml de inoculo- #enemos el inoculo de nuevo realizamos el conteo en la cámara de FE: KAM:E> 5egunda dilución

( 2 & ! % ' 8 ) <

+uadrante ( 0 2 0 () < & (2 (0 &

+uadrante ' (& ' ! ) & % ' < SEMESTRE 2016 -I


(0 (( (2 (& (! (% (' (8 () (< 20 2( 22 2& 2! 2% total

& & 8 (' (2 (& 2 ( (( (& 2 (< (0 ) 0 2 (8<

( ' ! & 2 (( 8 ' ! & & ( % & 2 % (2'

7romedio- (%2-%O 5e muestra en el siguiente cuadro &-!( ml es la cantidad de concentración conocida completando agua destilada para que llegue a (0 ml, sacamos un promedio en el cual nos quedamos de (%2-% esporasml será nuestra concentración conocida-

DISCUSIÓN 5egDn Accensi, 2000 el ongo apergillus niger forma colonias miceliales lanosas blancas o amarillentas9 a medida que .ste se desarrolla la superficie micelar se va cubriendo de puntos negros en ese entender pudimos obtener esas características que tiene en ongo A- niger en nuestra practica realizada como son cepas jóvenes usaremos para la generación de enzimas ?ries, >- 7-  C- ?isser- 200(- Bos aspergillus son ongos filamentos, son un grupo de inter.s industrial en la producción de enzimas ambos autores mencionan que es un generador de enzimas el aspergillus niger aplicable para producción de una gran variedad de glucanasas con un espectro tal que puede lograrse la completa degradación de la celulosa efectivamente al inducirle almidón degrada los azucares para su desarrollo  mejor plabacion en un medio-

KPKBP1>AQRA ?ries, >- 7-  C- ?isser- 200(- Aspergillus Enzme Pnvolved in Legradation of 7lant cell :all 7olsaccarides- icrobiolog and olecular Kiolog >evie/s '%=!<8%22

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