Prueba: Venereal Disease Research Laboratory U.S.R. (V.D.R.L.)
29/03/2012 C.B.T.i.s. # 168 Laboratorio Clínico Inmunohematología Profr.: Dr. Sergio Alcázar Hernández
Autor: Equipo 5 Janeth Alejandra Morales Flores Juan Andrés Navarro Robledo Víctor Sosa Morales Sebastián Zermeño Briones
Objetivo: “Que nosotros, los alumnos, comprendamos comprendamos la importancia, la trascendencia, la aplicación y el fundamento fundamento de la prueba prueba inmunoserológica inmunoserológica de Investigación de Laboratorio Laboratorio para para Enfermedad Enfermedad Venérea mejor conocida como V.D.R.L.”
“La ciencia no es sino una perversión de sí misma a menos que tenga como objetivo final el mejoramiento de la humanidad.”
Nikola Tesla (1856-1943) Físico, matemático e ingeniero eléctrico croata.
Introducción: El examen V.D.R.L.; cuyo significado es Venereal Disaese Research Laboratory, el cual es el nombre de este trabajo, en español quiere decir: examen de Investigación de laboratorio para enfermedad venérea, y es precisamente una prueba serológica de sensibilidad específica que nos
permite detectar si existe una alta probabilidad de que nuestro paciente esté contagiado de la enfermedad de la sífilis. Esta prueba tiene un nombre muy general en cuanto al fundamento, pero la prueba que se hace realmente es la U.S.R. (Unheated-serum reagin) ó reagnina sérica no calentada. La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual (ETS), que ha afectado al hombre durante siglos. La primera prueba diagnóstica para esta enfermedad, fue el test de Wassermann, que se desarrolló en 1906, valiéndose de una extracción alcohólica a partir de tejidos sifilíticos. Lo que se pretendía demostrar con esta prueba, era la presencia de anticuer pos séricos mediante una técnica de fijación de complemento, más tarde se demostró que estas reacciones eran inespecíficas y se producían con extractos de otros tejidos. Años después se purificó dos sustancias reactivas, a partir de músculo de corazón de vacunos, la cardiolipina y la lecitina, lo cual condujo a la obtención de un antígeno más específico, que es utilizado desde 1946 en la prueba de VDRL Venereal Disease Research Laboratory. Para el diagnóstico de la sífilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas. Por examen directo mediante microscopía en campo oscuro y por fluorescencia directa, mediante serología y por cultivo en células epiteliales de conejo. Por serología se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponémicas como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponémicas como FTAABS (Fluorescent treponemal antibody absorption) o como MHA-TP (Microhemaglutinación para T pallidum)1. Las nuevas pruebas diagnósticas para la sífilis, incluyen enzimo inmunoensayo (ELISA), Western bloty Reacción en cadena a la polimerasa (PCR). Por razones obvias en el presente trabajo abordaremos únicamente la prueba V.D.R.L., aunque cabe aclarar que dicha prueba es muy similar a la prueba llamada RPR, que ya antes se ha mencionado.
Fundamento: La sífilis es causada por una espiroqueta delgada con forma de sacacorchos con motilidad rotatoria lenta, esta bacteria, que es Gram (-), mide de 5 a 20 micras de largo y 0.5 de diámetro. La espiroqueta tiene el nombre de Treponema pallidum y es causante, por subespecies diferentes, de distintas enfermedades en el ser humano; Existen por lo menos tres subespecies bien conocidas: T. pallidum pallidum, causante de la sífilis; T. pallidum pertenue, causante de la frambesia
(también llamada buba o pian); y T. pallidum endemicum, causante del bejel (sífilis endémica o dichuchwa). A veces se incluye también como subespecie al Treponema carateum (o Treponema pallidum carateum), causante de la pinta (mal de pinto). 1
Es una bacteria bastante frágil. Fuera del cuerpo, no soporta los climas secos o las temperaturas superiores de 42°C. No resiste la penicilina, siendo esta última uno de los mejores antibióticos que pueden utilizarse contra esta bacteria. Para la prueba U.S.R se utiliza un reactivo de lectura macroscópica utilizado para el diagnóstico serológico de reaginas, estás son Anticuerpos séricos que pertenecen a las inmunoglobulinas IgE que aparecen espontáneamente en individuos genéticamente predispuestos y que están presentes en el suero de personas sifilíticas o que padezcan enfermedades agudas o crónicas. Va a fijarse sobre los mastocitos y basófilos de la sangre, donde al encontrarse con el antígeno desencadena una manifestación de alergia (asma, urticaria, etc.). La prueba se hace con plasma o suero no inactivado,( en la U.S.R. no es necesario inactivar el complemento en baño maría a 56°C). Cuando se mezcla un suero que contiene reaginas con el antígeno U.S.R. las partículas en emulsión floculan (juntan partículas que forman parte de un coloide) formando agregados visibles en un microscopio con un objetivo de 10x y ocular de 10x. Por el contrario, un suero sin reaginas no flocula alas partículas antigénicas, las cuales permanecerán dispersas.
Material: 1. Antígeno USR (VDRL) 2. Suero control positivo 3. Suero control negativo 4. Placas de reacción 5. Agitador rotatorio de 180 r.p.m. 6. Microscopio óptico 7. Pipeta semiautomática 50µL 8. Gradilla 9. Muestra de sangre venosa sin anticoagulante 10. Material necesario para obtener dicha muestra sanguínea
Técnica: Procedimiento (cualitativo)
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Coloque 50 µL (por cada pocito o circulo) de suero en una placa serológica de vidrio transparente circulo negro o en pocito.
Para corroborar que el reactivo funciona colocar también, 50µl de cada control (+ y -).
Tomar el látex (antígeno U.S.R) y colocar una gota a cada una de las/ la muestra de suero y los controles, colocando la jeringa antes, procurando atravesar en principio el orificio tapado del envase látex con al aguja (como se observa). Perforar aqui
Coloque la ó las láminas en un rotor a mezclar durante 4 minutos.
Observe el resultado en un microscopio óptico.
Interpretación de los resultados: 3
• Si las partículas observadas son en forma de
filamentos cortos dispersos, el suero es no re activo. • Si las partículas se presentan agrupadas en flóculos
pequeños el suero es débil reactivo. • Si las partículas se presentan agrupadas en flóculos
grandes el suero es reactivo.
Procedimiento (cuantitativo) OPTATIVO
Si es: débil reactivo o reactivo: 1) Para cada muestra a ser testada, colocar 50 µl de NaCl al 0,9 % en los círculos 2 a 5. 2) Colocar 50 µl del suero a testar en los círculos 1 y 2. 3) Mezclar la solución salina y el suero en el círculo 2 utilizando la pipeta automática, por aspiración y eliminación, 8 veces. Evitar la formación de burbujas. 4) Transferir 50 µl del círculo 2 (1:2) al círculo 3 (1:4), mezclar como en el paso 3. Transferir 50 µl del círculo 3 (1:4) al círculo 4 (1:8), mezclar como e n el paso 3. Transferir 50 µl del círculo 4 (1:8) al círculo 5 (1:16), mezclar como e n el paso 3 y descartar 50 µl. 5) Resuspender suavemente la suspensión antigénica. Sosteniendo el frasco del antígeno en posición vertical, dispensar 1 ó 2 gotas a fin de liberar el pico vertedor de aire, y luego Colocar exactamente una gota (1/60 ml) de la suspensión antigénica dentro de cada círculo de prueba con una aguja no descartable sin bisel de calibre 18.
7) Anotar los resultados en términos de la m ayor dilución de suero que produzca un resultado Reactivo.
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8) Si la más alta dilución probada (1:16) es react iva, proceder como sigue: a) Preparar una dilución 1:16 de la muestra por adición de 100 µl del suero a 1 ,5 ml de NaCl al 0,9 %. Mezclar. b) Colocar 50 µl de la solución de NaCl 0,9 % en los círculos 2, 3, 4 y 5 de la placa. c) Colocar 50 µl de la dilución 1:16 en los círculos 1 y 2. d) Con la misma pipeta, realizar diluciones seriadas dobles a partir del c írculo 2 y completar la prueba como se describió antes en los pasos 3 a 6. e) Leer los resultados como se describió previamente.
Bibliografía:
http://www.redbioquimicasf.com.ar/redes/ets/tecnicas_procedimientos_sifilis_2010.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm
http://es.wikipedia.org/wiki/VDRL
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003515.htm
http://www.clinicadam.com/salud/5/003515.html
http://www.onsalus.com/diccionario/enfermedad-mediada-por-reaginas/12015
http://exa.unne.edu.ar/bioquimica/inmunoclinica/documentos/Introduccion_TPN6.pdf
http://www.youtube.com/watch?v=8SuJxsQRnfw Treponema pallidum song
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/sifilis.html ... Y otras páginas.
Folleto de uso de la técnica que brinda la marca LAFON MR con la compra del reactivo.
“Agradecemos especialmente a los laboratoristas y trabajadores de la U.M.F. No. 7 por sus atenciones y comodidades que nos brindaron al explicarnos esta práctica, y a todos en general.
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