MATERIAL Y MÉTODO:
DIAGRAMA DE FLUJO DEL PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PREPARACIÓN DE SACOS INTESTINALES
sacrificar a la rata administrándole pentobartital seguida de trasección de la médula espinal.
abrir el abdomen por inscisión en la línea media abdominal
lavar los segmentos intestinales con ayuda de una jeringa que contenga Tyrode. Verificar que no tenga perforaciones el intestino.
Proceda a hacer la inversión de los segmentos intestinales
anuda con un hilo uno de los extremos del segmento, con una varilla de vidrio impulsar el extremo ocluido hacia el extremo abierto, deslizandolo por la varilla.
sostener con ua pinzas el saco intestinal e introducir por el extremo abierto el tubo de vidrio de la camara de órganos aislada hasta que sobrepase 5 mm mm
cortar tramos de intestino (2 a 3 cm de longitud) e insertar una cánula en la luz del segmento intestinal
extraer el intestino delgado y colocarlo en una caja de petri con solucion Tyrode fría
amarrar éste extremo a la varilla. Introducir el intestino al sistema
Experimento control
Introducir el saco intestinal dentro de la camara y llenarlo con solución Tyrode a 37°C con ayuda de una cánula acoplada a una jeringa.
verificar que el saco no presente fugas si este no es el caso, sumergir en solución de Tyrode-Glucosa (37°C)
Acoplar el sistema de aeración que es una bomba de aire para pecera, esta debe estar en baño maría (Temperatura constante)
tener cuidado que la solución interior y exerior no sobrepasen el borde superior del saco atado a la varilla
Toma de muestra
tomar muestra en tiempo cero tanto de solucion exterior como de la interor del saco intestinal.
utilizando las tiras reactivas determine la concentracion de glucosa en las muestras
en el tiempo de la última determinación volver a medir la concentracion del glucosa en el exterior del saco.
Hacer determinaciones cada 10 minutos hasta completar 5.
dejar pasar 15 minutos y volver a medir la concentracion de glucosa, solo de un muestra del interior del saco.
Verificar las condiciones de aeración y temperatura, estas deben ser constantes durante todo el experimento.
Efecto de la ausencia de oxígeno en la absorción intestinal de glucosa
colocar un saco intestinal que contenga en sus interior solución Tyrode a 37°C
esta debe estar dentro de una cámara que contenga solución salina de TyrodeGlucosa 37°C
esta debe estar sin adaptar el sistema de aeración pero manteniendo constante la temperatura.
hacer determinaciones de glucosa de la solución interior y exterior del saco cada 10 minutos hasta completar 5.
Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorción intestinal de glucosa
colocar un saco intestinal en una cámara de órganos aislados
llenar el saco intestinal con solución Tyrode a 37°C
este saco se colocará en una solución de Tyrode-Glucosa con 2-4 dinitrofenil (solución exterior)
Obtener una gota de solución problema del interior o exterior del saco intestinal
Determinación de glucosa por medio de tiras reactivas.
realizar 5 determinaciones cada 10 minutos
medir la concentación de glucosa en el tiempo cero dentro y fuera del saco intestinal
colocar la gota dicha gota e la zona reactiva de la tira y se deja reaccionar durante 30 segundos
el cambio de color sera de acuerdo con la concetracion de glucosa presente en la muestra
compara con la escala cromática que esta en el recipiente de las tiras bajo las condiciones de buena luz
no confiar en los resultados que aparecen despues de 3 minutos o solo en los bordes de la zona de prueba
RESULTADOS Escala de indicador de glucosa para los experimentos realizados:
Experimento control Se trabajó con el yeyuno de la rata. La concentración de glucosa que absorbió fue aumentando al pasar el tiempo, llegando a 56 mmol/L como máximo.
Tiempo (segundos)
Concentración de glucosa control
Concentración de glucosa sin oxigeno
Concentración de glucosa 2-4 dinitrofenol
0
0
0
0
10
5.6
0
0
20
14
0
5.6
30
28
0
5.6
40
56
0
5.6
Gráfica 1. Concentración vs tiempo para la absorción de glucosa
RESULTADOS
EFECTO DE 2-4 dinitrofenol En la prueba donde se administró 2,4-dinitrofenol. En comparación con el control, en este experimento se trabajó con el íleon del intestino de la rata y se observó que si hubo una absorción de glucosa pero muy baja de 5.6 mmol/L
EFECTO DE LA AUSENCIA DE OXIGENO Se denominó tubo “B” a aquel donde se realizó el experimento en ausencia de oxígeno. A comparación con el control, en este experimento se trabajó con el íleon del intestino de la rata y la concentración de glucosa fue nula en el intervalo de tiempo medido
ANÁLISIS DE RESULTADOS:
Experimento control La principal función del intestino delgado es la absorción de los nutrientes necesarios para el cuerpo humano y para el cuerpo de otros animales, en este experimento colocamos un saco intestinal dentro de la cámara y lo llenamos con solución salina de Tyrode a 37 °C y activamos la bomba de aire (similares a las condiciones internas del organismo). . Fuimos midiendo la concentración de glucosa cada 5 minutos. Como era esperado nuestro tubo problema presento una absorción exponencial, proporcional a la concentración de glucosa dela solución de tyrode, ya que al tener todos los elementos necesarios para realizar el proceso, este pudo continuar ininterrumpido, en adelante para el análisis de resultados tomaremos este como medida de referencia.
Efecto de la ausencia de oxígeno en la absorción intestinal de la glucosa En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentración de glucosa en los diferentes tiempos para que sean comparables con los resultados con los obtenidos en el experimento control. Podemos afirmar que la falta de oxígeno si afecta la absorción ya que en nuestro experimento en la ausencia de este no presento un incremento ni aumento y esto concuerda con lo que la literatura nos dice “en ausencia de oxigeno la absorción se inhibe”. (Guyton, 1992)
Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorción intestinal de glucosa En la tabla se presentan los valores obtenidos de concentración de glucosa en los diferentes tiempos para que dichos valores se puedan comparar con los resultados obtenidos en el experimento control. Nuestros resultados concuerdan con la teoría puesto que en este tubo se observó una disminución considerable en la absorción de glucosa, debido a una interrupción del ciclo de fosforilación oxidativa, sin el cual la célula no tiene ATP con los cuales trabajar. (Ganong, 2011)
DISCUSION DE RESULTADOS Experimento control Observamos que la concentración de glucosa fue aumentando tomando como referencia la escala cromática de las tiras reactivas. Esto es posible debido a que la rata con la que trabajamos era jóven por lo que su intestino delgado absorbió rápidamente la glucosa empezando desde una concentración de 0 hasta 56 mmol/litro, al estar el intestino volteado y ver que dentro de él no había glucosa, podemos explicar que mediante osmosis éste empieza a absorber glucosa por lo que con el paso del tiempo vemos que aumenta,
mientras que la concentración fuera del saco intestinal disminuyó casi totalmenta al final del experimento. (Barret, 2013).
Efecto de la ausencia de oxígeno en la absorción intestinal de la glucosa En estas condiciones la absorción de glucosa, se vio disminuida considerablemente con respecto al tubo prueba, puesto que las tiras reactivas siempre mostraron el mismo color que indicaba que la reacción enzimática de la glucosaoxidada específica para glucosa no manifestó un cambio de concentración. Ya que su ausencia, impide la respiración celular interrumpiendo la formación de ATP con el que las células del moco intestinal sigan funcionando y por lo tanto interrumpiendo su metabolismo, específicamente la absorción de glucosa, es decir; el oxígeno disminuye el suministro de energía en la célula, por lo que inhibe el transporte de glucosa. Cuando el oxígeno se termina la respiración ya no se lleva a cabo y por lo tanto no se realiza absorción esto se debe a que cuando la glucosa que llega a las células es degradada, en un proceso denominado glucólisis, necesita la ayuda del oxígeno, cuya principal función es la de combustionar la glucosa, como producto de este proceso se reconvierte en agua (que eliminamos o reutilizamos) y anhídrido carbónico (que exhalamos por medio de la respiración). (Guyton, 1992)
Efecto del 2-4 dinitrofenol en la absorción intestinal de glucosa En comparación con el experimento control notamos que si hubo una absorción de glucosa pero esta fue muy baja, solo de 5.6 mmol/L en 25 minutos. El 2,4-dinitrofenol es un agente desacoplante, es decir, desacopla la cadena de transporte de electrones de la fosforilación oxidativa inhibiendo la producción de ATP al no generarse el gradiente de pH, pero si permite que la cadena de transporte de electrones continúe funcionando, por lo que vemos disminuido la absorción de glucosa. (Guyton, 1992) Debido a que este agente desacoplante aísla el flujo de electrones (en la fosforilación oxidativa), lo que significa que este flujo no se puede usar para la formación de ATP). Transporta protones a través de la membrana interna de manera que no se forme (disipa) el gradiente de concentración de protones ni el potencial eléctrico de membrana, es decir; no hay bombeo de protones a través de la ATP-sintasa con producción de ATP Por ello, al no existir un gradiente, no puede llevarse a cabo la absorción por medio de los transportadores. (Fox. 2011)
Efecto de la oxigenación en la absorción de glucosa A condiciones naturales la absorción de glucosa se da ininterrumpida, y de manera exponencial, ya que las células tiene el oxígeno necesario para realizar respiración celular
y continuar funcionando así como la ausencia de sustancias que impidan su funcionamiento normal.
CONCLUSIONES: La digestión es el proceso en el cual los compuestos orgánicos complejos como carbohidratos son degradados hasta convertirse en unidades pequeñas fáciles de absorberse en el intestino delgado. El intestino delgado tiene tres regiones llamadas duodeno, yeyuno e íleon pero es en éstas últimas dos es donde fundamentalmente tiene lugar la absorción de los alimentos digeridos. El transporte activo es el principal mecanismo de la absorción de nutrientes en el intestino delgado por lo que la absorción de glucosa ocurre por medio de un trasporte activo secundario desde la luz del intestino hacia la sangre y transporte que depende del sodio en la luz intestinal. El oxígeno es indispensable para una buena absorción de las sustancias a través de intestino, ya que a falta de este se inhibe la absorción de glucosa. La presencia de oxígeno y la temperatura a 37ºC son factores qu favorecen la absorción de glucosa. El 2,4-dinitrofenol, impide la absorción correcta de glucosa así como su utilización como fuente de energía dentro de las células, por ello el que fuese utilizado en algún momento como ingrediente para suplementos para bajar de peso. La glucosa puede ser utilizada como fuente de energía, almacenarse en el hígado en forma de glucógeno y en los músculos para cuando se requiera rápidamente. La solución Tyrode fue importante debido a que permite darle ciertas condiciones al experimento facilitando el proceso de transporte de glucosa. El yeyuno tiene un revestimiento especializado en la absorción de carbohidratos y proteínas. Su gran cantidad de vellosidades permite que exista una mayor superficie de contacto y absorción de glucosa.
BIBLIOGRAFÍA Guyton, Artur C. “Fisiología Medica”, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 8a edición, 1992. Pp.800- 815, Barret K, Barman S, Boitano S. y Brooks H. “Fisiología Médica”, Editorial Interamericana Mc Graw
Hill, 24a edición, pp.479-486 Fox, Stuart I. “Fisiología Humana”, Editorial Interamericana Mc Graw Hill, 12a edición, 2011. pp 613 -
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