Práctica 20. Pruebas bioquímicas VITEK. Equipo 9. Garduño Reyes Rocio Elizabeth
8 de Junio de 2018
Ortega Arellano Anakaren
RESUMEN En la pres presen ente te prác prácti tica ca se real realiz izó ó la prue prueba ba bioq bioquí uími mica ca rápi rápida da “vit “vitek ek”” para para dete detecc cció ión n de un cier cierto to micr microo oorg rgan anis ismo mo segú según n su meta metabo boli lism smo. o. Se most mostró ró el mane manejo jo y las las part partes es del del apar aparat ato, o, así así como como los los cier cierto toss cuid cuidad ados os y espe especi cifi fica caci cion ones es que que se debe debe tene tenerr y segu seguir ir para para hace hacerr uso uso de esta esta técn técnic ica. a. Los Los resu result ltad ados os en esta esta prác prácti tica ca arro arroja jaro ron n que que anal analiz izam amos os Staphylococcus Staphylococcus aureus con 98% de probabilidad y un nivel de confianza excelente.
Palabras clave: Metabolismo, pruebas bioquímicas, vitek. RESULTADOS
inoculación y los sel sella. Ya dentro del equipo, ®
La efic eficie ien ncia cia del del sist sistem emaa VITE VITEK K 2 Comp Compac actt
van en un carrusel en el que se introducen a
se basa en su avanzada tecnología colorimétrica: el sistema lee las tarjetas de últi última ma gene genera raci ción ón del del VITE VITEK K (que (que cont contie iene ne 64 orificios para aseg segurar la exactitud) cada 15
incubación y cada 15 min. es removido el casete para llevarlo al sistema óptico de tran transm smita itanc ncia ia,, el que que usa usa dife difere rent ntes es long longit itud udes es de onda onda del del espec espectr tro o visib visible le para para inte interp rpre reta tarr las las
minutos utilizando 3 longitudes de onda
reacciones de turbiedad o el color de los
dist distin inta tas. s. Con Con esta esta técn técnic ica, a, más más info inform rmac ació ión n es analiza izada, lo que incrementa la precisió sión del
productos metabólicos, y es devuelto a su sitio en el carrusel hasta el siguiente tiempo de
resu result ltad ado o y redu reducc cció ión n del del tiem tiempo po,, ya que que arro arroja ja resultados de 4-10 h.
lectura.
(www.biomerieux.com.mx)
De los los cuid cuidad ados os y espe especi cifi fica caci cion ones es,, dest destac acaa el uso de solución salina estéril de NaCl 0.45%.
Se realizó el procedimiento empezando por una tinción de Gram la cual nos arrojó el resultado de un microorganismo con una morf morfol olog ogía ía de coco cocoss
grampositivos, es decir,
Tabla 1. Información de identificación N° de lote: Tarjeta: GP
Fecha de caducidad:
2420469403
10-mar-2019 13:00 CDT
se nos entregó una tarjeta con la ter terminación “GP”, esto debido a que existen tarjetas especiales para grampositivos y tarjetas espe especi cial ales es para para gram gramne nega gati tivo vos. s. Se real realiz izó ó una una suspensión la cual estaba al 0.59 en la escala de MacF MacFar arla land nd medi medid do con con un den densitó sitóm metro etro,, desp despué uéss se intr introd oduj ujer eron on toda todass las las tarj tarjet etas as y los los datos del grupo en un casete que se llevaron al equipo. El casete fue transportado a una
Finalizado:
Estado: Final
23-may-2018 14:37 CDT
Tiempo de análisis: 5.00 horas
98% Probabilidad
Staphylococcus aureus
Bionúmero:
Nivel de confianza: Identificación
010400062663211
excelente
cámara en la que se aplica vacío y en seguida
Perfil(es) típico(s) contraindicante(s): Staphylococcus aureus
se rein reintr trod oduc ucee nuev nuevam amen ente te el aire aire,, ésta ésta acci acción ón hace hace que que la susp suspen ensi sión ón bact bacter eria iana na pase pase a trav través és del tubo de transferencia hacia los microcanales que llenan todos los pozos, en
AGLU (79)
Tabla 2. Detalles bioquímicos 2
AMY
ー
4
PIPLC
ー
segu seguid idaa pasa asan por un mecan ecanis ismo mo que corta orta los los tubos que contiene cada tarjeta para la
5
dXYL
ー
53
dMNE
＋
8
ADH1
＋
54
MBdG
＋
9
BGAL
ー
56
PUL
ー
11
AGLU
ー
57
dRAF
ー
13
APPA
ー
58
O129R
＋
14
CDEX
ー
59
SAL
ー
15
AspA
ー
60
SAC
＋
16
BGAR
ー
AMAN
ー
62
dTRE
ー
17
PHOS
＋
63
ADH2s
ー
19
LeuA
ー
64
OPTO
＋
20 23
ProA
ー
24
BGURr
ー
25
AGAL
ー
26
PyrA
ー
27
BGUR
ー
28
AlaA
ー
29
TyrA
ー
30
dSOR
ー
31
URE
ー
ANÁLISIS DE RESULTADOS Las tarjetas reactivas tienen 64 pozos que contienen, cada uno, un sustrato de prueba individual. Con estos sustratos se miden varias actividades metabólicas como acidificación, alcalinización, hidrólisis enzimáticas y desarrollo en presencia de sustancias inhibidoras. Las tarjetas están selladas en ambos lados por una película clara que evita el contacto entre las diferentes mezclas sustrato-microorganismo y a la vez permite la transmisión del nivel de oxígeno apropiada. Cada tarjeta tiene un tubito de transferencia pre-insertado para la inoculación. (http://depa.fquim.unam.mx). Para la identificación de un microorganismo son
32
POLYB
＋
37
dGAL
＋
38
dRIB
ー
importantes dos cosas: 1. que se encuentre en una base de datos de microorganismos
39
ILATk
＋
patógenos para el hombre, de lo contrario no
42
LAC
ー
44
NAG
ー
45
dMAL
＋
46
BACI
＋
47
NOVO
ー
50
NC6.5
＋
52
dMAN
＋
se encontrara qué microorganismo se está analizando, y 2. que la inoculaiòn sea por medio de una suspensión 0.5-0-6 en la escala de MacFarland. De las 64 pruebas obtenidas, solamente se desarrollarán las siguientes: →AMY: S. aureus es incapaz de fermentar la amigdalina, ya que no promueve su degradación.
→PIPCL: Fosfatidil inositol Fosfolipasa C es una enzima hidrolasa, la cual no esta presenta
→BACI: Esta bacteria es resistente al sustrato bacitracina, es decir que su pared celular
en S. aureus.
inhibe la acción del antibiótico.
→ADH1: S. aureus presenta la enzima arginina dihidrolasa y es capaz de degradar
→NOVO: El microorganismo es sensible al antibiótico novobiocina debido a que este
L-arginina, dando un resultado positivo en esta
inhibe la bacteria y no permite su crecimiento.
prueba. →AGLU: La proteína A presente en la pared celular estafilocócica es detectada por
→dMAN y SAC: S. aureus, como se mencionó anteriormente, es una bacteria anaerobia facultativa por lo tanto es capaz de
moléculas
y pueden
fermentar
unirse, da por resultado aglutinación positivo, sin embargo estos procedimientos son rápidos
problema.
y S. lugdunensis y S. schleiferi pueden dar positivo en esta prueba, S. aureus no, por eso
CONCLUSIONES
está indicado con un perfil contradictorio. →PyrA: Esta prueba es únicamente positiva
actividades metabólicas de un microorganismo para poder caracterizarlo, y también es útil para hacer estudios de sensibilidad. La técnica
para cocos grampositivos, catalasa negativos. S. aureus presenta la enzima catalasa, por lo
para la preparación de la suspensión de 0.5 a 0.63 mcF, es el paso primordial y más tardado
tanto la prueba es negativa debido a no poder
para
hidrolizar la pirrolidonil-beta-naftilamida.
realizado este paso, el sistema VITEK nos disminuye el tiempo de identificación.
de
inmunoglobulina
estos
carbohidratos sin ningún
El sistema Vitek nos permite medir varias
realizar
el
proceso
automatizado,
→dSOR: S. aureus no es fermentadora de sorbitol, es decir, no promueve la degradación de este azúcar, por esta razón la prueba es
Está pensado y hecho para industria, esto debido a la gran cantidad de identificaciones
negativa. →URE: Fue negativa la prueba debido a que
que se pueden hacer al mismo tiempo, a diferencia de las pruebas bioquímicas convencionales que requieren más trabajo por
la bacteria en estudio no sintetiza la enzima ureasa y por lo tanto no puede hidrolizar la
parte del laboratorista. Con respecto a API 20E, el tiempo de la prueba en estudio es
molécula de la urea.
menor, ya que Vitek te arroja resultados a partir de las 4 horas y máximo 24 horas,
→LAC: En la literatura esta prueba se
mientras que API debe de estar en incubación
presenta positiva gracias a que es un microorganismo anaerobio facultativo, por lo tanto sí es fermentadora de este disacárido, sin embargo se le atribuye el resultado negativo a
24 horas obligatoriamente. Estas diferencias, son lo que hacen al sistema Vitek tan útil en las industrias farmacéuticas o de alimentos. El único problema es que solo reconoce
la concentración preparada con una turbidez de
microorganismos
0.59 de los tubos de McFarland, ya que la concentración ideal es de 0.5 del tubo de
humano.
McFarland.
patógenos
para
el
ser
BIBLIOGRAFÍA *http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/I dentificacionConVITEK2_21548 *http://www.biomerieux.com.mx/microbiologi a-industrial/vitekr-2-compact *http://www.labware-qc.com.ar/html/britania %5Ck08_06.html *Winn Washington C., Allen Stephen D., Janda William M., Koneman Elmer W., Procop Gary W., Schreckenberger Paul C., Woods Gail L., Koneman. Diagnóstico Biológico, 6ta. edición, Ed. Médica panamericana, Madrid España, 2006.
Imagen 3. Carrusel con el casete, dentro las tarjetas del grupo llevadas al proceso de inoculación.
ANEXOS
Imagen 1. Fecha: 23/mayo/18 Muestra: Gram positivo Tinción: Gram Aumento: 100x Descripción: Cocos asociados en tétradas y diplococos mayormente, grampositivos con residuos de colorante (safranina) por debajo.
Imagen 2. Equipo Vitek.
Imagen 4. Tarjeta del semestre pasado finalizada la identificación.
Imagen 5. Hoja de informe del examen realizado.
