4. Reaksi Warna Protein a) Reak Reaksi si Biur Biureet Reaksi biuret merupakan reaksi warna yang digunakan untuk menguji adanya gugus
peptida (-CO-NH-) dan protein. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya warna ungu berupa senyawa kompleks antara Cu 2 dan N dari molekul molekul ikatan peptida (!im "osen #imia Organik$ Organik$ 2%&'). ada perobaan ini bertujuan bertujuan untuk mengidentif mengidentifikasi ikasi adanya adanya gugus gugus peptid peptidaa (-CO-N (-CO-NH-) H-) dari dari protein protein melalui melalui reaksi reaksi warna warna pada pada protein protein menggunakan pereaksi biuret. Protein Susu * m+ larutan susu berwarna puti, dimasukkan kedalam tabung reaksi. +alu ditamba, & m+ larutan NaOH % (larutan tidak berwarna) meng,asilkan larutan larutan berwar berwarna na puti,. puti,. /ungsi /ungsi dari dari penamb penamba,a a,an n NaOH NaOH % adala, adala, agar agar suspensi protein menjadi bersuasana alkalis. 0etela, itu ditamba, Cu0O %$1 tetes demi tetes ,ingga larutan menjadi berwarna ungu kemera,an. kemera,an. umla, umla, Cu0O %$1 %$1 yang dibutu,ka dibutu,kan n untuk untuk meruba, meruba, warna menjadi menjadi ungu yaitu sebany sebanyak ak &% tete tetes. s.
/ung /ungsi si dari penam penamba ba,a ,an n Cu0O Cu0O %$1 yaitu untuk untuk
mengeta,ui adanya ikatan peptida atau tidak. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya warna ungu. Hal ini dikarenakan terbentuk senyawa kompleks antara Cu2 dan N dari molekul ikatan peptida. Reaksi sebagai berikut3 O H N
C C H2
H
H2 C
N
C
O
Cu2 →
O
O
2
H N
H2 C
C C H2
N H
Cu2 C
O
N H
H2 C
C C H2
N
C
H O
Protein Putih Pu tih Telur Ayam Ayam Negeri 0ampel protein yang digunakan puti, telur ayam. * m+ larutan puti,
telu telurr ayam ayam nege negeri ri tidak tidak berw berwarn arnaa dima dimasu sukk kkan an keda kedalam lam tabun tabung g reak reaksi si.. #emudian ditamba,kan & m+ NaOH %$ larutan tidak berwarna. 0etela, penamba,an & m+ NaOH %$ ampuran tetap tidak berwarna. /ungsi penamba,an NaOH % adala, agar suspensi protein menjadi bersuasana basa. 0elanjutnya ditamba,kan beberapa tetes Cu0O dan diperole, diperole, ,asil ,asil
ampuran tersebut beruba, warna ungu pekat. umla, Cu0O %$1 dibutu,kan untuk meruba, warna menjadi
yang
ungu yaitu sebanyak ' tetes.
enamba,an Cu0O berfungsi untuk mengeta,ui adanya ikatan peptida atau tidak pada sampel protein. Reaksi positif ditandai dengan terbentuknya warna ungu. Hal ini dikarenakan terbentuk senyawa kompleks antara Cu 2 dan N dari molekul ikatan peptida. 4anyaknya asam amino yang terikat pada ikatan peptida
mempengaru,i warna
reaksi
ini. 0enyawa dengan dipeptida
memberikan warna biru$ tripeptida ungu dan tetrapeptida serta peptida komplek memberikan warna mera, (!im "osen #imia Organik$ 2%&'). 4erdasarkan dasar teori tersebut$ diperole, ,asil ba,wa larutan puti, telur ayam merupakan senyawa yang mengandung tripeptida karena meng,asilkan warna ungu. Reaksinya sebagai berikut3 Cu0O (a5) 2NaOH (a5) Cu(OH)2
Cu(OH)2 (a5) Na20O(a5) Cu2 2OHO H N
C C H2
H
H2 C
N
C
O
O
Cu2
2
H N
H2 C
C C H2
N H
O
Cu2 N
C
H
H2 C
C C H2
O
N
C
H O
→
"ari perobaan warna protein pada reaksi biuret di,asilkan warna ungu pada protein susu lebi, pekat daripada protein telur. Hal ini menandakan ba,wa ikatan peptida dalam protein susu lebi, banyak atau lebi, panjang dibandingkan dengan ikatan peptida pada protein telu r. b) Reaksi Ksanthoprotein Protein Susu
0usu sebanyak * m+ dimasukkan kedalam tabung reaksi. +alu ditamba,kan & m+ HNO* pekat (larutan tidak berwarna). +arutan beruba, menjadi berwarna kuning dan terdapat endapan puti,. 0etela, itu$ dipanaskan dalam penangas. +arutan berwarna kuning keru, dan terdapat endapan kuning (). +alu ditamba,kan larutan & m+ NH * pekat$ larutan tidak berwarna dan berbau menyengat. enamba,an NH * pekat menyebabkan larutan berwarna jingga () yang disebabkan karena sifat keasaman fenol bereaksi dengan
alkali. Reaksi yang terjadi iala, reaksi substitusi atom H pada ben6ena yang terdapat pada molekul protein ole, gugus nitro. 7nti ben6ena dapat ternitrasi ole, asam nitrat pekat meng,asilkan turunan nitroben6ena. 8arna jingga disebabkan terbentuknya suatu senyawa polinitroben6ena dari asam amino protein. Hal ini berarti ba,wa dalam protein susu mengandung gugus senyawa polinitro ben6ena seperti tirosin$ fenilalanin$ triptofan$ albumin yang ditandai dengan terbentuknya endapan kuning. Reaksi sebagai berikut 3 O
H2N
O
C CH
O2N
H2N
OH
C CH
NO2
O2N
NO2
*HNO*
NO2
OH
*H2O
NO2
Protein Putih Telur Ayam negeri erobaan ini bertujuan untuk mengidentifikasi asam amino dengan
inti ben6ena pada sampel protein larutan puti, telur ayam negeri dengan reaksi #sant,oprotein. !es dikatakan positif ditunjukkan dengan warna kuning yang disebabkan terbentuknya suatu senyawa polinitroben6ena dari asam amino protein. (!im "osen #imia Organik$ 2%&'). * m+ larutan puti, telur ayam negeri tidak berwarna dimasukkan kedalam tabung reaksi. #emudian ditamba,kan & m+ HNO* pekat tidak berwarna di,asilkan larutan berwarna kuning$ dan terdapat endapan puti,. +arutan berwarna kuning terbentuk sebagai akibat terjadinya reaksi nitrasi pada inti ben6ena yang terdapat pada molekul protein ole, gugus nitro. 7nti ben6ena dapat ternitrasi ole, asam nitrat pekat meng,asilkan turunan nitroben6ena. 0elanjutnya dipanaskan dan di,asilkan endapan kuning () dengan larutan berwarna kuning jerni,. 0etela, itu$ ditamba,kan amonia pekat yang tidak berwarna dan meng,asilkan ampuran berwarna jingga (). enamba,an senyawa amonia menyebabkan warna kuning akan ,ilang dan beruba, menjadi jingga. Hal ini disebabkan karena sifat keasaman fenol bereaksi dengan amonia. ada uji #sant,oprotein$ ,asil uji positif pada larutan puti, telur ayam mengandung
asam amino dengan inti ben6ena yang ditandai dengan terbentuk warna jingga. Reaksi yang terjadi adala,3 O
H2N
O
C CH
O2N
H2N
OH
C CH
NO2
O2N
NO2
*HNO*
NO2
OH
*H2O
NO2
c) Reaksi Ninhirin Nin,idrin adala, suatu reagen berguna untuk mendeteksi asam amino dan
menetapkan konsentrasinya dalam larutan. 0enyawa ini merupakan ,idrat dari triketon siklik$ dan bila bereaksi dengan asam amino meng,asilkan 6at berwarna ungu
Protein Susu
0usu (+arutan berwarna puti, ) sebanyak & m+ dimasukkan kedalam tabung reaksi dan diukur tepat pH '. 9walnya$ pH susu yang kami dapatkan yaitu :. +alu$ larutan susu tersebut kami kontrol dengan menamba,kan 2 tetes larutan NHOH &2 dan & tetes larutan CH *COOH se,ingga pH yang kami dapatkan tepat '. +alu$ ditamba,kan &% tetes larutan nin,idrin %$2 (larutan tidak berwarna). Hingga di,asilkan warna larutan menjadi berwarna puti,. Campuran larutan tersebut dipanaskan selama &% menit pada su,u &%% ⁰C$ dan meng,asilkan larutan menjadi berwarna ungu ro,eman (). +arutan protein susu mengandung asam amino bebas dengan ditandai terbentuknya larutan berwarna ungu ro,eman yang menunjukkan uji nin,idrin positif. karena pada asam amino terdapat gugus karboksil yang dapat dilepaskan atau tereduksi akan bereaksi dengan NH* dengan proses dekarboksilasi dan meng,asilkan suatu amina. ;ugus amino pada asam amino dapat bereaksi dengan asam nitrit dan melepaskan gas nitrogen. 9sam amino$
ammonia dan gugus amino primer dalam protein apabila didi,kan dengan larutan protein pada pH ' dan dengan adanya nin,idrin menjadikan larutan menjadi berwarna ungu. Reaksi sebagai berikut 3
(/essenden < /essenden$ &=>2)
Protein Putih Telur Ayam negeri erobaan ini bertujuan untuk mengidentifikasi gugus amino bebas
dari asam amino pada protein larutan puti, telur ayam negeri dengan reaksi nin,idrin. Reaksi warna
protein
nin,idrin
menunjukkan positif
bila
memberikan warna biru atau ungu (!im "osen #imia Organik$ 2%&'). & m+ larutan protein puti, telur ayam negeri dimasukkan kedalam tabung reaksi. #emudian$ diukur pH tepat '. 9walnya$ pH telur yang kami dapatkan yaitu &%. +alu$ protein puti, telur ayam tersebut kami kontrol dengan menamba,kan & tetes larutan CH*COOH dan & tetes larutan NHOH &2 se,ingga pH yang kami dapatkan tepat '. 0etela, itu$ ditamba,kan &% tetes larutan nin,idrin %$2 (+arutan tidak berwarna)$ se,ingga larutan menjadi sedikit keru, dan terdapat sedikit gumpalan puti,. !ujuan penamba,an larutan nin,idrin %$2 adala, sebagai pereaksi untuk gugus amino bebas$ dimana apabila terdapat gugus amino bebas pada sampel protein akan meng,asilkan ,asil uji positif yaitu terbentuk warna ungu. +alu$ tabung reaksi dipanaskan pada penangas air dengan su,u &%% %C. 0etela, dipanaskan$ larutan beruba, warna menjadi ungu ro,eman (). 8arna ungu yang di,asilkan menunjukkan uji nin,idrin positif$ karena pada asam amino terdapat gugus karboksil yang bereaksi dengan NH*$ dengan proses dekarboksilasi meng,asilkan suatu amina. ;ugus amino bebas pada asam amino dapat bereaksi dengan asam nitrit dan melepaskan gas nitrogen. 9sam amino$ ammonia dan gugus amino primer dalam protein apabila didi,kan dengan larutan protein pada pH ' dan
dengan adanya nin,idrin menjadikan larutan menjadi berwarna ungu. Reaksi yang terjadi sebagai berikut3
) Reaksi !illon Protein Susu
2 m+ larutan susu dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditamba, dengan & m+ pereaksi ?illon (Hg0O memberi suasana asam agar Hg tidak mengendap$ meng,idrolisis protein agar terdapat tyrosin) meng,asilkan endapan puti,. 0etela, itu dipanaskan dan meng,asilkan larutan berwarna mera,. +alu ditamba, & tetes NaNO 2 & (larutan tak berwarna) se,ingga terbentuk larutan berwarna mera,$ dan terdapat endapan. /ungsi penamba,an NaNO2 adala, untuk mereduksi Hg. #emudian dipanaskan kembali meng,asilkan endapan mera,. 9dapun reaksinya sebagai berikut 3
Protein Putih Telur Ayam negeri 2 m+ larutan protein puti, telur ayam negeri dimasukkan kedalam
tabung reaksi. #emudian$ ditamba,kan & m+ pereaksi ?illon (larutan tidak
berwarna) dan meng,asilkan endapan puti,. !ujuan ditamba,kan pereaksi ?illon karena melibatkan penamba,an senyawa Hg ke dalam prote in se,ingga penamba,an logam ini akan meng,asilkan endapan puti, dari senyawa merkuri. +alu$ tabung reaksi dipanaskan dalam penangas air dan meng,asilkan larutan berwarna jingga. emanasan bertujuan untuk memperepat laju reaksi. 0etela, itu$ ditamba,kan & tetes NaNO 2 & (larutan tidak berwarna). 0etela, penamba,an NaNO 2 & meng,asilkan larutan berwarna jingga$ dan ada endapan. /ungsi penamba,an NaNO2 adala, untuk mereduksi Hg. #emudian dipanaskan dan meng,asilkan endapan mera,. Hal ini terjadi karena asam nitrat yang semula berfungsi sebagai pelarut mereduksi Hg 2 menjadi Hg. 4ersamaan dengan ,al tersebut$ asam amino tirosin ternitrasi. #emudian terjadi
reaksi
pembentukan
HgO
yang berwarna mera,.
embentukan kompleks berwarna mera, tersebut menunjukkan adanya tirosin pada larutan puti, telur ayam. ersamaan reaksi pada perobaan ini adala, sebagai berikut3
"ari perobaan ini dapat dijelaskan ba,wa terjadi pengikatan Hg pada ,idroksifenil yang meng,asilkan kompleks berwarna mera, menunjukkan adanya tirosin pada kedua protein tersebut yaitu susu dan telur. 0e,ingga dapat disimpulkan ba,wa jika protein direaksikan dengan millon akan bernilai positif. e) Reaksi "opkin#$ole Protein Susu 0usu sebanyak & m+ dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditamba, &
tetes formalde,id ener (larutan tidak berwarna)$ meng,asilkan larutan
berwarna puti,. #emudian ditamba, & tetes pereaksi merkuri(77) sulfat & larutan tetap berwarna puti,. +alu ditamba, asam sulfat pekat meng,asilkan larutan berwarna ,itam$ larutan panas. Reaksi antara larutan protein dengan asam sulfat pekat merupakan reaksi eksoterm yang ditandai dengan perpinda,an kalor dari sistem ke lingkungan se,ingga menyebabkan dinding tabung reaksi terasa panas. 0eara teori$ larutan protein mengandung inti indol asam amino triptofan dengan terbentuknya inin berwarna ungu. Namun$ dalam perobaan kami gagal se,ingga tidak terbentuknya inin ungu. Reaksi sebagai berikut 3
Protein Putih Telur Ayam negeri ada perobaan ini bertujuan untuk membuktikan adanya asam amino
triptofan pada protein larutan puti, telur ayam negeri dengan reaksi HopkinCole. & m+ protein larutan puti, telur ayam dimasukkan kedalam tabung reaksi. "an ditamba,kan & tetes larutan formalde,id ener tidak berwarna meng,asilkan larutan sedikit keru,. #emudian ditamba,kan & tetes pereaksi Hg0O & tidak berwarna untuk identifikasi adanya asam amino triptofan$ se,ingga meng,asilkan larutan sedikit keru, 0elanjutnya ditamba,kan & m+ H 20O pekat tidak berwarna bau menyengat. enamba,an H20O pekat ,arus dilakukan melingkar melalui dinding tabung reaksi dan posisi tabung reaksi dimiringkan. 0etela, penamba,an H 20O pekat$ terbentuk dua lapisan larutan. +apisan atas berwarna puti,$ lapisan bawa, berwarna oklat muda$ larutan panas. Reaksi antara larutan protein telur dengan asam sulfat pekat merupakan reaksi eksoterm yang ditandai dengan perpinda,an kalor dari sistem ke lingkungan se,ingga menyebabkan dinding tabung reaksi terasa panas. 0eara teori$ reaksi warna protein ini menunjukkan positif apabila ditandai terbentuknya inin ungu pada bidang batas antara larutan protein dengan
pereaksi.
embentukan
inin
ini
dikarenakan
terbentuknya
kondensasi 2 inti aldol dari triptofan dengan alde,id. Namun$ dalam perobaan kami gagal se,ingga tidak terbentuknya inin ungu. ada uji ini$ larutan protein susu dan telur masing-masing menunjukkan adanya peruba,an warna larutan$ namun tidak membentuk suatu
inin. Hal ini mungkin dikarenakan saat penamba,an H 20O pekat$ tabung tidak berada dalam posisi miring yang se,arusnya se,ingga larutan tidak menetes melalui dinding melainkan langsung jatu, ke dalam tabung. Reaksi yang terjadi dalam perobaan ini adala,3
#esimpulan3 a) Reaksi biuret dilakukan untuk mengeta,ui adanya ikatan peptida. Reaksi ini positif jika terjadi peruba,an warna larutan menjadi ungu setela, ditamba,kan larutan Cu0O. b) Reaksi ksant,oprotein dilakukan untuk mengeta,ui adanya gugus asam amino berinti ben6ene (albumin$ triptofan). Hasil uji positif pada larutan protein mengandung asam amino dengan inti ben6ena yang ditandai dengan terbentuk warna jingga ) Reaksi nin,idrin digunakan untuk mengeta,ui adanya gugus @-asam amino. Reaksi positif apabila memberikan warna ungu ro,eman. "imana gugus @-asam amino bereaksi dengan asam nitrit dan melepaskan gas nitrogen. d) Reaksi millon positif apabila protein yang mengandung gugus ,idroksifenil (asam amino tirosin) dapat bereaksi dengan larutan meruri nitrat dapat meng,asilkan larutan atau endapan yang berwarna mera,. e) Reaksi ,opkins-ole dilakukan untuk menguji adanya asam amino triptofan pada protein. +arutan protein mengandung tirosin dan indol yang ditandai dengan adanya inin ungu saat penamba,an H 20O pekat pada reaksi ,opkin-ole.
"aftar pustaka pemba,asan dan jawaban pertanyaan 9nna$ oedjiadi. &==. "asar-dasar 4iokimia. akarta3 A7 ress. 9nwar$ C,airill$ dkk. &==. Pengantar Praktikum Kimia Organik . Bogyakarta3 /?79 A;?. /essenden$ Ralp,. dan oan 0. /essenden. &=>2. Kimia Organik Jilid 2 Edisi Ketiga. akarta3 rlangga. !im "osen #imia Organik. 2%&:. Penuntun Praktikum Kimia Organik II . 0urabaya3 urusan #imia /?79 Anesa.
